大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

实验性睾丸缺血超声表现与别嘌醇药物保护作用的相关性研究

目的:探讨不同程度急性单侧睾丸缺血及再灌注后的灰阶、彩色多普勒及超声造影表现与别嘌醇药物保护疗效的相关性。方法:42只新西兰大白兔随机分成对照组、缺血组(A、B、C组)和缺血给药组(D、E、F组),每组6只。缺血组与缺血给药组在超声监测下制成不同程度的单侧睾丸缺血模型,A组与D组,睾丸回声均匀、血流信号轻度减少;B组与E组,睾丸回声不均匀、血流信号明显减少;C组与F组,睾丸出现放射状或小片状低回声、血流信号消失。A、B、C组分别出现上述声像图变化后直接予以再灌注。缺血给药组出现上述声像图变化后腹腔注射别嘌醇(200 mg/kg)后予以再灌注。各组再灌注前及再灌注后3 d分别行双侧睾丸超声造影。再灌注3 d后观察各组术侧睾丸的病理变化与丙二醛(m alond ialdehyde,MDA)含量改变。比对分析不同程度急性单侧睾丸缺血超声表现与别嘌醇治疗疗效之间的关系。结果:睾丸超声造影表现,对照组呈"快进快退";再灌注前,A组与B组呈"慢进慢退,"C组呈大面积中央型"充盈缺损",再灌注后3 d,各缺血组呈"快进慢退",以C组最明显;D、E、F组超声造影表现均分别与A、B、C组相同。D组[(9.10±0.23)分]与A组[(8.53±0.22)分]比较,E组[(7.03±0.20)分]与B组[(5.82±0.33)分]比较,Johnsen's评分均有明显提高(P<0.05),F组[(2.45±0.33)分]与C组[(2.30±0.53)分]比较,Johnsen's评分无明显提高(P>0.05);D组[(1.68±0.43)%]与A组[(7.12±0.84)%]比较,E组[(12.53±0.59)%]与B组[(20.87±1.59)%]比较,凋亡指数均有明显降低(P<0.05),F组[(51.23±2.53)%]与C组[(52.93±2.62)%]比较,凋亡指数无明显降低(P>0.05)。D组[(0.64±0.05)nmol/mg prot]、E组[(1.59±0.06)nmol/mg prot]、F组[(3.10±0.17)nmol/mg prot]分别与A组[(1.38±0.07)nmol/mg prot]、B组[(2.11±0.08)nmol/mg prot]、C组[(3.25±0.14)nmol/mg prot]比较,缺血侧睾丸MDA含量均有明显降低(P<0.05)。结论:睾丸表现为轻度或中度缺血时,别嘌醇对睾丸生精功能的恢复有帮助,当表现为重度缺血时,别嘌醇对睾丸生精功能的恢复无明显效果。超声技术尤其是超声造影有助于指导睾丸缺血的药物治疗及预测疗效。     

肥胖对雄性大鼠生殖功能影响的机制研究

目的研究肥胖对雄性大鼠生殖功能的影响,初步探讨其氧化损伤的相关机制。方法 6周龄SD雄性大鼠随机分成对照组(普通饮食,15只)和肥胖组(高脂饮食,30只)。喂养16周后,处死,测定体重、脏器系数、代谢参数和生殖内分泌激素(GnRH、FSH、LH、TT、E_2)和SHBG,检测睾丸生精细胞凋亡、氧化应激和附睾精子参数,比较两组各指标差异。结果与对照组大鼠相比,肥胖组大鼠体重和Lee指数明显增加,血清瘦素(Lep)[(3.17±0.23)ng/ml vs.(2.33±0.21)ng/ml]、胰岛素(INS)[(28.99±2.43)μU/ml vs.(20.62±1.72)μU/ml]和甘油三酯(TG)[(0.55±0.03)mmol/L vs.(0.36±0.04)mmol/L]显著升高,血清GnRH[(36.46±1.95)pg/ml vs.(45.51±2.75)pg/ml]、LH[(3.06±0.37)U/L vs.(4.67±0.70)U/L]、总睾酮(TT)[(0.81±0.13)ng/ml vs.(1.98±0.32)ng/ml]、SHBG[(55.31±3.80)nmol/L vs.(71.69±4.65)nmol/L]显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);TUNEL结果显示,肥胖组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组[(4.26±0.35)%vs.(3.09±0.28)%,P0.05];氧化应激结果表明,肥胖组大鼠的MDA上升、SOD降低,差异有统计学意义(P0.05);附睾精子分析发现,与对照组相比,肥胖组大鼠的精子活力显著下降[(14.36±7.67)%vs.(36.40±9.17)%,P0.01],而精子浓度无显著性差异(P0.05)。结论高脂饮食诱导雄性大鼠的肥胖,代谢和生殖内分泌紊乱,氧化损伤增加,导致生精细胞凋亡增加,并最终使精子活力下降。     

