低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

缺氧诱导因子-1α和Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达及其生物学行为

目的:探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α和Ki-67在子宫内膜癌生长转移中的作用.方法:免疫组化法检测子宫内膜癌组织中HIF-1α和Ki-67的表达,分析HIF-1α和Ki-67与临床病理特征之间的关系.结果:子宫内膜癌组织中HIF-1α和Ki-67阳性表达率显著高于正常子宫内膜组织.HIF-1α和Ki-67表达均与有无淋巴结转移、病理分级及临床分期有关,与肿瘤的病理组织类型无关.HIF-1α与Ki-67表达呈正相关(rs=0.426,P<0.01).结论:HIF-1α和Ki-67过度表达可能与子宫内膜癌的生长转移有密切关系.     

缺氧对成牙骨质细胞增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响

目的：探讨不同时间缺氧微环境对成牙骨质样细胞OCCM-30增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响,了解缺氧在正畸导致的牙骨质吸收中所起的作用。方法利用三气培养箱构建细胞缺氧模型,以常氧条件培养为对照组,利用MTT法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA等相关基因的表达变化。结果缺氧可以抑制OCCM-30细胞的增殖,明显提高细胞的凋亡率,并能显著诱导HIF-1α和VEGF mRNA基因的表达,HIF-1αmRNA的表达水平在24 h达到顶峰后进入平台期;而VEGF mRNA的表达水平在36 h后开始逐步上调。结论缺氧微环境能抑制OCCM-30细胞增殖,促进调亡及缺氧相关基因的表达。     

缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞整合素连接激酶的表达及其与HIF-1α、VEGF的相关性

目的:探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞(hRPE)整合素连接激酶(integrim linked kinase,ILK)的表达,及其与缺氧诱导因1α(hypoxia induciable factor,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular cndothclial growth factor,VEGF)表达的相关性。方法:hRPE培养,COCL2(150"mol/L)建立化学缺氧细胞模型。免疫组化方法检测缺氧0、6、12、24、48、72hhRPE细胞ILK、HIF-1α、VEGF的表达。Western blot和RT-PCR方法检测以上缺氧时间细胞ILK、HIF-1α、VEGF的蛋白及其mRNA表达水平并进行图像分析。结果:ILK表达于正常培养的hRPE中,随着缺氧时间的延长,其表达增加,且与HIF-1α、VEGF的表达呈正相关性。结论:ILK可能作为低氧反应性因子与HIF-1α、VEGF共同参与hRPE的低氧病理过程。     

抑制缺氧诱导因子-1α表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞裸鼠体内成瘤性的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制多发性骨髓瘤(MM)细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)表达,探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响.方法 利用短发夹RNA(shRNA)表达载体pSilencer 2.1-U6 hygro构建RNAi载体,在RPMI8226细胞中抑制HIF-1α的表达.应用RT-PCR技术和Western blot方法 ,鉴定RNAi后HIF-1α的表达.ELISA法测定细胞上清中血管内皮生长因子(VEGF)表达的改变.流式细胞术检测RNAi前后细胞周期的改变.研究缺氧(PO2为1%)条件下,抑制HIF-1α的表达对其靶基因VEGF和葡萄糖转运蛋白(Glut-1)表达的影响.利用异种移植瘤模型观察HIF-1α干扰后对肿瘤生长的影响.结果 RNAi后,HIF-1α的表达在mRNA和蛋白水平均明显降低.常氧条件下,RNAi组(RPMI8226-i1和RPMI8226-i2)和未干扰组(RPMI8226-c和RPMI8226)细胞上清中VEGF浓度无明显差异;缺氧条件下四组细胞上清中VEGF浓度分别为(506.0±53.2)、(494.7±63.1)、(984.4±61.9)和(938.2±62.2)pg/ml.RPMI8226-i1和RPMI8226-i2组较RPMI8226-c和RPMI8226组明显降低(P＜0.05).G0/G1期累积受到抑制,S期细胞比例增加.缺氧条件下VEGF和Glut-1等靶基因的表达明显下调(P＜0.05).裸鼠皮下成瘤性实验表明,抑制HIF-1α的表达,能够明显抑制肿瘤的生长.结论 RNAi抑制RPMI8226细胞HIF-1α表达,可能通过抑制肿瘤的血管新生和糖代谢过程来发挥肿瘤抑制作用.     

