补益脾胃元气方药对Aβ诱导的海马神经元JNK及p38MAPK信号通路相关蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:通过研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导的海马神经元JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响,探讨补益脾胃元气方对Aβ诱导的海马神经元损伤的保护作用及防治阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)的可能机制。方法:通过寡聚肽Aβ_(1～42)诱导海马神经元损伤模拟AD细胞模型;分别以蒸馏水、人参、洗心汤、大补元煎颗粒剂溶液对新西兰家兔灌胃给药,14天后抽取各组脑脊液,与终浓度为25μmol/L的寡聚肽Aβ_(1～42)单独或共同作用于原代海马神经元48小时,分别检测模型组、正常脑脊液对照组、安理申组、人参组、大补元煎组、洗心汤组海马神经元JNK和磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)及p-38MAPK和磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38,p-p38MAPK)的表达水平。结果:对培养至7～8天的成熟原代海马神经元,进行神经元树突标志物微管相关蛋白-MAP2标记,结果显示原代海马神经元在所培养的总细胞中所占比例达到95%以上。免疫荧光实验显示,人参、大补元煎及洗心汤三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达明显降低(P0.05),蛋白印迹实验中三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达同样降低(P0.05)。结论:补益脾胃元气方药可通过抑制JNK和p38MAPK信号通路中关键信号分子p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达,有效拮抗Aβ_(1～42)神经毒性,抑制由Aβ_(1～42)诱导的JNK和p38MAPK信号通路激活所引发的炎症信号通路活性增强及细胞损伤凋亡发生,起到神经保护作用。     

远志皂苷+β-细辛醚对阿尔茨海默病细胞模型Akt/GSK-3β信号途径的影响

目的:通过观察远志汤有效成分即远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元损伤的影响,探讨远志汤对阿尔茨海默病(AD)氧化应激损伤的保护作用和可能机制。方法:通过Aβ_(25-35)诱导原代培养的C57BL/6J小鼠海马神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,把神经元分为正常对照组,Aβ_(25-35)诱导组,Aβ_(25-35)与远志皂苷+β-细辛醚共同孵育3个剂量组(5、10、20μmol·L~(-1)),采用WST-1比色法、流式细胞术、荧光显微镜和Western blot方法检测远志皂苷协同β-细辛醚对原代培养的海马神经元细胞活性、细胞凋亡率和ROS含量,以及AKt、GSK-3β和磷酸化蛋白表达的影响。结果:成功复制了Aβ_(25-35)致海马神经元氧化应激损伤模型;远志皂苷协同β-细辛醚可以提高Aβ_(25-35)损伤的海马神经元细胞活力,降低Aβ_(25-35)所致的细胞凋亡率,同时降低ROS含量,诱导Akt表达,抑制GSK-3β活化。结论:远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元氧化应激损伤发挥保护作用,可能是通过调控Akt/GSK-3β信号途径。     

补益脾胃元气方药对海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:探讨人参、大补元煎、洗心汤三组补益脾胃元气方药对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化的影响。方法:从新生24小时内的Wistar胎鼠脑中分离培养海马NSCs,制备不同药物含药脑脊液并与Aβ_(1-42)共同处理海马NSCs。通过CCK8实验检测各组海马NSCs增殖率,免疫荧光法与蛋白印迹法检测海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞的情况。结果:含中药各实验组的海马NSCs增殖率显著高于Aβ_(1-42)处理组(P0.05);含中药各实验组海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞数量明显多于Aβ_(1-42)处理组(P0.05),各中药组之间对比,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论:人参、大补元煎、洗心汤能显著促进海马NSCs增殖、诱导海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞。     

