乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的：流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群（side population，SP），并检测SP和非SP细胞周期。方法：MCF-7细胞悬液经Hoeehst33342染色，流式细胞仪分选SP和非SP后，乙醇固定，PI染色，流式细胞仪检测细胞周期。结果：SP细胞在MCF-7细胞中占4％，Vempamil阻断后比例减为0．5％。SP细胞中S／G2／M期细胞最低，仅占7．9％，而非SP细胞增殖期比例相对高，S／G2／M期细胞约占34．2％。未分选细胞中S／G2／M期细胞比例居中，为22．9％。结论：人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群，比例约为4％，且SP细胞多处于静止期，具有一般干细胞的特性。     

致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨致康胶囊对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:采用0（对照组）、0.5、1.0、2.0 mg/ml 致康胶囊培养液分别处理乳腺癌细胞MCF-7,分别于培养后24、48和72 h计数MCF-7细胞数。采用MTT法检测致康胶囊对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期;PI 单染流式细胞仪检测致康胶囊对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:不同浓度致康胶囊能有效地抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.5、1.0、2.0 mg/ml的致康胶囊作用MCF-7细胞72 h后,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为19.33%±10.38%、14.12%±5.37%和26.84%±2.13%;而对照组G0/G1期比例为51.83%±1.90%。0.5、1.0、2.0 mg/ml致康胶囊处理48 h后细胞的凋亡率分别为2.09%±0.74%、3.84%±0.78%和 5.35%±0.83%。结论:致康胶囊能抑制MCF-7细胞的体外增殖,且抑制作用表现为时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G2/M期,促进乳腺癌细胞凋亡。     

MCF-7细胞株中SP与非SP细胞特点比较研究

目的:研究乳腺癌MCF-7细胞系中SP细胞与非SP细胞表面标记的特点,并进行比较分析.方法:以体外培养的MCF-7细胞作为研究对象,采用Hoechst33342染色,并用流式细胞仪分选出SP细胞和非SP细胞,检测两种细胞的各种表面蛋白或抗原和细胞周期增殖状况.结果:乳腺癌MCF-7细胞株中SP细胞的含量为(10.1±0.84)%;分选后SP细胞的CD38、CD117和CD34表达率分别为(1.67±0.60)%、(0.43±0.22)%和(0.27±0.12)%,非SP细胞分别为(1.37±0.49)%、(0.42±0.24)%和(0.33±0.15)%,差异无统计学意义,P均>0.05;两者CD133、CD24、ABCG2的表达率分别为(34.33±7.03)%、(46.68±4.44)%、(85.82±2.48)%和(5.62±1.16)%、(75.38±5.14)%、(4.89±1.80)%,差异有统计学意义,P均<0.05;两者细胞中G0/G1、S、G2/M期细胞数分别为 (81.34±6.69)%、(13.48±5.90)%、(5.18±2.42)%和(57.71±6.46)%、(23.14±6.46)%, (19.14±4.61)%,差异有统计学意义,P均<0.05; 两者Ki-67表达率分别为(12.63±2.10)%、(34.37±4.71)%,差异有统计学意义,P=0.000.结论:乳腺癌MCF-7细胞系中含有比例较高的SP细胞,且SP与非SP细胞有可以分别鉴定和纯化的抗原差别.选择SP方法分离乳腺癌干细胞具有科学性.     

MCF-7异质性及肿瘤干细胞相关亚群初步研究

目的:探讨人乳腺癌细胞系MCF-7的异质性及其肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞或CD44+CD24-/low细胞)的性质。方法:采用Percoll不连续密度梯度法分离MCF-7,流式细胞仪检测各亚群中SP和CD44+CD24-/low细胞比例及各亚群细胞周期时相分布,各亚群细胞体外培养获得其生长曲线,平板克隆实验检测各亚群的增殖能力。结果:经Percoll分选MCF-7可形成A、B、C、D和E 5个亚群。各亚群中SP细胞比例分别为1.43%、2.15%、6.43%、25.23%和2.09%,其中D亚群中SP细胞富集。细胞周期时相分布显示,D亚群中G0/G1静止期细胞比例最高(P<0.05),为80.58%。生长曲线显示D亚群生长速度最快,以下依次为A亚群、B亚群、C亚群和E亚群。各亚群克隆形成率分别为(32.5±3.7)%、(41.3±4.8)%、(50.8±4.3)%和(68.2±3.5)%,其中D亚群具有最高的克隆形成率(P<0.05),而E亚群未形成明显的克隆性集落。但各亚群中均未检测到明显的CD44+CD24-/low细胞。结论:乳腺癌细胞系MCF-7具有异质性特征,经Percoll分选MCF-7可形成5个异质性的亚群,其中D亚群富含肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞),但MCF-7在长期体外培养过程中,乳腺癌干细胞表面标志CD44+CD24-/low可能已经改变。     

