精索静脉曲张大鼠附睾线粒体钙线粒体与细胞质细胞色素C含量变化及细胞的凋亡

背景：精索静脉曲张可导致男性不育，探讨其机制对治疗男性不育有着重要意义。目的：分析外科所致的精索静脉曲张对大鼠附睾细胞线粒体钙、细胞色素C含量及附睾细胞凋亡和其显微、超微结构的影响。设计：随机对照实验。材料：实验于2003—06／2004—05在佳木斯大学完成。选取青春期雄性Wistar大鼠40只，体质量（220&;#177;20）g，室温下饲养1周后，随机分为假手术组、结扎组，每组20只。方法：假手术组显露左肾静脉建立假手术模型，结扎组部分结扎左肾静脉建立精索静脉曲张模型。术后10周，取双侧附睾，检测附睾头、体部细胞线粒体钙、细胞色素C含量及细胞质细胞色素C含量。以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，常规制作附睾体部光镜、电镜标本，观察附睾组织细胞形态变化。主要观察指标：细胞线粒体钙、细胞色素C含量；细胞质细胞色素C含量；细胞凋亡；附睾组织细胞形态变化。结果：40只大鼠全部进入结果分析。①结扎组左右侧附睾细胞线粒体钙含量较假手术组显著降低[（4．72&;#177;1．45），（5．90&;#177;1．97），（10．13&;#177;2．34）mg／g，P〈0．011，②结扎组左右侧附睾细胞线粒体细胞色素C含量较假手术组线粒体组显著增高[（0.36&;#177;0．20），（0．19&;#177;0．14），（0．15&;#177;0．07）pmol／LP〈0．051。③结扎组左右侧附睾细胞胞质内细胞色素C含量较假手术组显著增高[（8．17&;#177;1．49），（7．48&;#177;1．60），（5．93&;#177;1．60）mol／L，（P〈0．05）④结扎组左右侧细胞凋亡率较假手术组显著增高[（13．3&;#177;1．9）％，（12．6&;#177;1．5）％，（6．2&;#177;0.3）％，P〈0．011。结扎组左右侧线粒体钙含量、细胞色素C、胞质细胞色素C、凋亡率差别均无显著性意义（P〉0．05）。⑤光镜下主要改变有附睾管萎缩，上皮细胞出现空泡化，上皮内晕、亮细胞数明显增多。⑥电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大，残余小体增加，内质网扩张，线粒体嵴模糊，高尔基复合体空泡化；核染色质致密，形成大小不等的团块，边集于核膜处：上皮细胞游离面微绒毛稀少，可见局灶性断裂和破坏。结论：外科所致精索静脉曲张大鼠附睾组织细胞线粒体有损伤，使线粒体丧失储钙功能，同时细胞色素C通过线粒体外膜被释放进入胞质中，导致Caspase3激活，执行凋亡，使附睾组织细胞凋亡过度，其显微及超微结构明显改变，这些变化可能是影响精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。     

神经生长因子对新生大鼠脑神经元细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的:观察神经生长因子对新生大鼠脑神经元细胞缺氧缺血性损伤的保护作用。方法:实验于2004-01/06在东南大学临床医学院中心实验室完成。①体外培养新生脑皮质神经元细胞后,改良Goldberg方法建立神经元细胞“缺氧缺血”损伤模型。②应用光学显微镜、透射电镜观察不同组之间(正常组、缺氧缺血组、缺氧缺血后即刻给以神经生长因子-80μg/L治疗组)神经元细胞形态、超微结构改变。③应用细胞免疫化学方法检测神经生长因子治疗组细胞色素C基因在转录及翻译水平的表达,与正常组及缺氧缺血组进行比较。结果:①光镜测量缺氧缺血组细胞突起长度明显低于正常组和治疗组[(7.591±1.354),(23.7595±0.945),(23.466±1.005)μm],而其细胞色素C阳性率及AIFmRNA表达相对含量明显高于另两组[(69.318±6.646)%,(41.193±4.472)%,(41.817±4.364)%,P<0.05]。上述测值正常组与治疗组差异无显著性(P>0.05)。②透射电镜观察细胞:缺氧缺血对照组细胞核形状不规则,染色质凝聚成块,核周间隙明显增厚,线粒体肿胀空泡化;正常组神经元细胞及治疗组神经元细胞核大呈圆形或椭圆形,常染色质均匀分布,可见明显的核仁,胞浆内线粒体、粗面内质网结构清晰,核糖体丰富。结论:①体外培养新生大鼠脑皮质神经元细胞,剥夺氧及糖6h后能够模拟缺氧缺血性神经元细胞损伤。与正常组相比,缺氧缺血模型组光镜及电镜示凋亡小体存在,线粒体结构异常;细胞色素C细胞免疫化学示阳性率明显增加。②适宜浓度(80μg/L)的外源性神经生长因子能够促进缺新生大鼠脑缺氧缺血性神经元细胞修复,保护线粒体。     

