基于Box-Behnken法筛选与优化虎杖疏松愈伤组织培养条件

目的:研究虎杖疏松愈伤组织诱导的最佳条件.方法:本试验以MS为基本培养基,比较了不同外植体和激素配比对虎杖愈伤组织诱导的影响,采用单因素试验法研究了光培养和暗培养对愈伤组织诱导的影响,应用Box-Behnken 法考察不同激素浓度对虎杖愈伤组织增殖的影响.结果:虎杖愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2,4-D 4.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg· L-1,最佳的培养方式为暗培养,愈伤组织继代培养培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+KT 0.4 mg·L-1+2,4-D 0.5 mg·L-1.结论:实验研究过程中优化了虎杖疏松愈伤组织培养的条件,为建立虎杖悬浮细胞培养体系提供了基础依据.     

蒙古黄芪不定根的诱导

以蒙古黄芪无菌芽的下胚轴、无菌苗的根、茎、叶为外植体,分别接种在不同激素组合的Murashige和Skoog(MS)培养基中,在(25±1)℃条件下暗培养,蔗糖浓度为3.0%,pH值为5.8,琼脂的浓度为0.8%.对蒙古黄芪(Astragalus membranaceus Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao)进行愈伤组织诱导.结果表明最适合蒙古黄芪下胚轴愈伤组织诱导的激素组合为MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0 ml/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.5 ml/L和MS+α-奈乙酸(NAA)3.0 mg/L+6-BA 0.5 ml/L;最适合作为蒙古黄芪愈伤组织诱导的外植体为叶,最佳培养基为MS+NAA 3.0 mg/L.综合考虑愈伤组织质地以及后期试验目的,最终确定蒙古黄芪愈伤组织诱导和增殖培养基为MS+NAA 3.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L.黄芪愈伤组织生长曲线呈现S型,在d9进入快速增长期,最佳继代时间是在24 d左右.     

胀果甘草愈伤组织诱导培养

试验以甘草的子叶和下胚轴为外植体，分别接种在不同激素组合的MS培养基上，黑暗条件下培养，诱导愈伤组织。结果表明：诱导甘草子叶愈伤组织的最适培养基为MS 2，4-D(1mg／L) BA(1mg／L)，其愈伤组织诱导率达100％，而且其愈伤组织鲜重与接种外植体重的比值达到15．37倍；诱导甘草下胚轴愈伤组织的最佳培养基为MS 2，4-D(0．5mg／L)和MS 2，4-D(0．5) NAA(0．5)，通过在这两种培养基上进行愈伤组织的增殖培养，也得到了十分可观的增殖效果，其相对生长量分别达到了381．52％和498．80％。     

以叶片为外植体快速繁殖绿萝

本实验以绿萝的叶片为外植体在添加不同激素种类和浓度配比的培养基上诱导愈伤组织的形成,并进一步诱导不定芽的分化,建立绿萝的组织培养快繁体系。结果显示:在诱导培养基MS+TDZ 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L的上愈伤组织形成率最高,且褐化率较低;上述诱导获得的愈伤组织和不定芽进一步继代培养于MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L和MS+TDZ 0.2mg/L两种培养基上,分别采用黑暗和光照处理,发现光照可以显著促进愈伤组织和不定芽的转绿、增殖和分化。     

刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态调控

目的获得适宜悬浮培养的刺五加愈伤组织。方法利用植物组织和细胞培养技术,考察3种诱导培养基及9种继代培养基对刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态的影响。结果以α-萘乙酸(α-Naphthaleneacetic acid)2.0 mg.L-1+6-苄氨基嘌呤[N-(phenylmethyl)-1H-purin-6-amine,6-BA]2.0 mg.L-1诱导出的愈伤组织适于悬浮培养,叶和叶柄的诱导率分别为93.3%和100%;筛选出最佳固体继代培养的外源激素配比为NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1,在此激素配比下,愈伤组织生长代谢迅速,性状稳定,呈易分散的颗粒状,易于分散,适合下一步的悬浮培养。结论以刺五加嫩叶为外植体,NAA2.0 mg.L-1+6-BA2.0 mg.L-1为诱导培养基,NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1为继代培养基可以获得适宜悬浮培养的愈伤组织。     

