报告基因方法检测壬基酚、双酚A抗雄激素样活性的体外研究

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转染人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40的CHO细胞,在给予1×10-7mol/L二氢睾酮(DHT)后给予不同浓度的壬基酚(NP)及双酚A(BPA),检测报告基因表达活性。[结果]浓度均>1×10-6mol/L的NP、BPA可抑制1×10-7mol/LDHT产生的雄激素样作用,两者具有抗雄激素活性,但较雄激素拮抗剂氟他安(FLU)弱,BPA的抑制作用强于NP。[结论]NP、BPA有一定的抗雄激素活性,BPA的抑制作用强于NP。     

雄激素受体（hAR）CAT报告基因筛选AR激动剂和拮抗剂的方法研究

[目的]建立雄激素受体（hAR）报告基因实验，为AR激动剂和拮抗剂活性筛选提供检测方法。[方法]构建受雄激素效应元件（ARE）调控的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因质粒pMMTV—CAT，将该质粒与hAR表达质粒AR／pcDNA3．1和阳性对照质粒pSV—β—Gal共转染非洲猴肾细胞株CV-1。以AR激动剂5α-双氢睾酮（5α—DHT）、糖皮质激素受体（GR）激动剂地塞米松和AR拮抗剂氟鲁他明为受试物，研究它们对AR的激动或拮抗作用。[结果]10^-9mol／L的5α-DHT显著诱导CAT的表达，诱导倍数为56．67，10^-8mol／L时达最大值，诱导倍数为79.30，在10^-8mol／L～10^-6mol／L范围内CAT的表达量维持在较高的平台水平。地塞米松不诱导CAT的表达。氟鲁他明在10^-7mol／L～10^-5mol／L浓度范围内显著拮抗1nmol／L的5α-DHT诱导的CAT的表达。[结论]5α—DHT对CAT的诱导和氟鲁他明对CAT的拮抗呈剂量-效应关系。该方法不存在与GR激动剂的交叉反应，具有较高的特异性。雄激素受体报告基因实验可以作为化学物（抗）雄激素活性筛选的方法。     

报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究

目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究。方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERELuc,用脂质体转染法将pERELuc及内对照质粒phRLSV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达。结果转染pERELuc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11molLE2可引起报告基因的表达,至1×10-9molL可达到最大表达值,而未转染pERELuc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达。1×10-6molL以上NP和BPA出现雌激素样作用。NP的雌激素样活性略强于BPA。结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用。     

环境化学物雄激素干扰活性检测方法的建立

目的：建立雄激素受体（AR）介导的荧光素酶（Luc）报告基因试验方法,为化学物拟/抗雄激素活性的检测提供研究工具。方法：构建受雄激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pMMTV-Luc,将该质粒与表达AR的质粒AR/pcDNA3.1和阳性对照质粒phRL-tk共转染CV-1细胞,建立AR报告基因试验。以5α-双氢睾酮（5α-DHT）为阳性对照检测该方法的筛选效率。CV-1转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雄激素干扰活性。结果：5α-DHT对共转染三种质粒的CV-1的诱导作用表现为：10-10M的5α-DHT显著诱导Luc的表达,10-7M时达最大值,诱导倍数为61.83倍,计算其半数效应浓度EC50为3.65 nM。糖皮质激素受体（GR）激动剂地塞米松（dexamethasone）不诱导Luc的表达。AR拮抗剂氟他胺（flutamide）在10-7M～10-5M浓度范围内显著拮抗1nM的5α-DHT诱导的Luc的表达,其半数抑制浓度（IC50）为3.49μM。BPA在10-6M和10-5M时能拮抗1 nM 5α-DHT诱导的Luc的表达,其IC50为2.14μM。结论：本研究建立的AR报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有抗雄激素活性。     

镍诱导pSP189质粒的非定标性突变及其与DNA损伤的关系

目的检测醋酸镍诱导pSP189质粒在Vero细胞中的非定标性突变及其DNA损伤,分析其间的关系,为探讨镍的致癌机制提供线索。方法醋酸镍染毒Vero细胞2.5h,再常规培养24h后,转染野生型质粒pSP189,获取经该哺乳动物细胞复制过的质粒,转化其进入大肠杆菌MBM7070,通过特殊培养基筛选突变子;用改良的单细胞凝胶电泳法检测开始转染时Vero细胞的DNA损伤。结果醋酸镍浓度为250μmol/L和1000μmol/L剂量组诱导出了非定标性突变,其突变率分别为9.46×10-4和15.01×10     

