黄腐醇对肺癌细胞株A549体外抑制作用及其可能机制

目的 探讨黄腐醇对人肺癌细胞株A549的体外抑制作用及其可能机制.方法 体外培养A549细胞,采用MTT法检测黄腐醇10、20 μmol/L或联用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L对细胞生长的作用,细胞集落实验检测细胞的集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况和活性氧(ROS)含量,Western blot法检测p53、p21、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达.结果 黄腐酵呈浓度和时间依赖性地抑制A549细胞生长(P＜0.05).与对照组相比,黄腐醇10,20 μmol/L均可减少A549细胞集落的数量,促进细胞凋亡,增加细胞内ROS含量以及p53、p21、ATF4、CHOP蛋白表达(P＜0.05);而NAC预处理后,可降低黄腐醇诱导的ROS含量以及细胞抑制率(P＜0.05).结论 黄腐酵能够体外抑制肺癌细胞生长并促进细胞凋亡,可能与黄腐酵升高肿瘤细胞内ROS含量、调节细胞周期和内质网应激相关蛋白的表达有关.     

紫草素通过内质网应激蛋白抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞增殖的研究

目的研究紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞存活的抑制和对内质网应激蛋白的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.156 25～4μmol/L紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞抑制率;取对数生长期U-2 OS细胞,分别给予0～4μmol/L紫草素诱导U-2 OS细胞凋亡,24 h后用流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blotting检测紫草素对内质网应激蛋白ATF6、IRE1α、ATF4、GRP78的表达调控作用;将混有质粒或小干扰RNA的Lipofectamine 2000试剂处理U-2 OS细胞6 h换液,加入紫草素处理,检测ATF4或GRP78对紫草素处理的细胞活力的影响;将ATF4或空白质粒(3μg)、GRP78报告质粒(3μg)和海肾内参质粒(4μg)均匀混合,用Lipofectamine 2000试剂对人骨肉瘤U-2 OS细胞进行转染,6 h换液,加入0.8μmol/L紫草素继续孵育24h,实验结果用各孔海肾荧光做参比进行校正,检测紫草素对ATF4介导的GRP78转录的调控作用。结果紫草素显著抑制人骨肉瘤细胞的活力并能浓度相关性促进细胞凋亡;Westernblotting结果显示,紫草素能特异性增加ATF4和GRP78蛋白的表达;过表达ATF4能显著抑制U-2 OS细胞活力(P0.01);敲低ATF4能部分逆转紫草素对细胞活力的抑制(P0.01);过表达GRP78并不影响紫草素对细胞存活的抑制效果,但敲低GRP78可以显著增加紫草素对U-2 OS细胞活力的抑制(P0.01);报告基因结果显示紫草素能增加ATF4对GRP78基因的转录调控。结论紫草素能显著抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞活力,诱导内质网应激蛋白的表达,敲低GRP78能进一步增加紫草素的细胞毒性。     

没食子酰芍药苷对白细胞介素 8诱导的人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的研究没食子酰芍药苷(GPF)对白细胞介素 8(IL-8)诱导的人脐静脉血管内皮细胞( HUVECs)增殖和迁移的影响及潜在分子机制。方法用 100、200和 400 μmol/L GPF分别处理 100 μg/L IL-8诱导的 HUVECs，实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)和蛋白质印迹法( Western blotting)分别检测 HUVECs细胞中 miR-212-3p、激活转录因子 2(ATF2)、增殖细胞核抗原( PCNA)和基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)的表达，四氮唑蓝( MTT)和 Transwell实验分别测定 HUVECs细胞存活率和细胞迁移，双荧光素酶报告系统验证 miR-212-3p与 ATF2的调控关系。结果与对照 0 μmol/L组相比， 100 μmol/L、200 μmol/L和 400 μmol/L的 GPF可抑制 IL-8诱导的 HUVECs增殖和迁移，促进 miR-212-3p表达，抑制 ATF2表达，呈剂量依赖趋势；低表达 miR-212-3p可逆转 400 μmol/L GPF对 IL-8诱导的 HUVECs细胞增殖和迁移的抑制作用； miR-212-3p靶向 ATF2，调控 ATF2的表达；低表达 ATF2可部分逆转低表达 miR-212-3p对 GPF处理的 IL-8诱导的 HUVECs细胞增殖和迁移的作用。结论 GPF通过 miR-212-3p/ATF2途径抑制 IL-8诱导的 HUVECs细胞增殖和迁移。     

