重楼皂苷Ⅶ对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移与侵袭作用及机制研究

目的研究重楼皂苷Ⅶ对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移与侵袭作用及机制。方法采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ对PANC-1细胞存活率的影响;观察重楼皂苷Ⅶ对PANC-1细胞形态的影响;采用划痕实验和Transwell小室法考察重楼皂苷Ⅶ对PANC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对PANC-1细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测重楼皂苷Ⅶ对PANC-1细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(B-celllymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-associated X protein,Bax)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、DNA酶抑制物(inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease,ICAD)和程序性死亡分子配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)蛋白表达的影响。结果重楼皂苷Ⅶ可抑制PANC-1细胞存活率,显著抑制PANC-1细胞迁移和侵袭能力(P0.01),显著诱导PANC-1细胞凋亡(P0.05、0.01),显著升高PANC-1细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、PARP、Bax表达水平(P0.01),显著降低pro-PARP、ICAD、Bcl-2、PD-L1蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论重楼皂苷Ⅶ能够抑制PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭,并可能通过下调PD-L1表达诱导PANC-1细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的观察重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法不同浓度重楼皂苷Ⅱ作用于A549细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;将细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组,JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),Fluo-4 AM荧光探针检测细胞内Ca2+水平,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度重楼皂苷Ⅱ可降低A549细胞存活率,差异均有统计学意义(P0.01);重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组A549细胞MMP显著降低,Ca2+、ROS水平显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,重楼皂苷Ⅱ高剂量组Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可能通过降低细胞MMP,提高细胞内Ca~(2+)水平,增加细胞内ROS含量,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3表达,促进A549细胞凋亡。     

重楼总皂苷对A549细胞凋亡及Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨重楼总皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及对Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:CCK-8法检测重楼总皂苷对细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色后激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态的变化;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测重楼总皂苷对细胞凋亡的影响;Western blotting检测重楼总皂苷对细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2表达的影响。结果:重楼总皂苷对A549细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,显著上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,且与浓度成依赖关系。结论:重楼总皂苷可显著诱导A549细胞凋亡,其机制与上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达相关。     

裂果薯皂苷Ⅰ对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞增殖与凋亡的影响

目的:探导裂果薯皂苷Ⅰ对人非小细胞肺癌增殖与凋亡的影响。方法:MTT法检测裂果薯皂苷Ⅰ对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色法观察细胞核的形态学变化,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Westen blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达。结果:裂果薯皂苷Ⅰ呈时间和浓度依赖性抑制非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的增殖,裂果薯皂苷Ⅰ处理细胞后,细胞核呈致密浓染,凋亡小体形成,出现典型的凋亡变化。流式细胞术结果显示裂果薯皂苷Ⅰ能显著诱导NCI-H1299细胞的凋亡,且凋亡率随药物浓度的升高而升高。Westen blot检测显示,与空白对照组比较,裂果薯皂苷Ⅰ5、10μmol/L浓度组Caspase-3、Caspase-9蛋白表达及Bcl-2/Bax水平显著降低。结论:裂果薯皂苷Ⅰ能以浓度及时间依赖性抑制NCI-H1299细胞的增殖,诱导其发生凋亡。其机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

天然海藻色素糖蛋白诱导Hela细胞凋亡作用

目的研究天然海藻色素蛋白对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测天然海藻色素蛋白对Hela细胞存活率的影响;DAPI荧光染色法观察细胞形态;细胞DNA片段试剂盒检测Hela细胞内DNA片段化程度;Western blot检测细胞内的凋亡蛋白Bax,抗凋亡蛋白Bcl-2,半胱天冬氨酸酶Caspase-3、-9,多聚ADP核糖聚合酶PARP。结果天然海藻色素能明显降低Hela细胞的存活率,致使细胞形态发生变化,细胞内形成凋亡小体,DNA片段化程度升高,并呈现剂量依赖性;细胞内Bax表达量增加,Bcl-2表达量下降,Bax/Bcl-2比例随之增加,Caspase-3、-9被活化,表达量增加,Caspase-3活性增强,PARP被切割为剪切型PARP(Cleaved PARP)。结论天然海藻色素蛋白能诱导Hela细胞凋亡,并且呈现剂量依赖性,诱导凋亡的过程可能与上调细胞内Bax/Bcl-2的比例和激活Caspase-3、-9有关。     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅰ对人乳腺癌细胞MCF-7体内外生长的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅰ(PSI)对人乳腺癌细胞株MCF-7体内外生长的抑制作用及其作用机制。方法 CCK-8法检测重楼皂苷Ⅰ对MCF-7体外生长的抑制作用,将其接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制MCF-7荷瘤模型,然后分为模型对照组、环磷酰胺(30 mg/kg)组和PSI高、中、低剂量(60、30、15 mg/kg)组,腹腔注射给药,每天1次,连续15 d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织,称定质量,计算肿瘤抑制率,Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3表达。结果 PSI可显著抑制MCF-7生长,高、中剂量重楼皂苷Ⅰ组的作用更为明显(P0.01或P0.05),抑制率分别为64.34%和39.86%。另外,以上两组还可明显下调Bcl-2、Bax,上调剪切型Caspase-3表达(P0.01或P0.05)。结论重楼皂苷Ⅰ对MCF-7生长具有抑制作用,其机制可能与调节Bcl-2、Bax和Caspase-3有关。     

