ABI-7000 PCR仪对血清HBV DNA含量的定量分析

目的检验ABI-7000荧光定量PCR仪对血清HBV DNA检测的灵敏性和重复性,探讨HBV DNA定量与血清标志物的关系,比较荧光定量PCR与定性PCR的敏感性差异。方法对乙肝标志物已明确的305例血清进行HBV DNA定量检测,其中67例同时做HBV DNA定性,并对结果进行统计分析。结果ABI-7000荧光定量PCR仪检测HBV DNA的灵敏性高,可检测低至1000copies/ml血清,批内及批间cv值分别为9.16%及12.66%;各种血清标志物组合HBV DNA含量分布情况表明:HBeAg阳性组HBV DNA阳性率高于其它组合(p<0.05);荧光定量PCR组HBV DNA阳性率与定性PCR组比较,有显著性差异(p<0.05)。结论ABI-7000PCR仪定量检测HBV DNA,灵敏度高,重复性好,优于传统定性PCR;HBV DNA定量可准确反映体内HBV复制情况,具有重要临床意义。     

HBV DNA定量联合乙肝血清标志物检测的效果

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染采用HBV DNA定量与乙肝血清学标志物定量联合检测的效果。方法回顾性分析2018年1-12月湛江中心人民医院245例乙肝患者的资料,并根据HBV血清学标志物检测情况将其分为三组,即小三阳组88例、大三阳组80例与其他模型组77例。三组患者均接受HBV DNA定量检测与乙肝血清标志物定量检测,观察并评价HBV DNA定量对于HBV感染的测定情况,血清标志物定量与HBV DNA定量的测定阳性率、不同HBV DNA定量参数与不同血清学标志物定量模式的检测情况。结果 HBV DNA定量检测大三阳组阳性率高于小三阳组高于其他模型组,差异有统计学意义(P0.01)。HBV DNA定量检测大三阳组的平均值高于小三阳组高于其他模型组,差异有统计学意义(P0.05)。HBV DNA阳性样本中,HBsAg检出率为85.47%(147/172),HBeAg检出率为93.75%(75/80)。大三阳组以HBV DNA定量7.0 lg copies/ml,5.0～7.0 lg copies/ml居多,小三阳组以2.7～5.0 lg copies/ml居多,其他模型组居多以2.7 lg copies/ml居多。结论乙肝病毒感染采用HBV DNA定量与乙肝血清学标志物定量联合检测可以有效增强HBV的诊断效果,为评估HBV的感染程度提供有利的参考依据。     

试剂反复冻融对乙型肝炎病毒核酸检测结果的影响

<正>血浆(清)乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是乙肝感染者病毒复制的直接指标。HBV DNA定量检测结果的准确性直接关系到乙肝感染者病毒复制水平、抗病毒药物疗效、肝移植术后HBV复发感染。为保证HBV DNA定量检测结果的准确性,对     

定量PCR-微流芯片法定量检测血清HBV DNA含量

目的应用定量PCR-微流芯片法定量检测临床血清标本HBV DNA含量,以了解该方法的灵敏度。方法将定量PCR-微流芯片法应用于10倍梯度稀释的HBV DNA参比品的定量检测,并与Taqman荧光定量法作比较;同时,应用这两种方法平行检测49份HBsAg阳性乙型肝炎患者的血清标本。结果Taqman荧光定量法可检测出104拷贝/mL的HBV DNA参比品,测得临床血清标本HBV DNA阳性率为63.27％(31/49),阳性血清的HBV DNA含量均值为9.60×106±19.54拷贝/mL;而PCR芯片法可测出103拷贝/mL HBV DNA参比品,测得临床血清标本HBV DNA的阳性率为77.55％(38/49),阳性血清的HBV DNA含量均值为6.95×106±15.43拷贝/mL。两者差异无显著性(P>0.05)。结论两种方法均能有效检测临床血清标本HBV DNA含量,而定量PCR一微流芯片法的敏感性更高,尤其适合于低病毒载量检测及患者抗病毒药物选择和疗效的监测。     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测     

荧光定量PCR检测289例乙型肝炎病毒DNA意义分析

目的荧光定量PCR检测血样中乙型肝炎病毒DNA拷贝数，探讨血清HBV—DNA检测结果与HBV抗原抗体(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)5项标志物(HBV—M)间的关系及临床意义。方法采用荧光定量PCR和ELISA法分别检测289例乙肝患者血样。结果122例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性血样中，HBV—DNA阳性检出率98．4％；89例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性血样中，HBV—DNA阳性检出率42．7％；27例HBsAg、HBcAb均阳性血样中，HBV—DNA阳性检出率29．6％；6例HBV—M全阴性血样中，1例HBV—DNA呈弱阳性。结论只有检测HBV—DNA才能确定HBV的真实感染和复制情况。荧光定量PCR检测HBV—DNA作为判断乙肝病毒感染、复制及传染性强、弱等的确定依据，在追踪患者预后及流行病学上有一定意义。     

