非结核分枝杆菌分离与致病的相关性研究

目的 探讨非结核分枝杆菌分离与非结核分枝杆茵痛诊断的关系.方法 对2007年1～12月我院检验科分离的非结核分枝杆菌的实验资料及相应病例资料进行回顾性分析.结果 全年分枝杆菌培养阳性3046株,其中非结核分枝杆菌628株(占20.62%),它们包括鸟-胞内分枝杆菌复合群149株、戈登分枝杆菌98株、龟分枝杆菌90株、脓肿分枝杆菌90株,不产色分枝杆菌62株,瘰疬分枝杆菌31株、偶发分枝杆菌30株、耻垢分枝杆菌30株、次要分枝杆菌12株及其它非结核分枝杆菌56株.按中华医学会<非结核分支杆菌诊断与处理指南>(2000),从细菌学角度有13例鸟-胞内分枝杆菌病、9例龟分枝杆菌病,9例脓肿分枝杆菌病、4例偶发分枝杆菌病、2例不产色分枝杆菌病,1例戈登分枝杆菌病及1例其它非结核分枝杆菌病等39例病例确立诊断,涉及分离的非结核分枝杆菌96株.结论 多数非结核分枝杆菌为定植茵或污染菌.偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群等为非结核分枝杆菌病常见致病性菌种.     

复合PCR-膜芯片技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性的快速检测

目的　应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 rrs基因复合 PCR产物进行反向斑点杂交 ,并与 PCR-单链构象多态性 ( PCR- SSCP)和 PCR-直接测序 ( PCR- DS)结果比较。结果　 5 2株结核分枝杆菌临床分离株中 ,9株敏感株rps L和 rrs基因的 SSCP图谱、膜芯片杂交结果与标准株完全相同 ;4 3株耐 SM菌株中 ,33株存在 rps L 基因4 3位密码子 AAG→ AGG突变 ,5株有 rrs基因 5 13位 A→C突变 ,1株有 rrs基因 5 13位 A→ T突变 ,突变率为 90 .7%。结论　膜芯片技术检测结核分枝杆菌耐 SM基因型灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于临床耐药性检测     

用DNA芯片检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇基因突变的研究

目的利用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作DNA芯片。根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物，该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与DNA芯片杂交，同时以PCR-SSCP和DNA测序法为对照。结果120株结核分枝杆菌临床分离株中，35株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；85株耐乙胺丁醇临床分离株中有50株检测到embB基因突变[58．8％（50／85）]，均为306位密码子突变，该突变与PCR．SSCP和测序结果完全一致；85株耐药株中后有35株未检测到突变，占41．2％（35／85）。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株的embB基因突变，可协助临床医生制定合理的治疗方案，特别是复治患者，可帮助选择有效药物。     

脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展

脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一,对大多数抗结核药物耐药,临床治疗难度大。脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异,临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020版）,按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）分枝杆菌药敏试验标准（2018版）进行脓肿分枝杆菌药敏试验,建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。     

结核分枝杆菌DNA指纹分析研究

目的：采用结核分枝杆菌IS6110－RFLP DNA分型的方法分析上海近年分离的部分结核分枝杆菌临床分离株，并进行分子流行病学分析。方法：提取结核分枝杆菌基因组DNA，纯化后经限制性内切酶PvuⅡ切割，琼脂糖凝胶电泳和Southern转印后，用荧光标记的IS6110 DNA序列中245bp探针杂交，以核酸化学发光试剂盒探测荧光信号，比较各菌株指纹的IS6110拷贝数和带型，分析各菌株指纹的IS6110拷贝数和带型。结果：经245bp探针杂交后的指纹图谱显示大部分菌株含9－21个IS6110拷贝,但有1菌株不含IS6110拷贝。另一株含1个IS6110拷贝。结论：结核分枝杆菌上海分离株指纹图谱呈高度多态性。零拷贝菌株和单拷贝菌株不能用IS6110－RFLP DNA指纹分析方法分析。     

非结核分枝杆菌肺病的菌种分布及耐药性分析

目的 探讨非结核分枝杆菌肺病的菌种分布及药敏试验结果,为非结核分枝杆菌肺病的诊疗提供依据。方法 以山东省胸科医院2018年1月至2020年9月确诊的非结核分枝杆菌肺病患者143例患者为研究对象,其中男性87例,平均年龄（56.28±15.53）岁,女性56例,平均年龄（51.88±17.50）岁,收集患者的菌型鉴定结果及药物敏感试验结果进行分析。结果 143株肺结核分枝杆菌菌株中,9类NTM亚种被分离,胞内分枝杆菌（54.55%）最常见,其次为脓肿分枝杆菌（20.97%）,其他相对少见。药敏试验结果显示：非结核分枝杆菌耐药率高,耐药依次为亚胺培南、复方新诺明、多西环素、米诺环素、乙胺丁醇、妥布霉素、加替沙星、头孢西丁、利福平、利福布汀、阿奇霉素、克拉霉素、阿米卡星、莫西沙星、利奈唑胺。结论 非结核分支杆菌肺病菌种类型复杂多样,且耐药情况严重,应对可疑患者尽早行菌型鉴定及药物敏感性测定。     