肝硬化门脉高压症中肝细胞线粒体钙、细胞色素C与细胞凋亡的关系

目的:实验证实线粒体保护剂可以保护肝细胞,抑制肝纤维化的形成。分析肝硬化门脉高压症肝组织中线粒体钙、细胞色素C及相关基因表达与肝细胞凋亡的关系,探讨线粒体钙和细胞色素C对肝细胞凋亡的作用机制。方法:实验于2000-07/2003-06在佳木斯大学小儿神经康复重点实验室完成。通过外科手术采集人肝硬化组织20例,正常肝组织20例,供肝者均知情同意。每例组织均分为两部分,一部分于-20℃冷冻,另一部分于甲醛中固定72h以上。定量分析两组肝组织中线粒体Ca2 、胞浆内细胞色素C含量、凋亡细胞数及Bcl-2,Bax蛋白表达强度。结果:①肝硬化组肝组织线粒体Ca2 、胞浆内细胞色素C含量及凋亡细胞数均显著高于正常对照组(P<0.05￣0.01)。②肝硬化组肝组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达强度均高于正常肝组织,但差异无显著性意义(P>0.05)。两组肝组织中Bcl-2表达阳性率均显著低于Bax(P<0.05)。结论:①肝硬化门脉高压症肝组织中线粒体钙、细胞色素C含量增加可引起肝损伤。②肝细胞凋亡过度与肝纤维化及肝硬化有密切关系。③肝硬化时Bax/Bcl-2系统中Bax表达占优势,是机体的一种防御反应,说明Bax是促进肝细胞凋亡的一个因素。     

GYY4137对精索静脉曲张大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响

目的探讨缓释硫化氢供体GYY4137对精索静脉曲张(varicocele, VC)大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组各15只。VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型,假手术组、假手术+GYY4137组仅开腹不结扎左肾静脉。VC+GYY4137组、假手术+GYY4137组术后腹腔注射GYY4137(20 mg/kg GYY4137溶于1 mL生理盐水),1次/d,连续4周,VC组、假手术组腹腔注射等量生理盐水。药物处理4周后处死大鼠,取左侧附睾组织行病理检查,TUNEL法检测4组附睾上皮细胞凋亡指数(apoptotic index, AI),免疫组织化学法检测附睾上皮细胞细胞色素C(cytochrome C, CytC)、caspase-3阳性表达率,Western blot法检测附睾组织CytC、caspase-3蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测附睾组织CytC mRNA、caspase-3 mRNA相对表达量。结果药物处理4周,假手术组、假手术+GYY4137组附睾结构正常、上皮细胞排列整齐,VC组附睾组织结构萎缩、附睾管腔结构破坏、间质水肿,VC+GYY4137组附睾结构破坏、间质水肿程度较VC组轻;药物处理4周,VC组、VC+GYY4137组附睾上皮细胞AI[(23.18±2.09)%、(12.73±1.14)%]、CytC阳性表达率[(25.24±1.99)%、(13.88±1.26)%]及caspase-3阳性表达率[(28.20±2.11)%、(17.33±1.28)%]高于假手术组[(5.46±0.46)%、(5.37±0.77)%、(4.52±0.63)%]、假手术+GYY4137组[(5.86±0.55)%、(5.53±0.52)%、(4.93±0.65)%](P0.05),VC组高于VC+GYY4137组(P0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P0.05);VC组、VC+GYY4137组附睾组织CytC蛋白相对表达量(0.38±0.02、0.27±0.01)、CytC mRNA相对表达量(3.64±0.41、1.55±0.14)、caspase-3蛋白相对表达量(0.27±0.02、0.22±0.01)、caspase-3 mRNA相对表达量(4.09±0.36、2.27±0.32)均高于假手术组(CytC蛋白:0.11±0.03;CytC mRNA:1.01±0.04;caspase-3蛋白:0.10±0.01;caspase-3 mRNA:1.03±0.15)、假手术+GYY4137组(CytC蛋白:0.12±0.01;CytC mRNA:1.00±0.10;caspase-3蛋白:0.09±0.01;caspase-3 mRNA:1.09±0.18)(P0.05),且VC组高于VC+GYY4137组(P0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 GYY4137通过下调VC大鼠附睾组织CytC及caspase-3表达,抑制附睾上皮细胞凋亡,减轻附睾组织损伤。     

山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌注后脑线粒体损伤的保护作用

背景山莨菪碱是从茄科唐古特莨菪中提取的一种生物碱,是一种良好的细胞保护剂.而线粒体功能变化是反映细胞损伤的最敏感指标之一.目的观察山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌流后脑线粒体损伤的影响,探讨山莨菪碱的脑保护作用.设计完全随机对照实验.单位华中科技大学同济医学院附属同济医院.材料实验于2002-09/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成.选择30只健康家兔,随机分为假手术组、缺血再灌流组、山莨菪碱组,每组10只.方法采用"结扎双侧椎动脉和夹闭双侧颈总动脉+体循环低血压"建立全脑缺血再灌流模型,缺血20 min,再灌流2 h.山莨菪碱组于再灌流前1 min由股静脉给予山莨菪碱,剂量为10 mg/kg,并以5 mg/h速度维持治疗2 h.缺血再灌流组再灌流期间给予等量生理盐水治疗;假手术组只接受手术,但不结扎和夹闭血管.①采用氧化电极法测定脑线粒体呼吸功能,包括呼吸控制率,磷氧比,氧化磷酸化效率.②采用氧电极法测定脑线粒体内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶,琥珀酸氧化酶,细胞色素C氧化酶活性.③采用原子吸收光谱法测定脑线粒体钙含量.④采用改良八木国夫法测定脑线粒体丙二醛含量.主要观察指标①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸功能、呼吸链氧化酶活性变化.②各组家兔大脑皮质线粒体内钙和丙二醛含量.结果30只家兔均进入结果分析.①各组家兔大脑皮质线粒体呼吸控制率、磷氧比、氧化磷酸化效率缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组[烟酰胺腺嘌呤二核苷酸链呼吸控制率2.34±0.18,3.58±0.29,4.07±0.38,P＜0.05～0.01;磷氧比1.77±0.10,2.23±0.14,2.41±0.17,P＜0.05～0.01;氧化磷酸化效率(527±0.78),(8.03±1.30),(9.63±1.50)μkat/g,P＜0.05～0.01;黄素腺嘌呤二核苷酸链呼吸控制率1.47±0.23,2.53±0.28,2.84±0.36,P＜0.05～0.01;磷氧比0.88±0.09,1.58±0.11,1.73±0.17,P＜0.05～0.01;氧化磷酸化效率(6.05±1.13),(7.47±1.40),(8.62±1.60)μkat/g,P＜0.05～0.01],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P＜0.01).②各组家兔大脑皮质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶活性缺血再灌流组和山莨菪碱组低于假手术组[还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶(2.62±0.35),(4.55±0.48),(5.07±0.60)μkat/g;琥珀酸氧化酶(1.48±0.17),(1.83±0.22),(2.10±0.28)μkat/g;细胞色素C氧化酶(5.03±1.12),(7.62±1.23),(9.00±1.53)μkat/g,(P＜0.05～0.01)],山莨菪碱组明显高于缺血再灌注组(P＜0.01).③各组大鼠脑线粒体钙和丙二醛含量缺血再灌流组和山莨菪碱组高于假手术组[钙(2.36±0.23),(1.39±0.17),(1.22±0.12)mg/g;丙二醛[(36.38±10.42),(22.69±9.56),(19.74±7.26)μmol/g,(P＜0.05～0.01)].山莨菪碱组低于缺血再灌流组(P＜0.01).结论山莨菪碱可通过钙拮抗、抑制脂质过氧化、稳定线粒体膜,减轻线粒体结构损伤,并促进缺血再灌流后线粒体呼吸功能、呼吸链酶活性的恢复,从线粒体水平发挥脑保护作用.     