菌核净的抗雄激素作用及机制的研究

目的　确定有机杂环类杀菌剂菌核净是否具有抗雄激素作用并探讨其可能的作用机制。方法　采用体内和体外相结合的方法 :体内实验采用经典的Hershberger试验 ,菌核净经口给药剂量为 50、10 0、2 0 0mg·kg- 1·d- 1;体外实验采用雄激素依赖基因转录活化试验 ,将人雄激素受体 (AR)表达质粒、AR 依赖荧光素酶报告质粒同时瞬时转染HepG2细胞 ,加入菌核净或已知抗雄激素 ,同时加或不加一定浓度的双氢睾酮以诱导荧光素酶基因的表达。结果　体内实验中 ,菌核净与已知抗雄激素一样能引起雄激素依赖组织重量明显降低 :染菌核净 2 0 0mg/kg组大鼠精囊腺、腹侧前列腺、背后侧前列腺、尿道球腺、提肛肌加球海绵体肌重量分别比溶剂对照组低 57.8%、44.8%、43 .9%、3 0 .1%、3 4 .1%。菌核净对雄激素依赖组织生长的抑制作用弱于氟他胺和腐霉利 ,但强于异菌脲。体外实验中 ,菌核净能抑制双氢睾酮依赖的AR活力 ,并呈现剂量 -反应关系 (r =-0 .952 3 ,P =0 .0 47)。菌核净的抑制作用较氟他胺弱 ,约为氟他胺的 1/10 0。结论　菌核净具有抗雄激素作用 ,是AR拮抗剂 ,其抗雄激素作用强度弱于氟他胺、腐霉利 ,但强于异菌脲     

来曲唑与三苯氧胺对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响

目的:研究来曲唑(letrozole,LTZ)与三苯氧胺(tamoxifen,TAM)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,比较不同浓度的LTZ、TAM、LTZ+TAM对SKOV3/DDP细胞生长及对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的逆转作用。结果:①不同浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ或低浓度(1×10-9mol/L～1×10-7mol/L)TAM对SKOV3/DDP细胞生长无抑制,不能逆转DDP引发的耐药。高浓度(1×10-6mol/L～1×10-4mol/L)TAM能抑制SKOV3/DDP细胞的生长且能逆转DDP引发的耐药,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②1×10-6mol/L TAM与各浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ联合用药,对该细胞的生长抑制作用及逆转DDP引发的耐药较单用1×10-6mol/L TAM无明显增强,差异无统计学意义(P>0.05);(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)TAM与各浓度(1×10-9 mol/L～1×10-4 mol/L)LTZ联合用药,在LTZ为(1×10-6 mol/L～1×10-4 mol/L)时,两药联合对该细胞的生长抑制作用与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)及组间相比差异有统计学意义(P<0.01);在LTZ为(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)时,两药联合逆转DDP引发的耐药与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)逆转及组间相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:高浓度TAM可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性;高浓度LTZ与TAM联合可使TAM逆转SK-OV3/DDP细胞对DDP耐药的作用增强。     

苯并[a]芘对血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨苯并 [a]芘 (BaP)对内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)表达的影响。方法　培养猪主动脉血管内皮细胞 ,分别以不同浓度的BaP (0 ,0 1× 10 -6,0 5× 10 -6,1× 10 -6,5× 10 -6,10× 10 -6mol/L)染毒2 4h ,用Westernblot法检测诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的改变。结果　基础状态下 ,主动脉血管内皮细胞iNOS有微量表达 [蛋白质条带扫描定量的光密度 (A)为 1 0 87],随BaP浓度 (0 1× 10 -6,0 5× 10 -6,1 0× 10 -6,5 0× 10 -6mol/L)的升高 ,iNOS表达量逐渐升高 (A值分别为2 0 784 ,19 4 15 ,33 714 ,5 5 2 19) ,iNOS表达水平与BaP浓度呈一定的线性剂量 -反应关系。而eNOS (A值为 7 6 2 5 )在基础状态下的表达水平高于iNOS ,随BaP浓度 (0 1× 10 -6,0 5× 10 -6mol/L)的升高eNOS表达量也逐渐升高 (A值分别为 8 5 36 ,17 2 5 3) ,在BaP浓度为 1 0× 10 -6mol/L时eNOS的表达呈高峰 (A值为4 9 2 4 2 ) ,然后随BaP浓度 (5 0× 10 -6,10 0× 10 -6mol/L)增高而快速降低 (A值分别为 33 16 3,14 4 2 4 ) ,其表达水平与BaP浓度呈“偏峰”型。结论　BaP可激活NOS ,iNOS表达水平与BaP浓度呈一定的剂量 -反应关系 ,高浓度BaP抑制eNOS的表达。     

