1,25-(OH)_2D_3对DSS诱导的慢性结肠炎小鼠炎症反应的影响

目的探究不同剂量1,25-(OH)_2D_3对慢性溃疡性结肠炎小鼠炎症反应TLR4信号通路中相关因子的影响。方法 9w龄雌性C57BL/6小鼠50只,适应性喂养1w后,随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量干预组。正常组小鼠在整个实验期间自由饮用蒸馏水,其余四组在第1~7 d、15~21 d自由饮3%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水。在实验的第15~28日,低、中、高剂量干预组小鼠每天分别灌胃含10、50、100 ng 1,25-(OH)_2D_3 0.1ml的橄榄油,正常组和模型组小鼠则只灌胃0.1ml的橄榄油。于第29日处死全部小鼠。根据小鼠的一般情况,结合结肠大体形态评分以及结肠组织病理学评分对小鼠结肠严重程度进行评估。酶联免疫吸附法检测小鼠血清TNF-α、IL-10含量,免疫组化法检测小鼠结肠组织中VDR、TLR4、TRAF6及NF-κB1蛋白含量。结果与模型组小鼠相比,低、中、高剂量1,25-(OH)_2D_3干预组小鼠结肠大体形态和组织病理学评分均低于模型组,结肠长度均长于模型组。干预后,血清TNF-α含量降低,IL-10含量有所升高,结肠组织TLR4、NF-κB1、TRAF6表达减少,VDR蛋白表达增加。结论补充1,25-(OH)_2D_3可降低结肠组织TLR4、TRAF6、NF-κB1的表达,改善慢性溃疡性结肠炎,这可能与TLR4信号通路有关。     

全反式视黄酸与1,25-(OH)_2D_3联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Th17相关细胞因子作用的实验研究

目的研究全反式视黄酸(all-trans retinoic aciol,ATRA)与1,25-(OH)_2D_3联合作用对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠辅助性T细胞17(Thelper17cells,Th17)细胞相关因子表达的影响。方法 50只6周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、ATRA组、1,25-(OH)_2D_3组与ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合组。对照组饮用蒸馏水,其余组饮用3.0%DSS溶液造模。造模第3天起对3个干预组分别灌胃给予0.2mg/d/只ATRA或/和100ng/d/只1,25-(OH)_2D_3。第9天处死小鼠,取结肠组织,进行大体形态学评分;HE染色进行组织病理学评分;免疫组织化学法检测结肠IL-17、IL-23表达;ELISA测定结肠维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid acid receptor related orphan receptors,RORγt)、IL-6和TGF-β表达。采用单因素方差分析进行组间比较,采用析因设计方差分析判断两因素联合是否有交互作用。结果3个干预组与模型组比较,疾病活动指数(disease activity index,DAI)、大体形态和组织病理学评分均降低,IL-17、RORγt,IL-23及IL-6表达量下降,ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合干预组效果更显著(P0.05)。结论联合应用ATRA和1,25-(OH)_2D_3能更有效地抑制Th17相关因子的表达,减轻炎症,缓解结肠炎症状。     

