血液制品中人细小病毒B19基因的检测与分析

目的检测血液制品及原料血浆中人细小病毒B19,分析污染状况,以评估人细小病毒B19危险性。方法对单人原料血浆、混合原料血浆、4种类型的血液制品提取核酸后分别进行B19病毒核酸实时定量PCR检测筛查,对筛查结果进行数据统计分析。结果实验检测到个人血浆阳性率为0.267%、混合血浆感染5.45%、静注人免疫球蛋白感染0、人纤维蛋白原感染5.67%、人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物阳性率分别为7.41%和10.3%。结论尽管国内在血液制品生产工艺中使用了灭活/去除B19病毒的方法,但在本研究中筛查的原料血浆及血液制品中仍检测出了B19 DNA。     

检测人细小病毒B19DNA的超敏检测法

人细小病毒 B1 9(B1 9)可引起儿童传染性红斑 (第五病 ) ,并造成免疫损害患者慢性贫血。据报道 ,用聚合酶链反应 (PCR)法均可从世界各生产厂中检出含 B1 9DNA的血液制品。由于 B1 9无包膜且对热稳定 ,所以很难将血液制品中的 B1 9灭活 ,为此作者建立了一种 PCR与杂交保护测定 (HPA)相结合的超敏检测法。　　为了评估每次检测的 B1 9DNA拷贝数 ,作者将从一例传染性红斑患者血清中扩增出的约 4.7kb的 B1 9DNA克隆至 p UC1 9质粒中 ,并在大肠杆菌 HB1 0 1中增殖 ,用A2 6 0确定 B1 9DNA浓度。用定量和竞争PCR对日本福冈红十字血…     

聚合酶链反应增强的免疫测定法在抗肠道病毒IgM诊断方面的应用

聚合酶链反应 (PCR)增强的免疫测定法(PIA)是将固相血清学技术与 PCR结合 ,提供了一种多功能且敏感的抗体检测方法。作者将 PIA技术运用于抗肠道病毒 Ig M抗体的检测 ,即 Ig M抗体先被捕获于抗人 Ig M包被的微孔板中 ,抗肠道病毒 Ig M能结合肠道病毒粗抗原 ,被结合的病毒经加热变性 ,释放出的 RNA用作逆转录 PCR(RT- PCR)的模板 ,扩增产物与亲和标记的探针杂交后用微孔比色法检测。　　预初试验中 ,作者检测了 1 8份肠道病毒感染病人的血清样本。PIA所用的病毒抗原为柯萨奇病毒和埃可病毒共 1 0个亚型参考株的混合物。为了检…     

用遗传工程痘病毒组建活疫苗:表达流感病毒血凝素的重组牛痘病毒的生物学活性

作者将牛痘病毒HindⅢF片段嵌入质粒pBR322DNA,再经一系列拼接组合步骤建立了5种嵌含的供体质粒,分别命名为pDP122B、pDP301A、pDP301B、pJZ102A和pJZ102B。并以此分别建立和分离5株重组牛痘病毒,即VP53、VP7、VP8、VP9及VP10。其中VP7和VP8不含流感血凝素(HA)基因。pBR322序列极性相反。VP9和VP10含     

一种新的高纯度因子Ⅷ(OCTATE)的病毒安全性

用人混合血浆制备的血液制品有病毒污染的可能性,虽然溶剂/去污剂法(SD)已广泛地用于凝血因子浓制剂和静注免疫球蛋白制剂及全血浆的病毒灭活,但这种方法只能灭活脂质包膜病毒,对无包膜病毒效果不佳.为此作者将引入OCTAVI(一种仅用vonWillebrand因子稳定的高纯度因子Ⅷ浓制剂)制备工艺的改良巴氏消毒法(63℃加热     

在盐酸胍存在的情况下应用巴氏消毒法灭活血浆蛋白制品中的病毒

溶剂 /去污剂法和其他特定的病毒灭活法对血浆制品的安全性 ,尤其是对有包膜病毒的灭活具有重要作用。然而 ,仍受到特别关注的是无包膜小病毒 ,如细小病毒 B19,因为它们体积很小且理化性质极其稳定。目前对细小病毒及其他无包膜小病毒的有效灭活和去除仍存在许多问题 ,正在进行相关技术的研究。作者对在盐酸胍存在情况下巴氏消毒法灭活血浆病毒的效力进行评估。　　用冷乙醇沉淀法分离血浆获得含载脂蛋白 A1(apo A- 1)的沉淀物 ,用盐酸胍和乙二胺四乙酸悬浮沉淀物 ,获得浓度为 2 .5 %的apo A- 1悬液。用巴氏消毒法 (6 0℃ ,10小时 )处理上…     

