微管相关蛋白-2在AD模型大鼠海马组织中的表达及其意义

目的观察阿尔茨海默病（AD）大鼠海马组织中微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达。方法采用 β- 淀粉样肽（Aβ）大鼠侧脑室注射制作AD动物模型。用免疫荧光染色和Westernblot法检测大鼠海马组织MAP-2的表达。结果Aβ脑室内灌注造成Aβ沉积的AD模型在行为学和病理改变上一定程度地模拟了AD，AD大鼠海马区MAP-2蛋白表达与正常组大鼠相比显著下降，MAP-2蛋白荧光检测发现AD大鼠海马区MAP-2阳性神经元数量明显减少。结论在AD大鼠海马组织中MAP-2表达下降。     

缺氧诱导因子-1α在老年性痴呆模型鼠海马中的表达

目的 观察老年性痴呆(AD)大鼠行为学、海马神经细胞凋亡率及缺氧诱导因子(HIF)-1α表达水平的变化.方法 侧脑室注射Aβ25～35构建AD大鼠模型,Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习记忆能力,流式细胞术检测海马神经细胞凋亡率, Western印迹技术检测大鼠海马HIF-1α蛋白的表达.结果 Morris水迷宫实验结果显示AD组大鼠平均逃避潜伏期显著延长(P<0.05),流式细胞分析结果显示,AD组海马神经细胞凋亡百分率较正常对照组显著升高(P<0.05),Western印迹检测结果显示,AD组海马神经细胞HIF-1α蛋白表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05).结论 侧脑室注射Aβ25～35成功构建AD大鼠模型并上调海马神经细胞HIF-1α水平表达.     

老年性痴呆模型大鼠海马区Bcl-2、Bax的表达及七福饮的干预作用

目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的老年性痴呆(AD)模型大鼠Bcl-2、Bax的表达及七福饮对其的干预作用.方法 采用海马立体定向注射凝聚态Aβ1-42制备AD大鼠实验动物模型,药物干预4 w后应用实时定量PCR法检测Bcl-2 mRNA及Bax mRNA的表达.采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区Bcl-2、Bax蛋白阳性目标积分光密度.结果 与假手术对照组比较,模型组Bax mRNA和蛋白表达水平显著升高,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低.与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、七福饮各剂量组Bax mRNA 和蛋白表达显著降低,而七福饮各剂量组Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05).结论 大脑海马注射Aβ1-42后大鼠海马组织Bax 表达明显增高,Bcl-2表达明显降低,七福饮可抑制海马组织Bax表达,促进Bcl-2表达,为七福饮抗AD的作用机制之一.     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠海马区糖原合酶激酶-3β和磷酸化-tau蛋白的影响

目的观察山茱萸多糖(CFPs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区糖原合酶激酶(GSK)-3β和磷酸化tau(p-tau)蛋白的影响,探讨CFPs对AD大鼠神经元的保护机制。方法将Wistar大鼠100只随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、CFPs组。采用D-半乳糖联合Aβ1~40制备AD模型,采用免疫组化(SABC)法检测海马CA1区GSK-3β和p-tau蛋白表达量,Western印迹法检测海马GSK-3β和p-tau蛋白表达量。结果与模型组比较,CFPs和多奈哌齐可显著降低AD大鼠海马区GSK-3β和p-tau蛋白表达量(P<0.05),CFPs组和多奈哌齐组GSK-3β和ptau蛋白表达量无显著差异(P>0.05)。结论 CFPs通过抑制大鼠海马区GSK-3β蛋白表达从而降低tau蛋白过度磷酸化,实现其对AD大鼠神经元的保护作用。     

原花青素对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织的预防保护作用

目的 探讨葡萄籽原花青素(GSP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑组织的预防保护作用和其机制.方法 Wistar大鼠60只随机分为4组:空白对照组、AD模型组、GSP大剂量(40 mg/kg)组、GSP小剂量(20 mg/kg)组,每组15只,大鼠海马区注射凝聚态Aβ1～40制作AD模型成功后,先观察大鼠的认知功能,然后检测海马区脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、ATPase活性,免疫组织化学染色检测海马区脑皮质神经细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达,Hoechst33258染色观察海马区脑皮质神经细胞凋亡情况.结果 原花青素能明显改善AD大鼠的认知功能,使大鼠脑组织MDA含量明显降低,SOD、ATPase活性明显升高,Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白表达显著降低.结论 GSP对AD模型大鼠的认知功能有一定的改善作用；GSP可通过清除自由基和抗脂质过氧化作用来提高AD模型大鼠脑组织的抗氧化能力；GSP对AD模型大鼠神经细胞凋亡有明显的抑制作用.     