非结核分枝杆菌临床药敏结果分析

目的 为探讨非结核分枝杆菌变化以及耐药性,临床对其进行药敏试验并对结果进行分析.方法 选取本院2013年7月至2015年6月期间从肺部疾病患者痰、支气管冲洗液中分离得到的196株非结核分枝杆菌,分析其细菌种类、耐药性等情况.结果 病菌多分布在鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌中,其依次所占比例为31.6％、17.3％、14.8％、12.2％,克拉霉素对鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌等菌种敏感性较高,利福平、链霉素、异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、丙硫异烟胺对非结核分枝杆菌均有较高耐药性,且耐药性均在60.0％以上.结论 通过临床对非结核分枝杆菌进行药敏实验,对临床医师选药治疗,提高治疗效果有重要意义.     

广州地区分枝杆菌菌株库资源分析

目的 提高广州地区分枝杆菌菌株库建设水平,并大力促进其应用水平.方法 应用分枝杆菌菌株库信息系统资料,对2009至2016年保存菌株的病例来源和流动性特征、分枝杆菌菌种类型、结核分枝杆菌耐药性特点进行分析.结果 7年间,该库共保藏了来自12110例患者的15854株分枝杆菌菌株.12110例患者来自我国31个省、直辖市及特别行政区的567个地级市辖区/县和其他4个国家,其中常住人口6522例、流动人口2411例、资料不详3177例,分别占患者总数的53.86％、19.91％和26.23％,每例患者保藏1～ 13株菌株不等.在15854株分枝杆菌菌株中,对11068株分枝杆菌进行了菌种鉴定,鉴定出结核、牛、堪萨斯、猿、海、亚洲、戈登、瘰疠、苏尔加、鸟、胞内、玛尔摩、蟾、土、次要、龟、脓肿、偶然、耻垢、微黄、草分枝杆菌等21个分枝杆菌菌种;对8853株结核分枝杆菌进行了异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、莫西沙星等7种抗结核药物的体外药物敏感性试验测定,获得95种不同的耐药类型,其中包括5157株全部药物敏感株、1798株非耐多药株、1674株耐多药株和224株广泛耐药株.结论 广州地区分枝杆菌菌株库保藏菌株病例来源地域辽阔并具有相当的流动性,分枝杆菌菌种与结核分枝杆菌耐药类型资源丰富,具有较高的临床和科研应用价值.但有约1/4的保藏菌株的患者信息资料不完整,其患者信息资料库建设水平有待进一步提高.     

衢州市2010-2011年初治涂阳肺结核患者分枝杆菌培养及耐药情况调查

目的了解衢州市初治肺结核患者的原发耐药情况,为结核病防治提供参考依据。方法对2010-2011年本地区的痰涂片阳性初治肺结核患者658例进行分枝杆菌培养,将培养阳性菌株进行菌种鉴定和药物敏感试验。结果①658例中结核分枝杆菌复合群646株（98．2％）,非结核分枝杆菌12株（1．8％）。②646株结核分枝杆菌复合群菌株中非耐药521株（80．7％）,耐药125株（19．3％）。③耐药125株中单耐药98株（78．4％）,多耐药18株（14．4％）,耐多药9株（7．2％）。④耐药顺序依次为：INH,SM,OFLX,RFP,KM,EMB。结论衢州地区结核分枝杆菌复合群菌株的耐药情况低于全国平均水平,与2004—2005年衢州地区耐药监测结果相当,但本次调查发现了初治涂阳患者耐多药情况,且出现了广泛耐药菌株。这说明衢州地区耐药情况较前严重,需要进一步改进结核病的防控工作。     

2017-2021年厦门市分离的非结核分枝杆菌菌株类型及特征分析

目的 研究厦门市非结核分枝杆菌(NTM)的菌种分布情况，并分析其流行特征，为临床诊疗和流行病学研究提供一定的参考依据。方法 从厦门市结核病定点医院结核病实验室2017-2021年开展常规培养的菌株中，收集到3 812株分枝杆菌菌株，通过PNB、TCH培养基生长试验和基因芯片菌种鉴定，获得非结核分枝杆菌感染者的菌种分布数据，使用SPSS 21.0软件对数据进行描述统计和卡方检验；对芯片结果双信号的菌株，进行GeneXpert检测，获得混合感染的数据。结果 非结核分枝杆菌(NTM)分离率为12.38%,归属于341名患者，检出共计13种非结核分枝杆菌，居前4位者为胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌；4.4%NTM患者存在与结核分枝杆菌的混合感染；NTM患者男占比53.08%,女占比46.92%,60岁以上最多(50.7%),其次是40～59岁(41.6%),20～39岁最少(7.6%);在感染不同生长型非结核分枝杆菌上，存在性别差异(χ²=6.876,P=0.009)和年龄差异(χ²=12.268,P=0.002)。结论 ...     