SW480侧群细胞分选及其ABCG2的检测

目的：分选结肠癌细胞株SW480中的侧群细胞，检测ABCG2的表达情况，并探讨两者的关系。方法：用流式细胞仪分选SW480中的侧群细胞和非侧群细胞，并检测它们的细胞周期；用细胞免疫化学、激光共聚焦和流式细胞仪检测SW480中的ABCG2表达情况。结果：SW480中存在侧群细胞，比例为2．29％，其大部分细胞处于静止期，S、G2和M期细胞仅占16．14％，而非侧群细胞增殖期比例相对较高，S、G2和M期细胞占34．05％；SW480中存在ABCG2^＋细胞亚群，比例约为10％，处于低分化状态。结论：SW480中的侧群细胞具有相对静止的干细胞特性，ABCG2^＋细胞亚群具有低分化的特性。联合两种方法，分选癌侧群细胞中的ABCG2^＋细胞，将有可能进一步纯化癌干细胞，为今后分离癌干细胞提供实验基础。     

葫芦素B在体内外对乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的:体内外观察葫芦素B(cucurbitacin B)对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖抑制和诱导凋亡作用,为临床应用提供依据.方法:用浓度分别为0.001、0.01、0.1、1、10以及100μmoL/L的葫芦素B处理MCF-7细胞,24、48和72 h后用MTT法检测细胞增殖.用O.1和10μmol/L的葫芦素B处理MCF-7细胞24h,之后用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,并用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞凋亡.建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,观察葫芦素B的体内抑瘤作用.结果:MTT结果显示葫芦素B对MCF-7细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性.流式细胞仪检测提示,随着葫芦素B浓度增高,处于S期和G2/M期细胞的比例逐渐升高,同时伴随G0/G1期细胞的减少以及细胞凋亡率的逐渐升高.统计学分析提示,各实验组之间以及实验组与对照组之间均有显著差异(P相似文献   

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

β-榄香烯联合三苯氧胺抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的实验研究

目的:研究β-榄香烯联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞生长有无协同抑制作用,并探讨其可能的机制.方法: 采用MTT法检测β-榄香烯联合三苯氧胺对MCF-7细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,免疫组化SP法检测bcl-2、pS2表达变化.结果: 不同剂量的β-榄香烯联合治疗剂量的三苯氧胺,吸光度均值较单用三苯氧胺明显下降,相应 的细胞抑 制作用明显上升;流式细胞仪检测G0/G1期细胞比例增加,用药后凋亡率升高,bcl-2、pS2在联合用药后表达明显下调.结论:β-榄香烯使三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用显著增强,提示榄香烯与三苯氧胺具有协同增效作用,其作用机制与影响细胞周期进程,协同促进凋亡,下调bcl-2、pS2表达有关.     

5,4''-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨金雀异黄素(gen)衍生物5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5,4'-Di-noctoxyl-7-gem-difluoromethylenegenisteinDOdFMG)体外选择性抑制人乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡作用.方法:MTT法检测DOdFMG对MCF-7和HBL-100细胞生长的影响;流式细胞术和AO/EB荧光双染法测定DOdFMG诱导MCF-7细胞凋亡作用及对细胞周期的影响.结果:DOdFMG抑制MCF-7细胞生长,呈时间剂量依赖,比gen具有更强选择性和抗肿瘤活性;DOdFMG能诱导MCF-7细胞凋亡,DOdFMG40.0μM组比gen100μM组诱导凋亡的活性更强,DOdFMGMCF-7将MCF-7细胞阻滞于S期和G2期,呈浓度依赖.结论:DOdFMG能抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长和诱导凋亡,是一种高效、毒副作用小的新型治疗乳腺癌候选药物.     