川芎嗪对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力和细胞周期蛋白E、P21表达的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆和细胞周期蛋白(Cyclin)E、P21表达的影响及作用机制。方法大鼠海马区注入β淀粉样蛋白(Aβ)_(1~42)制作AD模型。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;免疫组化法检测海马区Cyclin E和P21蛋白的表达。结果低、高剂量TMP组均能改善AD大鼠的学习记忆能力(P0.01,P0.05),下调大鼠海马Cyclin E蛋白表达(P0.05),上调P21蛋白表达(P0.05)。低、高剂量TMP组相比无明显差异。结论 TMP能改善AD大鼠学习记忆功能,下调Cyclin E蛋白和上调P21蛋白表达,减轻神经细胞凋亡。     

中药提取物对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的干预作用

目的 观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)大鼠海马双侧注射后大脑组织Caspase-3表达和海马神经细胞超微结构的变化及加减地黄饮子的干预作用.方法 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导阿尔茨海默病(AD)动物模型.采用免疫印迹方法检测大脑组织Caspase-3的表达,通过透射电子显微镜观察海马组织神经细胞超微结构的变化.结果 模型组大鼠大脑组织Caspase-3蛋白表达相对值(2.647±0.603 6)较假手术组(0.901±0.102)明显升高(P<0.05),而加减地黄饮子(1.331±0.105 3)可下调Caspase-3的表达(P<0.05).Aβ1-40可致模型组大鼠海马神经元的胞体质膜下出现大量的脂褐素.游离核蛋白体减少,加减地黄饮子对损伤有不同程度的恢复.结论 加减地黄饮子通过上调Caspase-3蛋白的表达而发挥保护AB对大鼠脑神经细胞的损伤.     

通络救脑口服液对AD大鼠海马CA3区超微结构及C-反应蛋白表达的影响

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白_(1～40)(Aβ_(1～40))诱导的老年性痴呆(AD)模型大鼠海马CA3区超微结构及C反应蛋白(CRP)表达的影响.方法 140只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组及3个实验组(12、24、48 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量组),共7组.采用大脑海马立体定向注射凝聚态Aβ_(1～40)诱导AD动物模型,药物干预4 w后,透射电镜观海马组织超微结构的变化,免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区CRP阳性目标积分光密度.结果 电镜观察结果 显示:模型组大鼠海马变性,通络救脑口服液能改善大鼠海马神经元病理改变.与假手术组比较,模型组大鼠海马区CRP蛋白表达增高(P＜0.05);与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组CRP蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 通络救脑口服液对AD模型大鼠脑内海马组织超微病理改变具有改善作用,并且能明显降低大脑海马组织CRP蛋白的表达,具有抗炎作用.     

脑缺血对阿尔茨海默病大鼠海马内病理特征及炎性反应的影响

目的观察脑缺血后阿尔茨海默病(AD)大鼠海马内的病理特征、炎性细胞及细胞因子表达的变化,探讨脑缺血在AD病程进展中的作用及机制。方法经Morris水迷宫筛选SD大鼠30只.随机分为AD组、AD+脑缺血组、对照组,每组10只。大鼠海马注射凝聚态淀粉β样蛋白_(1-10)成功建立AD模型后.海马注射内皮素-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD大鼠海马内淀粉β样蛋白(Aβ)的沉积及神经元丢失的变化,采用免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR检测脑缺血后AD大鼠海马内星形胶质细胞的数量和白细胞介素1β(IL-1β)、TNF-α表达的变化。结果与对照组比较,AD组和AD+脑缺血组大鼠海马星形胶质细胞数量、IL-1β和TNF-α表达均显著增多(P<0.01)。结论脑缺血促进了AD大鼠海马内Aβ的沉积和神经元的丢失,提示脑缺血可促进AD的病程进展,星形胶质细胞、IL-1β和TNF-α参与了这一过程。     

姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠海马胶质纤维酸蛋白表达的影响

目的通过观察姜黄素对Aβ1～40诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力及海马区星形胶质细胞胶质纤维酸蛋白(GFAP)表达的影响,探讨姜黄素的作用机制。方法选择健康SD大鼠48只,分为空白对照组、AD对照组、姜黄素给药组,每组16只。Aβ1～40诱导大鼠认知障碍模型,采用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。采用免疫组织化学方法检测GFAP蛋白表达,RT-PCR检测GFAP mRNA表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05);与空白对照组相比,AD对照组大鼠脑组织海马区可见星形胶质细胞GFAP表达明显增多(P<0.05),姜黄素给药组大鼠脑组织海马区GFAP mRNA及免疫阳性细胞表达较AD对照组下降(P<0.05)。结论姜黄素能够改善Aβ1～40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与降低GFAP的表达和抑制星形胶质细胞活性有关。     

清心开窍方皂苷对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的 探讨清心开窍方皂苷对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响及其机制.方法 动物实验采用对照观察法.雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、安理申组、清心开窍方组和皂苷组.采用双侧杏仁核注射Aβ25 - 35诱导AD大鼠模型,观察大鼠水迷宫空间记忆能力,并通过免疫组化方法研究海马区神经胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、Aβ、淀粉样前体蛋白(APP)及白介素(IL) -1β的表达.结果 清心开窍方组和皂苷组能明显改善AD大鼠学习记忆能力,大鼠海马区GFAP、Aβ及APP表达水平降低,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).结论 清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,可能是通过降低海马GFAP、Aβ、βAPP、IL-1β表达作用.     