流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子线粒体膜电位的研究

目的 应用流式细胞术检测精索静脉曲张(VC)患者精子线粒体膜电位并探讨其临床意义.方法 将67例精索静脉曲张患者分为VC1组(精索静脉曲张1度,n＝26),VC2组(精索静脉曲张2度,n＝21)和VC3组(精索静脉曲张3度,n＝20),以正常生育男性为正常对照组(n＝29).通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析.精液标本洗涤处理后用荧光染料罗丹明(Rh123)和碘化丙锭(PI)染色后上流式细胞仪分析,检测精子线粒体膜电位(Rh123+/PI-%).结果 VC1,VC2和VC3组精子线粒体膜电位分别为(50.92±17.62)%,(41.34±16.78)%,(26.36±13.61)%,均显著低于正常对照组[(65.12±13.86)%,P<0.05或P<0.01].96例标本中,精子线粒体膜电位与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.647,P=0.000),而与其他参数无显著相关性(P>0.05).结论 精索静脉曲张可引起精子线粒体膜电位降低,可能是导致男性不育的重要原因之一.     

涤痰汤对脑出血大鼠神经元线粒体内细胞色素C释放的影响

目的:观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶及诱导细胞凋亡的细胞色素C的释放规律以及血肿变化和中药涤痰汤的干预作用。方法:实验于2003-10/2004-03在中南大学中西医结合研究所实验室进行。取健康SD大鼠65只,随机分成4组:正常组(n=5),假手术组(n=20),模型组(n=20),涤痰汤组(n=20),除正常组外,其余3组设4个时间点:6h,1,3,5d,每个时间点5只大鼠。正常组不干预,模型组和涤痰汤组用脑内立体定位注射含0.4UⅫ型胶原酶的生理盐水2μL诱导大鼠脑出血模型,假手术组注入2μL生理盐水。涤痰汤组大鼠手术清醒后即灌服涤痰汤中药煎液(半夏、南星各12g,橘红7.5g,枳实、赤茯苓各10g,石菖蒲、人参各5g,竹茹3.5g,甘草2.5g)生药2.67g/(kg·d),模型组和假手术组用蒸馏水灌胃,2mL/次,2次/d。神经元线粒体内细胞色素C的释放情况应用免疫组织化学法检测,不同时间点大鼠脑内血肿的最大直径用直尺测量。结果:65只动物均进入结果分析。①脑组织细胞色素C阳性细胞计数:正常组未见阳性细胞;假手术组仅于6h,1d时见少数阳性表达细胞,余时间点未见阳性细胞;模型组血肿周围于6h出现阳性表达细胞,1d阳性细胞计数达高峰,3d出现轻度下降,5d明显下降犤(12.66±2.12),(51.74±2.13),(35.46±2.84),(17.34±2.08)个犦;涤痰汤组与同时间模型组比较在6h计数无明显差异犤(12.68±2.06)个,P>0.05犦,1,3,5d时阳性细胞减少明显犤(50.28±2.87),(31.12±3.05),(13.18±2.94)个,P<0.05犦。②脑血肿的最大直径:正常组和假手术组无血肿形成;模型组造模后于1d达到最大,3d有所变小,5d最小犤(4.08±0.16),(3.58±0.15),(2.48±0.15)mm犦;涤痰汤组在3d时血肿小于模型组犤(3.22±0.26)mm,P<0.05犦,5d时差距更明显犤(1.70±0.19),P<0.01犦。结论:脑出血后血肿周围的神经元细胞色素C释放明显增多,而且是脑出血的一个早期事件,从脑出血后6h即开始,1d最明显,而后逐渐下降;涤痰汤具有阻止细胞色素C释入胞浆的作用,从而阻断凋亡信号进一步传导,保护脑出血后神经元免于凋亡;同时促进血肿的吸收。     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的:观察给予外源性重组人红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-03/06在解放军第四军医大学病理实验室进行。①取新生7dSD大鼠72只,随机分为3组(n=24),假手术组、模型组和促红细胞生成素组,各组又分为造模后6,24,48,72h组4个亚组,每组6只大鼠。②促红细胞生成素组和模型组大鼠结扎右颈动脉,手术后即刻分别腹腔内注射重组人红细胞生成素注射液(10U/g)及同体积生理盐水,手术后2h两组大鼠吸入体积分数为0.08氧气和体积分数为0.92氮气的混合气体2h,建立缺氧缺血脑损伤新生鼠模型及促红细胞生成素治疗模型。假手术组分离动脉不结扎,不缺氧。③各组大鼠在造模后相应时间点断头处死,采用TUNEL法检测大脑海马区神经细胞凋亡情况。结果:经补充后72只进入结果分析。①模型组6h右侧海马CA1区出现凋亡细胞[(19.10±5.90)个],24h显著增高,48h达高峰[(65.70±8.33)个]后逐渐下降,但72h仍高于假手术组[(28.70±5.74),(0.60±0.84)个,F=71.587,P<0.01]。②促红细胞生成素组各个时间点CA1区的凋亡细胞数均少于模型组(P<0.01),尤其在24h最明显[(28.20±7.77),(60.30±7.75)个,t=-9.251,P<0.01]。结论:外源性重组人红细胞生成素能抑制缺氧缺血性脑损伤后的神经细胞凋亡,对脑组织确有保护作用。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑损伤后线粒体Ca~(2+)、细胞色素C的影响

