SPA协同凝集反应快速检定痢疾杆菌的实验研究

1940年Verwey首先发现葡萄球菌A蛋白(Staphlococcal Protein A、简称SPA),以后经许多学者相继研究,证明它能与免疫球蛋白Ig~G FC段结合,结合后的IgG的Fab段仍能与特异性抗原结合,形成凝集,即协同凝集反应(Coaggulutination reaction,简称COA)目前已广泛用于很多微生物的鉴定和诊断。但作为快速     

应用协同凝集反应快速诊断流行性脑脊髓膜炎的研究

<正> 金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)具有与许多哺乳动物IgG分子的Fc段结合的特性,结合后Fab段暴露于外并保持其抗体活性,当与特异性抗原相遇时,使已标记抗体的SPA菌相互连结引起协同凝集反应(简称COAG)。国内外已应用COAG进行脑膜炎球菌的鉴定和分群,检测脑脊液中的可溶性抗原,并利用此法与细菌培养法、对流免疫电泳法做     

协同凝集试验的应用进展

协同凝集试验是目前用于快速诊断,微生物定群或分型的一种新近发展起来的敏感而简便的方法。此种试验是根据金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)表面的A蛋白成分,能结合IgG的Fc段,但不影响IgG的Fab段与相应抗原反应的特性而建立的一种凝集试验。方法是将特异性抗体致敏含A蛋白的金葡菌(SPA),再与相应微生物或抗原接触,相应微生物则与菌体表面吸附的抗体Fab段相结合,从而使含A蛋白金葡菌通过抗体与特异性抗原结合而互相联结,起到扩大的作用,呈现出肉眼可见的凝集颗粒。这一试验的特点是不论是颗粒抗原,还     

用特异性抗体标记含A蛋白金葡菌(简称SPA菌)所作的钩体玻片凝集试验

本试验的原理是基于金黄色葡萄球菌表面的A蛋白(简称SPA)能非特异地结合IgG的Fc段,能与特异性抗原相结合的Fab段仍然具有抗体活性。以SPA菌作为载体,使特异性免疫血清结合于金葡菌上,然后再与相应的抗原(如钩体)在玻片上作用,从而出现肉眼可见的协同凝集反应(Co—agglutination)。在教学和科研工作中,对于钩端螺旋体的定型,迄今所用的可靠方法仍为显微镜凝溶试验,该试验敏感性和特异性虽高,但需用暗视野显微镜,所用抗原应为活的钩体,操作麻烦,     

HRP-SPA用于丙型肝炎检测

葡萄球菌A蛋白(SPA),能与人和多种哺乳动物的IgG FC段呈非特异性结合,标记上酶等结合物,可作为广谱的第二抗体,而广泛地应用于各种疾病的IgG型抗体的检测。利用SPA以上特征,我们以南京铁道医学院自制的HRP-SPA试用于丙型肝炎的检测,取得了满意的效果。1 材料和方法     

用协同凝集试验筛检实验动物沙门氏菌感染的探讨

实验动物常易感染沙门氏菌,常规细菌学检测不仅需用大量培养基,而且费时费力。为及时及早检测感染的病原菌,必须建立简易快速筛检法。近年发展了细菌的协同凝集试验,用于沙门氏菌属的鉴定和诊断。该试验是利用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)与特异性抗体IgG分子的可结晶分段(Fc)结合,成为吸附特异性抗体的载体;作为指示系统的葡萄球菌,通过标记在表面的特异性抗体的抗原结合分段(F(ab’)_2,与受检细菌互相连结,而显现凝集反应。本法具有较高的敏感性,已用于某些肠道菌的鉴定和分型,特别是标本经增菌培养后效果更好。本文报道用协同凝集试验快速筛检实验动物粪便中沙门氏菌的应用结果。材料和方法     

抗IgG血清的新制备法——IgG-SpA菌体免疫法的研究

金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphyloc-occal protein A,SpA)已广泛应用于微生物学、免疫学及细胞表面结构的研究。为了改进制备第二抗体的方法,我们设想葡萄球菌吸附血清中IgG后,可能并不改变IgGFC 段的免疫原性,试以血清中IgG致敏SpA菌体的结合物     