大豆异黄酮对AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的影响

目的通过观察大豆异黄酮对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马钙调蛋白(CaM)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMPK)信号转导通路相关蛋白的影响,探讨大豆异黄酮治疗AD作用机制。方法采用Aβ双侧海马注射建立AD大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,ELISA法测定大鼠海马组织CaM、CaMPK含量,免疫组化SP法观察大鼠海马组织Ras蛋白的表达。结果大豆异黄酮可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织CaM、CaMPK的含量(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织Ras蛋白的表达(P<0.01)。结论大豆异黄酮可能通过降低AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的表达起到治疗AD的作用。     

NMDAR亚单位1在AD样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR,NR)亚单位1在阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 以Aβ1-40和AlCl3双干预的方法建立AD样大鼠模型.应用免疫组织化学法检测NR1在AD样大鼠海马的表达,TUNEL法检测AD样大鼠海马细胞凋亡情况,并观察二者的关系.结果 NR1在AD样大鼠海马各区的表达均升高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),区间比较未见显著性差异.凋亡阳性细胞在AD样大鼠海马各区均显著增多尤以CA1区为甚、其次为齿状回,与对照组比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NR1在AD样大鼠海马表现为病理性的高表达且这种病理性高表达和AD样大鼠海马的细胞凋亡以及选择性易损伤现象之间可能存在着某种特定的关系.     

侧脑室注射β-淀粉样蛋白制作阿尔茨海默病样大鼠模型

目的 研究侧脑室注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)对大鼠学习记忆功能及海马区病理改变的影响,探讨侧脑室注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样动物模型的可行性.方法 将20只雄性SD大鼠随机分为2组:空白对照组和AD模型组,每组10只.采用侧脑室立体定向注射β淀粉样蛋白(amyloid-beta protein, Aβ)25-35的方法,建立AD的动物模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过HE染色、刚果红染色观察大鼠海马区的病理改变.结果 大鼠经侧脑室立体定向注射10 μmol/L Aβ25-35 5 μl后,(1)AD模型组大鼠Morris水迷宫检测逃避潜伏期第1～3天分别为(42.19±12.29)s、(31.28±20.59)s、(23.91±8.05)s较对照组[分别为(27.35±14.96)s、(13.17±6.79)s、(13.01±6.83)s]明显延长(P＜0.05或P＜0.01);(2)HE染色见对照组大鼠海马神经元排列规则、紧密,形态完整,AD模型组海马区神经元明显疏松,排列紊乱,出现胶质细胞增生;(3)刚果红染色各组未见明显淀粉样斑块沉积,AD模型组于血管壁上见淀粉样物质沉积,这在国内损伤型AD动物模型中少见报道.结论 应用侧脑室内微量注射Aβ的方法建立AD动物模型,在行为学、病理学上均符合AD表现,可以作为一种简易而又经济的AD动物模型.     

大豆异黄酮对AD大鼠模型海马caspase-3表达的抑制作用

目的 观察大豆异黄酮对Aβ25-35诱导的Alzheimer病（AD）大鼠模型海马组织caspase-3蛋白表达的影响。方法 Aβ25-35双侧海马注射制备AD大鼠模型，分组后给予不同剂量大豆异黄酮，免疫组化法观察大豆异黄酮对大鼠海马组织caspase-3蛋白表达的影响。结果 与对照组相比，模型组caspase-3蛋白表达阳性率明显升高，大豆异黄酮治疗组caspase-3蛋白表达明显降低。结论 大豆异黄酮抑制caspase-3蛋白的表达和减少海马神经元凋亡可能是其改善大鼠的学习记忆功能的作用机制之一。     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响

目的 研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响,探讨其对AD大鼠的保护作用机制.方法 清洁级Wistar大鼠120只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌嗪对照组、山茱萸多糖水提液组、山茱萸水煎剂组,每组20只.采用海马注射Aβ-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)制作AD大鼠模型,免疫组化(SABC)法和免疫蛋白印迹法检测GSK-3β蛋白和GSK-3β(Ser9)蛋白的表达水平.结果 与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马组织GSK-3β蛋白表达增加(P＜0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,多奈哌嗪对照组,山茱萸多糖水提液组,山茱萸水煎剂组大鼠的GSK-3β蛋白表达显著减少(P＜0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达增加(P＜0.05).结论 山茱萸多糖通过抑制GSK-3β蛋白过度激活,促进GSK-3β(Ser9)蛋白表达途径防治AD的发生发展.     