从桔梗的培养物提取抗肿瘤药

从桔梗的培养细胞或其转化细胞提取菊粉,后者再制成抗肿瘤制剂。其副作用较小培养细胞是愈伤组织或分化的根组织。转化细胞是由土壤根瘤杆菌转化所得的多毛的根组织。为获得愈伤组织,将幼芽、根、茎、叶、花或花粉等辅成薄层,然后培养于固体培养基中。使用MS,LS,Heller培养基,并加生长素2.4-D,2,4,5-T或IAA和细胞分裂素(如毛     

激素对党参愈伤组织的诱导及其多糖含量的影响研究

以MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.2mg/l为诱导培养基时,党参的愈伤组织长势良好,愈伤组织诱导率和芽分化率均为100%,是最适培养基。以党参愈伤组织为材料,经真空干燥后,用水杨酸法测多糖含量,平均值为9.16%。其中含量最高的培养基组合是MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.2mg/L,为10.58%。实验表明,党参愈伤组织中多糖的合成与愈伤组织的生长情况成一定的正比关系。     

川贝母组织培养的影响因素研究

目的:以川贝母鳞茎外表基部为材料,研究激素、暗处理时间与低温处理温度对鳞茎诱导效果的影响,为川贝母组培技术应用研究提供参考。方法:通过采用组织培养的方法,比较无菌处理的外植体在不同培养方式中的生长情况,并简要分析川贝母组织培养的影响因素。结果:低温暗处理,GA3均有利于打破鳞茎休眠,加快分化速度,同时GA3有提高愈伤组织诱导率的效果;这批试验样本中,愈伤组织诱导率最高为80.2%,不定芽诱导率最高为79.3%。结论:诱导生成不定芽的最佳激素配比为6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1),诱导鳞茎生成愈伤组织的最佳激素配比为6-BA1 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+GA3 1 mg·L~(-1);低温暗处理诱导鳞茎分化效果最佳的组合为4℃+5 d。     

凹叶厚朴愈伤组织的诱导及其有效成分含量的比较

目的:研究凹叶厚朴愈伤组织的诱导、生长情况并比较愈伤组织内有效成分的含量。方法:采用单因素比较、正交设计试验,研究影响凹叶厚朴愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用高效液相色谱法测定不同来源愈伤组织内有效成分的含量。结果:外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以顶芽及茎段最好,雌蕊次之;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+NAA0.1mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1,而B5+NAA0.5mg.L-1+6-BA4.0mg.L-1对愈伤组织生长促进作用明显。以WPM为基本培养基诱导愈伤组织,继代后厚朴酚与和厚朴酚含量的总和可达0.1679%~0.2344%,但愈伤组织诱导率低,为33.08%~48.65%;培养条件为MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1时,愈伤组织诱导率为62.12%,继代后2酚总量为0.1686%。结论:本试验结果对凹叶厚朴愈伤组织的诱导及高产细胞系的筛选具有一定的参考价值。     

海南广藿香试管内芽分化与愈伤组织诱导研究

目的选择海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基。方法利用海南广藿香的叶柄、茎尖和带节茎段进行组织培养芽分化试验,并对上述材料进行愈伤组织诱导培养基选择试验。结果在芽分化培养基中,MS＋3-吲哚丁酸（IBA）1．0mg／L＋6-苄基腺嘌呤（6-BA）0．6mg／L培养基能够较好地诱导茎尖和带节茎端长出新芽,诱导率分别为94．3％和94．6％;在愈伤组织诱导培养基中,MS＋萘乙酸（NAA）0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L培养基能较好地诱导海南广藿香叶柄和带节茎段产生愈伤组织,诱导率分别为80．0％和100％。结论海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基分别为Ms＋IBA1．0mg／L＋6-BA0．6mg／L和Ms＋NAA0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L。     