辛酸盐对蛋白质中脂质包膜病毒的灭活作用

作者研究了辛酸盐对来自血浆制品和细胞培养产物的生物活性蛋白中的脂质包膜病毒的灭活作用。病毒包括1型单纯疱疹病毒(HSV-1)、水泡性口炎病毒、牛痘病毒和新培斯病毒(甲病毒属成员)。由于电离作用,在相当大的pH值范围内,改变电离型辛酸盐浓度能将非电离型维持在一个衡定的浓度。pH值升高,电离型增多,非电离型减少。非电离型辛酸盐浓度在0.001～0.07%(重量)时,脂质包膜病毒很     

酶免疫套式PCR检测HBVDNA方法学的建立

套式PCR比常规PCR具有更高的灵敏度，但扩增产物检测常采用琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳法，仅为定性试验，影响了应用价值。笔者设计了一套内引物和外引物，在内引物上各标记生物素和地高辛，使扩增产物标上了生物素和地高辛，通过生物素和固相亲和素反应，地高辛和AKP-抗地高辛抗体反应，建立了酶免疫套式PCR检测HBVDNA的方法，操作简便，特异性、重复性好。     

用逆转录PCR法自动定量检测丙型肝炎病毒血症

作者建立了一种自动定量检测丙型肝炎病毒（HCV）的逆转录PCR法。其原理是用两个类似模板,即病毒基因组与一个已知量的模拟靶序列RNA（下称摹版）的协同扩增,并用地高辛标记三磷酸脱氧尿苷（dUTP）。扩增后产物用两个分别与上述模板互补的生物素捕获探针进行测定。主要材料为:（1）引     

用聚合酶链反应检测黄热病病毒

尽管有了安全有效的黄热病疫苗,但在非洲和南美等地,每年仍有黄热病的爆发流行.由于缺乏及时可靠的实验室诊断方法,从而延误了对该病所采取的控制措施.为此,本文作者建立了一种特异和灵敏的逆转录酶/聚合酶链反应(RT/PCR),用于实验室确证黄热病病毒(YFV)感染.作者利用已知的YFV17D株、ASibi株和1899/81株的基因序列,设计了YFI和YF2两个合成引物及一个地高辛标记的探针,可以识别包膜E蛋白的保守区域.RT-     

脊髓灰质炎病毒衣壳多肽VP1、VP2和VP3诱生中和抗体

作者研究了脊髓灰质炎(以下简称脊灰)病毒的三个重要衣壳多肽VP1、VP2和VP3的抗原性和免疫原性。采用提纯的脊灰活毒或福尔马林灭活病毒(I型Mahoney株、11型MEF株及l型Saukett株)作为分离衣壳多肤的原材料,用SDSpAGE进行分离。每隔3~6周给Wistar鼠及新西兰兔重复肌注50一10郊g多肤以制备抗多     

脊髓灰质炎病毒衣壳多肽VP1、VP2、和VP3诱导中和抗体

作者证明了脊髓灰质炎病毒的3个重要衣壳多肽VP1、VP2和VP3有诱导中和抗体的能力。采用提纯的脊髓灰质炎清病毒或福尔马林灭活病毒(Ⅰ型Mahoney株、Ⅱ型MEF株和Ⅲ型Saukett株)作为分离衣壳多肽的原材料。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离农壳多肽。每隔3～6周给Wistar鼠及新英格兰兔重复肌肉注射50～100μg多肽以制备抗多     

地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立

目的  建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus, HaPyV）PCR检测方法,并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法  设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物,以含HaPyV VP1片段的质粒PMD19T-HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV688 10倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus, MuPyV)检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyV DNA检测。结果  仅含有质粒PMD19T-HaPyV688和MuPyV DNA的样品能够扩增出600 bp的片段,经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VP1特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T-HaPyV688和MuPyV 的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论  建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。     