表柔比星对乳腺癌微球体细胞和单层细胞作用的比较

目的:探讨表柔比星(epirubicin)对乳腺癌微球体细胞和单层细胞的不同作用.方法:MCF-7细胞在干细胞培养条件下进行微球体培养,MTT法检测表柔比星对MCF-7微球体细胞和单层细胞的抑制率,FCM 法检测表柔比星作用下,MCF-7微球体细胞和单层细胞中CD44+CD24-的表达及细胞周期变化.结果:相同质量浓度下,当表柔比星的质量浓度>100 ng/mL时,对MCF-7微球体细胞的抑制率明显低于对单层细胞的抑制率(P<0.01);表柔比星(400 ng/μL)作用72 h后,MCF-7微球体细胞的CD44+CD24-/low 比例为 (22.8±4.8)%,高于单层细胞的(3.3±0.8)%(P<0.01);MCF-7微球体细胞含有较高比例的G0/G1期细胞(74.33 ± 3.20)%,高于MCF-7单层细胞的(53.40±3.45)%(P<0.01),表柔比星对微球体细胞与单层细胞的G0/G1期影响较小,但显著影响S期及G2期的比例.结论:表柔比星对MCF-7微球体细胞的细胞毒作用较低,并可用于富集乳腺癌干细胞,其对微球体细胞G0/G1比例影响较小.     

Establishment of Paclitaxel-resistant Breast Cancer Cell Line and Nude Mice Models,and Underlying Multidrug Resistance Mechanisms in Vitro and in Vivo

Background: Breast cancer is a common malignant tumor which affects health of women and multidrugresistance (MDR) is one of the main factors leading to failure of chemotherapy. This study was conducted toestablish paclitaxel-resistant breast cancer cell line and nude mice models to explore underlying mechanisms ofMDR. Methods: The breast cancer drug-sensitive cell line MCF-7 (MCF-7/S) was exposed in stepwise escalatingpaclitaxel (TAX) to induce a resistant cell line MCF-7/TAX. Cell sensitivity to drugs and growth curves weremeasured by MTT assay. Changes of cell morphology and ultrastructure were examined by optical and electronmicroscopy. The cell cycle distribution was determined by flow cytometry. Furthermore, expression of proteinsrelated to breast cancer occurrence and MDR was tested by immunocytochemistry. In Vivo, nude mice wereinjected with MCF-7/S and MCF-7/TAX cells and weights and tumor sizes were observed after paclitaxeltreatment. In addition, proteins involved breast cancer and MDR were detected by immunohistochemistry.Results: Compared to MCF-7/S, MCF-7/TAX cells had a higher resistance to paclitaxel, cross-resistance andprolonged doubling time. Moreover, MCF-7/TAX showed obvious alterations of ultrastructure. Estrogen receptor(ER) expression was low in drug resistant cells and tumors while expression of human epidermal growth factorreceptor 2 (HER2) and Ki-67 was up-regulated. P-glycoprotein (P-gp), lung resistance-related protein (LRP)and glutathione-S-transferase-π (GST-π) involved in the MDR phenotype of resistant cells and tumors were alloverexpressed. Conclusion: The underlying MDR mechanism of breast cancer may involve increased expressionof P-gp, LRP and GST-π.     

无血清悬浮法培养MCF-7细胞系并筛选该细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的：研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法：应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其接种于含血清培养基,观察分化。应用单克隆形成实验、表面标志检测、HOECHST33342染色检测来确定培养出的细胞中肿瘤干细胞的比例及其培养后肿瘤干细胞含量的变化。结果：乳腺癌MCF-7细胞系中有约2.12%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的MCF-7无明显差别。流式细胞仪表面标志检测,细胞球中约含83.13%表达CD24^-CD44^＋的细胞,HOECHST33342染色提示细胞球中约含10.06%的侧亚群（sidepopulation）细胞。结论：MCF-7细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有比例较低的具有增殖和分化能力的乳腺癌干细胞相关亚群。表面标志以及HOECHST33342检测差异提示细胞球中仅约1/8细胞具有干细胞的功能。     

长程多柔比星化疗富集乳腺肿瘤干细胞

目的:探讨长程多柔比星( adriamycin,ADR)作用乳腺癌细胞株MCF-7对富集肿瘤干细胞的可能性.方法:采用长程ADR诱导的方法建立ADR耐药细胞株MCF-7/ADR'.ALDEFLUOR法检测亲本MCF-7细胞及ADR耐药细胞MCF-7/ADR'中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)阳性的肿瘤干细胞亚群的比例,然后采用无血清悬浮培养和裸鼠成瘤实验分别检测两者在体外形成干细胞微球体和体内成瘤能力的差异.结果:MCF-7和MCF-7/ADR'细胞中ALDH1+肿瘤干细胞亚群的比例分别为(0.82±0.77)％和(8.21±2.38)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05);两者经无血清悬浮培养形成干细胞微球体的比例分别为(2.17±0.70)％和(7.87±1.39)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MCF-7/ADR'细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显强于MCF-7细胞.结论:长程ADR作用MCF-7后可富集肿瘤干细胞.     

