小鼠及人源化鼠抗人交联纤维蛋白单链抗体的表达与纯化

目的：表达并纯化小鼠及人源化鼠抗人交联纤维蛋白单链抗体,并初步分析比较两者的体外生物活性。方法;经ＤＮＡ重组的构建重组表达质粒,经ＩＰＴＧ诱导,在大肠杆菌中高表达两种单链抗体,用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体后经ＩＭＡＣ纯化表达产物,并用凝血酶切除Ｎ端融合的（Ｈｉｓ）６,纯化的表达产物经复性后ＥＬＩＳＡ检测其活性,结果：两种单链抗体在大肠杆菌中表达量占全菌蛋白的５０％以上,经变性,纯化后纯度可达９７％     

乙型肝炎病人血清中PreS1／2抗原检测方法的建立及初步应用

目的：建立乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）ＰｒｅＳ抗原检测方法。方法：表达与纯化了ＨＢＶＰｒｅＳ１／２抗原，并用纯化蛋白免疫家兔，利用纯化抗血清包被ＥＬＩＳＡ板，吸附病人血清中包含ＰｒｅＳ１／２抗原的ＨＢＶ的病毒颗粒或病毒亚单位，特异吸附颗粒用抗ＨＢｓＡｇ的酶标单抗检测。结果：利用金属螯合柱层析的方法高度纯化了ＰｒｅＳ重组抗原，用复性的重组抗原免疫家兔３次，血清抗体滴度可达１     

表达大肠杆菌 LT-B/pro-ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门菌株的构建

目的：构建表达 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的产肠毒素大肠杆菌口服活菌疫苗候选株。方法：编码 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白的基因插入ｐ Ｙ Ａ２４８ 载体中,构建了重组质粒 ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６。该重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌 Ｓ Ｒ１１,Δ Ｃｙａ, Δ Ｃｒｐ, Δ Ａｓｄ 菌株 Ｘ４０７２。结果：此无抗药性的杂合菌株 Ｘ４０７２（ｐ Ｘ Ｚ Ｌ６６） 表达的 Ｌ Ｔ Ｂ／ Ｓ Ｔ 融合蛋白具有耐热及不耐热肠毒素的免疫原性而没有可检出的生物毒性。结论：为研究预防产肠毒素大肠杆菌腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。     

血小板源生长因子受体结合域与乙肝核心抗原融合蛋白的分离纯化

血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）受体结合域与乙肝核心抗原融合蛋白经ｐＥＴ３ａ、ｐＥＴ１５表达，通过不同的分离方法进行分离纯化，对比两种分离系统，选择总回收率高的羟基磷灰石、ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ两步分离方法，获得活性比为１．１×１０４Ｕ／ｍｇ、纯度较高的融合蛋白，为进一步的动物实验奠定基础     

用三步法纯化重组人促红细胞生成素

用生物反应器培养中国仓鼠卵巢细胞促红细胞生成素（ＣＨＯＥＰＯ）Ｃ２细胞株，培养上清液中重组人促红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）表达水平达２×１０６～３×１０６Ｕ／Ｌ。培养上清液经过三步纯化：第一步为反相色谱，可将样品体积浓缩约９６．７％，其收集液经充分透析后进行第二步的ＤＥＡＥ离子交换色谱，最后进行分子筛色谱，总回收率为３０％以上。经纯化的ｒＨｕＥＰＯ比活性为１．５×１０８Ｕ／ｇ蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ为一条带，扫描测试纯度达９８％以上。     

HER-2/neu配体结合区蛋白的表达、纯化及复性研究

目的：将HER-2/neu配体结合区(RLD)基因重组，并在大肠杆菌中表达，对以包涵体形式表达的融合蛋白进行变性和复性的研究。方法：采用PCR技术将皿R-2／neuRLD的两段基因分别扩增，并利用基因片段末端的共同酶切位点将两段基因相连接，连接产物插入原核表达载体，在大肠杆菌中实现融合蛋白的表达。表达产物经SDS-PAGE和Westem印迹检测后，进行蛋白质的变性、纯化和复性等处理。结果与结论：在大肠杆菌中实现了融合蛋白的高效表达，表达产物可被特异性抗体识别。经SDS-PAGE分析，表达产物以包涵体形式存在，通过变性、纯化和复性等处理，获得了含两个RID的融合蛋白，从而为HER-2／neu肿瘤疫苗的研究打下了基础。     