2种荧光定量PCR扩增仪检测结果的比较

目的:观察2种荧光定量PCR扩增仪测定乙肝病毒定量(HBV DNA)的结果是否一致。方法:用2台PCR扩增仪同时对20份标本进行检测,观察2台荧光定量PCR定量扩增仪对HBV DNA测定结果的差异。结果:对20份标本HBV DNA含量的对数值进行相关性分析,二者相关性良好(r=0.96)。结论:通过2种荧光定量PCR扩增仪对20份随机样本的检测结果比较,2种仪器检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA。     

乙肝病毒标志物与PCR-HBV定量水平的关系

目的：研究乙型肝炎病毒标志物定量检测结果与其HBV－DNA含量的临床关系。方法：采用时间分辨免疫定量和荧光定量－PCR技术，对HBV－M和HBV－DNA含量进行检测。结果：在HBsAg/HBeAg/HBcAb,HBsAg/HBeAb/HBcAb,HBeAg/IC及单纯HBcAb阳性的4个组中，HBV－DNA阳性率分别是97．17％，30．56％，100％和25％；在HBsAg，HBeAg，HBeAb、HBcAb定量检测高、低值两组HBV－DNA含量对比中，HBV－DNA阳性率分别为76．92％，58．14％；100％，97．26％；20．00％，11．42％；64．62％和27．63％。结论：HBV－DNA比HBV－M更能及时准确反映乙型肝炎病毒感染的病程情况。     

乙肝病毒血清复制指标相互关系研究

目的 探讨乙肝病毒血清中HBcAg、HBeAg、HBV.DNA与乙肝病毒复制的关系及临床意义。方法 对342例临床诊断为乙肝的病人进行ELISA检测血清HBcAg、HBeAg及荧光定量PCR检测血清HBV.DNA。结果 342例乙肝病人中，HBcAg阳性检出率为42.1%，HBV.DNA阳性检出率为48.0%，HBeAg阳性检出率为38.6%，HBeAg阳性病人中，HBcAg阳性检出率为95.4%，HBV.DNA阳性检出率为98.5%，PCR.HBV.DNA阳性病人中，HBcAg阳性出检出率为87.2%。结论：荧光定量PCR检测HBV.DNA是灵敏度最高的判断乙肝病毒复制的检测方法。     

乙肝病毒血清标志物与HBV复制的关系及其临床意义

目的探讨乙型肝炎（下称乙肝）患者血清中HBcAg、HBeAg、HBV—DNA与乙肝病毒（HBV）复制的关系及其临床意义。方法对171例临床诊断为乙肝的病人采用ELISA法检测血清HBcAg、HBeAg及荧光定量PCR检测血清HBV—DNA。结果171例乙肝病人中，HBcAg阳性检出率为42．1％，HBV—DNA阳性检出率为48．0％，HBeAg阳性检出率为38．6％，HBeAg阳性病人中，HBcAg阳性检出率为95．4％，HBVDNA阳性检出率为98．5％。PCR检测HBV—DNA阳性病人中，HB—cAg阳性检出率为87．2％。结论检测血清HBcAg与检测血清HBV—DNA具有高度地一致性，HBeAg和HBcAg亦具有良好的相关性，荧光定量PCR检测HBV—DNA是灵敏度最高的判断HBV复制的检测方法。     

标本不同状态对荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的影响

目的研究分析不同状态的标本对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响。方法采用实时荧光定量PCR方法分别检测不同程度模拟溶血(高溶血组、中溶血组、低溶血组)和模拟脂血(高脂组、中脂组和低脂组)标本的HBV DNA浓度。选择HBV DNA阳性患者,每人分别抽取EDTA-K_2和肝素抗凝血各1份,立即分离血浆作HBV DNA定量检测。对HBV DNA载量进行配对t检验,并进行统计分析。结果不同溶血程度对HBV DNA载量没有影响,差异无统计学意义(P0.05),但当血红蛋白浓度达到113 g/L时,HBV DNA载量下降明显;高脂组、中脂组和低脂组HBV DNA载量差异无统计学意义(P0.05),但甘油三酯浓度为6.21 mmol/L时,HBV DNA结果明显偏低; EDTA-K_2抗凝血浆组与肝素抗凝血浆组的检测结果差异有统计学意义(P0.05)。结论血红蛋白浓度低于113 g/L的溶血标本、甘油三酯浓度低于6.21 mmol/L的脂血标本对HBV DNA检测结果无明显影响。EDTA-K_2抗凝血适用于HBV DNA检测,而肝素钠抗凝血则不合适。     

