Ku70反义寡核苷酸增强甲状腺癌细胞的辐射敏感性

目的 研究DNA修复基因Ku70反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌细胞辐射敏感性的影响.方法 设计合成特异性靶向Ku70的ASODN,以不同浓度转染人甲状腺髓样癌细胞(TT),并设脂质体和正义寡核苷酸(SODN)对照组进行比较.采用Western印迹技术检测各组细胞中Ku70蛋白表达水平.利用不同剂量60 Co γ射线照射细胞后,细胞克隆形成实验检测细胞存活分数.CCK-8法、Annexin-V/PI染色法分析ASODN对细胞活力和细胞凋亡的影响.彗星电泳法比较γ射线照射后DNA双链断裂的修复效率.结果 转染ASODN各组细胞Ku70蛋白表达均较脂质体对照组、SODN组明显降低,并呈浓度依赖性;照射后细胞存活率降低(P＜0.01),凋亡率显著增加(P＜0.01),DNA双链断裂的修复效率降低(P＜0.01).结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞Ku70的表达,抑制γ射线照射后细胞存活和DNA双链断裂修复,提高肿瘤细胞的辐射敏感性.     

肝癌细胞放射敏感性与survivin蛋白表达的关系

目的 探讨肝癌细胞放射敏感性与survivin表达的关系.方法 肝癌细胞HepG2和SMMC-7721在接受不同剂量γ射线照射后,分别采用克隆形成法、免疫细胞化学法、流式细胞术、比色法等检测细胞存活率、survivin蛋白表达、细胞周期变化和Caspase-3活性.结果 在2Gy照射下HepG2和SMMC-7721细胞的存活分数分别为0.43±0.01与0.70±0.02,SMMC-7721较HepG2放射抗拒.γ射线对SMMC-7721细胞的G2/M期阻滞时间较HepG2细胞长(48 h对24 h),在阻滞峰各剂量点SMMC-7721细胞的G2/M期比例也更高.γ射线可上调两株肝癌细胞survivin蛋白的表达,照射后48～72 h,SMMC-7721细胞的survivin蛋白表达水平显著高于HepG2细胞(t值为2.81～5.20,P值均＜0.05).而Caspase-3的活化水平在放射敏感的HepG2细胞中更高(t值为6.05～6.72,P值均＜0.01).结论 射线诱导的survivin表达上调及survivin对Caspase-3的负调控可能是SMMC-7721细胞较HepG2细胞放射抗拒的原因之一.     

腺病毒介导人Rb94基因对食管癌细胞的生长作用观察

目的 观察含有视网膜母细胞瘤(Rb)94基因的重组腺病毒表达载体(Ad-Rb94)对人食管癌细胞生长的抑制作用. 方法 将Ad-Rb94于体外转染食管癌细胞EC-9706(Ad-Rb94组),设对照腺病毒组(Ad-lacZ组)和空白对照组,用MTT比色法和流式细胞仪观察EC-9706细胞的生长曲线和细胞周期. 结果 Ad-Rb94组EC-9706细胞在转染后第3天开始生长缓慢,在转染后第5天本组细胞的生长与Ad-lacZ组和空白对照组相比明显受抑制(P<0.05).Ad-Rb94组G1期细胞比空白对照组增加14%～19%,G2期和S期细胞分别减少4%～6%和10%～13%. 结论 腺病毒介导的外源性Rb94基因可有效转染人食管癌细胞,并对其生长有抑制作用.     

BEL7402细胞低剂量辐射后细胞周期和相关蛋白表达的变化

目的 研究低剂量辐射(LDR)对人肝癌细胞(BEL7402)增殖、细胞周期及相关信号蛋白表达的影响,为LDR临床应用提供理论依据.方法 体外培养BEL7402,分为7个实验组:假辐射组(0mGy)、5个LDR组(25,50,75,100,200mGy)及高剂量辐射组(1 Gy).辐射后用细胞计数法及噻唑蓝比色试验(MTT)检测细胞增殖率,用流式细胞术测定细胞周期中G0/G1,S,G2/M期的比例.应用蛋白分析系统分析检测细胞周期及相关信号蛋白共40个蛋白的表达.结果 细胞计数及MTT试验,5个LDR组BELT402细胞增殖率与假辐射组比较差异不显著(P>0.05).流式细胞术试验,5个LDR组BELT402细胞12、24 h G0/G1期细胞比例增高,但与假辐射组比较差异不显著(P>0.05);S期比例降低,与假辐射组比较差异显著(P<0.05);G2/M期比例升高,与假辐射组比较差异显著(P<0.05).48 h后G0/G1,S,G2/M期与假辐射组比较差异不显著(P>0.05).蛋白分析试验LDR后8种蛋白表达降低.结论 LDR对BEL7402细胞增殖无促进作用,但在一定程度抑制增殖及细胞周期相关蛋白的表达.     