改良的环境化学物雌激素干扰活性检测方法的建立和应用

目的建立雌激素受体(ER)介导的荧光素酶(Luc)报告基因试验方法,为化学物拟(抗)雌激素活性的检测提供研究工具。方法将受雌激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pERE-aug-Luc和表达ER的质粒rERα/pCI转染Vero细胞,建立ER报告基因试验。以雌激素(E2)为阳性对照检测该方法的筛选效率。Vero转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雌激素干扰活性。结果雌激素对转染两种质粒的Vero的诱导作用表现为:10-7 mg/L的雌激素显著诱导Luc的表达,最大诱导倍数为100.959倍,半数效应浓度EC50为3.57×10-6 mg/L。化学物BPA可诱导Luc的表达,其中在0.01mg/L时即可显著性的诱导Luc表达,未发现BPA具有雌激素拮抗作用。结论本研究建立的ER报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有拟激素活性。     

氯氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗雄激素活性研究

目的 观察氯氰菊酯和高效氯氰菊酯是否具有抗雄激素活性作用.方法 体外研究采用基于MDA-kb2细胞的雄激素依赖基因转录活化试验,观察浓度为10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L的氯氰菊酯和高效氯氰菊酯以及激动剂、拮抗剂和溶剂3个对照组对1.0 nmol/L双氢睾酮雄激素受体激动活性韵影响;体内研究对象为54只SD雄性大鼠,随机分为9组,每组6只,采用7 d Hershberger试验观察了氯氰菊酯(7、21和63 mg/kg)、高效氯氰菊酯(6、18和54 mg/kg)以及氟他胺阳性对照组、睾酮缺乏组和溶剂对照组对6周龄睾丸切除术后大鼠雄激素依赖组织重量的影响.结果 体外试验显示,10-6和10-5 mol/L的氯氰菊酯能够明显抑制双氢睾酮的雄激素受体激动活性,体内试验发现,63 mg/kg氯氰菊酯组精囊腺、腹侧前列腺、背后侧前列腺和包皮腺重量分别为(52.8+7.1)、(42.4+8.9)、(36.6+4.5)、(43.4+11.1)mg,比溶剂对照组明显降低;而21 mg/kg氯氰菊酯组只腹侧前列腺和背后侧前列腺的重量明显降低;7 mg/kg氯氰菊酯组只背后侧前列腺的重量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).对于高效氯氰菊酯,体内和体外试验均未发现各剂量组有抗雄激素作用.结论 在该实验条件下,氯氰菊酯具有中等程度的抗雄激素活性作用,雄激素受体拮抗可能是其作用机制之一;高效氯氰菊酯不具有抗雄激素活性.     

维生素D_3对报告载体荧光素酶表达的作用

目的：　研究１,２５－二羟维生素Ｄ３ 对结肠癌细胞系Ｃａｃｏ－２ 细胞中报告基因表达的作用,并探讨在报告载体ｐＧＬ２ 序列中存在潜在的抑制性维生素Ｄ应答元件（ＶＤＲＥ）的可能性。方法：　采用磷酸钙沉淀法将报告载体转染入Ｃａｃｏ－２ 细胞。Ｃａｃｏ－２细胞经不同浓度１,２５－二羟维生素Ｄ３ 处理后测定细胞裂解液中表达的荧光素酶活性。结果：　应用ｐＧＬ２ 报告载体时,当用ｐＳＧ５－ＶＤＲ表达载体共转染后,１,２５－二羟维生素Ｄ３显著地抑制Ｃａｃｏ－２ 细胞荧光素酶的表达（Ｐ＜ ０．０５）;而未使用该表达载体共转染则无抑制作用（Ｐ＞ ０．０５）。应用ｐＧＬ３ 报告载体时,不同浓度的１,２５－二羟维生素Ｄ３ 对ｐＬＧ３转染后Ｃａｃｏ－２ 细胞表达的荧光素酶活性均无显著抑制作用（Ｐ＞ ０．０５）,该作用不依赖是否存在有ｐＳＧ５－ＶＤＲ表达载体共转染。结论：１,２５－二羟维生素Ｄ３ 对报告载体ＰＧＬ２ 荧光素酶表达具有抑制作用,而对ｐＧＬ３ 则否;类似人类ＰＴＨ基因中的潜在抑制性ＶＤＲＥ存在于报告载体ｐＧＬ２,在ｐＧＬ３ 中该ＶＤＲＥ业已改变。     