梓醇对纤维状Aβ1-42诱导的bEnd.3细胞凋亡及过度自噬的影响

目的:观察梓醇对纤维状β-淀粉样蛋白(amyliod-beta protein,Aβ_(1-42))诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(b End.3)损伤的保护作用,并探讨其保护作用机制。方法:将b End.3细胞分为溶剂组,模型组(Aβ_(1-42)20μmol·L~(-1)),梓醇低、中、高浓度组(Aβ_(1-42)20μmol·L~(-1)+梓醇50,200,500μmol·L~(-1));噻唑蓝(MTT)比色法检测梓醇及其对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞活性的影响;Hoechst33258染色法检测梓醇对Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞凋亡情况的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬及凋亡相关蛋白(Beclin~(-1),LC3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素-C(cytochrome-C),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及切割活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果:MTT显示,梓醇对b End.3细胞无毒副作用;MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组比较,梓醇低、中、高剂量组能明显提高b End.3细胞活性,抑制Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞凋亡(P0.05);Western blot显示,与模型组比较,梓醇预处理后,可明显降低Bax/Bcl-2,cytochrome-C/β-actin,cleaved Caspase-3/Caspase-3,Beclin~(-1)/β-actin,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(P0.05)。结论:梓醇可能通过抑制Aβ_(1-42)诱导的b End.3细胞凋亡及过度自噬发挥其神经保护作用。     

丹皮酚对Aβ1-42致神经元细胞毒的保护作用及机制

目的:考察丹皮酚对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤神经元的保护作用及机制.方法:取生长良好的新生大鼠海马神经元和经诱导分化后的SH-SY5Y细胞株,在培养液中加入不同浓度(1,5,10 μmol·L-1)的丹皮酚孵育6h后,再加入Aβ1-42寡聚体(30 μmol·L-1)分别孵育24,48 h.采用Heochst33258荧光染色法观察神经元的凋亡形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定SH-SY5Y细胞凋亡率,RT-PCR法检测神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,各剂量丹皮酚(1,5,10 μmol·L-1)显著减少海马神经元核固缩,降低SH-SY5Y细胞的凋亡率至22.4％,18.1％,16.4％,显著增加海马神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结论:丹皮酚可通过增加神经元BDNF和Bcl-2的表达,拮抗Aβ1-42寡聚体诱导的神经细胞损伤.     

知母皂苷对Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元突触损伤的保护作用

目的:探讨知母皂苷(SAa B)对Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元损伤是否有保护作用。方法:MTT法测皮层神经元细胞存活率;免疫荧光染色法检测神经元突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的改变。Western印迹法检测神经元SYP、PSD-95、p-Akt473、p-m TOR蛋白表达水平表达的改变。结果:Aβ_(1-42)作用48 h可使大鼠大脑皮层神经元细胞存活率明显降低,使神经元SYP、PSD-95、p-Akt473和p-m TOR蛋白表达明显降低。SAa B(0.01,0.1,1,5,10μmol/L)可明显对抗Aβ_(1-42)引起的神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性。SAa B也可使SYP、PSD-95、p-Akt473和p-m TOR蛋白表达明显增加。结论:知母皂苷能够抑制Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元突触损伤,这种作用可能与PI3K/Akt/m TOR信号转导通路有关。     

银杏叶提取物对Aβ诱导神经毒性的保护作用

目的:研究不同剂量银杏叶(ginkgo biloba extract,EGb761)对Aβ诱导神经元损伤的影响。方法:取高、中、低剂量的EGb761质量浓度分别为100,10,1 mg·L-1预处理Aβ1-42干预的神经元,检测神经元活力、凋亡率及NeuN染色的变化。结果:与Aβ组相比,高和低剂量EGb761组的神经元活力和NeuN+细胞数存在显著差异(P<0.05),而中剂量EGb761组神经元活力和NeuN+细胞数均存在极显著差异(P<0.01);中剂量EGb761组的对神经元凋亡的保护作用优于高、低剂量EGb761组。结论:高、中、低剂量组银杏叶制剂均可提高损伤海马神经元活力、提高NeuN+细胞数,降低神经元凋亡率;尤以中剂量组显著。提示采用预处理的给药方式可保护Aβ诱导的神经元损伤。     