HIF-1α与VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,分析其临床意义。方法免疫组织化学法检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织中HIF-1α、VEGF的表达,分析其与临床病理特征的相关性。结果癌组织中HIF-1α、VEGF阳性率为87.5%、85.0%,较癌旁组织明显升高(P0.05);可以认为HIF-1α、VEGF的表达与肺癌的组织来源、分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关(P0.05)。结论非小细胞肺癌HIF-1α、VEGF高表达可以认为与组织来源、分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关。     

HIF-1α、VEGF及MMP-9在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

[目的]探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达.[方法]采用免疫组化法检测91例NSCLC组织及相对应的癌旁正常组织中hIF-1α、VEGF及MMP-9的阳性表达,并分析其与NSCLC临床病理参数的关系.[结果]NSCLC中HIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);低分化NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于中高分化(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期的NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),有淋巴结转移的NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率高于无淋巴结转移的(P<0.05);而NSCLC中HIF-1α、VEGF及MMP-9阳性率与年龄、性别、肿瘤直径及病理类型无关(P>0.05);NSCLC中hIF-1α、VEGF及MMP-9阳性表达呈两两正相关(P<0.05).[结论]HIF-1α、VEGF及MMP-9在NSCLC组织中高表达,且与病情的发生发展相关,三者联合检测可能为NSCLC的预后评估及靶向治疗提供依据.     

缺氧诱导因子-1α和Ki-67在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与肿瘤微血管密度的关系

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和Ki-67在乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中的表达及其与肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)的关系。方法:将82例乳腺IDC按照组织学分级分为I级组(n=11)、II级组(n=40)、III级组(n=31);按照肿块大小分为φ1组(φmax≤2 cm,n=18)、φ2组(2 cmφmax≤5 cm,n=50)、φ3组(φmax5 cm,n=14);以及根据有无淋巴结转移分为有淋巴结转移组(n=50)、无淋巴结转移组(n=32),并随机选取同期乳腺纤维腺瘤20例作为对照组。用免疫组织化学SP法检测各分组肿瘤组织中HIF-1α,Ki-67和CD34的表达。结果:组织学分级各分组中,I级、II级与III级各分组间HIF-1α,Ki-67表达和MVD分布差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。肿块大小各分组中,φ1,φ2与φ3各分组间HIF-1α表达和MVD分布差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),但Ki-67在不同肿块大小的各分组中的差异无统计学意义(P0.05)。有无淋巴结转移的两组间HIF-1α,Ki-67表达和MVD分布差异均有统计学意义(均P0.01)。82例乳腺IDC中HIF-1α和Ki-67的总阳性率分别为75.6%和73.2%,MVD均值为(78.1±19.7)个/HP,与对照组相比较差异均有统计学意义(均P0.01)。乳腺IDC中,HIF-1α(r=0.817,P0.01),Ki-67(r=0.656,P0.05)与MVD均呈正相关,HIF-1α与Ki-67也呈正相关(r=0.743,P0.05)。结论:HIF-1α,Ki-67及MVD与乳腺IDC组织学分级、肿块大小(其中Ki-67与肿块大小无相关性)和有无淋巴结转移密切相关;抑制HIF-1α的表达和/或抑制血管的生成可能在一定程度上减缓肿瘤细胞的分裂和血管转移。     