绿原酸基于PI3K/Akt信号通路对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探讨绿原酸对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用CCK8实验方法检测绿原酸对HCT116细胞增殖的影响,流式细胞术检测绿原酸对HCT116细胞凋亡的影响,免疫印迹技术检测绿原酸对HCT116细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)及Bax蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,绿原酸能明显抑制HCT116细胞增殖,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能显著诱导HCT116细胞凋亡,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能明显抑制p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达,诱导Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性。结论:绿原酸能明显抑制HCT116细胞的增殖、诱导其凋亡,其作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。     

地榆皂苷Ⅰ诱导人甲状腺乳头状癌细胞BCPAP凋亡的实验研究

目的研究地榆皂苷Ⅰ对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞作用及相关的分子机制。方法 MTT法检测地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖的作用;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平;JC-1染色检测线粒体膜电位;试剂盒检测Caspase活性。结果地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度依赖性(P0.05),IC_(50)为28.99μmol/L。地榆皂苷Ⅰ可显著诱导BCPAP细胞凋亡,且凋亡率随着药物浓度的升高而显著升高,呈剂量依赖性。地榆皂苷Ⅰ可提高Bax/Bcl-2比率,降低线粒体膜电位,促使细胞色素C从线粒体内的释放,提高Caspase-9和Caspase-3活性。结论地榆皂苷Ⅰ通过激活线粒体通路导致人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖受到抑制并诱导细胞凋亡。     

吴茱萸碱通过调控Hedgehog信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡的研究

目的:基于Hedgehog信号通路研究吴茱萸碱抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖和诱导凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞和人正常结肠上皮NCM-460细胞增殖的影响;显微镜观察吴茱萸碱对HCT-116细胞形态的影响;结晶紫染色考察吴茱萸碱对HCT-116细胞克隆形成能力的影响;细胞划痕试验检测吴茱萸碱对细胞水平迁移的影响;Hoechest33324/PI染色观察吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡的影响;试剂盒检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡相关因子Caspase-9和Caspase-3活性的影响;蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、Gli1、SMO、c-Myc表达的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA表达的影响。结果:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的增殖且在高剂量和长时间给药情况下对人正常结肠上皮NCM-460细胞产生一定的抑制效应。此外,HCT-116细胞经吴茱萸碱5、10、20μmol/L干预后形态发生改变,细胞水平迁移能力和克隆形成能力显著下降,染色质固缩,细胞核呈致密浓染,Caspase-9和Caspase-3活性升高(P<0.01);吴茱萸碱10、20μmol/L作用HCT-116细胞48 h后,Bax mRNA和蛋白表达随吴茱萸碱浓度增高而上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);吴茱萸10、20μmol/L碱诱导了周期调节因子Cyclin D1 mRNA和蛋白的下调(P<0.01);Hedgehog信号通路中的关键因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA和蛋白表达也在吴茱萸碱干预后显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的生长、增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能涉及抑制Hedgehog信号通路的激活。     

芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的影响

目的:探讨芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9及细胞色素C的影响。方法:SD大鼠50只,建立大鼠骨肉瘤模型,随机分为模型组,顺氯氨铂组(10 mg·kg-1),芹菜素低、中、高剂量组(1,2,4 mg·kg-1),每组10只,ig给药,连续给药30 d。模型组ig给等体积的生理盐水。末次给药24 h后,切取骨肉瘤组织,称质量。TUNEL法原位标记凋亡的骨肉瘤细胞;免疫组化法检测骨肉瘤组织中Bax,Bcl-2的蛋白表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测骨肉瘤组织中Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白含量。结果:与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组的骨肉瘤的质量降低,细胞凋亡数量明显增加,明显上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:芹菜素可通过上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡,从而对骨肉瘤产生治疗和抑制作用。     

丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度的YB16(0.125~16μmol·L-1),以噻唑蓝(MTT)比色法检测YB16对PC-3的细胞毒性,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,吖啶橙(AO)染色、流式细胞术检测YB16对PC-3的凋亡影响,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)检测YB16对PC-3细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bcl-xl,Bax,激活型Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达,并对结果进行分析。结果:YB16能显著抑制PC-3细胞的生长,具有剂量依赖性(P0.05);YB16能促进细胞的凋亡,相差显微镜,AO染色法观察可见细胞具凋亡特征性改变;YB16能下调Bcl-2,Bcl-xl,上调Bax,Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论:YB16能抑制PC-3细胞增殖,促进PC-3发生凋亡,其机制可能与促进Caspase-3表达有关,具有良好的抗肿瘤作用。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

