HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。     

Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌相关性的研究进展

Wnt信号通路是调节细胞增殖、分化及移型的经典通路之一.Wnt蛋白可与多种不同Wnt蛋白受体结合,激活细胞内不同的信号通路,研究证实Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌的发生发展密切相关.对Wnt/β-catenin信号通路在细胞周期、细胞凋亡、肿瘤干细胞及血管生成方面对胰腺癌发生发展的影响进行综述.     

NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的:探讨NO-ASA(一氧化氮阿斯匹林)对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制.方法:建立稳定传代的MCF-7细胞系.MT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用.应用Western blot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响.结果:NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞总β-catenin的表达水平.结论:NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因一细胞周期蛋白D1表达降低.这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法.     

CRD-BP和β-TrCP在结直肠癌中的研究

不稳定编码区（CRD）是c-myc基因的影响因素之一。不稳定编码区结合蛋白（CRD-BP）与CRD结合可使CRD免受核酸内切酶攻击,阻止c-mycmRNA快速降解,增加c-myc蛋白含量。B一转导重复相容蛋白（β-TrCP）可对多个信号通路及细胞周期进行调控,影响细胞生长、分化、凋亡及肿瘤形成。CRD-BP高表达进而上调β-TrCP,与结直肠癌的发生发展、转移侵袭等密切相关。     

宫颈癌细胞自噬与Wnt/β-catenin信号通路关系的研究进展

自噬是真核细胞内发生的一种高度保守的自我降解机制,宫颈癌的肿瘤细胞自噬是肿瘤进展的重要因素。自噬作用的下调与宫颈细胞HPV感染、宫颈癌的产生存在紧密联系。Wnt信号通路在宫颈癌细胞的自我更新和分化的调控中扮演重要角色,越来越多的研究证明Wnt信号通路表达的激活及β-catenin的异常表达与宫颈癌密切相关。宫颈癌细胞自噬与Wnt/β-catenin信号通路之间存在一定关系并相互作用,影响着癌症的发生发展。本文就宫颈癌细胞自噬与Wnt/β-catenin信号通路关系综述如下。     

经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤细胞株中作用的初步研究

目的:通过检测经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)细胞株中是否存在异常激活,以探讨其与NHL发病的相关性.方法:选取人NHL细胞株SUDHL-4、Raji和Namalwa(以正常人淋巴细胞作为对照),采用蛋白质印迹法检测各细胞株中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)及其失活形式Ser9被磷酸化的GSK-3β [phospho-glycogen synthase kinase-3β (Ser9),p-GSK-3β (Set9)]蛋白的表达情况;应用实时荧光定量-PCR技术检测β-catenin编码基因CTNNB1、经典Wnt通路上游相关调控因子低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low density lipoprotein receptor related protein 5,LRP5)基因及靶基因c-Myc的转录表达水平.结果:与正常对照组淋巴细胞相比较,3株NHL细胞中总蛋白及细胞核内β-catenin蛋白的表达水平明显上调;p-GSK-3β (Ser9)蛋白较正常对照也存在不同水平表达上调的现象,而GSK-3β蛋白的表达在各组间差异无统计学意义.NHL细胞中CTNNB1、LRP5及c-Myc mRNA表达水平与正常对照相比,均有明显提高.结论:β-catenin作为经典Wnt信号通路重要的激活标志,其在NHL中的高表达及经典Wnt通路其他相关分子异常,说明经典Wnt信号通路可能是导致NHL的分子作用机制之一.     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的：探讨NO-ASA（一氧化氮阿斯匹林）对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制。方法：建立稳定传代的MCF-7细胞系。MTT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。应用Westernblot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响。结果：NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1（cyclinD1）和细胞总β-catenin的表达水平。结论：NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因—细胞周期蛋白D1表达降低。这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法。     

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调（P<0.001）。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

Wnt/β-catenin信号通路在白血病中的研究进展

Wnt/ β-catenin信号通路在胚胎发生和器官发育中发挥着重要作用.该信号通路与多种实体肿瘤的发生密切相关.新近研究发现,Wnt/β-catenin信号通路在多种白血病中异常激活,提示其可能参与了白血病的发生、发展.针对Wnt/β-catenin信号通路的靶向治疗可能成为白血病治疗的新方向.本文就Wnt/β-catenin信号通路在白血病中的研究进展作一综述.     

Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育和细胞增殖、分化等生理过程中扮演着重要角色,同时它在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的肿瘤干细胞(cancerstemcell, CSCs)的维持、血管生成和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition, EMT)中起着至关重要的作用。有多项研究证实Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC中被显著激活,随着对Wnt/β-catenin信号通路的研究,靶向Wnt/β-catenin信号通路疗法在NSCLC的治疗中取得了显著成效。本文对Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC发生和发展中的作用以及治疗研究进行概述。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

直肠癌组织β-catenin和β-Trcp表达及其临床意义的探讨

目的:探讨直肠癌组织β-catenin和β-Trcp的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测直肠癌组织(60例)、直肠腺瘤组织(42例)和正常直肠黏膜组织(20例)中β-catenin和β-Trcp的表达情况.结果:直肠癌、直肠腺瘤和正常直肠黏膜组织中β-catenin的异位表达率分别为85.0％ (51/...     

槲皮素抗肿瘤作用与Wnt/β-catenin信号转导关系的研究

目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖的影响及对细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用。方法:以不同浓度的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法分析槲皮素对细胞增殖的抑制作用,利用报告基因方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导的影响,用RT-PCR及蛋白质印迹法观察槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路的下游关键因子Cyclin D1和Survivin转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:(40～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖,P<0.01,抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;(10～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞TCF-4报告基因TOPflash活性,P<0.05,抑制作用呈剂量依赖性。槲皮素可显著下调β-catenin/TCF下游靶基因CyclinD1和Survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,呈剂量依赖性。结论:槲皮素可抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

食管鳞状细胞癌中Wnt2、β-catenin、c-myc 和cyclinD1的表达及临床意义

 目的研究Wnt2、β-catenin及其下游的靶基因c-myc、cyclinD1在食管鳞癌中的表达情况,以期探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用及意义。方法用免疫组织化学SP法检测40例食管鳞癌患者石蜡包埋的癌组织、癌旁组织及正常组织中Wnt2、β-catenin、c-myc、cyclinD1表达情况,分析Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达阳性率逐渐降低,差异有统计学意义（P<0.01）,β-catenin和c-myc与肿瘤浸润和有无淋巴结转移相关（P<0.05）。结论Wnt2β-catenin Tcf4通路在食管鳞状细胞癌发生发展中起重要作用,该通路有可能成为基因治疗的潜在靶点。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

沉默ACY-1基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:初步探索氨基酰化酶1（ACY-1）与结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制。方法:小干扰RNA（siRNA）技术沉默结直肠癌细胞中ACY-1基因的表达,转染至SW480细胞中,分为对照组、si-NC组、si-ACY-1组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹试验（Western Blot）检测转染效果;用四甲基偶氮唑盐微量（MTT）实验检测干扰ACY-1基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭,Western Blot检测Ki-67、Caspase-3、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的蛋白水平。结果:Western Blot检测结果显示si-ACY-1组细胞中ACY-1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05）。干扰ACY-1表达显著抑制细胞的增殖（P<0.05）和Ki-67蛋白水平,促进其凋亡（P<0.05）,增加Caspase-3蛋白水平,降低细胞的侵袭能力（P<0.05）。si-ACY-1组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:沉默ACY-1抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭,诱导其凋亡,其作用与Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的激活有关,为结直肠癌的治疗提供新的治疗靶点。     

非甾类抗炎药通过β-catenin/TCF4 survivin通路诱导结肠癌细胞凋亡

背景与目的：Wnt信号传导通路异常导致的细胞增殖加快和凋亡抵抗,在结肠癌发生发展中发挥重要作用。本研究探讨Wnt信号传导通路在结肠癌细胞中拮抗凋亡的作用机制。方法：将survivin的启动子区克隆到荧光素酶报告基因表达系统,与pRL-SV40共转染HCT116细胞,利用双荧光检测系统检测启动子区活性;以非甾类抗炎药物indomethacin刺激HCT116细胞,细胞P1染色后,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡状态;Western blot检测蛋白表达。结果：Smvivin作为β-catenin的靶基因受到Wnt通路的调节;lndomethacin通过β-catenin／TCF4信号通路在转录水平抑制survivin的表达;Survivin过表达可以部分逆转Indomethacin诱导的HCT116细胞凋亡。结论：β-catenin／TCF4-survivin通路作为拮抗细胞凋亡的重要途径,在结肠癌的治疗方面具有重要的应用前景。