银杏叶提取物对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的:探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb761)对过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)诱导的胰岛RIN-mβ细胞株凋亡的影响。方法:以500μmol/L H2O2作用于胰岛RIN-mβ细胞6 h建立凋亡模型;分别设空白对照组(Control)、阴性对照组(H2O2)、阳性对照组(槲皮素Que 100μmol/L)、EGb 761单用对照组(EGb 761100μmol/L),EGb 761给药组(EGb 761 10、30、100μg/ml);采用MTT检测细胞存活率,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态变化,PI单染色法和Annexin V-PI双染色法流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果:与空白对照组比较,阴性对照组500μmol/L H2O2作用6 h后,细胞存活率明显降低、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,EGb 761显著降低H2O2诱导的细胞凋亡(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:过氧化氢可诱导胰岛RIN-mβ细胞凋亡,EGb 761对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

银杏叶提取物EGb761对海马神经元氧糖剥夺后神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:通过观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGb761)对氧糖剥夺处理的原代培养海马神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨EGb761对脑缺血的神经保护作用。方法:采用海马神经元培养氧糖剥夺损伤(OGD)模型,分为正常对照组、OGD组及EGb761组,观察神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl-2表达情况。结果:EGb761组较OGD组能明显减少神经元凋亡,上调Bcl-2表达(P<0.05)。结论:EGb761对氧糖剥夺处理后的海马神经元具有明显保护作用。     

银杏叶提取物EGb761对MPP~+诱导的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的观察银杏叶提取物EGb761对人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞损伤的影响,探讨其作用机制。方法采用细胞培养方法,建立SH-SY5Y细胞1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)损伤帕金森病体外模型。实验分为对照组、模型组和中药低、中、高剂量组,各给药组给予相应剂量药物。MTT法测定细胞存活率,Annexin V凋亡检测试剂盒和流式细胞仪测定细胞凋亡率;倒置显微镜观察细胞形态;硝酸还原法检测SH-SY5Y细胞一氧化氮(NO)的含量。结果与对照组比较,模型组SH-SY5Y细胞存活率降低、细胞凋亡率增加和NO含量升高(P0.05);与模型组比较,中药中、高剂量组SH-SY5Y细胞存活率增加、细胞凋亡率降低,NO含量降低(P0.05)。结论银杏叶提取物EGb761可以通过抑制细胞内NO自由基的含量对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤起到保护作用。     

银杏叶提取物及银杏内酯B对体外培养大鼠神经元损伤的保护作用比较

目的:经预处理给药模式观察了银杏叶提取物(extract ofGinkgo biloba,EGb761)及其单体银杏内酯B(ginkgol-ide B,GB)对神经元损伤的影响,以探讨EGb761及GB在抗兴奋毒性神经损害中的应用价值与实施途径。方法:原代培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠的海马神经元,建立谷氨酸诱导的兴奋毒性模型。采用台盼蓝染色、凋亡神经元测定及乳酸脱氢酶(LDH)测定的方法观察不同剂量EGb761,GB的神经保护作用,并与NMDA(N-甲基-D-天门冬氨酸盐)受体非竞争性拮抗剂MK801的神经保护作用相比较。结果:EGb761,GB在不同剂量下均能不同程度的提高细胞存活率,降低凋亡率,减少LDH泄露,且在一定范围内保护作用呈剂量依赖的方式。EGb761,GB分别在100 mg.L-1,100μmol.L-1的剂量下有最佳的保护效果,但均弱于MK-801(10μmol.L-1),GB最佳剂量下保护效果优于EGb761。结论EGb761,GB对谷氨酸兴奋毒性损害有保护作用。在预处理给药模式的最佳剂量下,GB的保护效果优于EGb761,将其用于高危人群的预防干预可能有更大价值。     

银杏叶提取物对过氧化氢诱导的成纤维细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究银杏叶提取物(EGb761)对过氧化氢诱导的大鼠真皮成纤维细胞氧化应激的保护作用。方法:原代培养大鼠真皮成纤维细胞,以不同浓度(20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)的EGb761对其生长进行干预后,H2O2诱导其损伤,MTT法观察细胞活力,硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法分别测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)含量;荧光探针DCFH-DA进行活性氧(ROS)检测;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡。结果:不同浓度(20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)的EGb761均能提高H2O2诱导的成纤维细胞细胞存活率和SOD活力,降低MDA含量、活性氧水平和细胞凋亡率,且呈一定的剂量相关性。结论:EGB761在一定范围内能保护过氧化氢诱导的大鼠真皮成纤维细胞氧化应激损伤且呈一定的剂量相关性。     

银杏叶提取物EGb761对中枢脱髓鞘大鼠神经保护作用的研究

目的 研究银杏叶提取物EGb761对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠的神经行为学及脑脊髓组织病理改变.以探讨EGb761对脱髓鞘疾病的神经保护及髓鞘再生的作用.方法 将Wistar大鼠随机分为3组,正常对照（NC）组,EAE组,BGb761组.诱导Wistar大鼠BAE模型,同时以EGb761分别于免疫当日开始治疗,并观察神经行为改变;全部动物于免疫第14d取脑,脊髓,常规病理切片,HE染色.结果 与EAE组相比,EGb761组推迟了EAE发病时间,其临床评分在疾病高峰时有明显下降.BGb761组较EAE组,脑和脊髓炎性细胞浸润,神经元肿胀、变性、坏死明显减轻.正常对照组未见异常.结论 EGb761使EAE大鼠减轻了脱髓鞘症状,减轻组织中神经髓鞘及神经元的损伤,对神经有保护作用,并促进神经髓鞘的再生.     