In vitro and in vivo antimycobacterial activity of an antihypertensive agent methyl-L-DOPA

Methyl-L-DOPA, an antihypertensive agent, has significant in vitro activity against a variety of atypical mycobacteria such as the Mycobacterium avium complex, M. scrofulaceum, M. xenopi and M. marinum, and rare pathogens like M. fortuitum. In the present investigation, the screening of the in vitro activity was further extended by testing the in vitro activity against a total of 53 different strains of mycobacteria, including 34 clinical isolates of both drug-sensitive and drug-resistant Mycobacterium tuberculosis. Most of the strains were inhibited at 10-25 microg/mL concentrations of the drug. When methyl-L-DOPA was injected into male mice at a concentration of 10 microg/g body weight (20 g each), methyl-L-DOPA significantly protected them when challenged with a 50 median lethal dose of M. tuberculosis H37Rv102. According to the chi2 test, the in vivo data were highly significant (p<0.01).     

The occurrence of rare rpoB mutations in rifampicin-resistant clinical Mycobacterium tuberculosis isolates from Kuwait

Mutations associated with rifampicin (RIF) resistance in two regions of the rpoB gene were studied by line probe (INNO-LiPA Rif. TB) assay (LiPA) and/or DNA sequencing in 32 RIF-resistant and 21 RIF-susceptible Mycobacterium tuberculosis strains isolated from 53 tuberculosis patients in Kuwait. The LiPA identified all susceptible strains as RIF sensitive, and the DNA sequences of the 81bp rifampicin resistance-determining region (RRDR) and the N-terminal region of the rpoB gene from five isolates were identical to the wild-type sequences from M. tuberculosis H(37)Rv. The LiPA identified 24 of 32 (75%) phenotypically documented RIF-resistant M. tuberculosis isolates as RIF resistant, with specific detection of mutation in 19 isolates, whilst 8 strains were identified as RIF susceptible. DNA sequencing of the RRDR confirmed the results for the 19 RIF-resistant isolates and identified precise mutations in five isolates for which specific base changes could not be determined by LiPA, as well as identifying a mutation (insertion 514TTC) in three isolates and no mutation in five of the eight isolates that were detected as RIF susceptible by LiPA. Two of the latter five isolates contained a V146F mutation in the N-terminal region of the rpoB gene and were recovered from patients of Middle Eastern origin. These analyses identified 11 different mutations in two regions of the rpoB gene. The majority of the isolates carrying identical or no mutations in the rpoB gene exhibited unique DNA banding patterns in fingerprinting studies. The occurrence of rare mutations in the rpoB gene, namely insertion 514TTC in 3 (9%) and V146F in 2 (6%) of 32 RIF-resistant M. tuberculosis isolates from Kuwait, is the highest reported so far.     

In vitro and ex vivo activity of new derivatives of acetohydroxyacid synthase inhibitors against Mycobacterium tuberculosis and non-tuberculous mycobacteria

Sulfometuron methyl (SM) is an inhibitor of acetohydroxyacid synthase (AHAS), the first common enzyme in the branched-chain amino acid biosynthetic pathway, and shows activity against Mycobacterium tuberculosis both in vitro and in vivo. To develop AHAS inhibitor derivatives with more potent activity, 100 sulfonylurea analogues were screened for antimycobacterial activity against M. tuberculosis and non-tuberculous mycobacteria (NTM), and then evaluated for intracellular activity using mouse macrophages. Three new compounds with antimycobacterial activity comparable with that of SM were identified. These compounds exhibit significant activity against intracellular M. tuberculosis (including the drug-resistant M. tuberculosis strains), and NTM Mycobacterium abscessus and Mycobacterium kansasii, respectively.     

分枝杆菌的多相分类鉴定

分枝杆菌属除麻风分枝杆菌外,主要包括结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌.近年来,随着结核病(结核分枝杆菌复合群为其致病菌)的回潮,非结核分枝杆菌感染率由4%急速上升到10%,快速和准确地鉴定它们显得非常重要.在我国非结核分枝杆菌的表型鉴定一直沿用以生化实验为核心的传统鉴定方法,且欠缺数值分类的补充分析.全细胞脂肪酸气相色谱分析这种表型鉴定方法仅在有条件的省份开展.随着分子生物学的发展以及系统发育理论的提出,与之相应的基因分型方法也被用于分枝杆菌属的鉴定.本文详细阐述了系统发育的理论以及应用于非结核分枝杆菌的遗传学分类鉴定方法,即DNA-DNA杂交和16S rDNA基因序列分析.为进一步提高表型鉴定的准确性,又详细介绍了一些用于数值分类的应用软件.总之,多相分类鉴定已被广泛应用于非结核分枝杆菌的分类鉴定中.本文也介绍了一些结核分枝杆菌复合群基因分型鉴定方法及其在结核分子流行病学中的广泛应用.     