人参皂甙Rg1对抗Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的实验研究

目的:观察人参皂甙 Rg1对 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响以及 Rg1对 Caspase-3活性的影响。方法:用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色、TUNEL 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳方法观察神经元凋亡形态学和生态改变;荧光分光光度计法检测凋亡效应分子 Caspase-3活力的变化;RT-PCR 法检测 Cas-pase-3 mRNA 的表达水平。结果:人参皂甙 Rg1预处理可显著降低 Aβ_(1-40)诱导大鼠皮层神经元的凋亡率,凋亡细胞特有的 DNA 梯形条带消失,Caspase-3活力下降,Caspase-3 mRNA 表达下调。结论:人参皂甙 Rg1可通过抑制 Caspase-3的激活,使 Aβ_(1-40)诱导的大鼠皮层神经元减少凋亡。     

海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响

目的:探究海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响及可能机制。方法:将b End.3细胞分为阴性对照组,模型组(Aβ_(1-42)20μmol/L),海风藤水煎剂低中高剂量组(Aβ_(1-42)20μmol/L+海风藤0.5,1,5 mg/m L);(1)利用噻唑蓝(MTT)法检测海风藤水煎剂对Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞活力的影响;(2)利用Hoechst33258染色法鉴定b End.3细胞的凋亡情况;(3)Western Blot法检测死亡受体凋亡信号通路相关蛋白Caspase-8,Cleaved Caspase-8,Caspase-3及Cleaved Caspase-3的表达水平。结果:MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组相比,海风藤低、中、高剂量组能显著提高b End.3细胞活性,抑制Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞凋亡(P0.05),且保护作用与海风藤水煎剂浓度成正相关;Western blot显示,与模型组相比,海风藤预处理后,可明显减Cleaved Caspase-8/Caspase-8、Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值(P0.05)。结论:海风藤能够提高b End.3细胞可能通过抑制Aβ_(1-42)诱导的死亡受体信号通路发挥其神经保护作用。     

姜黄素对Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体内细胞色素C表达的影响

目的:探讨姜黄素对β淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡及线粒体内细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)表达的影响,探讨其抗PC12细胞凋亡的线粒体机制。方法:以Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,分别以0(空白组),1.25,2.5,5,10,20,40μmol·L-1不同浓度的姜黄素进行处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对细胞存活率的影响。实验随机分为空白组,模型组,姜黄素低、高(10,20μmol·L-1)浓度组,采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡情况;JC-1染色分析检测线粒体膜电位(Δψm)的变化;免疫荧光分析检测Cyt C的分布;蛋白质印迹法(Western blot)检测线粒体内Cyt C蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组PC12细胞存活率显著降低,凋亡率升高(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞存活率,降低凋亡率(P0.01)。与空白组比较,模型组PC12细胞Δψm降低,Cyt C由线粒体释放至胞浆增多,线粒体内Cyt C的表达下调(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞Δψm,抑制Cyt C由线粒体释放至胞浆并上调线粒体内Cyt C的表达(P0.05,P0.01)。结论:姜黄素可抑制线粒体凋亡途径,从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。     

黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病细胞模型细胞凋亡的影响

海马神经细胞丢失是阿尔茨海默病(AD)的主要病理特征之一,其发生与海马神经细胞凋亡有关。黄蒲通窍胶囊用于治疗AD,但其作用机制尚未明确。该实验通过观察黄蒲通窍胶囊含药血清对Aβ25-35诱导的原代培养海马神经元AD细胞模型神经损伤的保护作用及细胞凋亡的影响,探讨黄蒲通窍胶囊治疗AD的神经保护作用机制。原代培养海马神经元,倒置显微镜观察细胞生长状态,MAP-2免疫荧光法鉴定原代培养的海马神经元。运用血清药理学方法制备黄蒲通窍胶囊含药血清,MTT法筛选黄蒲通窍胶囊含药血清最佳浓度范围和Aβ25-35造模浓度。用Aβ25-35诱导建立AD细胞模型后,给予不同浓度的黄蒲通窍胶囊含药血清继续干预,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞内Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达。结果显示,原代培养海马神经元成功,且海马神经元在培养至第7天时生长成熟;与正常组比较,模型组海马神经元细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达增加(P0.05,P0.01);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊含药血清组细胞存活率明显升高,细胞凋亡率减少,Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结果表明,黄蒲通窍胶囊含药血清对Aβ25-35诱导的原代培养海马神经元损伤具有保护作用,可抑制海马神经元细胞凋亡从而起到治疗AD的作用。     