几种生长调节物质及有机附加物对菠萝愈伤组织分化影响的细胞学研究

用菠萝6－74冠芽诱导愈伤组织，在愈伤组织分化过程中进行细胞学研究，观察到菠萝伤组织中薄壁细胞随机分化形成胚性细胞，胚性细胞分裂形成两种分生组织即生细胞团和分生组织结节，它们可以进一步形成器官原基，分化为芽、根、苄氨基嘌呤（BA）对务组织芽的分化起决定性作用，它刺激分生细胞团产生单向极性生长形成芽原基。萘乙酸（NAA）则对根的分化起决定作用，玉米素（ZT）在有BA和NAA的存在下加速了细胞型分裂和分生组织向芽原基的分化，水解乳蛋白（LH）促进芽的分化，但却抑制维管组织结节向根的转化；。酵母提取液（YE）则对两种分生组织的进一步分化都有抑制作用。     

山梨醇对籼稻愈伤组织培养的效应

以6个籼稻品种为供试材料,研究结果肯定了培养基中附加成分山梨醇在愈伤组织继代培养中,具有促进愈伤组织生长及提高其分化潜力的效果;籼稻亚种中的不同品种,愈伤组织的生长及再生植株能力,在继代培养的后期表现出明显的品种特异性;分化培养基中加入不同浓度配比激素,对诱导器官分化的效果有明显差别,激动素(KT)与萘乙酸(NAA)的比例为5:1有利于取得根、芽生长的同步性。     

培养条件对三叶青愈伤组织生长及总黄酮含量的影响

研究培养条件对三叶青愈伤组织生长及黄酮积累的影响,建立用愈伤组织生产三叶青黄酮的方法。以三叶青的叶诱导产生的愈伤组织为材料,分别采用单因素实验、正交实验的方法比较了不同光照周期、不同有机添加物、不同前体、3种基础培养基、不同6-BA与NAA浓度的培养条件下愈伤组织生长的情况及黄酮含量。用愈伤组织生产三叶青黄酮可采用两步培养法来进行:先在促进愈伤组织生长的最佳处理组合条件:12 h/d间断性光照、MS+3.0 mg/L6-BA+2.0 mg/L NAA+2 g/L蛋白胨下培养30 d,再转入最利于黄酮积累的处理组合:连续光照、B5+4.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+40 mg/L苯丙氨酸下培养20 d。采用该方法培养的愈伤组织中总黄酮最大浓度可以达到28.4±3.9 mg/g DW。采用愈伤组织培养方式生产三叶青黄酮,不仅可以大大地缩短生产周期,而且培养物中的总黄酮含量也明显高于原植株叶片,接近于根茎中的黄酮含量,具有较大的可行性。     

白首乌的组织培养和快速繁殖技术研究

建立和优化白首乌组织培养克隆化快速繁殖技术,为保护白首乌的野生资源,发展人工资源和探讨育种新途径奠定基础。在组织培养条件下进行白首乌愈伤组织的诱导、分化,试管苗复壮和生根等一系列技术优化试验。在培养基中适当添加矮壮素(PP333)能显著改善试管苗的素质,萘乙酸(NAA)对植株愈伤组织的生成具有十分有效的作用。PP333和NAA与激素配合使用,能十分有效地调控白首乌愈伤组织的分化、试管苗的生长与生根。     

莫邪菊的离体培养研究初报

目的 为建立莫邪菊的离体培养体系.方法 以成熟果实中的种子为外植体,探讨不同生长调节剂对离体培养中愈伤组织诱导、不定芽的分化和试管苗生根的影响.结果 培养基配方为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA0.2 mg/L时,种子破壳萌发率为70%,胚轴处愈伤组织诱导率为100%;MS+6-BA 2.0 mg/L为合适的丛生芽诱导和增殖培养基配方;培养基为MS0时生根率为95%,生根效果好且配方简单,移栽的试管苗成活率可达95%.结论 该试验建立的离体培养体系可用于莫邪菊的离体培养.     