目的观察缺血预处理对大鼠局灶性脑损伤后线粒体Ca2+、细胞色素C的影响。方法用大鼠右侧大脑中动脉阻闭制成局灶性脑缺血模型。24只大鼠,每组8只,随机分为缺血预处理组、模型组和假手术组。缺血预处理组给予30 min预缺血,72 h再灌注,后续2 h缺血,4 h再灌注。用张均田的改良方法测定细胞色素C含量。用火焰原子吸收法检测线粒体Ca2+含量。结果缺血预处理组动物的细胞色素C、Ca2+,与假手术组相比差异显著(P0.05,P0.01),缺血预处理组与模型组相比差异显著(P0.05,P0.01)。结论缺血预处理减少线粒体释放细胞色素C,维持线粒体Ca2+稳态     

糖尿病大鼠卵巢组织中细胞色素C、线粒体Ca2+变化与灵芝孢子粉的干预

目的:以卵巢组织中细胞色素C、线粒体Ca2 和性激素水平为观察指标,观察灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠卵巢组织的保护作用。方法:实验于2006-06/08在佳木斯大学黑龙江省小儿神经康复重点实验室完成。①实验对象:Wistar雌性大鼠50只,随机分为对照组10只,2型糖尿病模型组20只,灵芝孢子粉组20只。②实验方法:大鼠禁食16～18h,自由饮水,模型组及灵芝孢子粉组大鼠经尾静脉一次性按25mg/kg注射2%链脲佐菌素,正常对照组尾静脉注射等量柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后,进行糖耐量试验,模型组和灵芝组以糖耐量异常者保留,余去除,并改喂高脂高糖饮食,灵芝孢子粉组另加灵芝孢子粉[250mg/(kg·d)]持续10周,实验结束前一天再次做糖耐量试验。③实验评估:实验结束后,各组动物均禁食12h,乙醚吸入浅麻醉,内眦静脉取血待测血清胰岛素。解剖出卵巢,待测线粒体细胞色素C、线粒体Ca2 含量。结果:选用Wistar雌性大鼠50只,结果分析数量每组8只。①葡萄糖耐量试验:实验开始及实验12周时,模型组大鼠均表现出糖耐量异常的变化(P<0.05),1h血糖增高显著(P<0.05)达到高峰,2h血糖仍较高;对照组大鼠30min血糖达到峰值,2h血糖基本恢复正常。②血清胰岛素和卵巢性激素水平:模型组血清胰岛素明显升高(P<0.05)。而灵芝孢子粉组与对照组比较差异无显著性。模型组雌二醇含量明显降低(P<0.05),卵胞刺激素含量、睾酮含量明显升高(P<0.05),而灵芝孢子粉组与对照组比较差异无显著性。③胞浆细胞色素C、线粒体细胞色素C、线粒体钙变化:模型组卵巢组织胞浆细胞色素C含量明显升高(P<0.05),模型组卵巢组织线粒体细胞色素C含量明显降低(P<0.05),模型组卵巢组织线粒体钙含量明显降低(P<0.05);而灵芝孢子粉组与对照组比较差异均无显著性。结论:灵芝孢子粉可降低糖尿病大鼠血清胰岛素、卵巢组织卵胞刺激素、睾酮、胞浆细胞色素C含量,调节卵巢组织雌二醇、线粒体细胞色素C、钙含量,对糖尿病大鼠卵巢组织具有一定保护作用。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠凝血及纤溶功能的影响与补充外源性17β-雌二醇的比较