颈椎病终板软骨组织中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α表达的相关性

目的:探讨颈椎病软骨终板组织中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1!(HIF-1α)的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测25例颈椎病患者和20例颈椎外伤患者(对照组)终板软骨组织中VEGF和HIF-1α的表达,并且对颈椎病患者终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达进行相关性分析。结果:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α阳性表达率分别为(28±12)%和(39±17)%,对照组VEGF及HIF-1α阳性表达率分别为(43±14)%和(63±11)%;终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达均低于对照组(P<0.05);相关分析显示,颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达存在正相关性(r=0.86,P<0.05)。结论:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达明显减少,HIF-1α对调节VEGF的表达起到关键性作用。     

低氧对Jurkat细胞低氧诱导因子-1α及其类泛素化的影响及意义

目的 探讨低氧条件下Jurkat细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)类泛素化的变化对其基因转录活性和蛋白稳定性的影响,以及对下游靶基因转录活性调控的影响和意义.方法 氯化钴(CoCl2)化学缺氧法模拟肿瘤缺氧不同时间,分别用荧光定量PCR、Western blot法检测HIF-1α基因及蛋白稳定性的变化,类泛素-1(SUMO-1)、类泛素蛋酶-1(SENP-1)蛋白水平的表达,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1和survivin等基因转录活性的变化.结果 在缺氧诱导4、8、16、48、72 h后,HIF-1α基因转录活性分别为缺氧诱导前的(0.79 ±0.19)、(2.65±2.05)、(4.19±4.72)、(2.77±3.37)、(0.09±0.05)、(0.69±0.55)倍(P>0.01),而蛋白稳定性逐渐增高后减低(P<0.01).SEN-1蛋白的表达与SUMO-1蛋白表达呈相反趋势,前者逐渐增高后减低,而后者逐渐减低后增高(P<0.01).除survivin 基因外,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1基因转录水平与HIF-1α蛋白稳定性相平行.结论 缺氧引起SENP-1表达变化,通过减低HIF-1α蛋白类泛素化作用而影响HIF-1α稳定性,从而改变下游VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1等基因的转录活性而最终影响细胞牛物学过程.     

血管内皮生长因子、微血管密度及Ki-67在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)及Ki-67在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法测定45例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织中VEGF、Ki-67和F8的表达。结果宫颈鳞癌中VEGF的表达阳性率为77.78%,Ki-67标记指数(Ki-67LI)和MVD分别为12.7±4.1和37±10,VEGF表达水平与肿瘤恶性程度、Ki-67 LI和MVD计数呈正相关。结论VEGF有促进肿瘤细胞增殖及血管生成的作用,联合检测VEGF、Ki-67和F8可作为病理诊断的补充,对患者预后判断和治疗方案的选择有重要的参考价值。     

缺氧诱导因子-1α与X染色体连锁凋亡抑制蛋白在人卵巢癌中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义。方法 用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10例、良性卵巢肿瘤标本10例、交界性卵巢肿瘤标本10例及恶性卵巢癌组织标本30例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α基因表达变化。结果 XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)。恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05)。随缺氧时间延长,SKOV3细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24 h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36 h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑...     

HIF-1α、Glut-1及VEGF在皮肤鳞状细胞癌及基底细胞癌中的表达

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)及血管内皮生长因子(VEGF)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)及基底细胞癌(BCC)中的表达。方法免疫组织化学法检测43例SCC标本、109例BCC标本、30例正常皮肤组织标本中HIF-1α、Glut-1、VEGF的表达,并分析三者之间的相关性。结果 SCC及BCC中HIF-1α、Glut-1及VEGF阳性表达率显著高于正常皮肤组织(P0.05);SCC中HIF-1α、Glut-1及VEGF阳性表达率显著高于BCC(P0.05)。SCC中HIF-1α、Glut-1及VEGF表达与SCC分化程度无关,但3个指标表达两两呈现正相关关系(P0.05)。结论 HIF-1α、Glut-1及VEGF在SCC及BCC中高表达,三者的表达可为SCC及BCC的诊断提供判断依据。     