1,25-(OH)_2D_3和全反式视黄酸联合应用对溃疡性结肠炎小鼠TREG细胞Foxp3表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3和全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Treg细胞Foxp3蛋白及其相关细胞因子的表达和血钙、肌酐水平的影响。方法 6w龄雌性C57BL/6小鼠50只,随机分为正常对照组(CN),溃疡性结肠炎模型组(model,M),1,25-(OH)_2D_3干预,全反式视黄酸(ATRA)干预,1,25-(OH)_2D_3+ATRA联合干预共5组,除CN组外,其余4组随意饮3%糖酐酯(DSS)溶液建立溃疡性结肠炎模型,从造模D3开始干预,干预剂1,25-(OH)_2D_3和ATRA分别用花生油溶解(后者需在暗光下进行),干预剂量1,25-(OH)_2D_3100ng(d/capita),ATRA 0.2 mg(d/capita),1,25-(OH)_2D_3+ATRA(100ng/d+0.2mg/d)每天对应灌胃干预,9d后处死小鼠,取血清和结肠组织。按小鼠一般情况进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;测量结肠长度;观察结肠大体形态和病理学损伤情况,并对其进行组织病理学评分;生物化学方法检测小鼠结肠髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和血清钙、肌酐水平;免疫组化法测结肠组织Foxp3、TGF-β、IL-10蛋白表达情况。结果与M组比较,三个干预组小鼠溃疡性结肠炎大体形态改善,组织学损伤较轻,结肠长度缩短有所缓解,结肠组织MPO活性下降,Foxp3蛋白及其相关细胞因子TGF-β、IL-10表达水平上升,血钙和肌酐水平下降。且联合干预组相比单独干预组效果更明显,差异具有统计学意义(除血钙)。结论 1,25-(OH)_2D_3和全反式视黄酸(ATRA)联合应用能够增强Treg细胞Foxp3的表达,使Treg细胞更好地发挥抑制免疫应答的作用,并可能缓解1,25-(OH)_2D_3引起的血钙升高,改善肾功能。     

健康及溃疡性结肠炎模型豚鼠维生素D和维生素C的交互作用

目的探讨不同维生素D(vitamin D,VD)和维生素C(vitamin C,VC)干预水平在健康及溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型豚鼠VD羟化产物(25(OH)D_3、1,25(OH)_2D_3)和相关羟化酶mRNA水平上是否存在交互作用。方法将雄性Dunkin-Hartley豚鼠72只,随机分为健康组和UC模型组各36只,2组又按照VC干预3个水平[10、100、200 mg/(kg·d)]×VD干预2个水平[0.25、5μg/(kg·d)]随机分为6小组。各小组给予不同水平VD和VC灌胃干预5周后,UC模型组给予2%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用4 d进行造模,处死豚鼠,取血清和肝肾组织。检测血清25(OH)D_3、1,25 (OH)_2D_3、肝脏CYP2R1、CYP27A1及肾脏CYP27B1、CYP24A1 mRNA的表达水平。结果健康豚鼠中,血清1,25(OH)_2D_3和肾脏CYP24A1 mRNA在不同VD和VC干预水平之间存在交互作用(P0.05);UC模型豚鼠中,在肝脏CYP27A1和肾脏CYP24A1 mRNA方面,不同VD和VC干预水平之间存在交互作用(P0.05)。结论 VC和VD的交互作用主要影响健康豚鼠VD在肾脏的第二次羟化。     

1,25(OH)_2D_3调控内质网稳态改善自发性糖尿病大鼠心肌损伤

目的探讨1, 25(OH)_2D_3补充改善ZDF大鼠心肌损伤的潜在机制。方法健康雄性5～6 w龄Zucker瘦型鼠为正常对照组(C),胖型鼠按照体质量随机分为模型组(DM)、1, 25(OH)_2D_3低(DM+VD(L))、VD中(DM+VD(M))、高(DM+VD(H))剂量干预共4组。各组大鼠喂养至12 w龄,检测血糖血脂、心脏损伤及心肌细胞内质网应激相关指标。结果 DM组血脂、血糖显著升高,心肌出现严重损伤,内质网应激/未折叠蛋白反应标志蛋白GPR78显著降低,IRE1α-XBP1通路受阻;不同剂量1, 25(OH)_2D_3干预对ZDF大鼠血脂血糖及心肌损伤均有改善,其中、高剂量改善作用更为显著。1,25(OH)_2D_3低剂量干预未能显著改善ZDF大鼠未折叠蛋白反应的失活,1,25(OH)_2D_3中高剂量干预激活IRE1α-XBP1通路恢复内质网的稳态调节,中剂量的改善作用优于高剂量。结论适量的1,25(OH)_2D_3可通过IRE1α-XBP1通路调节内质网稳态,从而减轻糖尿病心肌损伤。[营养学报,2019,41(1):58-62]     