荜茇酰胺对H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨荜茇酰胺对体外培养的H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制.方法 采用不同浓度荜茇酰胺(0、1.25、2.5、5、10、20、30、40和50 μmol/L)孵育H1975细胞72 h,MTT法检测细胞生存率.采用荜茇酰胺0、2.5、5和10 μmol/L孵育H1975细胞,细胞集落形成实验和划痕实验分别测定细胞增殖和迁移情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况和活性氧(ROS)水平,倒置显微镜观察ROS荧光水平、细胞焦亡情况和ROS变化对细胞焦亡的影响,Western blot法分析加斯德明E(GSDME)、GSDME-N端、GSDMD和前体Caspase-3蛋白表达的变化.结果 荜茇酰胺能够浓度依赖性地抑制细胞生长、集落形成和细胞迁移,诱导细胞凋亡和焦亡,提高细胞内ROS水平,下调GSDME、前体Caspase-3和GSDMD蛋白表达,上调GSDME-N端蛋白表达(P＜0.05).降低ROS水平后,抑制细胞焦亡(P＜0.05).结论 荜茇酰胺能促进H1975细胞凋亡,通过提高细胞内ROS水平诱导细胞焦亡;其机制可能与ROS作用于GSDMD/GSDME蛋白有关.     

枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用

目的 探讨枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用.方法 分别以0,5,10,20,40,80,160μmol/L的枸橘苷处理U-2 OS细胞,检测细胞活力并计算枸橘苷对U-2 OS细胞的半数抑制浓度(IC50);U-2 OS细胞实验分为空白对照组[等体积磷酸盐缓冲液(PBS)]和枸橘苷高、低剂量组(52,26μmo...     

维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖和迁移侵袭的作用机制

目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤 MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤 MG63细胞,采用人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对 Hippo信号通路中 Yes?相关蛋白 1(YAP1)、 TEA转录因子 1(TEAD1)、磷酸化 Yes?相关蛋白 1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果 CCK?8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤 MG63细胞的增殖, 24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤 MG63细胞凋亡,使骨肉瘤 MG63细胞周期阻滞于 G0/G1期;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制 MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的 MG63细胞中 YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而 pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤 MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调 YAP1及 TEAD1表达,维替泊芬阻碍 YAP1和 TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

黄腐醇诱导胃癌细胞焦亡的作用机制

目的 探讨黄腐醇对人胃癌细胞系SGC-7901焦亡的作用及其可能机制。方法 用DMSO(对照组)和不同浓度黄腐醇10、20和40μmol/L处理SGC-7901细胞,采用细胞集落实验检测细胞集落形成,细胞划痕实验观察细胞迁移,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot法检测加斯德明E-N端(GSDME-N)和Caspase-3蛋白表达。采用ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126 10μmol/L或p38抑制剂达马莫德(BIRB)10μmol/L预处理SGC-7901细胞后再加入黄腐醇40μmol/L,采用Western blot法检测GSDME-N蛋白表达,倒置显微镜下观察细胞焦亡的形态学变化。结果 与对照组相比,黄腐醇呈浓度依赖性地抑制SGC-7901细胞集落形成、细胞迁移和Caspase-3蛋白表达,上调ROS水平和GSDME-N蛋白表达(P<0.05);而用NAC、U0126或BIRB预处理后,GSDME-N蛋白表达降低,细胞焦亡数目减少(P<0.05)。结论 黄腐醇可能通过升...     