选择A蛋白葡萄球菌标准株(Cowan Ⅰ)替代菌株的实验研究

国外对金黄色葡萄球菌A蛋白(SpA)及其应用,已进行了广泛的研究。我们从收集到的金黄色葡萄球菌中,选出了含有丰富A蛋白的Z_5和No.1800株及不含A蛋白的Z_(12)株,经特异性抗体标记后的协同凝集反应,证明Z_5和No.1800株结合IgG的效果良好,可以替代国外标准株Cowan Ⅰ,而Z_(12)株因不含A蛋白,不能结合IgG,故可替代国外标准株Wood 46。Z_5和No.1800株及Z_(12)株的建立为开展SpA在免疫学方面的研究提供了必要条件。     

基因工程技术制备的人源性抗Mr 48×103角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定

目的用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定. 方法将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,产物经金属鏊合层析纯化,并用ELISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS-PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体Fab片段识别的抗原组分. 结果可溶性表达的抗角蛋白抗体Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化,蛋白印迹明确纯化产物为人Fab片段.所纯化的Fab片段在非还原SDS-PAGE中形成Mr 50×103单一条带,在还原SDS-PAGE中可见Mr 23×103,Mr 25×103两条带. ELISA和Western blot证实该片段具备良好的抗原结合活性和抗原特异性. 结论成功表达并鉴定了人源性抗Mr 48×103角蛋白的Fab可溶性片段,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础.     

葡萄球菌A蛋白用于免疫学研究的进展

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal proteinA,SPA)是某些金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白质成分。早在1940年Verwey已有描述。60年代许多学者相继对SPA的理化特性和生物学活性进行了研究,发现SPA具有能与人和多种哺乳类动物的IgG分子Fc段呈非特异性结合而不影响抗体活性的特性。此后,众多学者利用SPA这一特性以特异性抗血清标记的SPA直接鉴定抗原,或以荧光素、同位素和酶标记的SPA代替第二抗体来测定抗体、抗原抗体复合物或研究淋巴细胞表面的抗原和受体等。70年     

人破伤风免疫噬菌体抗体库的建立及鉴定

目的：建立人破伤风免疫噬菌体抗体库，筛选抗破伤风类毒素的抗体基因，并在大肠杆菌中表达可溶性Fab段。方法：从破伤风类毒素免疫志愿者中分离淋巴细胞，提取细胞总RNA，用一组人IgG Fab基因特异性引物，从合成的cDNA中经PCR扩增出抗体轻链(VL CL)和重链Fd(VH CHl)基因，分别经Xba Ⅰ／Sac Ⅰ和Spe Ⅰ／XhoⅠ酶切克隆入噬菌粒pComb3。用破伤风外毒素作为抗原进行筛选富集获得特异性抗破伤风类毒素的噬菌体抗体，切去噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ(gⅢ)，表达可溶性人抗破伤风类毒素的Fab段。结果：经核苷酸序列分析证实，所获得的基因为人IgGFab基因；用ELISA鉴定表明，表达的人IgGFab抗体能特异性地与破伤风外毒素结合。结论：利用噬菌体抗体库技术筛选可得到与破伤风外毒素特异性结合的人抗破伤风类毒素基因工程抗体。     

静脉注射免疫球蛋白在儿科临床应用进展

免疫球蛋白替代治疗免疫缺陷病已有40余年的历史。50年代开始应用肌肉注射血清免疫球蛋白(ISG)预防和治疗感染性疾病及无丙种球蛋白血症。1981年又相继开发出静脉注射免疫球蛋白(IVIG)。由于其投于方便,副作用小,使用安全有效,因而在临床上广泛应用。一、IVIG的特性IVIG是数千个成人供体混合的血浆分离制备的免疫球蛋白(IgG)。IgG分子如经蛋白酶水解,则可形成抗原结合段(Fab)和结晶段(Fc)两部分。Fab段决定抗原特异性,当其与抗原结合时,Fc段的许多功能被激活而调节免疫反应。     