1,25-二羟维生素D_3对β淀粉样蛋白1-42诱导PC12细胞焦亡的保护作用

目的探讨1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导的PC12细胞焦亡的保护作用。方法 Aβ_(1-42)诱导PC12细胞构建体外阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)细胞模型,设立对照组、模型组(20μmol/L Aβ_(1-42))及不同浓度1,25(OH)_2D_3预处理组[1、10、100 nmol/L 1,25(OH)_2D_3+20μmol/L Aβ_(1-42)]。CCK-8检测1,25(OH)_2D_3对Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞活性,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色检测细胞膜通透性,比色法、酶联免疫吸附法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,免疫蛋白印迹法检测NOD样受体家族蛋白(NOD-like receptor family protein 1, NLRP1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1, caspase-1)和消皮素D(gasdermin D, GSDMD)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞活性显著降低(P0.01),细胞膜通透性、LDH、IL-1β、NLRP1、caspase-1和GSDMD蛋白显著升高(P0.01)。与模型组相比,3个1,25(OH)_2D_3预处理组的细胞活性均有所提高(P0.05),细胞膜破损减少。10和100 nmol/L 1,25(OH)_2D_3预处理组细胞LDH释放、IL-1β水平显著降低(P0.01)。1 nmol/L 1,25(OH)_2D_3组中NLRP1和GSDMD蛋白的表达量明显降低(P0.05),10和100 nmol/L 1,25(OH)_2D_3组降低更为显著(P0.01),10和100 nmol/L 1,25(OH)_2D_3组的caspase-1蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论 1,25(OH)_2D_3对Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞焦亡具有保护作用。     

1α,25(OH)_2D_3对大鼠成骨细胞κB受体活化因子配体及骨保护素蛋白表达的影响

目的 研究1α,25-二羟维生素D_3(1α,25(OH)_2D_3)对体外培养3～4 d的SD大鼠成骨细胞(OB)核因子κ B受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)蛋白和mRNA表达的影响.方法 1α,25(OH)_2D_3作用24、48、72 h,分别采用ELISA及FQ-PCR法测定.结果 10、100 nmol/L 1α,25(OH)_2D_3较对照及1 nmol/L显著或极显著促进RANKL蛋白及mRNA表达;1、10 nmol/L 1α,25(OH)_2D_3较对照显著或极显著促进OPG蛋白及mRNA表达,而100 nmol/L则极显著抑制OPG mRNA表达;RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG显示,1 nmol/L组与对照组差异不显著,10、100 nmol/L组RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG板显著高于对照组和1 nmol/L组.结论 低浓度1α,25(OH)_2D_3(1 nmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度1α,25(OH)_2D_3(10、100 nmol/L)能通过上调RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG比例,促进OC的生成及骨吸收功能,增强骨更新.     

哮喘患儿血清1,25-二羟维生素D3和IL-25与肺功能及生活质量的相关性研究

目的探讨哮喘患儿血清1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]水平和白介素-25(IL-25)的水平与肺功能和生活质量的关系。方法选取该院2013年11月-2014年12月急性期哮喘患儿30例(观察组)和同期健康患儿30例(对照组)为研究对象,取空腹静脉血,采用酶联免疫分析(ELISA)法测定血清中1,25(OH)_2D_3和IL-25的浓度,并对哮喘患儿进行肺功能检查及用儿童哮喘患者生活质量调查问卷(PAQLQ)进行生活质量评分。结果观察组患儿血清1,25(OH)_2D_3显著低于对照组,IL-25水平均显著高于对照组,PAQLQ分值明显低于对照组,观察组患儿血清IL-25均与肺功能指标FEVl%、FEVl/FVC%呈负相关(r=-0.493,P0.05;r=-0.485,P0.05)和PAQLQ分值均呈负相关(r=-0.341,P0.05;r=-0.503,P0.05;r=-0.476,P0.05),1,25(OH)_2D_3与肺功能指标FEVl%、FEVl/FVC%呈正相关(r=0.513,P0.05;r=0.504,P0.05)和PAQLQ分值均呈正相关(r=0.389,P0.05;r=0.532,P0.05;r=0.587,P0.05);PAQLQ分值均与肺功能呈正相关。结论血清1,25(OH)_2D_3和IL-25参与了哮喘的急性反应,可作为判断哮喘急性期指标;哮喘患儿的肺功能和生活质量下降可能与两者有关。     

