白藜芦醇-Sirt1 Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用

目的 研究白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用。方法 将大鼠心肌细胞株H9C2培养48 h后,随机分为5组,即20 μmol/L白藜芦醇(resveratrol,Res)干预组、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）对照组、40 mmol/L尼克酰胺（nicotinamide,Nam）干预组、Nam空白对照组及正常对照组。培养24 h后终止培养,用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测Sirt1、Foxo1、p27、Bim mRNA及其蛋白表达水平的变化;用TUNEL法及流式细胞仪（flow cytometer,FCM）分析细胞凋亡和细胞周期。结果 20 μmol/L Res干预组可使Sirt1 mRNA及SIRT1蛋白表达的水平增加。Sirt1可通过抑制Foxo1 mRNA的转录活性而调节其下游基因p27及Bim的表达。SIRT1的高表达可使细胞周期延长,细胞凋亡减少。结论 Res干预可使SIRT1表达增加。Sirt1可能通过对Foxo1及其下游基因Bim、p27的调控,延长心肌细胞的细胞周期,减少其凋亡。     

白藜芦醇对大鼠缺氧心肌细胞凋亡的保护作用及对SIRT1表达的影响

目的研究白藜芦醇(Res)对大鼠缺氧心肌细胞凋亡的保护作用,以及对SIRT1表达的影响。方法选择褐鼠心肌细胞株H9c2培养48 h后随机分为5组:Res干预组,Res对照组,尼克酰胺(Nam)干预组,Nam对照组和正常对照组。24 h后终止培养,RT-PCR法检测SIRT1 mRNA表达水平的变化;免疫细胞化学法和Western blot法检测sIRT1蛋白表达水平的变化;TUNEL法及流式细胞仪PI染色法分析细胞凋亡。结果与Res对照组比较,Res干预组SIRT1 mRNA表达水平升高,蛋白表达增加;与Nam对照组比较,Nam干预组SIRT1 mRNA水平与蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与Res对照组比较,Res干预组细胞凋亡率降低,与Nam对照组比较,Nam干预组细胞凋亡率升高(P<0.01),正常对照组细胞凋亡率最低。结论 Res能减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调SIRT1的表达发挥作用。     

白藜芦醇干预对已退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1表达的影响

目的 探讨不同浓度及不同时间的白藜芦醇干预对退变椎间盘终板软骨细胞沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达的影响.方法 老年患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分组,分别用不同浓度及不同作用时间的白藜芦醇干预,终止培养后检测SIRT1蛋白及mRNA表达水平.结果 与空白对照组相比较,DMSO组SIRT1蛋白及mRNA表达无显著差异(P＞0.05);白藜芦醇干预的浓度在12.5 μmol/L、作用24 h,以及浓度在50 μmol/L、作用12h以上时能够显著促进已退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA(P ＜0.05).结论 白藜芦醇干预可促进退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA,且该作用呈现浓度、时间依赖关系;0.1％ DMSO对细胞表达SIRT1蛋白无抑制作用.     

白藜芦醇通过调节SIRT1活性促进退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质

目的探讨白藜芦醇(Res)干预对退变椎间盘终板软骨细胞(DEC)合成细胞外基质的影响。方法老年腰椎间盘突出症患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分为5组,即Res组、二甲基亚砜对照组、Res+尼克酰胺(Nam)组、Res+siRNA转染组及空白对照组。各组进行对应处理后检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、Ⅱ型胶原(COLA2)、蛋白聚糖聚合物(aggrecan)及SIRT1 mRNA表达水平。结果 Res干预上调DEC SIRT1 mRNA及蛋白的表达,促进细胞外基质(COLA2、aggrecan)的合成;Nam及siRNA干预分别有效抑制了SIRT1酶活性及SIRT1 mR-NA的表达,并抑制了细胞外基质的合成。结论 Res可促进DEC合成细胞外基质,抑制椎间盘软骨终板退变,其机制与调节SIRT1活性有关。     