异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

目的:观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞γ-氨基丁酸(GABA),5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组,地西泮组(25 mg·L~(-1)),异虎耳草素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·L~(-1)),共5组,给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA,5-HT含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA_1,GABRA_5,GABRB_2,γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)基因GABBR1,5-羟色胺1A型受体(5-HT1_A)基因5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(B)),5-HT1_(A(C))表达的变化。结果:第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度 90%;与空白组比较,海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(P 0. 01),GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(P 0. 01),GABRA_1,GABRA_5,5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(C))mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(P 0. 05,P 0. 01),GABBR_1,5-HT1_(A(B))mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡,升高抑制性神经递质GABA含量,上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。     

阿魏酸钠通过抑制β淀粉样蛋白1-42所致的星形胶质细胞炎症因子释放

目的:研究阿魏酸钠对Aβ1-42激活的培养星形胶质细胞引起的海马神经细胞损伤的保护作用。方法:原代培养海马神经细胞与星形胶质细胞,星形胶质细胞用阿魏酸钠(50,100,200 mol/L)预处理6 h后,加入50 nmol/L的Aβ1-42作用24 h,将作用后的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)加入到培养海马神经细胞中作用48 h,以加入Aβ1-42的无细胞培养液为对照。ELISA法测定星形胶质细胞培养液中IL-1β、TNF-α表达,Griess法测定培养液中NO的含量;测定各组海马神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放、采用突触素荧光免疫组织化学染色观察神经元损伤、Western蛋白印迹法检测神经元caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组相比,星形胶质细胞培养液加入Aβ1-42处理后IL-1β、TNF-α、NO生成量明显增加,海马神经元细胞加入ACM后突触素减少,LDH漏出量增加,磷酸化的caspase-3蛋白表达明显增加;应用阿魏酸钠(50,100,200 mol/L)预处理6 h可明显对抗Aβ1-42引起的星形胶质细胞及海马神经元细胞的这些改变。结论:阿魏酸钠通过抑制星形胶质细胞炎症因子释放对抗Aβ1-42引起的海马神经元损伤。     

补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马神经干细胞活力与迁移的影响

目的研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白诱导的海马神经干细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)活力与迁移能力的影响,探讨其对海马神经元修复和再生的作用。方法从孕14～16 d Wistar大鼠胎鼠分离培养NSPCs并鉴定,并随机分为空白组、Aβ1-42处理组、正常脑脊液对照组、安理申组及补益脾胃元气方药人参、大补元煎、洗心汤保护组,共7组。以25μmol/L Aβ1-42干预NSPCs,与抽取的终体积分数为20%的不同方药含药脑脊液作用第3代神经干细胞48 h。采用CCK-8实验检测各组NSPCs的活力,Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移,流式法检测各组细胞内活性氧(ROS)含量。结果免疫荧光染色鉴定NSPCs特异性蛋白SOX2染色为阳性;CCK-8检测结果表明,补益脾胃元气方药各组海马NSPCs活性显著增高(P0.01);Transwell实验和划痕实验检测结果显示,补益脾胃元气方药各组NSPCs迁移能力显著增强(P0.05、0.01);流式法检测ROS含量结果表明,补益脾胃元气方药各组NSPCs内ROS水平显著降低(P0.01)。结论补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马NSPCs活力与迁移能力具有促进作用。还可拮抗Aβ诱导的氧化应激,同时其有效成分易于透过血脑屏障,可能发挥更强的神经保护作用。     