乳腺癌干细胞富集与鉴定的初步研究

目的:通过从MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中培养富集及鉴定乳腺癌干细胞(breast cancer stem cell,BCSC),寻找培养与富集乳腺癌干细胞的方法。方法:贴壁培养MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系,倒置显微镜观察各细胞形态;流式细胞仪分别分选收集CD44-CD24-、CD44-CD24+、CD44+CD24-及 CD44+CD24+ 细胞,其中CD44+CD24-为乳腺癌干细胞,其余三类为对照组;MTT法计数细胞,绘制MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系生长曲线;MCF-7细胞系进行无血清悬浮培养1个周期,流式细胞仪检测分子表面标记物CD44+CD24-含量,贴壁培养的CD44+CD24-乳腺癌干细胞为对照组;将分选的MCF-7（CD44+CD24-）和分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-）进行干性成球实验,鉴定CD44+CD24-干性表达。结果:MCF-7、MDA-MB-231细胞系富含表面标志物CD44-CD24-的乳腺癌细胞;ZR-75-1细胞系富含分子表面标志物CD44+CD24+的乳腺癌细胞;生长曲线显示MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231均呈持续增长,MDA-MB-231细胞生长较MCF-7、ZR-75-1细胞快;通过无血清悬浮培养CD44+CD24-乳腺癌干细胞由19.4%富集到88.9%;成球实验中CD44+CD24-表型细胞成球数量较分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-表型）明显增多,成球率分别为（36.5±1.7）%,（1.1±0.5）%。结论:流式细胞仪可成功分选出分子表面标志物为CD44+CD24-的乳腺癌干细胞;CD44+CD24-可能不是乳腺癌干细胞唯一的表面标志物;MDA-MB-231细胞系较MCF-7、ZR-75-1细胞系生长快;无血清悬浮培养法可简便、高效地富集乳腺癌干细胞;CD44+CD24-乳腺癌干细胞干性表达较强。     

rhTFAR19蛋白质对γ射线诱导MCF—7细胞周期及凋亡影响的初？…

探讨细胞核内蛋白ＴＦＡＲ１９对γ射线诱导的ＭＣＦ－７细胞周期及凋亡的影响。和细胞形态学、荧光显微镜及激光共聚焦荧光显微镜、单细胞微凝胶电泳、流式细胞仪进行观察和检测。结果ｒｈＴＦＡＲ１９感对γ射线诱导ＭＣＦ－７细胞周期无明显作用。细胞周期特异性凋亡为Ｇ２Ｍ期细胞凋亡。凋亡细胞形态表现为核心碎裂,染色质边集,凋亡小体形成。单细胞电泳可显示典型的“彗星”,并通过形态变化区别坏死细胞和辨别荧光显微镜下难     

新型光敏剂联合阿霉素对乳腺癌细胞增殖及周期的影响

目的:研究新型光敏剂叶绿素衍生物(Chlorophyl derivative4,CPD4),联合阿霉素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响,初步探讨联合用药的作用机制,为临床开辟新的治疗方法提供实验依据.方法:以人乳腺癌MCF-7细胞系为研究对象,新型光敏剂和乳腺癌传统化疗药物阿霉素(ADM)联合给药.采用流式细胞仪检测ADM组(2个浓度组分别预处理24小时、48小时)、光动力效应组、联合用药组细胞凋亡率和周期分布:流式细胞仪分析ADM(20ng/mL)预处理24小时、48小时对细胞平均荧光强度的影响以及ADM预处理24小时、48小时后加入CPD4 1.5μg/mL孵育不同时间细胞平均荧光强度的变化.结果:联合用药组细胞凋亡率明显高于单药组,差异有统计学意义(P＜0.01);光动力效应可造成MCF-7细胞G_0/G_1期阻滞,低浓度ADM预处理后GdM期细胞增加,联合用药时G_2/M期细胞升高.ADM预处理MCF-7细胞24小时、48小时细胞平均荧光强度与对照组荧光强度比较差异无统计学意义(P＞0.05);ADM预处理MCF-7后能增加光敏剂CPD4进入细胞的量,在CPD4孵育2小时细胞平均荧光强度最强,且ADM预处理48小时组＞预处理24小时组＞对照组.结论:ADM预处理MCF-7细胞后能够增加光敏剂CPD4进入细胞的量;光动力效应联合ADM具有协同作用.     