1,25二羟维生素D_3通过抑制mTOR通路而激活自噬以促进大鼠成骨细胞增殖和分化

目的探讨1,25二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对大鼠原代成骨细胞培养的第4代细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的作用及其对成骨的影响。方法由新生SD大鼠颅骨获取原代成骨细胞,用培养的第4代细胞进行研究,分为对照组(control)、雷帕霉素组(rapamycin,RAPA)(20nmol/L)、MHY1485组(2nmol/L)、1,25(OH)_2D_3组(5nmol/L)和MHY1485+1,25(OH)_2D_3组,作用0、12、24、36、48、60、72、84、96、108和120h后,以CCK8检测成骨细胞增殖活性。Western blot和RT-PCR检测mTOR及下游因子真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6激酶1(S6K1)、自噬标志物Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和成骨细胞分化相关因子碱性磷酸酶(ALP)、成骨相关转录因子(Osterix)和Runt相关转录因子2(Runx2)的表达,ALP染色观察各组细胞内ALP含量变化。以上分组条件作用21d后茜素红染色检测各组矿化情况。结果与对照组比较,1,25(OH)_2D_3明显促进成骨细胞增殖,逆转MHY1485抑制的成骨细胞增殖活性。Western blot和RT-PCR结果显示1,25(OH)_2D_3抑制mTOR、4E-BP1和S6K1的蛋白磷酸化,并使自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ、分化标志物ALP、Osterix和Runx2表达显著增加。ALP染色和茜素红染色结果显示,1,25(OH)_2D_3早期促进ALP的分泌,晚期促进矿化结节形成。结论 1,25(OH)_2D_3可以促进大鼠成骨细胞的增殖、分化与矿化,其可能与其通过抑制mTOR信号通路而激活自噬有关。[营养学报,2021,43(1):71-78,85,96]     

1,25二羟维生素D3对肝癌HepG2细胞增殖侵袭影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]及PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)对人肝癌Hep G2细胞的增殖、侵袭影响及作用机制。方法实验设10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/L 1,25(OH)_2D_3组及2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L LY294002组,10~(-7)mol/L 1,25(OH)_2D_3+5μmol/L LY294002联合组,噻唑蓝法检测人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率;Compu Syn软件计算联合指数;Tanswell小室检测HepG2细胞侵袭数;Western blot检测Hep G2细胞增殖细胞核抗原(PCNA),细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、10号染色体缺失且与张力蛋白同源物磷酸脂酶基因(PTEN)蛋白。结果 1,25(OH)_2D_3及LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖抑制率呈时间-剂量依赖效应(P0.05);1,25(OH)2D3联合LY294002组细胞增殖抑制率明显高于二者单独处理组(P0.05),联合指数=0.728,2者具有协同效应;10-7mol/L 1,25(OH)2D3组、5μmol/L LY294002组以及联合组Hep G2细胞侵袭数[分别为(45.9±6.4)、(49.9±6.0)、(27.8±4.0)个]明显低于对照组[(64.6±8.0)个](P0.05)。与对照组比较,10-7mol/L 1,25(OH)2D3组及联合组HepG2细胞PTEN蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),10-7mol/L 1,25(OH)_2D_3组、5μmol/L LY294002组及联合组HepG2细胞PCNA、MMP-9、p-AKT蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P0.05),且联合组蛋白表达量低于二者单独处理组(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭,其机制可能与上调PTEN表达,抑制PI3K/AKT信号通路活性,下调PCNA、M M P-9蛋白有关;与LY294002合用具有协同效应。     