缺氧诱导因子-1α对A549细胞株中生存素表达及其生物学特性的影响

目的观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对生存素转录的调控作用及对A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测生存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA HIF-1α质粒和阴性(错义链)、内参(β-肌动蛋白)微小RNA(miRNA)质粒转染A549细胞。转染分为未处理组(正常A549细胞)、HIF-1α沉默组(转染HIF-1αmiRNA质粒)、阴性对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果最佳的miRNA HIF-1α干扰载体;常氧、缺氧条件下检测各组中HIF-1α、生存素在mRNA和蛋白水平的变化;用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果 (1)γ-32P标记的生存素启动子序列-26^-9 bp与A549细胞核蛋白作用,该条带可与HIF-1α抗体结合产生特异性抗体结合条带;(2)常氧下HIF-1α沉默组的HIF-1α和生存素mRNA分别为0.313±0.051和0.060±0.008,明显低于未处理组的1.042±0.036和1.071±0.016(F=436.433,0.002,均P<0.05);HIF-1α和生存素的蛋白含量分别为0.559±0.051和0.051±0.003,未处理组分别是1.452±0.146和0.194±0.007,两组比较差异有统计学意义(F值为53.525和331.646,均P<0.05)。缺氧条件下HIF-1α沉默组中HIF-1α、生存素的mRNA和蛋白分别为0.604±0.040、0.394±0.018、0.997±0.026、0.172±0.006,明显受到抑制(mRNA的t值分别为7.809和-28.936,均P<0.01;蛋白的t值分别为13.523和-14.202,均P<0.01);常氧条件下,转染miRNA后A549细胞增殖(24 h为0.273±0.008)无明显变化,但迁移细胞数(30±6)比未处理组(121±17)减少;缺氧条件下,转染miRNA后,A549细胞生长速度(24 h为0.273±0.008)减慢,细胞体外的迁移细胞数(75±4)减少(均P<0.05)。结论 A549细胞中生存素核心启动子上存在HIF-1α结合位点;miRNA沉默A549细胞HIF-1α表达后,可有效下调生存素基因表达,常氧条件下仅抑制细胞迁移,缺氧条件下不仅促进细胞凋亡,还可抑制细胞增殖和迁移。     

缺氧对人胃癌细胞的细胞周期调控及己糖激酶Ⅱ表达的影响研究

目的 探讨缺氧对人胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期调控机制及对乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶Ⅱ(HK Ⅱ)表达的影响.方法 人胃癌细胞株SGC-7901分成3组:缺氧12 h组、缺氧24 h组及对照组.缺氧组分别在缺氧条件下(37℃、5%CO2、2.0%O2饱和度)培养12 h和24 h,对照组置于正常氧浓度条件下(37℃、5%CO2、21%O2饱和度)培养24 h.流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达,荧光定量PCR法检测HK Ⅱ mRNA表达量.结果 缺氧情况下细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,缺氧12 h组、缺氧24 h组的G0/G1期比例显著高于对照组(P＜0.05);HIF-1α和HK Ⅱ在两组缺氧组与对照组比较,其表达量明显增加(P＜0.05),缺氧24 h组与缺氧12 h组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺氧导致细胞阻滞在G0/G1期,HIF-1α可刺激人胃癌细胞HK Ⅱ表达的增加,以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗胃癌的重要新方法.     

膀胱癌中缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子与P53基因表达相关性的初探

目的探讨膀胱癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)与P53基因表达及其与临床的关系。方法采用免疫组织化学SABC法对196例膀胱癌患者的组织标本分别进行VEGF,HIF-1α及P53免疫组化染色,分析这三种标志物与临床分期和细胞分级的关系及VEGF/HIF-1α在瘤细胞中的共表达情况,并就P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性进行对比分析。结果膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53的阳性表达率分别为70.5%,57.2%和49.3%。同时提示非肌层浸润和分化好的低级别膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53表达水平低于肌层浸润和分化差的高级别患者,两者相比,差异具有统计学意义(P0.05),VEGF/HIF-1α间表达呈正相关(P0.05),其中共表达率为48.6%(92/196),P53与VEGF和HIF-1α阳性表达也呈正相关(P53vs VEGF P0.01,P53vs HIF-1αP0.05)。结论 VEGF/HIF-1α共表达提示在肿瘤组织细胞中存在VEGF/HIF-1α信号转录现象,P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性,表明突变型P53基因可能参与了肿瘤组织的新生血管形成。重视三者的相互影响,有助于提高膀胱癌患者的预后判断及复发风险预测,对分子靶向用药的基因治疗也可能具有一定指导意义。     