脑还丹对痴呆模型大鼠炎性因子及海马超微结构的影响

目的:探讨脑还丹对Aβ_(25-35)诱导的痴呆模型大鼠炎性因子表达及海马区超微结构的影响。方法:原代海马神经元分为对照组、β-淀粉样蛋白(Aβ)组、脑还丹低剂量组、脑还丹高剂量组、银杏叶片组,对照组和Aβ组加入对照组血清,其他各组分别加入对应的含药血清,72 h后,Aβ组、脑还丹低剂量组、脑还丹高剂量组、银杏叶片组加入Aβ_(25-35)作用72 h,测量各组海马细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA水平,并检测海马神经元存活率。另外,用Aβ行立体定位制造痴呆大鼠模型,分组同上,分别给予生理盐水及高剂量脑还丹、低剂量脑还丹、银杏叶片治疗,1个月后取海马标本,观察海马区神经元超微结构。结果:(1)Aβ组海马细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA水平明显高于对照组(P0.01),脑还丹高剂量组、脑还丹低剂量组和银杏叶片组海马细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA水平均低于Aβ组(P0.01),其中以脑还丹高剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA水平最低。(2)Aβ组海马神经元存活率低于对照组(P0.01);脑还丹高剂量组、脑还丹低剂量组和银杏叶片组海马神经元存活率高于Aβ组(P0.01),其中以脑还丹高剂量组海马神经元存活率最高。(3)Aβ组大鼠海马区出现脂褐素堆积,溶酶体增大、空化,粗面内质网结构破坏,核糖体减少,线粒体减少,细胞核变形,突触减少和结构破坏。脑还丹组及银杏叶片组上述变化较Aβ组减轻。结论:脑还丹能通过减少炎性反应降低海马神经元损伤,从而改善神经退行性病变。     

氧化苦参碱对Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的影响

目的:探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对Aβ_(1-42)诱导的原代星形胶质细胞的影响。方法:采用原代星形胶质细胞模型,随机将细胞分为正常对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及OMT低(10μg/m L)、中(100μg/m L)、高(1 000μg/m L)浓度组。应用MTT比色法检测OMT对Aβ_(1-42)诱导原代细胞存活率的影响;应用ELISA试剂盒,检测细胞培养液中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;应用Western blot法测定营养因子的特异性受体Trk B、Trk A、RET及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果:OMT可呈剂量依赖的提高原代星形胶质细胞的存活率(P0.05)。各浓度OMT均能提高营养因子分泌水平,抑制促炎因子的分泌,并呈剂量依赖性的上调Aβ_(1-42)诱导后原代星形胶质细胞Trk B、Trk A、RET、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:OMT能缓解Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的损伤,促进营养因子分泌,其机制可能与促进营养因子受体Trk B、Trk A、RET蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达并抑制凋亡蛋白Bax和促炎因子水平有关。     

固本健脑法对老年性痴呆模型大鼠SorLA、VPS35的影响

目的:探讨固本健脑法干预老年性痴呆即阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用及机制。方法:12月龄衰老大鼠行脑立体定位手术于双侧海马注射Aβ_(1-42)制备复合AD大鼠模型,并用固本健脑液灌胃干预,以安理申组为对照。4周后,Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆能力,Westen Blot检测SorlA、VPS35、APP的表达,ELISA法检测Aβ_(1-42)的表达。结果:通过大鼠双侧海马注射Aβ_(1-42),可诱导出大鼠AD样学习记忆能力减退模型。水迷宫检测显示固本健脑液中剂量能改善大鼠学习记忆能力。Westen Blot显示固本健脑液高剂量能提高海马区SorlA的表达量。ELISA显示给药后各给药组Aβ_(1-42)含量降低,固本健脑液高剂量Aβ_(1-42)含量最低。结论:固本健脑法可通过影响SorLA、VPS35的表达,影响APP的转运,减少Aβ_(1-42)的生成,加速Aβ_(1-42)的清除。     