银杏叶提取物对皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及作用机制研究北大核心

目的:探讨银杏叶提取物对皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:采用0、80、160、320、400、500 mg/L银杏叶提取物处理人表皮癌细胞株A431,CCK-8检测细胞存活率;EDU检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达;实时荧光定量PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果:A431细胞增殖率随银杏叶提取物浓度的升高而降低,当银杏叶提取物浓度为160~500 mg/L时,A431细胞增殖率及Bcl-2蛋白表达显著低于对照组;当银杏叶提取物浓度为80~500 mg/L时,A431细胞凋亡率显著高于对照组;银杏叶提取物浓度为400、500 mg/L时,A431细胞中Caspase-3 mRNA及Bax蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:银杏叶提取物可通过活化Caspase-3,上调细胞促凋亡因子Bax表达,下调细胞抗凋亡因子Bcl-2表达,从而抑制人表皮鳞状细胞增殖,促进细胞凋亡。     

中药复方脏毒清体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的:探讨中药复方脏毒清对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW480,用不同质量浓度的脏毒清(0.05,0.10,0.15,0.20,0.25 g·m L-1)进行干预12,24,36,48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。用不同质量浓度脏毒清(0.10,0.15,0.20 g·m L-1)作用SW480细胞24 h后,另设空白组,采用用荧光染色技术和流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬酶-3(Caspase-3),Caspase-9的酶活性,Western blot技术检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示脏毒清对其有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;与空白组比较,脏毒清0.10,0.15,0.20 g·m L-1组能明显诱导SW480细胞凋亡,Caspase-3及Caspase-9酶活性明显升高,促凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bal-2表达明显降低,均具有统计学意义(P0.01)。结论:脏毒清具有促进人结肠癌SW480细胞凋亡的作用,并通过线粒体凋亡途径发挥作用。     

人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子的影响

目的观察人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响,探讨人参皂苷Rg_5抑制胃癌生长转移的可能作用机制。方法采用CCK-8法检测人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞24、48 h的细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测高、低浓度人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果与空白组比较,人参皂苷Rg_550、100、200μmol/L 24 h存活率降低(P0.05),人参皂苷Rg_512.5、25、50、100、200μmol/L 48 h存活率降低(P0.05);与空白组比较,低浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05);与空白组比较,高低浓度人参皂苷Rg_5组Bax蛋白表达均升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5组Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论人参皂苷Rg_5可有效抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进BGC-823细胞凋亡,且其促进BGC-823细胞凋亡的机制可能与其降低线粒体途径相关的细胞凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达相关。     

小檗碱通过调节凋亡相关基因的表达抑制金黄色葡萄球菌诱导的ECV-304细胞凋亡

目的:研究小檗碱在金黄色葡萄球菌(S.aureus)诱导ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的调节作用,探讨其抑制金黄色葡萄球菌诱导ECV-304细胞凋亡的机制。方法:小檗碱(Berberine,BBR)预处理ECV-304细胞2h后,用1∶100感染复数的S.aureus感染细胞,采用半定量RT-PCR及Western-blot法检测金黄色葡萄球菌感染后ECV-304细胞内Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果:小檗碱预处理ECV-304后再感染S.aureus可显著性增加凋亡相关细胞因子Bcl-2 mRNA水平及蛋白表达量,而Bax和Caspase-3表达下调。结论:小檗碱可以通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达抑制S.aureus诱导的ECV-304细胞凋亡,本实验结果为临床治疗S.aureus感染提供理论依据。     

垂盆草总黄酮影响肝星状细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究垂盆草总黄酮(SSTF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其作用机制。方法:将不同质量浓度的SSTF与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测SSTF对HSC-T6细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪Annexin-V/PI双染方法检测SSTF对HSC-T6细胞凋亡的影响;应用Western blotting和Real-time PCR方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果:SSTF能显著抑制HSC-T6细胞增殖、诱导细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖;Western blotting结果显示,SSTF通过抑制Bcl-2,促进Bax和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡;进一步采用Real-time PCR研究发现,Bcl-2能够从mRNA水平抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3表达。结论:SSTF具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达实现的。     

重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及机制研究

【目的】 观察重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及其机制。【方法】 以人胰腺癌细胞AsPC-1皮下注射裸鼠构建胰腺癌移植瘤模型。将胰腺癌移植瘤裸鼠随机分为5组,即对照组,重楼皂苷Ⅶ低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶组,对应给药治疗。给药结束后,测量移植瘤体积、质量;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记（TUNEL）法测定移植瘤组织细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测移植瘤组织Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。【结果】 与对照组比较,重楼皂苷Ⅶ低、中、高剂量组和 5-氟尿嘧啶组移植瘤体积、质量显著降低,TUNEL 阳性表达细胞比例显著升高,移植瘤组织Caspase-3、Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低（均P＜0.01）。【结论】 重楼皂苷Ⅶ可有效抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞凋亡有关。