1,25-二羟维生素D_3对人癌实体瘤的异种移植瘤体内生长的抑制

已证明几种人类癌细胞株有1,25-二羟维生素D_3(1,25-(OH)_2D_3)的特异性高亲和力受体。1,25-(OH)_2D_3及其代谢物在体外能够抑制人类乳腺癌和恶性黑素瘤细胞株生长,并且1,25-(OH)_2D_3及其一种人工合成类似物能够延长用白血病细胞接种的白血病小鼠的存活期。本文研究了1,25-(OH)_2D_3及其同类物在小鼠体内对人类肿瘤的三个细胞株的异种移植瘤生长的抑制作用。 CBA/Lac小鼠出生后16～18天时切除胸腺,饲养18～21天后,经腹腔注射1-β-D阿糖呋喃嘧啶200mg/kg,48小时后用~(137)Csr射线     

HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义

目的 探讨HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中的表达及作用机制.方法 BALB/C小鼠随机分为正常对照组及模型组,每组12只;正常对照组不造模,模型组用恶唑酮(OXZ)灌肠复制UC模型.观察两组实验小鼠体质量变化、大体及组织病理学改变;RT-PCR检测结肠组织HMGB1mRNA的表达变化;免疫组织化学和流式细胞术检测结肠组织中HMGB1、TLR2、NF-κB蛋白的表达变化.结果 与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠出现不同程度的腹泻和便血,结肠黏膜明显充血、水肿,可见较大溃疡病灶;模型组小鼠结肠组织中HMGB1mRNA及蛋白表达升高,主要位于细胞浆和细胞外;模型组小鼠结肠组织TLR2和NF-κB蛋白表达亦明显升高;HMGB1蛋白与TLR2蛋白表达呈显著正相关(r=0.81,P＜0.01);TLR2蛋白与NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.78,P＜0.01).结论 HMGB1在小鼠溃疡性结肠炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体TLR2,激活NF-κB信号途径而实现的.     

维生素C和维生素D_3水平对女性抗氧化能力影响

目的探讨血清维生素C(VC)和维生素D_3(VD_3)水平对女性抗氧化能力的影响。方法集中收集2017年1—2月在山西省太原市山西民盛体检中心体检的124名25～45岁健康女性的血清样本,采用高效液相色谱–紫外检测法检测VC含量,根据VC水平将其分为高VC组(≥2μg/mL)和低VC组(2μg/mL),采用酶联免疫吸附法检测25–羟基维生素D_3[25-(OH)D_3]和1,25–二羟基维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3)含量,采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,比较高VC组与低VC组的差异;对25-(OH)D_3水平30 ng/mL且同意参与补充VD_3的65人(均为高VC组)进行干预,2017年4月6日收集其血清,比较干预前后25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3、SOD和GSH-Px水平的变化。结果高VC组血清25-(OH)D_3含量为(22.65±5.51)ng/mL,1,25-(OH)_2D_3含量为(19.10±5.60) pg/mL, SOD活性为(79.25±26.98) U/mL, GSH-Px活性为(32.73±6.06) nmol/mL,均高于低VC组,除25-(OH)D_3外,差异均有统计学意义(P 0.05)。VC与1,25-(OH)_2D_3、SOD及GSH-Px呈正相关,25-(OH)D_3与1,25-(OH)_2D_3呈正相关,1,25-(OH)_2 D_3与SOD呈正相关。补充VD_3后血清25-(OH)D_3含量为(40.66±12.12)ng/mL,1,25-(OH)_2D_3含量为(24.79±4.93)pg/mL,SOD活性为(86.05±26.95)U/mL,GSH-Px活性为(42.11±8.22)nmol/mL,均高于补充VD_3前,且差异均有统计学意义(P 0.05)。结论在一定范围内VC能够促进VD_3活化为1,25-(OH)_2D_3,VC和VD_3能够降低机体的氧化应激水平,提高抗氧化能力。     