山葵愈伤组织培养及其风味物质的研究

通过山葵愈伤组织的诱导培养,测定培养物中的风味物质,为通过组织培养的手段来生产药用成分提供依据.选择山葵幼叶和叶柄作为外植体,以MS为基本培养基,配以不同浓度的激素进行愈伤组织的诱导.选择继代几次以后的愈伤组织进行风味物质的测定.确定MS-4-6-BA 1.0+NAA 3.0为愈伤组织诱导的最佳条件,致密型的愈伤组织经...     

瘤毛獐牙菜愈伤组织诱导及生理生化特性研究

目的:确立瘤毛獐牙菜愈伤组织诱导的最佳条件,探讨其胚性愈伤组织(EC)与非胚性愈伤组织(N-EC)生理生化指标差异。方法:以嫩茎及嫩叶为外植体,应用L9(34)正交试验,研究光照、植物生长调节剂对愈伤组织诱导的影响;测定EC与N-EC可溶性糖、可溶性蛋白含量及抗氧化物酶(SOD、POD、CAT)活性。结果:嫩茎及嫩叶均能诱导出愈伤组织,但质量差异较大;EC的可溶性糖、可溶性蛋白含量及CAT活性高于N-EC,SOD、POD活性低于N-EC。结论:以嫩茎为外植体,在黑暗条件下诱导出的愈伤组织较优,最佳诱导培养基为MS+6-BA1 mg﹒L~(-1)+2,4-D2 mg/L+ZT0.9 mg﹒L~(-1)。EC较N-EC在生理生化反应中更为活跃。     

杜仲带腋芽茎段组织培养的研究

目的研究不同培养条件下杜仲带腋芽茎段愈伤组织的诱导和生长情况,以及腋芽的生长情况。方法以带腋芽的杜仲茎段为外植体,设计9种不同的培养基配方,为了防止褐化,在23.4℃下培养箱中暗培养,30 d后调查出愈率及腋芽的生长情况。结果 NAA浓度从0.05~0.5 mg.L-1,随着浓度增加,腋芽生长受抑制;6-BA浓度从0.3~1.0 mg.L-1,随着浓度增加,愈伤组织块增大,达到1.0 mg.L-1时愈伤组织的生长受到抑制;本实验中最佳的杜仲愈伤组织诱导和生长培养基配方为6号培养基:B5+0.5 mg.L-1NAA+0.3 mg.L-16-BA。腋芽生长最佳培养基配方为4号培养基:B5+0.05 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-16-BA。结论本试验的结果对杜仲的生物技术利用有一定的参考价值。     

人参体细胞胚胎发生及植株再生研究

通过比较不同外植体、植物生长调节物质种类及配比对人参体细胞胚发生的影响,建立了人参胚状体培养方法并获得再生植株;结果表明诱导愈伤组织的培养基MS 2,4-D 4.0 mg/L BA 0.2 mg/L;在MS 2,4-D 1.0 mg/L KT 0.2mg/L培养基上继代培养,转变为胚性愈伤组织;在去掉2,4-D的培养基上进行胚状体的诱导,转入无任何激素的MS培养基上使胚状体快速生长,之后在1/2MS培养基上进一步生长获得再生植株.     

徐长卿组织培养技术的研究

对徐长卿组织培养快速繁殖技术的试验研究结果表明，NAA诱导愈伤组织效果优于IAA。而IAA较适于诱导丛生芽，BA浓度有较明显的协同作用。因此，在组织培养中激素和生长素的合理配合是达到最佳培养效果的关键。试验结果表明：诱导愈伤组织的最适培养为MS NA1.0g/L NAA1.0mg/L,诱导丛生芽的最适基为B5 BA2.0mg/L IAA0.5mg/L,而诱导生根的最适培养基为1/2MS NAA1.0mg/L。通过三阶段组织培养技术的优化，可以快速繁殖出大批种苗，有效地解决徐长卿药材繁殖速度慢的问题，这一技术可望应用于生产。