人睫状神经营养因子的原核表达及其初步纯化

目的：优化条件实现人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌中的高效表达。方法：ＣＮＴＦ克隆进ｐＢＶ２２０后,表达,凝胶过滤纯化,１０日龄鸡背根神经节（Ｅ１０ＤＲＧｓ）测定其生物活性。结果：ＣＮＴＦ在ＨＢ１０１中高效表达,并具有生物活性。结论：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察到相对分子质量约为２４×１０３的预期表达产物,优化表达条件后发现其在ＨＢ１０１中的表达状况最好,用凝胶过滤纯化的重组蛋白能促进Ｅ１０ＤＲＧｓ的生长     

抗人肝癌单抗HAb18F(ab’)_2片段的制备及纯化

目的：制备抗人肝癌单抗（ ＭｃＡｂ） ＨＡｂ１８ Ｆ（ａｂ’）２ 片段。方法 ：用二硫苏糖醇（ＤＴＴ） 激活木瓜蛋白酶,ｐＨ５ ．５ 环境下消化ＨＡｂ１８ ＭｃＡｂ（ＩｇＧ１） ,然后用快速蛋白液相色谱（ＦＰＬＣ） ＤＥＡＥ－ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ － ＦＦ 柱（２ｃｍ ×１８ｃｍ）纯化。对所获Ｆ（ａｂ’）２ 段的纯度、免疫活性、热原质、细菌、产率等方面进行质量检测。结果：在酶∶抗体为１∶２０ ,消化ＨＡｂ１８ ２ ｈ ,９５ ％ 以上ＩｇＧ 裂解为Ｆ（ａｂ’）２ 段,纯化后Ｆ（ａｂ’）２ 段的纯度为＞ ９６ ．１ ％ ,纯化周期６０ ｍｉｎ , 一次制备量可达５００ ｍｇ ,产率为５３ ％ ,免疫活性１∶８０００ ,细菌、热原检测结果为阴性。结论：该法是一种快速、大量制备高产率、高质量ＭｃＡｂ ＩｇＧ１ 亚类Ｆ（ａｂ’）２ 段的有效方法。     

人红细胞膜血型糖蛋白A的纯化及鉴定

目的：获得纯度高、抗原特异性好的Ｍ和Ｎ型血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）。方法：将人红细胞膜血影，用ＳＤＳ溶解后用氯仿－甲醇提取，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析。结果：获得了纯度高而均一的Ｍ，Ｎ型ＧＰＡ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＧＰＡ二聚体和单体相对的分子质量分别为７５×１０３，３８×１０３。结论：酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析均表明，Ｍ和Ｎ型ＧＰＡ有很好的抗原性，但Ｎ－ＧＰＡ蛋白容易因为构象改变而丧失抗原性     

不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其？…

目的：为满足丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＥＩＡ检测的需要，构建含优势抗原表位的ＨＣＶ嵌合重组抗原。方法：利用基因工程重组技术，获得了不同的ＨＣＶ嵌合抗原ＮＣ１和ＮＣ２。含嵌合基因的表达质粒在大肠杆菌中表达了目的抗原，其中包括结构区核壳蛋白Ｃ２２和不同长度的非结构区蛋白ＮＳ３；表达产物经离子交换和盐析纯化。结果：用针对Ｃ２２或ＮＳ３抗原表位特异 血清及系列血清进行了检测，表明ＮＣ１和ＮＣ２均同时具有Ｃ２２     

液体衰减翻转恢复序列在颅脑MRI中的应用

目的：探讨１．５ＴＭＲ颅脑液体衰减翻转恢复（ＦＬＡＩＲ）序列的合理扫描参数及其临床应用价值。材料和方法：首先对１８名健康志愿者行１．５ＴＭＲ的颅脑ＦＬＡＩＲ序列的参数选择试验，然后用筛选出的合理参数对２４例脑部疾病患者行ＦＬＡＩＲ序列与ＳＥ序列的对照扫描。结果：在１．５ＴＭＲ颅脑ＦＬＡＩＲ扫描中，当ＴＲ＝６０００ｍｓ时，ＴＩ为１７００－１８００ｍｓ接近脑脊液的无效值，ＴＥ以１６０ｍｓ为宜。ＦＬＡＩＲ序列与ＳＥ序列的对照扫描中，ＦＬＡＩＲ序列显示病变为７５／７６（９８．６８％），ＳＥ序列为６５／７６（８５．５３％），两者显示病变的敏感度有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：ＦＬＡＩＲ序列对靠近脑脊液的病变、脑组织水肿、室管膜下漏液、脑室和脑池内病变的检出较ＳＥ序列更敏感。     