IGF-1对Alzheimer大鼠认知功能和海马Aβ1-40表达的影响

目的建立凝聚态淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导的模拟老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)动物模型,观察Aβ1-40对Wister大鼠行为学及病理的改变,以及皮下注射胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对拟AD模型大鼠学习记忆能力和海马CA1区淀粉样蛋白(Aβ1-40)表达的影响。方法设立正常组、拟AD模型组、盐水治疗对照组及IGF-1治疗组共4组。采用凝聚态Aβ1-40进行海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型,术后第二天治疗组分别皮下注射生理盐水(1ml/kg)和IGF-1(50μg/kg)。造模2周后4组分别进行水迷宫行为学试验检测大鼠学习记忆能力,用药3周后行病理学检查(包括HE、刚果红)和免疫组化方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果 IGF-1组与拟AD模型组比较,定位航行试验第3天开始平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),在空间探索试验中,跨越原平台位置的次数明显增多(P<0.01)。拟AD模型组和盐水治疗组海马点附近可见颗粒细胞带明显受损,弥漫性胶质细胞浸润,局部神经元大量缺失,细胞排列疏松紊乱,IGF-1组海马注射区可见颗粒细胞带轻度受损,神经元排列尚规则,与模型组之间有统计学意义(P<0.01)。IGF-1组大鼠海马CA1区Aβ1-40的表达,与拟AD模型组比较明显减少(P<0.01),生理盐水对治疗没有影响。结论凝聚态Aβ1-40海马注射可以模拟AD的学习记忆障碍和神经元损伤等行为学和病理学特征。IGF-1减少海马CA1区Aβ1-40的表达,减轻凝聚态Aβ1-40对大鼠海马的病理损害,有显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力和病理改变的作用。     

Tau蛋白调控Fyn信号通路在阿尔茨海默病大鼠发病机制中的作用

目的 探讨Tau蛋白调控Fyn信号通路在阿尔茨海默病(AD)大鼠发病中的作用机制.方法 雄性SD大鼠60只随机分为正常组,模型组及观察组.采用β淀粉样蛋白毒性片段(Aβ25～35)海马注射制备AD大鼠模型.10 μmol/L SB216763(Tau蛋白抑制剂)注射至观察组大鼠脑组织.采用SABC法对大鼠脑组织中Tau蛋白进行免疫组化检测,Western印迹检测Fyn和Fak的表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠脑组织Tau蛋白含量及Fyn和Fak的表达显著增加(P＜0.05);与模型组相比,观察组Tau蛋白含量及Fyn和Fak的表达显著增加(P＜0.05).结论 Tau蛋白可能通过调控Fyn信号通路参与了AD的发病过程,为AD的治疗提供了新的研究方向.     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能及海马病理的影响

目的 观察脑缺血对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能及海马病理的影响,探讨脑缺血在AD病程进展中的作用.方法 大鼠海马注射凝聚态Aβ1-40成功建立AD模型后,再于海马注射内皮素-1建立脑缺血条件,检测脑缺血后AD大鼠认知功能、海马内Aβ的沉积、海马神经元的丢失及异常磷酸化tau表达的变化.结果 脑缺血后AD大鼠认知功能明显下降,海马内Aβ的沉积增加,海马神经元丢失增加,异常磷酸化tau的表达增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 脑缺血促进了海马内Aβ的沉积、神经元的丢失和异常磷酸化tau的表达,最终导致了AD大鼠认知功能障碍的加重,提示脑缺血可加剧AD的病程进展,防治脑缺血可能减缓AD的进展.     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及海马糖原合成酶激酶-3β表达的影响

目的研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆及海马糖原合成酶激酶(GSK)-3β表达的影响。方法将100只Wistar大鼠随机分成4组,青年组、模型组、多奈哌齐组、山茱萸多糖组。采用D-半乳糖联合海马区β淀粉样蛋白(Aβ)_(1～40)注射建立AD模型。水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力,HE染色观察病理组织学变化,免疫组化(SABC法)检测海马CA2区GSK-3β蛋白表达量。结果与模型组比较,山茱萸多糖组平均逃避潜伏期明显缩短(P0.05),穿越原平台次数明显增加(P0.05)。山茱萸多糖组GSK-3β蛋白阳性染色较模型组明显减弱(P0.05)。结论山茱萸多糖对AD模型大鼠学习记忆能力有改善,可能与降低海马区GSK-3β蛋白表达量相关。