背景天然植物雌激素α-玉米赤霉醇具有与雌激素类似的抗动脉粥样硬化作用,且副作用明显低于雌激素,有一定的应用前景. 目的探讨补充外源性17β-雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠凝血及纤溶功能的影响,并对二者的药物作用进行比较分析. 设计观察对比实验. 单位首都医科大学病理生理学教研室和中国医学科学院中国协和医.科大学基础医学研究所病理生理学系. 材料实验于2003-07/09在首都医科大学实验动物科学部完成.选择36只12周龄健康雌性Wistar大鼠,体质量(250±10)g,清洁级,随机分为4组,假手术对照组、去卵巢组、去卵巢+17β-雌二醇组及去卵巢+α-玉米赤霉醇组各9只. 方法假手术对照组开腹而不摘除卵巢.去卵巢组在无菌条件下摘除双侧卵巢复制去卵巢动物模型.去卵巢+17β-雌二醇组和去卵巢+α-玉米赤霉醇组分别在去卵巢14 d后肌注17β-雌二醇(1 mg/kg)和α-玉米赤霉醇(1mg/kg),3 d注射1次,共35 d.实验结束后大鼠经颈总动脉采血,分离血浆备用.用凝固法测定血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间.用全自动生化分析仪测定血浆纤维蛋白原水平.用酶联免疫吸附法测定血浆组织因子水平.组织型纤溶酶原激活剂及纤溶酶原激活剂抑制物活性测定均采用发色底物法.同时分离子宫,计算子宫质量与体质量的比值. 主要观察指标①血浆凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、血浆纤维蛋白原水平、血浆组织因子水平、组织型纤溶酶原激活剂活性及纤溶酶原激活剂抑制物活性.②子宫质量/体质量的比值. 结果36只大鼠全部进入结果分析.①凝血酶原时间变化去卵巢组显著短于假手术对照组(P＜0.01);补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后长于去卵巢组(P＜0.05～0.01).②纤维蛋白原和组织因子水平变化去卵巢组显著高于假手术对照组(P＜0.05～0.01);补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后低于去卵巢组(P＜0.05～0.01).③组织型纤溶酶原激活剂活性变化去卵巢组显著低于假手术对照组[(0.33±0.33)μkat/L,(4.00±1.50)μkat/L,(q=9.43,P＜0.01)].补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后[(1.83±0.67)μkat/L,(1.17±0.83)μkat/L]显著高于去卵巢组(q=13.30,P＜0.01;q=5.00,P＜0.05).④纤溶酶原激活剂抑制物活性变化去卵巢组显著高于假手术对照组[2.33±0.67)μkat/L,(1.17±0.33)μkat/L,(q=10.5,P＜0.01)].⑤子宫质量/体质量比值去卵巢+α-玉米赤霉醇组明显低于去卵巢+17β-雌二醇组[0.66,1.96,(q=14.67,P＜0.01)]. 结论补充外源性17β-雌二醇或α-玉米赤霉醇后,均可使去卵巢大鼠重新建立起凝血-纤溶的动态平衡,表明α-玉米赤霉醇具有同17β-雌二醇相似的心血管保护作用,且其致子宫增生的副作用明显小于17β-雌二醇,是一种有一定应用前景的雌激素替代药物.     

天年饮干预亚急性衰老大鼠模型的性腺功能

背景随着机体衰老性腺功能逐渐降低,中国传统医学认为精气虚弱是导致机体衰老的主要原因. 目的观察中药天年饮对亚急性衰老大鼠血清睾酮含量、睾丸组织超氧化物歧化酶的活性及睾丸生精细胞凋亡的影响. 设计随机对照实验. 单位承德医学院人体解剖学教研室. 材料实验于2003-04/07在承德医学院基础医学研究所进行.选择成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.模型组、用药组、对照组采用D-半乳糖连续腹腔注射200mg/(kg·d)制备亚急性衰老动物模型,1次/d,共40 d,模型组大鼠于造模成功后不再作任何处理.用药组大鼠于造模成功后每天用天年饮灌胃(天年饮由灸何首乌、怀牛膝、肉从蓉、茯苓、丹参、淫羊藿6味中药组成,经熬制后含生药1.5 g/mL),1次/d,共30 d;对照组大鼠在造模成功后每天灌胃同等剂量的生理盐水,时间同用药组大鼠.方法各组大鼠血清中睾酮的含量采用酶联免疫吸附方法检测,睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测,睾丸生精细胞的凋亡情况采用免疫组化法观察. 主要观察指标①各组大鼠血清中睾酮的含量.②睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性.③睾丸生精细胞的凋亡情况. 结果40只大鼠均进入结果分析.①血清中睾酮的含量模型组大鼠血清睾酮含量低于正常组[(0.52±0.15)μg/L,(1.26±0.32)μg/L,(t=3.004,P＜0.05)],用药组高于模型组[(1.16±0.32)μg/L,(0.52±0.15)μg/L,(t=2.321,P＜0.05)].②睾丸组织超氧化物歧化酶的活性模型组明显低于正常组[(107.22±9.33)kNU/g,(147.73±11.9)kNU/g,(t=13.339,P＜0.01)],用药组明显高于模型组[(141.05±14.57)kNU/g,(107.22±9.33)kNU/g,(t=9.970,P＜0.01)].③生精细胞的凋亡情况模型组凋亡生精小管百分率、凋亡阳性细胞率均明显高于正常组[(53.95±2.02)%比(34.21±2.10)%,(8.67±0.80)%比(3.86±0.52)%,(x2=7.9,＜0.01,x25.01.P＜0.05)];用药组明显低于模型组[(35.33±2.18)%比(53.95±2.02)%,(4.68±0.74)%比(8.67±0.80)%,(x2=7.02,P＜0.01,x2=3.96,P＜0.05)]. 结论衰老模型睾丸生精细胞凋亡增多,经天年饮灌胃后可以使凋亡细胞阳性率明显下降,说明天年饮可以清除体内过多的氧自由基,减少凋亡发生,改善动物模型的生精功能.     