褪黑素对大鼠睾丸扭转术后氧化应激及凋亡相关信号通路的影响

目的:研究褪黑素对大鼠单侧睾丸扭转/复位后睾丸氧化应激和凋亡相关基因信号通路的影响,探讨其保护性作用。方法:雄性SD大鼠24只,随机分成对照组、扭转组和褪黑素组,每组8只,建立720°2 h睾丸扭转动物模型。扭转组和褪黑素组于复位前15 min分别腹腔注射生理盐水和褪黑素(17 mg/kg),术后24 h留取手术侧睾丸。应用FCM检测各组生精细胞凋亡;qRT-PCR对Fas、FasL和Bax mRNA进行定量分析;Western印迹检测细胞色素C含量;分光光度法测定睾丸组织中髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)。结果:与扭转组相比,褪黑素组睾丸正常细胞百分比升高[(77.81±6.52)%vs(88.61±7.93)%,P0.05],早期凋亡生精细胞百分比减少[(16.74±3.16)%vs(6.97±1.65)%,P0.05],Fas、FasL和Bax mRNA表达显著下调[(4.52±0.29)vs(2.66±0.37);(2.82±0.30)vs(1.73±0.18);(2.39±0.18)vs(1.50±0.14),P均0.01];同时胞质中细胞色素C含量显著降低[(1.40±0.38)vs(0.67±0.30),P0.01],睾丸组织T-AOC活性显著回升[(0.76±0.25) U/mg prot vs(1.55±0.32) U/mg prot,P0.01],MPO和MDA含量显著下降[(0.52±0.15) U/g prot vs(0.19±0.10) U/g prot;(6.37±1.73) nmol/mg prot vs(3.98±0.90) nmol/mg prot,P0.01]。结论:褪黑素可能参与调控凋亡相关基因的表达,发挥组织抗氧化作用,对睾丸扭转术后的生精功能具有明显的保护性作用。     

葡萄籽原花青素对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用

目的:探讨葡萄籽原花青素(GSP)对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用。方法:24只健康雄性昆明小白鼠(8周龄,25～27 g)随机分为3组:对照组、扭转组、治疗组,每组8只。扭转组及治疗组建立单侧睾丸扭转复位动物模型,治疗组于扭转复位前30 min腹腔注射GSP(50 mg/kg),术后采用腹腔注射方式连续给药3 d,每天1次,每次50 mg/kg。扭转组方法同治疗组,治疗同体积生理盐水。术后第4天取扭转侧睾丸,检测组织病理学参数和生精细胞凋亡指数(AI),并检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。对照组行假手术。结果:治疗组与扭转组相比,Johnsen评分上升[(7.38±0.92)分vs(5.00±1.85)分,P<0.05],生精小管直径略增大[(178.75±1.58)μm vs(176.50±1.60)μm,P>0.05],生精细胞层数增加[(5.75±0.71)层vs(3.75±1.03)层,P<0.05],生精细胞凋亡指数AI明显降低[(16.25±1.67)%vs(40.50±1.60)%,P<0.05)],SOD活性明显上升[(52.67±3.57)U/mg prot vs(29.04±4.46)U/mg prot,P<0.05],MDA含量明显下降[(2.91±0.04)nmol/mg prot vs(4.63±0.05)nmol/mg prot,P<0.05]。结论:GSP对小鼠睾丸扭转复位后生精功能损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其能清除氧自由基、抑制脂质过氧化、提高机体抗氧化能力有关。     