诃子提取物的抗过敏作用

近几年研究证明,硫酸多糖对多种包膜病毒显示广谱抗病毒活性,这些病毒包括在免疫抑制(如移植)或免疫缺损(如艾滋病)患者体内作为病原体的人疱疹病毒(HSV)和人巨细胞病毒。作者研究了卷枝藻属红海藻B.montagnei(BM)水提取物和硫酸半乳聚糖提取部位的抗 HSV-1、-2和抗凝血活性。晒干的 BM 粉末用25℃蒸馏水提取和乙醇沉淀得多糖(BCW),剩余残渣用85℃     

细小病毒B19在血液及血液制品中的存在和意义

细小病毒B19常污染混合血浆和由它制备的血液制品,可引起慢性病毒血症、再生障碍性贫血等疾病。目前尚无一种稳定可靠的灭活该病毒的方法。因此,只有用预先筛检无B19病毒的血浆作原料,才能保证血液制品不含感染性B19病毒。     

对HIV-1或HIV-1包膜糖蛋白(gp120)制备的免疫刺激复合物的免疫应答

作者用去垢剂溶解的1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)B和HIV-1B包膜糖蛋白(gP120)分别制备了两种免疫刺激复合物(ISCOM).HIV-1B ISCOM在电镜下呈开放的环形骨架样结构,平均直径为35nm,不含完整病毒.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶上可观察到ISCOM与病毒的主要区别在于缺乏p24.由于HIV-1B     

抗体在心脏病学中的临床应用

临床心脏病学中应用最广的4个抗体是:(1)Digibind,抗地高辛多株抗体片段,用于治疗致命性地高辛中毒;(2)OKT_3,抗T细胞单株抗体,作为心脏移植术后的免疫抑制治疗;(3)Myoscint,~(111)铟标记的抗肌凝蛋白单株抗体,用于心肌坏死时的显象;(4)7E_3,抗血小板抗体,抑制血小板功能。这些抗体是基因重组技术制成的一些蛋白。抗地高辛抗体免疫作用抗地高辛抗体能降低细胞外地高辛浓度,促使受体结合部位释放地高辛,从而降低细胞(如红细胞、肾皮质细胞)内地高辛水平。实验证明,抗地高辛抗体能消除     

一种改良的免疫印迹法检测抗HIV抗体

作者介绍了一种改良的免疫印迹法,用收获的细胞培养物作为抗原,不需纯化病毒,用放射性碘标记的抗人IgG单克隆抗体(McAb)作为标准试剂即可完成。将感染HTLV-ⅢB株的H9或CEM细胞在36～37℃培养以增殖病毒,离心收集细胞,悬浮于含0.1M Tris-HCl 4%十二烷基硫酸钠(SDS)、4%2-巯基乙醇、20%蔗糖和0.001%溴酚蓝的溶解     

用表达AIDS病毒包膜糖蛋白的重组牛痘病毒免疫的黑猩猩的AIDS病毒糖蛋白特异性细胞毒T细胞及其增殖

作者用表达人类免疫缺陷症病毒(HIV)包膜(env)糖蛋白的牛痘病毒重组株v-env5免疫黑猩猩,并用表达Ⅰ型单纯疱疹病毒gD糖蛋白的重组牛痘病毒(v-HSV-gD1)作对照。采血后分离外周血淋巴细胞(PBL)。分别以纯化的HIV、env和灭活的牛痘病毒对两利PBL作抗原刺激,用~3H-胸苷(~3H-TαR)标记细胞,以~3H-TαR结合量来反映PBL的增殖应答。发现经v-env5免疫的黑猩猩的PBL在HIV或env刺激后均大幅度增殖。HIV刺激后PBL内~3H-TαR的结合量比无抗原刺激对照组高7～144倍,以env刺激后PBL中~3H-TαR结合量也提高16～80倍,而v-HSV-gD1     

SARS的被动免疫治疗策略

当前SARS尚无特效治疗方法,由于SARS患者在感染过程中产生抗SARS病毒抗体,因此用恢复期血浆作被动免疫治疗可减少患者体内病毒负荷,控制病毒血症症状.为了提高被动免疫治疗的安全性和功效,应对恢复期血浆进行病毒灭活和混合,并可从大量混合血浆中提纯抗SARS病毒IgG制剂.本文对SARS被动免疫治疗策略作了较全面的评述.