Extended spectrum of antibiotic susceptibility for tuberculosis,Djibouti

In the Horn of Africa, there is a high prevalence of tuberculosis that is reported to be partly driven by multidrug-resistant (MDR) Mycobacterium tuberculosis strictu sensu strains. We conducted a prospective study to investigate M. tuberculosis complex species causing tuberculosis in Djibouti, and their in vitro susceptibility to standard anti-tuberculous antibiotics in addition to clofazimine, minocycline, chloramphenicol and sulfadiazine. Among the 118 mycobacteria isolates from 118 successive patients with suspected pulmonary tuberculosis, 111 strains of M. tuberculosis, five Mycobacterium canettii, one ‘Mycobacterium simulans’ and one Mycobacterium kansasii were identified. Drug-susceptibility tests performed on the first 78 isolates yielded nine MDR M. tuberculosis isolates. All isolates were fully susceptible to clofazimine, minocycline and chloramphenicol, and 75 of 78 isolates were susceptible to sulfadiazine. In the Horn of Africa, patients with confirmed pulmonary tuberculosis caused by an in vitro susceptible strain may benefit from anti-leprosy drugs, sulfamides and phenicol antibiotics.     

结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定

目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法，以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照，11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同；限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示，11株耐EMB分离株中4株(36．4％)不被NlaⅡ消化；46例结核病痰标本中10例(21．7％)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。     

分枝杆菌的鉴定、药物敏感性及动物毒力试验——Ⅰ.588株(例)分枝杆菌的鉴定结果

本文报道对588株(例)分枝杆菌进行的细菌学鉴定,除传种未生长及污染107株外,实际鉴定481株。其中人型结核杆菌302株(62.8%),牛型结核杆菌80株(16.6%),非典型分枝杆菌99株(20.5%)。后者20株传代失活及污染,其余79株中缓生菌29株(36.7%),速生菌50株(63.2%)。对分枝杆菌鉴定的指标,现行的生物化学鉴定方法和基因探针杂交技术的优缺点等进行了讨论。并根据多年的实践与体会,设计出一条较为切实可行的分枝杆菌鉴定程序。     

Mycobacterium fortuitum infection following adalimumab treatment for psoriasis and subsequent complication-free treatment with alternate TNF-a blockers

Tumor necrosis factor-a (TNF-a) inhibitors, such as adalimumab, are often used to treat psoriasis and psoriatic arthritis. While it is well known that these agents increase the risk of reactivation tuberculosis, recent evidence suggests that the risk of other nontuberculous mycobacterial (NTM) infections is on the rise. We report cutaneous Mycobacterium fortuitum in a 60-year-old woman with psoriasis who had been receiving adalimumab therapy for psoriatic arthritis for six months. No other risk factors were identified. M. fortuitum was cultured from a lesion on the right leg. Following resolution of the lesion, the patient has been successfully treated with infliximab infusions and subsequently certalizumab without complication for the past three years. To our knowledge, this is the first report of M. fortuitum occurring in a patient receiving adalimumab with successful subsequent treatment without complication while on another TNF-a inhibitor.     

广东地区结核分枝杆菌利福平耐药与基因rpoB突变关系分析

目的 为了解广东地区结核分枝杆菌rpoB基因突变特点,并探讨其与利福平耐药之间的关系.方法 本研究根据结核病诊断细菌学检验规程从临床结核病疑似患者痰液中分离鉴定结核分枝杆菌,采用绝对浓度法对其进行药敏试验,并用PCR-DNA直接测序法对结核分枝杆菌rpoB基因进行序列分析.结果 结果分离得到利福平耐药株27株,其中低浓度耐药8株,高浓度耐药19株.经测序分析,所有利福平敏感株rpoB基因均未发生氨基酸突变 利福平耐药株rpoB基因的突变率为81.5%（22/27）,突变均发生在利福平耐药决定区内,突变位点为526、531及533,以Ser531Leu突变最为常见（55.6%,15/27）,并且高浓度耐药株的突变率明显高于低浓度耐药株.结论 结果表明广东省结核分枝杆菌rpoB基因突变是结核分枝杆菌利福平耐药性产生的主要分子机制,突变位点同国内外研究基本一致,但各位点突变形式所占比例有自身特点.