大鼠全脑缺血再灌注时左旋四氢巴马汀对脑内离子稳态平衡的影响

背景脑缺血再灌注可使脑内离子稳态遭到严重破坏,这种离子稳态的破坏又可加重脑缺血再灌注损伤.目的通过观察脑缺血再灌注时脑组织钙、镁、锌、钠、钾、铁含量的变化,探讨左旋四氢巴马丁在全脑缺血再灌注损伤时的作用机制.设计完全随机设计,对照实验研究.地点和材料本研究的地点为华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科.材料由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供清洁级Wistar大鼠35只,雌雄不拘,体重180～200 g,鼠龄4～6周.方法建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型,用原子分光光度仪检测脑组织电解质含量.结果与假手术组比较脑缺血再灌注12 h组钙[(218.66±11.88)μg/g,q=5.526,P＜0.01]、锌[(72.45±0.830)μg/g,q=23.240,P＜0.01]、钠[(5 237.85±106.48)μg/g,q=7.956,P＜0.01]、钾[(15 421.52±264.86)μg/g,q=3.805,P＜0.05]、铁[(151.27±10.21)μg/g,q=3.392,P＜0.05]含量增高,镁[(617.71±13.91)μg/g,q=5.009,P＜0.01]含量降低;24 h钙[(295.63±64.69)μg/g,q=12.251,P＜0.01]、锌[(74.44±0.47)μg/g,q=27.354,P＜0.01]含量进一步增高,镁[(587.14±10.90)μg/g,q=10.499,P＜0.01]含量进一步降低,钠[(5 056.68±100.18)μg/g,q=5.269,P＜0.01]、钾[(15 116.52±631.96)μg/g,q=4.156,P＜0.05]含量仍升高,铁[(118.79±14.22)μg/g,q=2.515,P＞0.05]含量与假手术组接近.左旋四氢巴马丁在脑缺血再灌注12 h和24 h均能抑制脑组织钙[(175.67±2.70)μg/g,q=3.756,P＜0.05;(190.76±4.60)μg/g,q=9.163,P＜0.01]、锌[(66.77±1.14)μg/g,q=11.758,P＜0.01;(69.94±0.98)μg/g,q=9.304,P＜0.01]、钠[(4 841.94±179.00)μ.g/g,q=4.206,P＜0.05;(4 251.05±194.31)μg/g,q=3.183,P＞0.05]含量的上升,并提高脑组织镁[(706.21±25.92)μg/g,q=15.888,P＜0.01;(662.80±9.74)μg/g,q=13.585,P＜0.01]和钾[(16 294.68±102.48)μg/g,q=5.274,P＜0.01;(16 577.51±152.46)μg/g,q=3.339,P＞0.05]的含量,降低铁[(86.90±2.89)μg/g,q=11.607,P＜0.01;(84.85±3.21)μg/g,q=11.795,P＜0.01)含量.结论左旋四氢巴马丁可抑制脑缺血再灌注期间脑组织钙、锌、钠含量的上升,提高镁和钾含量,降低铁含量.     

染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨质疏松的影响

背景染料木黄酮是植物性雌激素大豆异黄酮的主要成分,其结构与雌激素相似,提示它可能预防或延缓骨质疏松的发生发展.有关染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨钙、磷、锌和锰影响的研究较少.目的研究染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨钙、磷、锌和锰的影响,为染料木黄酮用于预防骨质疏松提供理论依据.设计以实验动物为研究对象的对照性实验研究.单位解放军总医院营养科.材料实验于2003-02/06在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所完成.10周龄雌性Wistar大鼠(合格证号军医动D98014号),体重(170±20)g.干预实验动物饲正常饲料6周后,改饲AIN-93合成饲料,5 d后按体质量随机分为去势组(n=40)和假手术组(n=7).去势组手术切除双侧卵巢,假手术组只做腹部切开术,恢复5 d后,将去势组按体质量随机分为5组,每组8只去势对照组、雌激素组[己烯雌酚20 μg/(kg穌)]、染料木黄酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组[剂量分别为25,50,100 mg/(kg·d)].饲养3个月,随机抽取各组大鼠6只测量骨密度和骨组织形态计量学相关指标.主要观察指标各组大鼠骨密度、骨矿化相关参数、骨中钙、磷、锌和镁含量.结果大鼠去势后,股骨骨密度[(0.247±0.007)g/cm2]降低,平均类骨质宽度[(7.04±0.32)μm]增大,骨矿化延迟时间[(4 96±0.99)d]和类骨质成熟时间[(26.99±7.70)d]延长,骨中钙[(251.11±5.31)mg/g]、磷[(115.08±3.78)mg/g]、锌[(299.69±37.1)μg/g]和镁[(4.32±0.12)μg/g],与假手术组比较,差异均有显著性(P＜0.05);补充染料木黄酮后,股骨骨密度[(0.250±0.007)g/cm2]有改善的趋势,平均类骨质宽度[(4.87±0.77)μm]变窄,骨矿化延迟时间[(3.18±0.69)d]和类骨质成熟时间[(14.53±3.84)d]缩短,骨中钙[(270.00±5.65)mg/g]、磷[(124.25±2.37)mg/g]、镁[(4.61±0.08)μg/g]含量升高,锌无显著变化.结论染料木黄酮促进去势大鼠类骨质矿化,减少骨中钙、磷、镁丢失,预防骨质疏松的发生.     

腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h最为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.     