An assessment of in vitro androgenic activity and the identification of environmental androgens in United Kingdom estuaries

Environmental androgens are a group of compounds that to date have received very little attention. In this study, a yeast-based androgen screen (YAS) was used to determine the level of in vitro androgenic activity in seven United Kingdom estuaries. Surface water, sediment pore water, and sediment particulate material solvent extracts collected from Southampton Water, the Thames, Mersey, Tees, Tyne, Clyde, and Forth were tested for in vitro androgenic activity. Eleven of the 41 surface water samples collected displayed androgenic activity >2 ng dihydrotestosterone (DHT) equivalents/L (3-9 ng DHT/L), while eight of the 39 sediment pore waters collected showed activity >45 ng DHT/L (51-187 ng DHT/L). High levels of androgenic activity were determined in the solvent extracts of sediments, with 10 of 39 samples exhibiting a level of androgenic activity >454 ng DHT/kg (1,020-15,300 ng DHT/kg). In vitro YAS testing of five selected sewage treatment works (STW) effluents entering these estuaries showed that measurable levels (34-635 ng DHT/L) of androgenic activity were observed in those receiving only primary treatment (Howdon STW and Irvine Valley Sewer) at the time of the survey. A toxicity identification evaluation (TIE) study of Irvine Valley Sewer effluent using the YAS assay was used to identify the natural steroids/steroid metabolites dehydrotestosterone, androstenedione, androstanedione, 5beta-androstane-3alpha,11beta-diol-17-one, androsterone, and epi-androsterone as responsible for 99% of the in vitro activity determined in the effluent.     

大豆异黄酮和玉米赤霉烯酮对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的 通过观察大豆异黄酮(genistein,GS)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞(PEO4)增殖的影响探讨其雌激素效应。方法 雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4在达克尔培养基(DMEM,含小牛血清10％)中采用开放式单层贴壁培养,于加受试物5d前将细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红高糖DMEM(含活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清5％)中培养,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照和2种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝法、^3H—TdR掺人法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析。结果 与溶剂对照组相比较,96μmol/L对PEO4处理24h,可明显抑制PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期阻滞在G2／M;随着培养时间延长至48h,32μmol/L GS也能明显抑制PEO4细胞增殖,在浓度低于8μmol/L时,GS有促进细胞增殖的趋势。ZEA对PEO4增殖的影响与雌二醇类似,96nmol/L ZEA对细胞处理24h可明显促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期由G0／Gl向S期推进,提高细胞分裂增殖指数。结论 ZEA具有较强的雌激素效应,在较低的浓度条件下(8nmol/L,92h)即可促进雌激素受体阳性细胞PEO4的增殖作用;GS对PEO4细胞的影响作用比较复杂,较低浓度的GS(＜10nmol／L)促进细胞的增殖作用,而在高浓度的处理条件下则抑制细胞的增殖作用。这些资料提示高剂量的GS有抗卵巢癌的作用,而ZEA具有雌激素样效应。     

Endocrine Activities of Pesticides During Ozonation of Waters

Two yeast-based bioassays were used to assess the endocrine activity potential of transformation products formed during the ozonation of water containing a variety of pesticides (propiconazole, atrazine, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid [2,4-D], tebuconazole, climbazole, myclobutanil, irgarol, terbutryn, dicamba, mecoprop and diuron). Ozone experiments were conducted first in reverse osmosis water to isolate the effects of the pesticides and then in synthetic wastewater and wastewater effluent to investigate whether the results translated to more complex matrices. The findings demonstrate the recalcitrant nature of most pesticides during ozonation, with removals below 50%, except for irgarol, terbutryn and climbazole with removals up to 70%. This study is the first one to investigate the removal of the fungicides myclobutanil and tebuconazole by ozonation and is one of the first studies to investigate the androgenic activity of ozonation transformation products of contaminants of emerging concern. These findings also demonstrated that during ozonation the initial anti-androgenic activity was removed while the estrogenic activity remained undetected and the androgenic activity increased to levels up to 60% of the anti-androgenic activity of the DHT control. These results indicate that bioactivity should be considered in the evaluation of treatment performance and risks assessment associated to wastewater discharges.     

