MAPK信号通路在复方丹参注射液调节人羊膜上皮细胞AQP3表达中的作用研究

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases, MAPKs）―细胞外信号调节激酶1和2（extracellular signal regulated kinase1/2, ERK1/2）信号转导通路在复方丹参注射液对人足月妊娠羊膜上皮细胞水通道蛋白3（aquaporin 3,AQP3）表达调节中的作用。方法原代培养足月妊娠羊水量正常与羊水过少人羊膜上皮细胞,将人羊膜上皮细胞均分为4组：分别为空白对照组、U0126组、复方丹参注射液组和U0126加复方丹参注射液组。采用免疫印迹技术检测人羊膜上皮细胞中磷酸化ERK1／2（p ERK1／2）和AQP3的表达。结果（1）在羊水量正常和羊水过少人羊膜上皮细胞中,均发现p ERK1/2表达水平在U0126组较空白对照组明显下降（P<0.05）,而复方丹参注射液组可以明显上调p ERK1/2表达水平（P<0.05）,U0126加复方丹参注射液组人羊膜上皮细胞中p ERK1/2表达水平高于U0126组,但低于复方丹参注射液组（P<0.05）。（2）在羊水量正常的人羊膜上皮细胞中,U0126组AQP3的表达与空白对照组比较无明显变化（P>0.05）;复方丹参注射液组和U0126加复方丹参注射液组AQP3的表达水平均高于空白对照组（P<0.05）,但两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。（3）在羊水过少羊膜上皮细胞中,U0126组AQP3的表达较空白对照组下降（P<0.05）;复方丹参注射液组可以明显上调AQP3的表达水平（P<0.05）,而U0126加复方丹参注射液组AQP3的表达水平低于复方丹参注射液组（P<0.05）,但高于U0126组（P<0.05）。结论羊水过少时,复方丹参注射液通过激活MAPK ERK1/2信号转导通路来调节人羊膜上皮细胞中AQP3的表达水平。     

复方丹参注射液对JNK信号通路调节人羊膜上皮细胞AQP3表达的影响

目的探讨复方丹参注射液调节人羊膜上皮细胞中水通道蛋白3（aquaporin 3,AQP3）的表达与c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）信号通路的关系。方法分别取足月妊娠的正常羊水和羊水过少的人羊膜上皮细胞进行原代培养。将培养的正常羊水和羊水过少的人羊膜上皮细胞分别分成4个处理组：空白对照组（A组）、SP600125组（B组）、复方丹参注射液组（C组）和SP600125加复方丹参注射液组（D组）。采用cell counting kit-8（CCK-8）法检测各组细胞的活力,Western blot技术分析人羊膜上皮细胞中总JNK、磷酸化JNK（p-JNK）和AQP3蛋白的表达量。结果（1）在正常羊水及羊水过少人羊膜上皮细胞中：4组细胞活力和总JNK蛋白差异均无统计学意义（P〉0.05）。p-JNK差异有统计学意义（P〈0.05）。与A组比较,p-JNK在B组表达明显下降,而在C组中其表达明显上调（P〈0.05）。且p-JNK在D组中的表达较C组明显下降,但高于A组和B组（P〈0.05）。与A组比较,在正常羊水人羊膜上皮细胞中,C、D组中AQP3表达明显上调（P〈0.05）。但与C组比较,D组AQP3表达差异无统计学意义（P〉0.05）。而在羊水过少人羊膜上皮细胞中,B组中AQP3的表达明显下降（P〈0.05）,而C组中AQP3表达明显上调（P〈0.05）;D组中AQP3表达低于C组（P〈0.05）,但高于B组（P〈0.05）。结论羊水过少时,复方丹参注射液可通过激活JNK信号通路来调节人羊膜上皮细胞中AQP3表达的水平。     

复方丹参注射液对滋养细胞JEG-3氧化应激中核因子NF-κBp65表达的影响

目的观察复方丹参注射液对滋养细胞JEG-3氧化应激中NF-κBp65的表达影响及意义。方法对JEG-3滋养细胞用不同质量浓度（0、1.25、2.50、12.50mg/mL）的复方丹参注射液预处理后,用5mmol/L过氧化氢（H2O2）诱导建立氧化应激模型,检测细胞存活率、细胞内氧化应激水平、细胞裂解液中丙二醛（MDA）的含量及细胞中NF-κBp65的表达。结果与未加丹参组（0mg/mL）比较,经复方丹参注射液（1.25、2.50mg/mL）预处理的滋养细胞H2O2氧化损伤后,细胞存活数明显升高,ROS产生、MDA含量及NF-κBp65表达明显减少,而丹参注射液高质量浓度组（12.50mg/mL）细胞存活数下降,ROS、MDA及NF-κBp65表达均较低浓度组减少。结论低浓度复方丹参注射液对滋养细胞核因子NF-κBp65的表达有抑制作用,可能与其抗氧化作用有关。     