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。     

不同间歇性缺氧诱导方式对SW480细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的利用不同方法模拟间歇性缺氧(intermittent hypoxia,IH)环境,观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在SW480细胞中的表达情况。方法利用CoCl2(A)和三气培养箱(B)两种方式诱导IH。根据缺氧时间的不同每种诱导方式分2组,IH2 h:A2、B2组,IH3 h:A3、B3组;C组为常氧组。利用免疫细胞化学检测HIF-1α蛋白的表达部位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HIF-1α表达量的变化。结果 HIF-1α蛋白主要在胞质表达。各缺氧组HIF-1αmRNA的表达水平高于C组(0.76±0.03),A3组(0.87±0.04)高于A2组(0.78±0.04),B3组(0.98±0.04)高于B2组(0.85±0.03),差异均有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α蛋白在各缺氧组的表达水平高于C组(0.19±0.03),A3组(0.39±0.04)高于A2组(0.21±0.02),B3组(0.46±0.04)高于B2组(0.24±0.03),差异均有统计学意义(P<0.01)。B2、B3组HIF-1αmRNA和蛋白的表达量分别高于A2、A3组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IH可以上调HIF-1αmRNA及蛋白水平。HIF-1α在氧箱诱导的IH环境中上调更显著。     

缺氧诱导因子2α、血管内皮生长因子与口腔鳞癌中血管生成及转移关系初探

目的 探讨缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达及其与微血管生成和癌转移的关系.方法 应用免疫组织化学检测51例OSCC中HIF-2α、VEGF的表达.结果 51例OSCC中HIF-2α阳性率为68.62%,强表达11例,中度表达14例,弱表达10例,无表达16例,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05).VEGF阳性率为70.58%,强表达10例,中度表达12例,弱表达11例,无表达18例,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05).OSCC转移组较无转移组HIF-2α、VEGF表达有统计学差异(P<0.05).VEGF与HIF-2α表达呈正相关(r=0.307,P<0.05).结论 HIF-2α与VEGF有相关性,HIF-2α、VEGF与微血管生成、癌转移有关,联合检测HIF-2α、VEGF可能成为判断OSCC转移潜力及预后的指标.     

缺氧诱导因子-1α对口腔鳞状细胞癌血管生成拟态相关基因影响的实验研究

目的探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞移植瘤血管生成拟态(VM)的影响及其可能的机制。方法 (1)沉默Tca8113细胞的HIF-1α,Real time RT-PCR和Western blot验证干扰效率;(2)建立裸鼠皮下移植瘤模型:分为阴性对照组和沉默HIF-1α的干扰组,观察沉默HIF-1α对肿瘤生长的影响并绘制生长曲线;(3)瘤体HE染色及免疫组化CD31染色观察血管形态、微血管密度(MVD)和VM的变化,免疫组化染色观察沉默HIF-1α对血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果 (1)移植瘤的生长曲线显示干扰组瘤体的生长速度和体积显著慢于和小于对照组(P<0.05);(2)与对照组相比,干扰组瘤体内的血管形态趋于正常且MVD减小(P<0.05),VM现象少见;(3)与对照组相比,干扰组瘤体组织的VEGF、TGF-β1表达显著减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论口腔鳞癌移植瘤中存在VM现象,VM的形成可能与HIF-1α对靶基因VEGF、TGF-β1的表达调控有关。