激动素抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:研究激动素对实验性肝纤维化的影响,探讨作用机制。方法:用CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型,使用0.1%激动素溶液0.5ml.100g-1.d-1,背部皮下注射,治疗12周,设正常对照组和模型组。血清ALT用全自动生化分析仪检测,血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)含量用RIA方法检测。肝组织学检查:采用苏木精-伊红染色观察肝组织炎症和纤维化程度。结果:激动素组ALT水平与模型组ALT水平分别为(57.40±17.49)U/L和(84.70±31.85)U/L,两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。激动素组LN和CⅣ含量分别为(29.25±6.67)ng/ml和(14.84±5.84)ng/ml,较模型组(37.18±10.06)ng/ml、(35.69±30.84)ng/ml明显降低(P<0.05);激动素组HA和PCⅢ含量分别为(136.25±76.83)ng/ml和(11.43±3.67)ng/ml,较模型组(168.55±56.19)ng/ml、(14.64±8.00)ng/ml有不同程度降低,但无统计学意义。组织学检测结果表明,模型组肝脏炎症和纤维化程度明显高于激动素组。结论:激动素对实验性大鼠肝纤维化具有抑制作用。     

SB203580对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨SB203580对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法:将32只♀SD大鼠分为4组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(HF组)8只、DMSO溶剂干预组(D组)8只、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB组)8只.采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,肝纤维化模型制作结束后,D组给予2‰DMSO溶液3 mL/(kg?d),SB组给予SB203580溶液10 mg/(kg?d),N组、HF组给予同等剂量0.9%生理盐水3 mL/(kg?d)腹腔注射,连续注射4 d.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏,行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,采用SP免疫组织化学法检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,应用逆转录PCR法检测肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达.结果:正常对照组(N组)、肝纤维化组(H F组)、S B203580溶剂组(D M S O组)和P38MAPK通路特异性抑制剂组(SB203580组)的肝纤维化分期平均秩分别为4.50、22.50、24.00和15.00;SSS评分分别为2.750±0.707、15.875±0.835、16.000±0.926和11.625±0.9 1 6;Ⅰ型胶原显色指数分别为1.5 7 5±0.249、7.650±0.621、7.725±0.501和4.625±0.495;Ⅲ型胶原显色指数分别为2.375±0.518、4.025±0.446、4.075±0.544和3.375±0.167;Ⅰ型胶原mRNA表达分别为0.020±0.003、0.012±0.002、0.009±0.002和0.016±0.005;Ⅲ型胶原mRNA表达分别为0.412±0.772、0.773±0.137、0.799±0.116和0.572±0.862.HF组与N组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高(均P<0.001),与肝纤维化分期结果一致(P<0.001);D组与HF组无明显差异(均P>0.05);SB组与HF组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达降低(Ⅰ型胶原显色指数P<0.001,Ⅲ型胶原显色指数P=0.041);Ⅰ型胶原mRNA表达降低(P=0.005),同时Ⅲ型胶原mRNA表达亦降低(P=0.005),肝纤维化分期下降(P=0.015).结论:P38MAPK抑制剂SB203580阻断P38MAPK通路具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,将32只♀SD大鼠分为3组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(hepatic fibrosis,HF组)13只、NaHS干预组(S组)11只,采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,S组自造模第6周始给予NaHS56μmol/(kg·d)腹腔注射12d,N组和HF组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,应用RT-PCR法检测肝脏中COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达,采用SP免疫组织化学法检测肝脏COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达.结果:HF组与N组相比,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及其mRNA表达升高(均P=0.000),与肝纤维化分期结果一致(P=0.000);S组与HF组相比,COL-Ⅰ和COL-Ⅲ表达降低(均P=0.000);COL-ⅠmRNA表达降低(P=0.009),同时COL-ⅢmRNA表达亦降低(P=0.003),肝纤维化分期下降(P=0.047).结论:H2S具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶抑制因子-1表达的影响

目的:研究蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达的影响.方法:Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、模型组和高、中、低剂量蕲艾提取液治疗组,采用异种血清腹腔内注射构建肝纤维化大鼠模型,肝组织切片HE染色后,光镜下观察大鼠肝组织纤维化程度;SABC型免疫组化染色法观察肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1含量变化.结果:蕲艾提取液各治疗组与模型组相比,肝纤维化程度显著减轻;肝纤维化模型组及蕲艾提取液治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TIMP-1水平显著高于正常对照组;蕲艾提取液治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1水平又显著低于肝纤维化模型组.结论:蕲艾提取液能够显著降低免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达.     