肝素酶抑制剂OGT2115对口腔癌KB细胞侵袭迁移的影响

目的探讨肝素酶抑制剂OGT2115对人口腔上皮癌KB细胞增殖及侵袭迁移能力的影响,以期为治疗肿瘤转移提供思路。方法 MTT法和Transwell实验分别检测不同浓度OGT2115(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4μmol.L-1)对口腔癌KB细胞增殖以及侵袭迁移的影响;Transwell实验和划痕实验检测OGT2115(0.4μmol.L-1)联合低浓度(2μmol.L-1)阿霉素(adriamycin,ADM)后对细胞侵袭迁移的作用;ELISA法观察不同浓度OGT2115、OGT2115联合ADM对乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)的影响。结果 MTT法结果显示,OGT2115对KB细胞的增殖具有一定的抑制作用,IC50为8.59μmol.L-1,抑制活性随着作用时间和浓度的增加而增加(P<0.05)。OGT2115可抑制KB细胞的侵袭和迁移,OGT2115(0.4μmol.L-1)与ADM(2μmol.L-1)联用后可以明显增强ADM抗KB细胞增殖和侵袭迁移能力(P<0.05)。结论肝素酶抑制剂OGT2115可以抑制KB细胞的侵袭和迁移,且可增强ADM抗KB细胞侵袭迁移的能力,其机制可能与抑制Hpa的活性有关。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制。方法 （1）选取 2 组人卵巢癌细胞(SKOV3 和 SKOV3/DDP; HO8910 和 HO8910-PM)后, 设置对照组和终浓度为 1、 3、 5 及 7 μmol/L SAHA 组(SAHA 1~4 组), 采用 CCK-8 法分别检测 SAHA 对细胞增殖的影响。（2） 设置对照组和 SAHA 1、 2 组(2 和 5 μmol/L), Annexin V-FITC/PI 双标记流式细胞术分别检测 SAHA 对细胞凋亡及周期的影响。（3） RT-PCR 和 Western blot 检测 SAHA 1~4 组表型相关蛋白的表达水平。结果 （1）随着 SAHA 浓度的增加, SKOV3 细胞株 SKOV3/DDP 及 HO8910 细胞株 48 h 光密度 （OD） 值均呈逐渐降低趋势(均 P＜0.05)。（2） 48 h SAHA 1、 SAHA 2 组凋亡率高于对照组(均 P＜0.05); SAHA 作用 48 h, 细胞周期发生阻滞, 与对照组比较, SAHA 1 组和 SAHA 2 组 SKOV3 和 SKOV3/DDP 细胞 S 期和 G2/M 期比例增高, HO8910 和 HO8910-PM 细胞 G0/G1期比例增高(P＜0.05)。（3） SAHA 1、 2 组 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的 mRNA 表达水平均低于对照组, Caspase-3、 p21 和 p53 的 mRNA 表达水平明显高于对照组(P < 0.05); SAHA 1~4 组 Ac-Histone H3 和 Ac-Histone H4 和 p53 蛋白的表达较对照组明显增强, CyclinB1、 Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱。结论 SAHA 通过调节恶性表型相关蛋白 Caspase-3、 p53、 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的表达水平, 促进组蛋白乙酰化, 抑制卵巢癌细胞增殖, 阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

氧自由基致痛、痛敏及其与阿斯匹林、吲哚美辛镇痛的关系

采用光照核黄素产生氧自由基，观察后者在外周和脊髓水平对疼痛的影响。发现在外周，小鼠足跖部皮下注射ＬＲＦ０．０６，０．６７ｍｍｏｌ．ｍｏｕｓｅ＾－１有致痛作用；脊髓水平，小鼠鞘内注射ＬＲＦ０．１０６－０．６６５ｎｍｏｌ．ｍｏｕｓｅ＾－１有致痛敏作用；进一步研究发现ＯＦＲ的脊髓痛敏与Ｃａ＾２＋有密切关系，用维拉帕米，尼莫地平，ＥＧＴＡ可拮抗ＯＦＲ的痛敏作用。     

生殖道解脲支原体和沙眼衣原体感染与女性不孕的相关性研究

目的探讨生殖道解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）与女性不孕症的关系。方法对305例不孕症患者（观察组）和130例正常女性（对照组）,应用荧光定量PCR技术检测生殖道分泌物中的UU和CT,观察两组的差异。结果观察组UU、CT、UU和CT双重感染率分别为59．3％、41．0％和17．0％,均明显高于对照组（x2=89．82、44．86、19．11,均P〈0．05）;原发性不孕组UU、CT感染率与继发性不孕组比较,差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论UU和CT的感染与女性不孕症有一定的相关性。     

实时三维超声在膀胱癌虚拟立体模型及体积测量中的应用

目的探讨实时三维超声在膀胱癌虚拟立体模型及体积测量中的应用价值。方法对经膀胱镜活检病理确诊的29例膀胱癌患者,进行实时三维超声扫查,然后应用虚拟组织计算机辅助分析（VOCAL）技术对癌体虚拟立体模型及体积测量。结果实时三维超声不仅在膀胱癌虚拟立体模型明显优于三维图像,并且癌体体积测量十分准确。结论应用实时三维超声VOCAL技术,在膀胱癌虚拟立体模型,能够客观准确地反映癌体空间形态,并且对癌体积测量更加准确。     

医院以及医院药学的定位和服务方式转变

本文以新一轮医药卫生体制改革的内容为切入点,分析我国现有医院与医院药学的现状,并与国外医疗体系做对比;提出了公立医院的定位问题及如何发挥医院药学在医院中的作用,转变服务方式,加强药师队伍建设等问题。