低反应性乙型肝炎表面抗原患者血清核酸定量及基因型的相关性分析

目的分析温州地区HBV基因型的分布特征,研究HBsAg低反应性患者不同基因型之间HBeAg表达和HBV DNA载量之间的关系。方法选取临床HBsAg定量1 000 COI的患者标本,采用电化学发光法定量检测HBsAg、HBeAg,PCR-荧光探针法定量检测HBV-DNA以及HBV基因分型。结果共146例患者标本,有51例HBV DNA定量达到10~3 IU/ml的标本全部分型成功,其中B型13例、C型38例。不同基因型组在HBeAg定量和HBV DNA定量的比较,B基因组HBeAg定量(Z=16.96)C基因型组(Z=29.09),P0.05;B基因组HBV DNA定量(Z=13.96)C基因型组(Z=30.12),P0.05。B基因型组HBeAg与HBV DNA log值呈正相关(r=0.740,P0.05),C基因型组HBeAg与HBV DNA log值无相关性(r=0.184,P0.05)。结论温州地区HBV基因型以C型为主,B型次之。B基因型组血清HBeAg与HBV DNA值呈一定正相关关系,深入研究HBsAg低反应性患者的HBV基因型与HBeAg表达和HBV DNA载量之间的关系对临床诊断、治疗及预后有一定临床意义。     

荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR法与酶联免疫吸附(ELISA)法在乙型肝炎病毒(HBV)检测中的应用,以及不同HBV感染者血清学标志物和HBV DNA定量之间的关系。方法采用荧光定量PCR法和ELISA法对100份献血者血浆标本的HBV DNA和血清学标志物进行检测,并比较分析检测结果。结果乙型肝炎标志物呈阳性的各组中均有不同程度的病毒DNA复制。大三阳(HBs Ag、HBeAg、HBcAb三项阳性)的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为96.0%和3.12×10~8,小三阳(HBsAg、HBeAb和HBcAb三项阳性)的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为86.7%和5.88×10~5,HB-s Ab和HBeAg二项阳性的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为50.0%和6.01×10~4,HBsAb、HBeAb和HBcAb三项阳性的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为45.5%和2.30×10~4,其他血清标志物阳性组合的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值均较低。以大三阳的阳性率和HBV DNA含量最高,与其他组比较,差异具有统计学意义(P0.01)。结论荧光定量PCR法检测HBV DNA具有灵敏度高、结果可靠的优点,可真实反应HBV感染和复制状态,可为乙型肝炎的早期诊断、传染性判断、治疗监测及病情转归提供客观依据。     

慢性乙型肝炎患者血清表面抗原与抗体同时阳性结果分析

目的:探讨乙型肝炎患者HBsAg和抗HBs共存模式及与HBV DNA的关系。方法:采用增强化学发光法检测血清乙肝标志物,并采用荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果:5717例慢性乙肝患者检测出HBsAg和抗HBs双阳性248例,占4.34%,其中多数与HBV DNA同时出现。结论:HBsAg和抗HBs同时阳性并不少见,慢性乙肝患者出现抗HBs,不完全代表病毒复制终止,需结合HBV DNA定量综合分析。     

国产磁珠核酸自动提取系统对HBV-DNA检测前处理的研究

目的:比较国产磁珠法核酸自动提取系统和传统的沉淀离心提取法提取血清HBV DNA的效果,探讨其应用潜力。方法:以两种方法平行提取50份血清HBV DNA,荧光定量PCR检测其提取核酸的拷贝数及CT值,进行方法对比试验;配制成不同浓度的HBV应用血清,用国产自动提取系统提取HBV DNA,评价方法的灵敏度、重复性及线性范围;向已知浓度的HBV阳性血清中定量加入溶血及脂血的阴性血清,再同样提取HBV DNA,观察方法的抗干扰特性。结果:两种方法平行提取血清HBV DNA,方法对比试验显示无显著差别;国产自动提取系统的重复性良好,定量检测的灵敏度及线性范围与现行方法一致;抗干扰能力强,溶血及脂血等常见干扰物对HBV DNA提取无干扰。结论:国产磁珠法核酸自动提取系统对血清HBV DNA的提取效果良好,操作简单,自动化程度高,重复性好,适宜用于临床HBV DNA检测前处理的核酸提取。     