髓系抑制性细胞与诱导型一氧化氮合成酶在哮喘小鼠肺组织中的表达及意义

目的:探讨髓系抑制性细胞(MDSCs)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在哮喘小鼠肺组织中的表达及意义。方法:将BALB/C小鼠随机分成哮喘组及对照组,每组10只。用卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立小鼠哮喘模型,用HE染色观察两组小鼠肺组织病理改变;用免疫组织化学(免疫组化)方法检测小鼠肺组织中MDSCs积分光密度值平均值;用RT-PCR检测小鼠肺组织中iNOS mRNA的表达。结果:哮喘组可见气道壁增厚,炎性细胞浸润,对照组则无明显变化。哮喘组小鼠肺组织MDSCs、iNOS mRNA的表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:哮喘小鼠肺组织中MDSCs的聚集增加,iNOS的表达增多,MDSCs通过表达iNOS来实现其在哮喘小鼠气道炎症、气道高反应及免疫抑制等方面的重要作用。     

血清1,25-(OH)D_3水平与婴幼儿喘息的相关因素分析

目的研究血清1,25-(OH)D_3水平和总IgE水平在喘息婴幼儿中的表达及临床意义。方法随机选取2015年9月-2016年3月于本院住院的喘息患儿52例,依据哮喘预测指数分为哮喘预测指数阳性的喘息Ⅰ组(n=29)和哮喘预测指数阴性的喘息Ⅱ组(n=23),对照组为本院门诊健康体检儿童(n=23)。分别测定3组患儿血清1,25-(OH)D_3和总IgE水平。结果喘息Ⅰ组和喘息Ⅱ组患儿血清1,25-(OH)D_3水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),喘息Ⅰ组1,25-(OH)D_3水平低于喘息Ⅱ组(P0.05),喘息Ⅰ组IgE水平高于喘息Ⅱ组和对照组,差异有统计学意义(P0.05),喘息Ⅱ组和对照组之间差异无统计学意义(P0.05);喘息Ⅰ组血清1,25-(OH)D_3与IgE呈负相关性(r=-0.915,P0.01)。结论 1,25-(OH)D_3水平在有特应质的反复喘息儿童中显著降低,并且与总IgE水平呈负相关。     

1,25-(OH)_2D_3-26,23-Lactone的一步高压液相色谱纯化法

用顺相HPLC一次性纯化1,25-二羟胆骨化醇类脂[1,25-(OH)_2D_3-26,23-Lactone],流动相为:甲醇、二氯甲烷、正己烷的混合液。流速为2ml/min。1,25-二羟胆骨化醇(1,25-(OH)_2D_3)的保留时间是12分10秒,1,25-(OH_2)D_3-26,23-Lactone的保留时间是17分6秒,1,24,25-三羟胆骨化醇[1,24,25-(OH)_3D_3]的保留时间是22分。该法能用HPLC一次性分离出1,25-(OH)_2D_3;1,25-(OH)_2-D_3-26,23-Lactone和1,24,25-(OH)_3D_3。具有快速、准确、节约试剂的特点。     

抗坏血酸联合维生素D_3对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎影响

目的探讨抗坏血酸(AA)联合维生素D_3(VD_3)对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎(UC)的影响。方法随机将32只豚鼠按体重分为4组,每组8只,对照组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、模型组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、高、低剂量AA组(240 mg AA+2.8μg VD_3/kg、8 mg AA+2.8μg VD_3/kg);每组豚鼠均进食不含AA和VD的特殊饲料,7W后,对照组豚鼠继续饮用蒸馏水,其他3组豚鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,3 d后处死豚鼠,检测相关指标。结果与对照组比较,模型组豚鼠结肠DAI评分、大体形态评分和组织病理学评分升高,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平降低,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达下降,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(80.21±6.22)、(174.08±11.04)ng/m L]升高;与模型组比较,低剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分升高,血清25-(OH)D_3水平降低,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(93.23±4.76)、(208.46±14.15)ng/m L]升高;与低剂量AA组比较,高剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分下降,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平升高,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达升高,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(75.20±3.85)、(167.83±11.85)ng/m L]降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 AA在适宜范围内能够促进VD_3更充分地羟化为活性形式1,25-(OH)_2D_3,AA联合VD_3对DSS诱导的豚鼠UC具有一定干预作用。     