1．06μm激光血管成形术后动脉平滑肌细胞中的癌基因表达

通过建立兔腹主动脉粥样硬化性狭窄模型进行１．０６μｍ激光血管成形术（ＬＡ），应用系列癌基因片段与地高辛－ｄＵＴＰ随机插入标记，进行血管组织的原位杂交。发现：（１）ＬＡ后血管壁可见ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ等癌基因表达；（２）癌基因表达多位于血管斑块中的ＳＭＣ；（３）ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达迅速而短暂，ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ表达较迟，持续时间较长。结论：激光损伤可诱导动脉ＳＭＣ中的某些癌基因表达。     

新型重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白复性及纯化

目的：对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化。方法：对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性，经离子交换层析。结果：工程菌HB101／pE01T的表达产物是以包涵体形式存在，菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后，再超声破碎效果最好；包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次，再用8mol／L尿素洗涤一次效果更优；最佳变性条件为在7mol／L盐酸胍中加入0．065mmol／L的DTT和0．2mol／L的盐酸精氨酸；最佳复性奈件为在10℃复性保持24h，蛋白浓度保持在30～80μg/ml，并需加入0．2mol／L盐酸精氨酸；利用谷胱甘肽的氧化还原法，当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在2：1时所获得的活性成分得率最高；利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95％的目的蛋白，所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞。结论：本研究获得重组IL-6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线。     

人β－干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达

采用苜蓿尺蠖核多角休病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体，将人β－干扰素（ＨｕＩＦＮ－β基因插入转移载体ｐＵＡｃ－５，构建成ｐＡｃ－ＩＦＮ－β载体。该质粒ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ经ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ共转染秋粘虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）传代细胞（Ｓｆ９细胞），利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带ＨｕＩＦＮ－β基因的主组病毒。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，可表达ｒＨｕＩＦＮ－β。在１．０×１０￣６细胞／ｍｌ感染上清中测定ｒＨｕＩＦＮ－β最高活性为３．０×１０￣６ＩＵ／ｍｌ，抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和ｒＨｕＩＦＮ－β的抗病毒活性。     

MRI与CT对颅颈移行区肿瘤的诊断价值评估：附16例分析

本文旨在评价ＭＲＩ与ＣＴ对颅颈移行区病变的诊断价值，共１６例分析，包括斜坡脊索瘤５例，小脑下蚓部肿瘤２１例，延髓肿瘤４例，上颈段脊髓肿瘤５例。患者均作ＭＲＩ平扫，采用ＳＥ系列，Ｔ１Ｗ（ＴＲ５００／ＴＥ３０ｍｓ）、Ｔ２Ｗ（ＴＲ１８００／ＴＥ９０ｍｓ）和质子密度像（ＴＲ１８００／ＴＥ３０ｍｓ），其中２例作了Ｇｄ－ＤＴＰＡ顺磁增强，所有病例均作了ＣＴ平扫，６例同时还作了增强ＣＴ扫描。通过本组病例分析：１     

不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其产物的分析

目的：为满足丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＥＩＡ检测的需要，构建含优势抗原表位的ＨＣＶ嵌合重组抗原。方法：利用基因工程重组技术，获得了不同的ＨＣＶ嵌合抗原ＮＣ１和ＮＣ２。含嵌合基因的表达质粒在大肠杆菌中表达了目的抗原，其中包括结构区核壳蛋白Ｃ２２和不同长度的非结构区蛋白ＮＳ３；表达产物经离子交换和盐析纯化。结果：用针对Ｃ２２或ＮＳ３抗原表位特异性血清及系列血清进行了检测，表明ＮＣ１和ＮＣ２均同时具有Ｃ２２和ＮＳ３抗原的免疫反应性。以嵌合抗原制备的抗ＨＣＶＥＩＡ试剂检测中国药品生物制品检定所的第三代Ｐａｎｅｌ血清时，其阳性、阴性通过率都符合要求。结论：构建的嵌合抗原有多个优势抗原表位，可用于ＨＣＶＥＩＡ检测     