HBV—DNA定量与HBV血清学标志物的相关性探讨

目的探讨HBV—DNA定量与HBV血清学标志物（HBV—M）的相关性。方法采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测449例乙肝感染者血清的HBV—DNA含量,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其血清学标志物进行检测。结果在不同HBV—M模式中,HBV—DNA与preS1总检出率无显著差异。在模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）和HBcAb（＋）中血清HB—DNA含量明显高于其他模式。在278例HBV—DNA阳性的标本中,HBV—DNA与preS1检出率无显著差异（P〉0．05）,HBV—DNA与HBeAg检出率有显著差异（P〈0．01）,同时preS1阳性组HBV～DNA定量值显著高于preS1阴性组。结论HBV—DNA或preS1与HBV复制密切相关,preS1较HBeAg更能敏感反映HBV在体内的复制状况,联合检测HBV—DNA与HBV血清学标志物,在乙型肝炎的诊断治疗中更有重要的临床指导价值。     

慢性乙肝HBV DNA定量与e系统及ALT检测结果

乙型肝炎病毒 (HBV)感染的诊断及疗效主要依据血清学标志物和HBV DNA等的检测 ,其中HBV DNA是HBV感染、复制和传染性强弱的直接指标[1 ] 。我们用荧光定量PCR法检测 2 13例慢性乙肝患者血清HBV DNA含量 ,同时用ELISA法检测HBV标志物及ALT水平 ,分析HBV -DNA含量与HBV血清学标志物及肝功能的关系。对象与方法1　对象　慢性乙肝病人血清标本 199例 ,根据HBeAg与抗HBe分组 ,HBeAg (+)、抗HBe (- ) 94例为A组 ,HBeAg (- )、抗HBe (+) 10 5例为B组。2　方法　 (1)HBVDNA的检测 :荧光定量PCR法检测HBV -DNA ,试剂…     

常规清洗消毒对胃镜HBV污染的清除效果

目的了解常规消毒方法对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性患者使用过的胃镜乙型肝炎病毒（HBV）污染的清除情况。方法检测2014年12月1-31日于某院行胃镜检查的HBsAg阳性患者使用后的胃镜,根据检查时患者有无黏膜损伤分为黏膜损伤组和黏膜完整组,分别于初洗前、初洗后、消毒后进行3次采样,进行HBsAg、HBV DNA定量检测。结果黏膜损伤组胃镜初洗前HBsAg检测阳性率为93.33%（28/30）、HBV DNA定量检测阳性率为53.33%（16/30）,黏膜完整组初洗前HBsAg 定量检测阳性率为80.00%（24/30）、HBV DNA定量检测阳性率为20.00%（6/30）;初洗前两组HBV DNA阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）;初洗后仅黏膜损伤组HBsAg阳性2例（6.67%）,余均为阴性;消毒后两组HBsAg与HBV DNA检测结果均为阴性。结论HBsAg阳性患者使用后的胃镜可以通过规范的常规清洗和消毒达到消毒效果。     

无症状HBsAg携带者血清HBV DNA定量检测的评估

目的　探讨一种新的高灵敏度血清 HBV DNA水平检测方法以及病毒 DNA检测用于献血员筛选的可行性。方法　采用 Am pli Sensor定量荧光 PCR技术定量检测经 EL ISA法筛选的 32 1名健康志愿者和37名 HBs Ag携带者血清 HBV DNA水平。结果　 32 1名志愿者中 2名 HBV DNA阳性 (0 .6 % ) ;37例 HBs Ag携带者 DNA检出率 1 0 0 % ,但 DNA含量相差较大 (7.98± 5 .37)。结论　 Ampli Sensor定量荧光 PCR技术灵敏度可达对数值 1拷贝 /毫升 ,该法用于献血员病毒 DNA检测有一定意义 ,但更适合用于临床健康检查 ;同时发现 HBV在无症状 HBs Ag携带者体内病毒复制差异较大 ,可能与不同个体的免疫状况有关。     

舟山海岛中学生HBV基因型分布调查

[目的]了解我市携带HBsAg无症状学生的HBV基因型分布,为乙肝防治提供新的理论依据。[方法]采用ELISA检测HBsAg和HBeAg,实时荧光定量PCR检测HBV DNA和HBV基因型。[结果]HBeAg阳性血清的基因型检出率为100%(35/35),HBeAg阴性检出率17.1%(6/35),HBV DNA定量检测拷贝数<103/ml的血清无法检出HBV基因型。HBV基因型分布:C型占78.0%(32/41)、B型占17.1%(7/41)和B/C混合型占4.9%(2/41)。[结论]舟山市携带HBsAg无症状学生HBV基因型分布以C型为主,还有B型和B/C混合型,未检出其他基因型。HBV DNA定量拷贝数<103/ml的血清不能用于HBV基因型检测。