Interlaboratory comparison of four in vitro assays for assessing androgenic and antiandrogenic activity of environmental chemicals

We evaluated and compared four in vitro assays to detect androgen agonists and antagonists in an international interlaboratory study. Laboratory 1 used a cell proliferation assay (assay 1) with human mammary carcinoma cells stably transfected with human androgen receptor. The other laboratories used reporter gene assays, two based on stably transfected human prostate carcinoma cells (assay 2) or human mammary carcinoma cells (assay 4), and the third based on transient transfection of Chinese hamster ovary cells (assay 3). Four laboratories received four coded compounds and two controls: two steroidal androgens, two antiandrogens, an androgenic control, 5alpha-dihydrotestosterone (DHT), and an antiandrogenic control, bicalutamide (ICI 176,334). All laboratories correctly detected the androgenic activity of 4-androsten-3,17-dione and 17alpha-methyltestosterone. For both compounds, the calculated androgenic potencies relative to the positive control (RAPs) remained within one order of magnitude. However, laboratory 3 calculated a 50-fold higher RAP for 4-androsten-3,17-dione. All assays detected and quantified the antiandrogenic effect of vinclozolin [median inhibitory concentration (IC50) values ranging from 1.1 times symbol 10(-7) M to 4.7 times symbol 10(-7) M]. In assays 2 and 3, vinclozolin showed partial androgenic activity at the highest concentrations tested. For vinclozolin, calculated antiandrogenic potencies relative to bicalutamide (RAAPs) differed no more than a factor of 10, and IC50 values matched those of bicalutamide. Similarly, we found antiandrogenic activity for tris-(4-chlorophenyl)methanol. RAAP values were between 0.086 and 0.37. Three assays showed cytotoxicity for this compound at or above 1 times symbol 10(-5) M. In summary, all assays proved sensitive screening tools to detect and quantify androgen receptor-mediated androgenic and antiandrogenic effects of these chemicals accurately, with coefficients of variation between 8 and 90%.     

双酚A等化学物对耗尽内源性雌激素诱导T47D细胞凋亡的影响

目的　在乳腺癌细胞株T4 7D细胞内采用雌激素耗尽的方法诱导其发生凋亡 ,然后观察对 壬基酚 (n 4 noniphenol,NP)、双酚A (bisphenolA ,BisA )和邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutylphthalate ,DBP)对这种凋亡的影响 ,探讨环境雌激素是否能够抑制雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用。方法　T4 7D细胞在达克尔培养液 (DMEM ,含 10 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,于实验前 4d将细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤后改为在无酚红DMEM培养 ,目的是耗尽细胞内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照 (E2 )、抗雌激素他莫昔芬 (TAM)对照及 3个试验组 ,采用流式细胞术 ,琼脂糖凝胶电泳和HE染色镜检观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡的影响。结果　流式细胞仪分析结果表明 ,雌激素耗尽能够诱导T4 7D细胞发生凋亡 ,凋亡率为 34 5 % ,此时往培养液中分别加入 32× 10 -7mol/LNP和 32× 10 -7mol/LBisA ,对细胞处理 72h ,可显著抑制细胞凋亡作用 (凋亡率分别变为 2 0 1%和 16 5 % ) ;琼脂糖凝胶电泳显示 ,细胞凋亡特有的DNA ladder消逝 ;HE染色镜检表明 ,细胞出现活跃核分裂相。加入 5× 10 -7mol/LTAM可加重细胞的凋亡现象 (细胞凋亡率为 5 5 6 % )。结论　NP和BisA均可抑制雌激素耗尽所诱导的T4 7D细胞的凋亡作用 ;     

三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的　观察对 壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)对乳腺癌细胞株MCF 7增殖的影响。方法　将MCF 7细胞在达尔克 (DMEM)培养液 (含 10 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养 ,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤后改在无酚红DMEM (含 5 %胎牛血清 )中培养继续 4d以耗尽其内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对MCF 7细胞的增殖情况进行分析。结果　与对照组相比 ,NP、BisA和DBP对细胞处理 2 4h ,分别在 96× 10 -7mol/L、96× 10 -7mol/L、96× 10 -6mol/L可促进MCF 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间延长至 96h ,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果。结论　对 壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF 7的增殖 ,可能具有雌激素样作用。