沉默结缔组织生长因子对大鼠肝纤维化及细胞外基质积聚的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)小干扰RNA(siRNA)在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对细胞外基质积聚的影响.方法 雄性SD大鼠30只,随机分成5组.模型组:皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水,3 d 1次,连续6周;预防组:皮下注射CCl4及经门静脉注射CTGF siRNA,连续6周;治疗组:皮下注射CCl4 2周,随后给予CTGF siRNA及CCl4 4周;对照siRNA干预组:皮下注射CCl4及经门静脉注射对照siRNA,连续6周;空白对照组:经门静脉注射等渗盐水6周.用HE和Sirius red染色评估大鼠肝组织学变化,RTPCR或(和)Western blot检测肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白的表达,放射免疫法检测外周血Ⅲ型前胶原及透明质酸含量.结果 模型组及对照siRNA组大鼠肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白基因表达显著上调;与模型组相比,预防组及治疗组由CCl4诱导的CTGF mRNA和蛋白表达及Ⅰ与Ⅲ型胶原、层黏连蛋白mRNA表达分别下调76%±8%、95%±2%、74%±8%、78%±8%、31%±7%和80%±3%、93%±3%、57%±6%、59%±10%、43%±9%(F值分别为68.630,21.234,24.219,16.315和9.716,P值均＜0.01),肝纤维化程度明显减轻,大鼠外周血Ⅲ型前胶原和透明质酸含量也显著降低.结论 经门静脉注射CTGF siRNA能显著抑制实验大鼠肝CTGF基因表达,由此通过阻止细胞外基质积聚而缓解肝纤维化.     

益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠I,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法采用400mL@L-1四氯化碳(CCl4)sc制备大鼠实验性肝纤维化模型,将80只(雌雄各半)Wistar大鼠随机分成正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、秋水仙碱组(C组)和益肝煎剂组(D组)各20只.后两组于造模的同时开始给药,观察10 wk.采用苦味酸-天狼星红(Picric acid-Sirius red)染色显示Ⅰ,Ⅲ型胶原.偏振光显微镜下区分Ⅰ,Ⅲ型胶原.用半定量评分方法判断细胞变性程度和纤维化程度.结果益肝煎剂组大鼠肝组织的脂肪变性程度较模型组明显减轻,脂肪变性积分分别为2.00±1.36和3.17±0.75(P＜0.01);Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白含量明显少于模型组,纤维化程度积分分别为1.32±0.57和2.33±0.82(P＜0.01).结论益肝煎剂对大鼠实验性肝纤维化的形成有明显抑制作用.     

虫草多糖脂质体对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响

目的:探讨虫草多糖脂质体(CPL)对CC14大鼠肝纤维化的预防作用及可能机制。方法:采用虫草多糖脂质体(CPL)预防CC14大鼠肝纤维化,运用免疫组和Northern杂交化检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达。结果:CPL预防组肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较模型对照组明显减少(P值分别<0.01);CPL预防组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达量明显下降,与模型组大鼠比较差异有显著性(P值分别<0.05)。结论:虫草多糖脂质体可以预防大鼠肝纤维化,其抗纤维化作用是通过在转录水平抑制肝脏胶原合成而实现的。     

鸡尾酒疗法对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ表达的影响

目的:研究鸡尾酒疗法对肝纤维化大鼠肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)表达的影响.方法:采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型, 实验分为: 牛磺酸组、表没食子儿茶素没食子酸酯组、三羟基异黄酮组、鸡尾酒组、秋水仙碱组、模型组和正常组. 在实验的第10周末取肝组织, HE染色法观察肝组织改变, 免疫组织化学法检测肝组织中TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ的表达.结果:病理组织学观察发现各组能明显改善肝纤维化大鼠肝组织结构和肝纤维化, 免疫组织化学检测表明鸡尾酒组、三羟基异黄酮组、表没食子儿茶素没食子酸酯组、牛磺酸组的肝组织中TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ表达量与模型组比较均显著降低(TGF-β1: 2.57±0.23, 4.21±0.35, 4.93±0.21, 4.81±0.16 vs12.11±0.62, P <0.05; COLⅠ: 2.69±0.10, 4.88±0.42, 5.04±0.31, 4.79±0.29 vs 13.06±0.24,P <0.05; COLⅢ: 3.17±0.42, 5.73±0.23, 5.51±0.25, 5.24±0.18 vs 15.15±0.43, P <0.05), 并且鸡尾酒组与单一用药各组相比有统计学意义(P <0.05).结论:鸡尾酒疗法能对肝纤维化大鼠的肝脏起保护作用, 与单一用药相比更能有效降低TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ的表达, 可能具有更高的抗肝纤维化能力.     

排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:采用逆转录定量PCR方法测定不同剂量排钱草总生物碱对大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的相对表达值。结果:高、中剂量组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达显著低于模型组,P<0.05。与正常对照组相比差异无显著性意义。结论:排钱草总生物碱能显著降低猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。     

姜黄素治疗大鼠肝纤维化及其对肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的 观察姜黄素治疗肝纤维化的效果及其对肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响,探讨两者间的关系.方法 以四氯化碳腹腔注射的方法制作大鼠肝纤维化模型,姜黄素治疗组大鼠于第9周起分别给予姜黄素10、20、40 mg/100 g灌胃,设立正常对照组、溶剂对照组、模型组和丹参组,检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PC-Ⅲ)含量,肝组织行HE和Masson胶原染色,光镜下观察肝脏病理学改变,并按肝纤维化半定量计分系统(SSS)进行评分.免疫组织化学染色观察肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化,专业图像分析软件进行分析.结果 与模型组比较,姜黄素治疗组大鼠肝纤维化时异常升高的ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ明显降低(P＜0.05);大鼠肝纤维化的病理学改变明显改善,肝纤维化评分明显降低(P＜0.05),接近正常组;肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低,且这种效果随着姜黄素剂量的增大而增强.结论 姜黄素具有治疗大鼠肝纤维化的作用;增强胶原纤维降解可能是其重要的作用机制之一.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.