创伤修复期间参附注射液对肠黏膜的保护作用

背景创伤修复期间胃肠道存在再灌注损伤和灌注不全,引起肠黏膜损伤.目的观察人用等效剂量参附注射液对创伤修复期间家兔肠pH、肠黏膜一氧化氮、丙二醛、Ca2+含量、血清双胺氧化酶的影响.设计以实验动物为观察对象的随机对照实验.单位武汉大学人民医院麻醉科.材料实验于2003-08/10在武汉大学人民医院麻醉学研究室完成,选择健康家兔24只随机分为3组参附注射液治疗组、单纯创伤修复组和对照组,每组8只.干预措施通过股动脉放血[2 mL/(kg·min)],平均动脉压降至40mmHg并持续60 min,回输自体血及等量平衡盐液制备兔创伤修复模型;参附注射液组于回输自体血同时先静注参附注射液2.1 mL/kg,随后持续注入参附注射液5 mL/(kg·h).主要观察指标分别于实验前,创伤修复1 h,及再灌注1,3 h检测乙状结肠黏膜内pH、肠黏膜一氧化氮、丙二醛及钙含量、血清双胺氧化酶活性.结果24只家兔均进入结果分析.①参附注射液治疗组再灌注1,3 h肠黏膜pH为7.171±0.102,7.194±0.106,高于单纯创伤修复组(6.920±0.155,6.971±0.165,P＜0.05,P＜0.01)及对照组(7.329±0.038,7.322±0.101,P＜0.05).②参附注射液治疗组再灌注1,3 h血清双胺氧化酶为(35.090±1.184),(32.440±2.884)μkat/L,显著高于单纯创伤修复组[(50.994±2.684),(52.377±1.217)μkat/L,P＜0.01]及对照组[(15.970±1.734),(16.620±0.767)μkat/L,P＜0.05].③再灌注3 h肠黏膜一氧化氮、丙二醛含量参附注射液治疗组均显著低于单纯创伤修复组[(61.8±5.3,72.2±5.8)μmol/g,(68.2±4.9,96.9±8.5)μmol/L,P＜0.05].再灌注3 h肠黏膜Ca2+含量参附注射液治疗组为(2.43±0.27)μnol/L,低于单纯创伤修复组[(2.93±0.34)μmol/L,P＜0.05],高于对照组[(2.26±0.31)μnol/L,(P＜0.05)].结论给予家兔人用等效剂量的参附注射液,增加了肠黏膜灌注及氧合作用,抑制了肠黏膜一氧化氮活性和清除氧自由基及减轻钙超载,对创伤修复期间肠黏膜具有良好的保护作用.     

姜黄素上调线粒体融合蛋白2抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 研究姜黄素抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的作用与机制.方法 取45只清洁级BALB/c雄性小鼠,随机(随机数字法)分为3组,即假手术组(n=15),脓毒症组(n=15),姜黄素组(n=15),实验重复3次.脓毒症组行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),术前予等体积生理盐水灌胃1周;姜黄素组行CLP术,术前给予姜黄素200 mg/ (kg-d)灌胃1周;假手术组仅行开腹,不予以结扎、穿孔,术前等体积生理盐水灌胃1周.观察各组小鼠术后24h病死率,并处死存活小鼠,分离脾脏淋巴细胞.采用流式细胞术、TUNEL法检测淋巴细胞凋亡情况;流式细胞术检测线粒体膜电位水平;Western Blot检测线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)、Bax、Bcl-2蛋白表达.数据采用SPSS 18.0软件进行分析,计数资料采用x2检验,计量资料组间比较采用单因素方差分析.结果 小鼠病死率采用x2检验,脓毒症组小鼠术后24h病死率为46.7％,较假手术组0.00％明显升高(x2 =27.391,P＜0.01),姜黄素组病死率较脓毒症组有所降低(40.0％ vs.46.7％,x2=6.429,P=0.01).脾淋巴细胞凋亡率比较采用单因素方差分析,3组比较,P＜0.01,差异具有统计学意义.进一步两两比较,脓毒症组脾淋巴细胞凋亡率为(17.1±1.67)％,较假手术组(9.43±1.06)％明显增高(P ＜0.001);姜黄素组淋巴细胞凋亡率(12.70±1.25)％较脓毒症组比较明显下降(P=0.012).脾淋巴细胞线粒体膜电位比较采用单因素方差分析,3组比较P＜0.01,差异具有统计学意义.进一步两两比较,脓毒症组线粒体膜电位降低率为(45.13±4.14)％,较假手术组(21.63±1.62)％明显升高(P＜0.01),姜黄素组线粒体膜电位降低率为(29.67±2.15)％,较脓毒症组明显降低(P=0.001).蛋白表达情况采用单因素方差分析,3组线粒体Bax蛋白(P＜0.01)、胞浆Bax蛋白(P＜0.01),差异具有统计学意义.进一步两两比较,与假手术组比较,脓毒症组线粒体Bax蛋白表达水平明显上调(P=0.001),而胞浆Bax蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).经姜黄素预处理后线粒体Bax蛋白水平较脓毒症组明显降低(P=0.02),胞浆Bax蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).3组细胞总Mfn2蛋白(P ＜0.001)、Bcl-2蛋白(P=0.001),差异具有统计学意义.进一步两两比较,与假手术组比较,脓毒症组Mfn2蛋白(P=0.015)、Bcl-2蛋白(P=0.01)表达水平明显降低,经姜黄素预处理后Mfn2蛋白(P=0.002)、Bcl-2蛋白(P =0.001)水平明显上调.结论 姜黄素能够上调Mfn2表达,促进线粒体融合进而抑制脓毒症小鼠脾淋巴细胞的凋亡.     