IL-32及TNF-α在哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的:探讨哮喘小鼠发病过程中白细胞介素32(IL-32)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肺内表达的变化及布地奈德的干预作用。方法:将30只健康雌性BALB/c小鼠随机分为3组:卵蛋白(OVA)致敏并激发的哮喘模型组(A组),OVA致敏、激发并予布地奈德吸入治疗组(B组)及正常对照组(C组),每组10只。观察卵蛋白激发及布地奈德干预后哮喘小鼠气道的病理变化;免疫组织化学染色观察IL-32及TNF-α表达的变化。结果:IL-32及TNF-α在对照组中呈低表达,在哮喘组中表达明显增加,使用布地奈德干预后,IL-32及TNF-α的表达明显降低(P<0.05),且二者表达量均与气道壁厚度呈正相关(r=0.716,P<0.05;r=0.459,P<0.05)。结论:IL-32及TNF-α可能参与了哮喘小鼠气道重塑过程,布地奈德干预改善哮喘小鼠的气道重塑可能与降低IL-32及TNF-α的表达有关。     

高迁移率族蛋白B1激活JAK2/STAT3并促进支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)参与调节支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子的机制。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分对照组和哮喘组,采用卵清蛋白腹腔注射致敏联合雾化吸入激发建立哮喘小鼠模型。支气管上皮细胞16-HBE分组处理:空白对照组,HMGB1组(浓度分别为100、200、500 ng/mL),500 ng/mL HMGB1+AG490组,500 ng/mL HMGB1+雷帕霉素组。HE染色观察小鼠气道结构;qRT-PCR和免疫组化法检测两组小鼠肺部组织HMGB1的表达;ELISA法测定两组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中HMGB1的含量和各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1α(IL-1α)水平。Western blot检测各组细胞中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果 哮喘组小鼠HMBG1的表达比正常小鼠明显升高。HMGB1升高细胞中TNF-α、IL-6和IL-1α水平,上调p-JAK2和p-STAT3水平,并且呈现浓度依赖性关系。AG490和雷帕霉素处理抑制细胞中p-JAK2和p-STAT3表达,同时降低TNF-α、IL-6和IL-1α水平。结论 HMGB1参与调控哮喘慢性炎症反应,可能与活化JAK2/STAT3信号通路促进支气管上皮细胞分泌炎症因子有关。     

支气管哮喘患者血清1,25-二羟基维生素D3和血管内皮生长因子水平及意义

目的了解支气管哮喘(简称哮喘)患者血清1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)和血管内皮生长因子(VEGF)水平,比较与正常人的差异。方法纳入2010年7月至12月到我院就诊的62例非稳定期哮喘患者为病例组,同期健康体检者60例为对照组。收集哮喘患者临床信息,并测定所有纳入者血清1,25(OH)2D3、和VEGF水平。结果病例组1,25(OH)2D3水平低于对照组(7.4±3.6vs.28.3±4.1,p<0.01),VEGF明显高于正常对照组(372.3±108.2vs.201.2±77.2,p<0.01),差异有统计学意义。病例组中血清1,25(OH)2D3水平与VEGF水平呈负相关(r=-0.734,p<0.01)。结论支气管哮喘患者血清1,25(OH)2D3和VEGF水平与健康者之间存在差异,这种变化可能与哮喘气道炎症及气道重构有关。