SIRT1信号通路在白藜芦醇保护脑缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对大脑缺血再灌注损伤后大鼠神经元凋亡的影响及其作用机制。方法采用线栓法制作短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(MCAO组)、白藜芦醇低剂量(10 mg/kg)组(Res 10组)、白藜芦醇高剂量(30 mg/kg)组(Res 30组)。栓塞缺血2 h、再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能损伤评分、脑组织含水量及脑梗死体积评估,TUNEL染色检测细胞凋亡,同时测定缺血再灌注损伤缺血测脑组织中SIRT1、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果脑缺血再灌注后24 h,MCAO组脑梗死体积大于Sham组(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数及Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均明显高于Sham组(P0.01),而SIRT1 mRNA表达量较Sham组明显降低(P0.01)。与MCAO组比较,Res 10组、Res 30组脑梗死体积明显缩小(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数以及脑组织中Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量明显降低(P0.01),SIRT1 mRNA表达明显增加(P0.01)。结论白藜芦醇可通过减轻缺血脑组织神经元凋亡对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用,其可能通过激活SIRT1信号通路从而抑制或逆转脑缺血再灌注神经损伤的发生。     

丙咪嗪对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨丙咪嗪对结肠癌HT-29细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制.方法:按ACTT方法常规培养HT-29细胞,并以不同浓度(0、1、5、10、25、50和100μmol/L)丙咪嗪干预,MTT法检测各浓度干预24、48和72h后的细胞增殖能力:丙咪嗪以各浓度(0、1、10、50和100μmol/L)干预HT-29细胞24h,PI染色后流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V/PI双染后流式细胞仪和DNA片段梯试验检测细胞凋亡,Western blot检测Eagl蛋白的变化,逆转录PCR检测p21、p27、CyclinE1和cDK2mRNA表达水平的变化.结果:各浓度丙咪嗪干预HT-29细胞24、48和72h后,IC50分别为43、32、22μmol/L;丙咪嗪以剂量依赖方式诱导HT-29细胞在细胞周期Gn/G1期停滞,随丙咪嗪干预的浓度增加,HT-29细胞的凋亡指数逐渐升高(P<0.01),HT-29细胞中Eag1蛋白的表达水平逐渐下降(P<0.05),p27和p21mRNA表达水平逐渐增强(P<0.05),cyclinE1和CDK2mRNA的表达水平逐渐减弱(P＜0.05).结论:丙咪嗪可抑制HT-29细胞增殖,阻滞HT-29细胞周期进展,诱导细胞凋亡.其作用机制可能与抑制Eag1钾通道的活性,上调p27和p21表达、下调CyclinE1和CDK2表达有关.     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

白藜芦醇促进人前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的研究

目的 观察白藜芦醇(Res)对人前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 以PC-3细胞作为实验对象,并根据干预方式不同分为A组(12.50μmol/L Res)、B组(25.00μmol/L Res)、C组(50.00μmol/L Res)、D组(100.00μmol/L Res)和对照组(等体积完全...     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

睾酮对衰老心肌细胞及细胞周期调控因子的作用

目的 探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制.方法 用1 μmol/L、 100 nmol/L、10 nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD1 mRNA、蛋白及去磷酸化RB蛋白的表达.结果 与衰老心肌细胞相比,1 μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L睾酮干预细胞G0/G1期比例明显降低(P＜0.05),这一作用具有剂量依赖性.睾酮干预可上调cyclinD1mRNA及蛋白表达,下调p16INK4a mRNA及蛋白表达,并使去磷酸化RB蛋白表达下降(P＜0.05),而这些作用均可被雄激素受体阻断剂而不被雌激素受体阻断剂所阻断(P＜0.05).结论 睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过睾酮上调cyclinD1表达,下调p16INK4a及去磷酸化RB蛋白表达而实现的.