多发骨髓瘤摄取~(99m)Tc- M IBI的不同形式

目的：评价多发骨髓瘤病人不同形式摄取９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ的发病率及其与临床状态和疾病分期的关系，并尝试进一步明确骨髓摄取９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ的意义。方法：选多发骨髓瘤病人 ３９ 例，其中缓解期 １０例，活动期 ２９ 例（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为 １３、１０、６ 例）。静脉注射 ５５５ Ｍ Ｂｑ ９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ后 １０ 分钟和 １、２、４小时分别行全身前、后位显像，每体位采集 ７ 分钟。９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ摄取形式分为正常摄取（ Ｎ）、弥漫性摄取（ Ｄ）、局部明显摄取（ Ｆ）和弥漫摄取与局部摄取并存（ Ｄ＋ Ｆ）四种。显像结果总评分为摄取范围评分（０～３）与强度评分（０～３）之和。同时做了血液及生化检查。结果：９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ摄取的不同形式所发生的例数分别为 Ｎ７、 Ｄ１８、 Ｆ２、 Ｄ＋ Ｆ１２；所有活动期病人均异常摄取９９ｍ　 Ｔｃ Ｍ Ｉ Ｂ Ｉ（总评分＞ ２，其中Ⅰ期 Ｄ 为 １２例、 Ｄ＋ Ｆ为 １ 例，Ⅱ期 Ｄ 为 ２ 例、 Ｄ＋ Ｆ为 ６ 例、 Ｆ为２ 例，Ⅲ期 Ｄ 为 １ 例、 Ｄ＋ Ｆ为 ５ 例，与缓解期摄取形式（总评分≤２， Ｎ 为 ７ 例、 Ｄ 为 ３ 例），差异显著（ Ｐ＜０．００１）。所有病人９９     

幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆及高效分泌表达

目的：从幽门螺杆菌（Ｈｐ）分离热休克蛋白Ａ基因，并实现在大肠杆菌中的融合分泌表达，方法：提取Ｈｐ染色体ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增ｈｓｐＡ基因。经克隆、测序后，构建融合分泌表达载体ｐＭＡＬ－ＨｓｐＡ，转化大肠杆菌，ＩＰＴＧ诱导表达。结果：分离得到了高度保守的３５４ｂｐ的ｈｓｐＡ基因片段，并在大肠杆菌中实现了该基因的融合分泌表达。在３７℃诱导表达３ｈ后，基融合分泌表达蛋白可占细菌周质总蛋白的６６．６％。     

γ－32P标记反义核苷酸对HBV基因表达的封闭效应

人工构建特异性互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增强子区的１５－聚反义硫代脱氧核苷酸（１５Ｓ－ａｓＯＮ）并用ｌ－３２Ｐ进行末端标记，以２μＬｍｏ１／Ｌ剂量作用于ＨＢＶ基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞），培养２４ｈ及４８ｈ后检测掺入２．２．１５细胞的１５－Ｓ－ａｓＯＮ分别为６９．４ｎｍｏ１／Ｌ和７５．８ｎｍｏ１／Ｌ；对ＨＢ３ｓＡｇ的抑制率分别为５０％和７０％；斑点杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，结果表明实验组与对照组无显著性差异，提示本实验所选用的反义核苷酸对ＨＢＶ基因的封闭环节可能发生在翻译水平。实验组与对照组的细胞形态及细胞计数结果表明：我们设计的反义核酸只特异性抑制ＨＢＶ基因表达，而对宿主细胞无明显毒害作用。     

胞壁佳治疗结核性胸膜炎并乳糜胸一例报告

患者男性，４１岁，于１９９７年３月入院，主诉乏力、盗汗低热２月余，一个月来并胸闷、气短。入院体检：Ｔ３７．８℃，慢性消耗病容，双颊潮红，浅表淋巴结不大，双下胸部叩诊浊音，呼吸音消失。心音较钝，心率１００次／ｍｉｎ。白血球４．６×１０９／Ｌ，Ｌ：０．５８，ＥＳＲ１１５ｍｍ／第１ｈ，ＣＥＡ，ＣＡ５０，ＣＡ９９等癌标记物阴性，全套生化基本正常，Ａ／Ｇ为４６／２４（ｇ／Ｌ）。胸片示双侧胸腔积液，Ｂ超示左右腋中线至腋后线胸腔积液平段分别为９．４ｃｍ及８．５ｃｍ，胸膜厚０．７～０．８ｃｍ。ＥＣＧ除低电压外无…