富马酸二甲酯对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨富马酸二甲酯(DMF)在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用及可能的机制。方法将小鼠随机分成3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和DMF预处理组(DMF组)。IR组及DMF组制备肾脏IR模型,再灌注24h后收集血清及肾组织,测定血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)值;评定肾脏组织形态学改变;检测肾脏组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western-blot检测各组肾组织内核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白含量。结果IR组SCr及BUN显著高于S组[(143.17±14.18)μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L vs.(24.50±5.54)μmol/L,(8.25±2.14)mmol/L,P0.01];DMF组SCr及BUN均低于IR组[(81.83±9.39)μmol/L,(18.62±2.75)mmol/L vs.(143.17±14.18)μmol/L,(26.52±3.56)mmol/L](P0.01);和IR组比较,DMF组的组织形态学损伤较轻(P0.01);DMF组过氧化损伤指标MDA水平低于IR组[(3.55±0.48)μmol/g vs.(5.48±0.70)μmol/g](P0.01),而抗氧化酶SOD水平高于IR组[(35.02±4.13)kU/g vs.(23.80±4.36)kU/g](P0.01)。Western-blot及免疫组化结果显示DMF组Nrf2和HO-1蛋白表达水平高于IR组(P0.05)。结论 DMF对小鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路进而提高肾脏抗氧化应激能力有关。     

六味地黄丸降低手机频率电磁辐射对大鼠睾丸组织的损伤

目的:观察六味地黄丸对手机频率电磁辐射雄性大鼠睾丸组织形态学、氧化损伤和细胞凋亡的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常组、辐射组、六味地黄丸组,每组各10只。正常组不辐射,辐射组和六味地黄丸组大鼠每天暴露于900 MHz手机频率辐射4 h共18 d;六味地黄丸组大鼠每日灌胃六味地黄丸悬液(1 ml/100 g体重),其他组大鼠每天灌胃等量纯净水。实验结束后腹腔麻醉取材处死大鼠,分别取睾丸组织固定和冷冻,常规HE染色观察组织形态学变化,比色法检测睾丸组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平,免疫组化法观察睾丸细胞bax,bcl-2蛋白表达的平均光度值。结果:与正常组相比,辐射组大鼠睾丸生精小管细胞结构松散,精母细胞层数减少,内有空洞出现;睾丸组织MDA水平显著升高[(0.36±0.07)μmol/g prot vs(0.25±0.06)μmol/g prot,P0.05],GSH水平显著降低[(42.10±5.08)mg/g prot vs(52.29±4.16)mg/g prot,P0.05];辐射组大鼠睾丸生精细胞bax蛋白表达显著增强(0.91±0.10 vs 0.21±0.01,P0.01),bcl-2蛋白表达显著减弱(0.18±0.07 vs 0.70±0.94,P0.01)。六味地黄丸组大鼠睾丸组织形态学接近正常,与辐射组比较,睾丸组织MDA含量显著降低[(0.30±0.05)μmol/g prot,P0.05],GSH含量无明显变化[(45.34±5.21)mg/g prot,P0.05],睾丸生精细胞bax蛋白表达(0.41±0.05)明显减弱(P0.01),bcl-2蛋白表达(0.27±0.08)明显增强(P0.01)。结论:六味地黄丸可改善手机频率电磁辐射造成的大鼠睾丸组织结构损伤,降低睾丸组织氧化损伤,减少睾丸细胞凋亡。     