Reversing adriamycin resistance of human breast cancer cells by hyperthermia combined with Interferon alpha and Verapamil

One of the major obstacles related to chemotherapy is resistance against anticancer drugs, including Adriamycin (ADM). The purpose of the present work is to investigate the reversal effects on ADM resistance by hyperthermia (42.5 degrees C) combined with two reversal agents (Interferon alpha and Verapamil) in MCF-7/ADR (ADM-resistant MCF-7 breast cancer cell line), and its relevant molecular mechanism of action. The cell survival rate and ADM IC50 of different experiment groups were measured by MTT test. The quantitative expression of MDR1 gene in cells was detected by Real-time PCR, and the expression of P-glycoprotein (P-gp) on the cells surface and the intracellular ADM accumulation was detected by flow cytometry (FCM). The ADM IC50 of the MCF-7/ADR cells decreased 830-fold after combined with Interferon alpha (IFN-alpha) and Verapamil (VRP). Although there was no distinction in the mRNA expression of MDR1, the P-gp on the MCF-7/ADR cell membrane was significantly reduced and the cellular ADM uptake increased markedly as compared to pretreatment. Our results suggeste that hyperthermia induces a considerably reversal activity against ADM resistance synergizing other reversal agents (IFN-alpha and VRP). The reversal mechanism needs further study. However, these features of hyperthermia may be exploited in clinical cancer chemotherapy.     

Unexpected Lower Expression of Oncoprotein Gankyrin in Drug Resistant ABCG2 Overexpressing Breast Cancer Cell Lines

Background: Development of a multidrug resistance (MDR) phenotype to chemotherapy remains a major barrier in the treatment of cancer. Gankyrin (p28, p28GANK or PSMD10) is an oncoprotein overexpressed in different carcinoma cell lines. The aim of this study was to compare Gankyrin expression level in MDR cells (MCF-7/ADR and MCF-7/ MX) and non-MDR counterparts (MCF-7). Methods: Gankyrin, MDR1 (also known as ABCB1; the ATP-binding cassette sub-family B member 1) and ABCG2 (also known as BCRP; the human breast cancer resistance protein) mRNA levels were analyzed by real-time RT-PCR. Western blot analysis was used to detect the protein expression levels of Gankyrin. Results: The PCR results showed that the expression of Gankyrin was significantly lower in the ABCG2 overexpressing cell line MCF-7/MX than in non-resistanct MCF-7 cells. In contrast, there were no significant differences in mRNA expression of Gankyrin in the MDR1 overexpressing cell line MCF-7/ADR in comparison with MCF-7 cells. Similarly, Western blot analysis confirmed lower expression of Gankyrin protein in the MCF-7/MX cell line (26% compared to controls) but not in MCF-7/ADR cells. Conclusion: These findings showed that there may be a relation between down-regulation of Gankyrin and overexpression of ABCG2 but without any clear relationship with MDR1 expression in breast cancer cell lines.     

RNAi抑制PI3Kp85α蛋白活性对人乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制的体外研究

目的:探讨敲低PI3Kp85α表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长的影响和机制.方法:用靶向PI3Kp85α的siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7,使用Real-time PCR法鉴定转染PI3Kp85α表达水平;MTT法评价PI3Kp85α siRNA对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期分布和凋亡;采用免疫荧光染色及Western blot方法观察IA型PI3K/AKT通路主要成员的表达.结果:Real-timePCR结果显示PI3Kp85α siR-NA转染导致PI3Kp85α表达下调;MTT结果显示PI3Kp85α siRNA转染抑制肿瘤细胞生长;流式细胞术检测可见PI3Kp85α siRNA转染组细胞周期存在G_0/G_1期阻滞而且凋亡率显著高于对照组与空载体组(F=19.255,P=0.002).结论:应用PI3Kp85α siRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,可抑制其增殖和诱导细胞凋亡,因此PI3Kp85α可以作为人乳腺癌基因治疗的候选靶点.