银杏叶提取物对大鼠脊髓损伤神经保护作用的实验研究

目的探讨银杏叶提取物对脊髓损伤后神经细胞的保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、银杏叶提取物组(EGb组)和损伤组(T组),采用改良Allen打击法建立脊髓中度急性损伤模型。N组仅暴露大鼠脊髓,T组打击术后不予药物,EGb组术后予EGb 17.5 mg/(kg.d)腹腔注射。结果大鼠脊髓损伤后,光镜下可见EGb组脊髓组织损伤程度较T组轻;伤段脊髓内Caspase-3表达上调,在3 d达到高峰,但EGb组Caspase-3表达低于T组(P<0.01);流式细胞仪检测显示,大鼠脊髓损伤后,N组和T组均发现凋亡细胞,均在3 d达到高峰,但EGb组凋亡细胞比率显著低于T组(P<0.01)。结论银杏叶提取物在脊髓损伤早期可以明显抑制Caspase-3的高表达,并且减少神经细胞的凋亡。     

加味不忘散对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响

目的:研究中药免煎剂加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响,初步探讨其发挥作用可能的机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、低剂量组及高剂量组,分别采用HE染色、TUNEL染色观察海马神经元细胞形态学改变及海马神经元细胞凋亡情况,使用ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果:HE染色观察结果示,模型组海马神经元细胞形态异常,低、高剂量组海马神经元细胞较模型组均有不同程度的改善; TUNEL染色结果示,模型组较假手术组凋亡细胞数明显增加,低剂量组未见凋亡细胞数减少,而高剂量组凋亡细胞数减少; ELISA结果示,低剂量组海马组织中TNF-α水平较模型组降低,而IL-1β及IL-6水平并未降低,高剂量组海马组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低。结论:加味不忘散可抑制Aβ1-42所致的海马炎症因子释放以及神经元细胞凋亡,提示加味不忘散可能通过抑制炎症反应发挥其神经元保护作用。     

远志皂苷+β-细辛醚对阿尔茨海默病细胞模型Akt/GSK-3β信号途径的影响

目的:通过观察远志汤有效成分即远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元损伤的影响,探讨远志汤对阿尔茨海默病(AD)氧化应激损伤的保护作用和可能机制。方法:通过Aβ_(25-35)诱导原代培养的C57BL/6J小鼠海马神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,把神经元分为正常对照组,Aβ_(25-35)诱导组,Aβ_(25-35)与远志皂苷+β-细辛醚共同孵育3个剂量组(5、10、20μmol·L~(-1)),采用WST-1比色法、流式细胞术、荧光显微镜和Western blot方法检测远志皂苷协同β-细辛醚对原代培养的海马神经元细胞活性、细胞凋亡率和ROS含量,以及AKt、GSK-3β和磷酸化蛋白表达的影响。结果:成功复制了Aβ_(25-35)致海马神经元氧化应激损伤模型;远志皂苷协同β-细辛醚可以提高Aβ_(25-35)损伤的海马神经元细胞活力,降低Aβ_(25-35)所致的细胞凋亡率,同时降低ROS含量,诱导Akt表达,抑制GSK-3β活化。结论:远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元氧化应激损伤发挥保护作用,可能是通过调控Akt/GSK-3β信号途径。     

G15逆转六味地黄汤冻干粉对慢性应激海马细胞的保护作用

目的 探讨六味地黄汤(LW)冻干粉对皮质酮诱导损伤的HT22海马细胞的保护作用及G15的逆转作用。方法 利用皮质酮构建慢性应激损伤HT22神经元细胞体外模型，将神经元分为对照组，模型组，LW(320 mg·L^-1)组、LW+G15低剂量组(10μmol·L^-1)和LW+G15高剂量组(30μmol·L^-1),并进行相应干预。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HT22细胞的存活率。采用TUNNEL染色检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较，CORT诱导损伤的模型组细胞OD值显著下降和细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。与模型组比较，LW可明显增加海马细胞OD值和降低凋亡细胞(P<0.05)。与LW组比较，LW+G15高剂量组可降低海马细胞OD值和增加凋亡细胞(P<0.05)。结论 G15 30μmol·L^-1可逆转LW冻干粉对皮质酮损伤小鼠HT22海马细胞的保护作用。