A蛋白在免疫细胞化学中的应用——检查病人血清自身抗体IgG(ANA、PCA)的免疫细胞化学方法

A蛋白(Protein A简称SPA)产生于金黄色葡萄球菌细胞壁,它能和数种哺乳类IgG的Fc段高度特异性亲和,是藉助于两个结合点与IgG相结合。由于A蛋白能     

血清中免疫球蛋白的测定及其临床意义

原理免疫球蛋白(Ig)是具有抗体活性和结构相似的血清球蛋白。Ig的基本结构是四条肽链,二轻二重,肽链之间由二硫键相联结。各种Ig的轻链相同,但重链则不同。根据重链的抗原结构,可将Ig分为:IgG、IgA、IgM、IgD,和IgE五种。用木瓜酶处理,可将Ig分子裂解为氨基端二个Fab片段[(Fab)_2]与一个Fe片段。Fab是抗体与抗原结合的区域,一个Ig分子有二个Fab,所以抗体是二价的。Fe部分和Ig的其他特性(如结合补体,通过胎盘,亲细胞性和代谢特点等)有关(表1)。从表1还可看到正常健康人血清中Ig有一定含量,但在患某种疾病(如慢性感染、变态反应病、     

葡萄球菌蛋白A在病毒学诊断中的应用

<正> 葡萄球菌蛋白A(SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成份,具有与人及多种哺乳动物血清中IgG类抗体Fc段结合的特性。国外自七十年代起对SPA广泛开展了研究;国内自1979年由张颖悟引进标准株以来也进行了大量研究。近年国内外学者应用SPA作为一种新的免疫学试剂,建立了许多敏感、特异、快速而简便的检测方法,本文仅就SPA在病毒学诊断中的应用综述如下。一、SPA主要性质 SPA分子是高度稳定的单一多肽链,分子量为42000。从N端开始有4个高度同源性片段,每个片段都具有与IgG Fc段结合的特性。SPA具有多结合片段的特性使SPA碘化     

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体

目的 利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性.方法 用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性.结果 成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体.ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应.结论 成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径.为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础.     

荧光素标记金葡菌A蛋白作间接荧光抗体试验检测日本血吸虫抗体

用荧光素标记的金葡菌A蛋白为第二抗体,以含血吸虫卵肝组织石蜡切片为抗原,作间接荧光抗体试验,检测日本血吸虫的特异抗体,结果表明具有较好的敏感性和特异性.与沿用的IFAT(FITC-羊抗人IgG)的检测结果一致,但本法更具有抗原制作简便、来源丰富、不具种属特异性等优点.     

抗商品庚酸盐清蛋白血清凝集素一例

本文报告1例由于血清中含有庚酸盐清蛋白凝集素影响合血的结果。这份血清在庚酸盐处理清蛋白溶液中能与人红细胞发生广谱凝集反应与自家凝集反应,发生反应后,血清中的庚酸盐清蛋白凝集素即被吸收除去。凝集反应在室温和37℃时均能发生,后者反应较强,推断为IgG类抗体,患者红细胞洗脱液中不含庚酸盐清蛋白凝集素。     

应用含A蛋白的葡萄球菌(SpA)快速鉴定钩端螺旋体菌株群(型)别的实验研究

葡萄球菌细胞壁A蛋白(SpA)具有与人及多种哺乳动物IgG分子Fc段结合而Fab段仍保持抗原抗体反应的特性。国外从70年代初开始将SpA作为一种新的免疫试剂应用于多种细菌和病毒的鉴定,国内开展SpA的研究较迟。晚近,张颖悟等报告,用自选的葡萄球菌Z_5株作肠道病原菌和钩端螺旋体(简称钩体)的鉴定,并用1800株作脑膜炎球菌的群别鉴定,效果满意,可以代替传统的试验方法。鉴于钩体菌型复杂和来源的多样性,张氏等作钩体协同凝集试验(简称CA)时,标本数较少,菌型和来源亦较单一,故我们作了进一步研究。兹将实验情况和应用结果报告如下。     

HRP-SPA免疫组织细胞化学法检测抗核抗体

用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA),在酶标记免疫组织细胞化学法中,代替酶标记第二抗体(马抗人IgG)。以鼠肝印片作为抗原基质,检测32例病人血清中的抗核抗体,并与免疫荧光间接法、酶标记抗体(HRP—IgG)免疫组织细胞化学法,检测抗核抗体比较,三者在敏感性和特异性方面基本相符。HRP—SPA免疫组织细胞化学法,HRP—IgG免疫组织细胞化学法,都可在光学显微镜下观察,标本可长期保存。但是HRP—SPA试剂较HRP—lgG试剂稳定,为检测抗核抗体提供了更便于推广的一种新方法。