131I和高能X线对HER-2高表达乳腺癌细胞BT474杀伤效应的比较

目的比较放射性131I与高能X线对人类表皮生长因子受体-2(HER-2)高表达乳腺癌细胞BT474的杀伤效应,为临床放射免疫治疗(RIT)提供依据。方法采用免疫组化法检测BT474细胞HER-2基因表达。取对数生长期BT474细胞,分别行放射性核素131I培养和高能X线外照射,并按射线吸收剂量分为0、2、4、6、8 Gy 5个亚组,以克隆形成实验分析细胞存活率,根据多靶单击模型绘制细胞存活曲线,计算反映放射敏感性的指标准域剂量(Dq)、平均致死剂量(D0)、2 Gy照射的存活分数(SF2)。结果免疫组化染色显示BT474细胞呈HER-2蛋白高表达。131I和高能X线外照射后BT474细胞的D0分别为1.725、1.786,Dq分别为0.415、-0.762;SF2分别为22.650%、37.922%,差异无统计学意义(P>0.05,t=3.643)。结论放射性核素131I低剂量持续辐射与高能X线外照射对乳腺癌BT474细胞可产生相当的杀伤效应,前者因对正常组织损伤小而更适于RIT。     

TLR4对人乳腺癌细胞MCF-7放射敏感性的影响

目的初步探讨Toll样受体(TLR4)对人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响。方法将体外培养的MCF-7细胞分为假照组和5 Gy照射组,将其各自分为空白对照组、TAK242阻滞组和LPS刺激组,采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性,用Annexin V凋亡试剂盒检测其凋亡率,用流式细胞术观察细胞周期进程的变化,用克隆形成实验计算其细胞存活分数。结果 5 Gy照射后MCF-7细胞的增殖活性明显降低(P<0.05),与对照组相比,TAK242阻滞TLR4后MCF-7细胞增殖活性更加降低(P<0.05),而LPS刺激TLR4后MCF-7细胞增殖活性明显升高(P<0.05)。MCF-7细胞受照后G2/M期细胞显著多于对照组(P<0.01),G0/G1期细胞明显减少(P<0.01),S期细胞变化不明显(P>0.05)。5 Gy照射后MCF-7细胞的凋亡率明显高于假照组(P<0.01),与对照组相比,阻断TLR4后其凋亡率明显升高(P<0.05),而激动TLR4后其凋亡率明显降低(P<0.05)。5 Gy照射后MCF-7细胞的存活分数明显降低(P<0.05),与对照组相比,阻滞TLR4后MCF-7细胞存活分数明显降低(P<0.05),而激动TLR4后MCF-7细胞存活分数显著升高(P<0.05)。结论 TLR4能够增强人乳腺癌MCF-7细胞的辐射敏感性,可致细胞G2期阻滞,但其机制需要进一步探讨。     

人肺腺癌细胞A549的耐药性与放射敏感性的相关性研究

目的 研究肺腺癌细胞株A549及耐药株A549/DDP放射敏感性差异,探讨肺腺癌的耐药性与放射敏感性的关系.方法 对指数生长期的A549、A549/DDP细胞用6 mV直线加速器分成0、1、2、4、6、8、10、12 Gy 8个剂量点进行放射.倒置显微镜观察细胞的形态变化,并根据细胞克隆计数,计算SF2,绘制细胞存活曲线.结果 放疗后两种细胞株的细胞形态发生改变,部分细胞死亡、破碎.A549和A549/DDP细胞株的SF2分别为0.417和0.685.结论 肺腺癌肿瘤细胞产生耐药性后可以使其放射敏感性降低.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肝癌耐药细胞株阿霉素化疗敏感性的影响

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合阿霉素(ADM)处理肝癌耐药细胞株HePG2／ADM对化疗敏感性的影响。方法 通过培养液中ADM的浓度梯度增加法长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株，荧光定量PCR检测多药耐药(MDR)1的表达，TRAIL联合化疗药物ADM处理HePG2／ADM，MTT比色法检测细胞增殖，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测观察HePG2／ADM对化疗药物的敏感性变化。结果 HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，联合TRAIL(100ng／L) ADM(0．1mg／L)后，MTT显示HepG2／ADM细胞的增殖明显抑制，流式细胞术、TUNEL法检测TRAIL联合ADM处理HePG2／ADM细胞诱导的凋亡，与对照组相比，凋亡指数显著增加。结论 MDR1不参与TRAIL耐受。TRAIL可部分逆转HepG2／ADM对ADM的耐药，增加其对化疗药物的敏感性。联合TRAIL和亚毒剂量化疗药物可望克服肿瘤细胞中存在的化疗耐药和TRAIL耐受。     

胰岛素对人食管鳞癌细胞化疗增敏的影响及作用机制

目的 探讨胰岛素对人食管鳞癌细胞株EC9706化疗敏感性的影响及机制.方法 顺铂处理食管鳞癌EC9706细胞,MTT法检测细胞活力,探寻活细胞数量达到平台期的时间T1;加入胰岛素继续培养,探寻活细胞数再次达到平台期的时间T2.用Annexin V-FITC+ PI和MDC进行细胞染色,荧光显微镜下定性观察细胞荧光情况；流式细胞术定量检测细胞凋亡、测定MDC荧光强度.结果 (1)顺铂可以诱导EC9706细胞的自噬和凋亡.(2)胰岛素可以增强顺铂对肿瘤细胞的杀伤.(3)T1平台期细胞凋亡比例低于T2平台期(P＜0.05),但T1平台期细胞MDC平均荧光强度明显高于T2平台期(P＜0.05).结论 在顺铂作用后期,胰岛素通过抑制自噬引起细胞凋亡增加,实现其化疗增敏作用.     

钯配合物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用及机制

目的 探讨钯配合物(PBIPS)对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测PBIPS对MCF-7的细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测MCF-7细胞的凋亡率;Western-blotting检测不同浓度PBIPS作用48 h凋亡蛋白survivin 、caspase-3及bcl-2和bax的表达情况.结果 PBIPS可以时间和剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的生长;与对照组比较,PBIPS不同浓度剂量组AO/EB荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明MCF-7细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P＜0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blotting显示与对照组相比,各实验组PBIPS可显著下调MCF-7细胞survivin和bcl-2的表达(P＜0.01),而caspase-3和bax的表达显著增加(P＜0.01).结论 PBIPS能明显诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、bcl-2、caspase-3及bax的表达有关.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.