藏药鲁堆多吉水提物对雄性幼年大鼠生殖系统的影响

目的:研究藏药鲁堆多吉对雄性幼年大鼠生殖系统的影响。方法:将32只SD雄性幼年大鼠分为对照组、鲁堆多吉水提物低、中、高剂量组,灌胃2周后处死,用放射免疫法检测大鼠血清中睾酮(T)的含量,用ELISA试剂盒测量大鼠血清中LH和FSH的含量,称量大鼠的睾丸重量,计算体重增加量、睾丸脏器系数和精子浓度。将高剂量组大鼠血清在57℃水浴锅中灭活后,按0(对照组)、10%、15%、20%的体积分数加到培养的大鼠睾丸间质细胞中,分别用台盼蓝染色法和MTT检测细胞活率和活力,用放免法检测睾丸间质细胞培养液中T的含量,用大鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒检测睾丸间质细胞内cAMP的变化。结果:与对照组相比,低、中、高剂量的鲁堆多吉水提物能使幼年雄性大鼠的血清T水平[(1.22±0.32)、(1.06±0.29)、(0.57±0.18)nmol/L vs(3.09±0.42)nmol/L,P0.01]、睾丸重量[(0.96±0.09)、(0.92±0.11)、(0.91±0.08)g vs(1.40±0.16)g,P0.01]和精子浓度[(0.19±0.07)、(0.17±0.08)、(0.16±0.07)×106/ml vs(1.03±0.16)×106/ml,P0.01]显著降低,并且呈剂量依赖性。与对照组相比,中、高剂量给药组血清中的LH[(14.69±0.12)、(14.93±0.28)ng/L vs(13.62±0.89)ng/L,P0.01]、FSH[(4.77±0.23)、(4.89±0.38)IU/L vs(4.32±0.18)IU/L,P0.05]显著上升;睾丸脏器系数[(51.39±3.09)、(52.28±4.86)、(54.13±6.06)mg/10 g vs(42.22±3.02)mg/10 g,P0.01]显著提高。与对照组相比,鲁堆多吉水提物含药血清能显著抑制睾丸间质细胞内cAMP水平[(4.39±0.06)、(4.28±0.07)、(4.11±0.10)nmol/L vs(5.51±0.12)nmol/L,P0.01]和T的合成[(1.42±0.15)、(1.12±0.18)、(0.88±0.21)nmol/L vs(1.85±0.18)nmol/L,P0.01]。结论:鲁堆多吉水提物可能通过PKA途径抑制大鼠睾丸间质细胞中T的合成,从而抑制睾丸发育和精子生成,影响雄性幼鼠生殖系统的发育。     

肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响

目的 研究大鼠肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响.方法 36只SD大鼠随机分为假手术组(C组)和IR组,每组18只.IR组制成肝脏缺血1 h再灌注12 h的70%肝脏I/R损伤模型.每组取10只大鼠,再灌注12 h后采血,测定血糖及血胰岛素浓度并计算胰岛素分泌指数.每组另各取8只大鼠,进行高血糖钳夹试验.结果 IR组血糖水平明显高于C组[(9.02±1.37)mmol/L vs.(5.52±0.95)mmol/L](P<0.01),胰岛素浓度也显著高于C组[(116.45±10.87)mU/L vs.(73.65±22.87)mU/L](P<0.01),但IR组胰岛素分泌指数显著低于C组[(462.80±46.28) vs.(1 046.54±30.21)](P<0.01).高血糖钳夹试验显示,IR组2相胰岛素分泌量显著低于C组[(83.17±6.01)mU/L vs.(99.80±10.81)mU/L](P<0.05),葡萄槠代谢率也明显低于C组[(29.68±4.92)mg·kg-1·min-1 vs.(53.16±3.45)mg·kg-1·min-1](P<0.01),胰岛素敏感性指数显著低于C组[(30.97±8.11) vs.(64.34±7.21)](P<0.01).结论 肝脏缺血-再灌注损伤12 h后,大鼠胰岛β细胞分泌功能受损,外周组织的胰岛素敏感性明显下降.