清心开窍方对Aβ_(25-35)诱导原代海马神经元损伤IGF-1R、IRS-1及Aβ mRNA表达的影响

目的:研究清心开窍方对Aβ_(25-35)诱导原代海马神经元细胞损伤胰岛素样生长因子1受体(insulinlike growth factor 1 receptor,IGF-1R)、胰岛素受体底物蛋白1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)及β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)基因表达的影响,探讨清心开窍方对神经元细胞的保护作用及其机制。方法:制备SD乳鼠原代海马神经元细胞,分为6组:正常对照组、模型组、尼莫地平组(1×107mol·L~(-1))、清心开窍方低、中、高剂量组(6.25、12.5、25 mg/m L)。支持培养至第7天,各治疗组分别给予相应药物预处理24 h后,模型组及各治疗组加入老化处理的Aβ_(25-35)(终浓度为10μmol·L~(-1))共同作用24 h,建立AD细胞模型。正常对照组给予相等体积的培养液继续孵育24 h。采用CCK-8法检测各组的细胞活力,RT-PCR法检测各组IGF-1R、IRS-1和AβmRNA的表达水平。结果:模型组与正常对照组比较细胞活性明显降低(P0.01),而清心开窍方能有效改善细胞活性;RT-PCR法结果显示模型组IGF-1R mRNA明显降低(P0.01),IRS-1和AβmRNA表达均明显增加(P0.01),而不同浓度的清心开窍方处理后均能提高IGF-1R mRNA的表达(P0.01或P0.05),减少IRS-1和AβmRNA表达(P0.01或P0.05)。结论:清心开窍方能减轻β-淀粉样蛋白对神经元细胞的毒性作用,提高细胞存活率,保护海马神经元细胞。     

加味不忘散对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响

目的:研究中药免煎剂加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响,初步探讨其发挥作用可能的机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、低剂量组及高剂量组,分别采用HE染色、TUNEL染色观察海马神经元细胞形态学改变及海马神经元细胞凋亡情况,使用ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果:HE染色观察结果示,模型组海马神经元细胞形态异常,低、高剂量组海马神经元细胞较模型组均有不同程度的改善; TUNEL染色结果示,模型组较假手术组凋亡细胞数明显增加,低剂量组未见凋亡细胞数减少,而高剂量组凋亡细胞数减少; ELISA结果示,低剂量组海马组织中TNF-α水平较模型组降低,而IL-1β及IL-6水平并未降低,高剂量组海马组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低。结论:加味不忘散可抑制Aβ1-42所致的海马炎症因子释放以及神经元细胞凋亡,提示加味不忘散可能通过抑制炎症反应发挥其神经元保护作用。     

白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的研究白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响。方法 Aβ_(25-35 )(1μmol/L)诱导HT22建立细胞损伤模型,同时白果内酯(6、12、24μmol/L)和NADPH氧化酶抑制剂(DPI, 15μmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测神经元细胞凋亡率,流式法(DCFH-DA荧光探针)测定细胞内ROS生成,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞活力下降(P0.01),神经元细胞凋亡率提高(P0.01),同时,ROS的生成、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达均增多(P0.01);与模型组比较,白果内酯(12、24μmol/L)组能提高细胞活力,减少ROS生成,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平与神经元细胞凋亡率(P0.05,P0.01),白果内酯(24μmol/L)组能抑制细胞NLRP-1、ASC及caspase-1的蛋白表达(P0.01)。结论白果内酯对Aβ_(25-35)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有较好的保护作用,其机制可能与抑制NADPH氧化酶-ROS介导的NLRP-1炎症小体激活有关。