黄芪对新生鼠乏氧缺血脑损伤后海马区神经的保护及学习记忆能力的干预

背景:黄芪可通过减轻兴奋性氨基酸的释放及在细胞间的堆积、缓解Ca2 超载、抗氧化等途径抑制凋亡的发生。目的:将黄芪用于未成熟脑缺氧缺血脑损伤的治疗,一方面检测其对海马缺氧缺血后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA表达水平的影响,另一方面通过迷宫实验观察黄芪对缺氧缺血脑损伤的成熟鼠学习记忆能力的干预。设计:随机对照实验。单位:东南大学临床医学院/附属中大医院儿科,基础医学院病理科。材料:实验于2002-10/2003-06在东南大学临床医学院实验中心完成。选取出生7d的同窝SD大鼠114只,随机分成3组:假手术组18只,模型组48只,黄芪治疗组48只。黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产,规格为10mL/支,含生药20g。方法:模型组与黄芪治疗组建立缺氧缺血脑损伤模型,假手术组不造模。黄芪治疗组于造模后即刻及每天同一时间腹腔注射0.08mL黄芪注射液,7d后停药,模型组于同时间腹腔注射等量生理盐水,假手术组不给药。黄芪治疗组及模型组在缺氧缺血后24h,5d断头取脑,假手术组于假手术后24h断头取脑。各组海马区脑损伤行组织病理学检测,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达采用半定量反转录-聚合酶反应方法进行检查,成年90d龄的大鼠进行三等分迷宫测试其学习记忆能力,3个实验各自独立。主要观察指标:①各组海马区脑损伤组织病理学检测。②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达。③三等分迷宫试验结果。结果:实验纳入大鼠114只,全部进入结果分析。①各组海马区脑损伤组织病理学检测:假手术组双侧海马区组织无水肿、坏死,神经细胞形态正常,神经细胞数为(87.7±0.6)×103/高倍视野。模型组24h时结扎侧海马区水肿,细胞周围间隙增宽,神经细胞数减少为(68.8±3.0)×103/高倍视野,与假手术组比较差异显著(P<0.01);5d时结扎侧海马体积缩小,锥状细胞层紊乱,神经细胞稀少至(48.7±2.2)×103/高倍视野,与假手术组及同侧24h时比较均有显著差异(P<0.01)。黄芪治疗组24h时结扎侧海马区组织水肿较模型组明显减轻,5d时可观察到完整的海马形态,此两时间点神经细胞死亡率均较模型组明显减低(P<0.01)。②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达:假手术组以低水平表达,吸光度值为0.220±0.009。模型组于缺氧缺血后逐渐升高,6h时比假手术组升高11%,至24h时mRNA水平达高峰,较假手术组约升高260%(P<0.01),高峰持续至48h后下降,5d和7d时恢复基础水平。黄芪治疗组变化趋势与模型组相似,但在24,48h两时间点时峰值降低了44%～46%,与模型组比较差异显著(P<0.01)。③三等分迷宫试验结果:与模型组比较,黄芪治疗组达到学会标准所需训练次数明显减少犤(45.7±2.7),(16.1±2.5)次,P<0.01犦,缺氧缺血24h后记忆保持率显著提高犤(48.3±11.7),(80.0±9.0)%,P<0.01犦。结论:黄芪可以有效抑制未成熟脑缺氧缺血损伤后海马区神经细胞的凋亡,提高神经细胞存活率,此种保护作用与抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达有关。同时黄芪能够明显改善未成熟脑缺氧缺血损伤后的学习记忆能力。     

肠淋巴途径在失血-脂多糖二次打击大鼠心肌损伤中的作用

目的 探讨肠系膜淋巴管结扎干预失血-脂多糖(LPS)致大鼠心肌损伤的作用机制.方法 将雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、未结扎组、结扎组;以失血-LPS复制二次打击动物模型,结扎组于失血后行肠系膜淋巴管结扎术以阻断肠淋巴液回流.创伤后24 h处死各组大鼠制备心肌组织匀浆,检测髓过氧化物酶(MPO)、ATP酶活性以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;制备心肌病理切片,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率,免疫组化法检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 未结扎组大鼠心肌MPO[(0.23±0.08)U/g]、TNF-α[(9.99士2.74)pg/g]、IL-6((31.57士12.71)pg/g;～均显著高于假手术组[MPO:(0.12士0.03)U/g、TNF-α:(4.17±1.35)μ/g、IL-6:(17.86±5.17)μg/g,均P＜0.01],ATP酶活性显著低于假手术组;结扎组大鼠心肌MPO[(0.13±0.03)U/g]、TNF-α[(5.57±1.65)μg/g]、IL-6[(23.24±5.95)μg/g]均显著低于未结扎组(P＜0.05或P＜0.01),ATP酶活性显著高于未结扎组.未结扎组心肌细胞凋亡率[(22.7±6.9)%)、心肌细胞bax蛋白表达(104.5±11.4)显著高于假手术组[凋亡率:(3.8±1.2)%,bax蛋白:142.1±10.9]和结扎组[调亡率:(8.4±2.8)%,bax蛋白;128.4±9.6],bcl-2蛋白表达(196.4±19.3)显著低于假手术组(132.2±12.3)和结扎组(165.1±11.6,均P＜0.01).结论 肠系膜淋巴管结扎通过降低炎症介质TNF-α、IL-6水平,提高bcl-2蛋白表达和心肌细胞膜ATP酶活性,从而干预失血-LPS致大鼠心肌损伤.