清开灵、复方丹参、黄芪3种注射液抗大鼠脑缺血的比较研究

目的比较清开灵、复方丹参、黄芪注射液抗大鼠急性脑缺血的作用。方法运用线栓法造成大鼠局灶性脑缺血,造模后2h分别腹腔注射3种药物2.5mL/kg,72h后取材,观测指标为梗死体积比、脑水肿比。通过测定加药物血浆的血小板聚集率,比较3种药物对血小板聚集的影响。结果清开灵、复方丹参、黄芪注射液给药组均能有效降低脑梗死体积比,与模型组比较,P<0.05或P<0.01;复方丹参、黄芪注射液组能降低脑水肿比,与模型组比较,P<0.05或P<0.01。3种注射液终浓度为50、25、12.5μL/mL,均能降低血小板的聚集率,其中,黄芪注射液作用强于清开灵、复方丹参注射液。结论清开灵、复方丹参、黄芪注射液均有抗大鼠脑缺血和血小板聚集作用。     

复方丹参注射液加饮水疗法治疗妊娠晚期羊水过少的疗效观察

目的:复方丹参注射液加饮水疗法治疗妊娠晚期羊水过少的疗效探析。方法:选取我院100例妊娠晚期羊水过少患者作为研究对象,分为对照组和观察组,对照组复方丹参注射液治疗,观察组复方丹参注射液联合饮水疗法治疗。结果:对照组行剖宫产比例、早产率、新生儿窒息率均高于观察组;治疗后观察组孕产妇AFI高于对照组,S/D低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:妊娠晚期羊水过少临床治疗中采用复方丹参注射液加饮水疗法能改善妊娠结局,确保产妇及新生儿安全。     

复方丹参注射液对羊水过少孕妇MMPs、TIMPs、炎症因子及宫腔环境的影响

目的探讨复方丹参注射液对孕晚期羊水过少孕妇胎盘组织基质金属蛋白酶(MMPs)、金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)、炎症因子及宫腔环境的影响。方法孕晚期羊水过少孕妇60例随机均分成常规治疗组(n=30)和复方丹参注射液治疗组(n=30),常规治疗组接受常规水化治疗,复方丹参注射液组加用复方丹参注射液30 m L,用药持续至分娩前结束,同时入选30例正常孕妇作为对照组,胎儿娩出后取胎盘组织检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),评估各组治疗前后宫腔环境的改变。结果与对照组比较,常规治疗组MMP-2、MMP-9明显下降,TIMP-2、TIMP-1、IL-6、TNF-α明显升高,复方丹参注射液组MMP-2明显下降,IL-6、TNF-α明显升高;与常规治疗组比较,复方丹参注射液组MMP-2、MMP-9明显升高,TIMP-2、IL-6、TNF-α明显下降;复方丹参注射液组治疗后患者羊水指数(AFI)显著升高,胎儿脐动脉血流收缩期最大血流速率与舒张末期血流速率比值(S/D)、胎儿脉搏指数(PI)显著下降;差异具有统计学意义(P0.05),MPP-2、TIMP-2在常规治疗组及复方丹参注射液组内都有负相关(r=-0.506、-0.669)。结论复方丹参注射液能有效改善孕晚期羊水过少孕妇胎盘组织MMPS/TIMPs系统的失平衡和炎症因子的异常表达,改善宫腔环境。     

醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内水通道蛋白表达的影响

目的:探讨醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为脑出血组(ICH)、生理盐水组(NS)、醒脑静合生脉注射液治疗组(XNJSM)、水蛭素治疗组(HIR),每组10只大鼠。采用自体不凝血注入法复制脑出血模型,造模后6 h,XNJSM组ip醒脑静合生脉注射液2 mL.kg-1+10 mL.kg-1(按1∶5比例混合),1次/d,连续3 d;HIR组给予脑内注入水蛭素10 U(5μL)1次。术后72 h取脑组织,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组化法及免疫印迹(Western blot)法检测各组血肿周围脑组织AQP4的表达。结果:脑出血后72 h脑组织内AQP4阳性细胞及蛋白表达与NS组比较明显增加(P<0.05),XNJSM组、HIR组脑组织病理形态明显改善,脑组织AQP4表达减少,与ICH组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:醒脑静合生脉注射液能够有效抑制大鼠脑出血后AQP4蛋白的表达,减轻脑水肿,对脑出血后脑组织发挥保护作用。     

不同剂量血小板源性生长因子-B及黄芪注射液对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞的影响

目的观察不同剂量的血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、不同剂量的黄芪注射液以及两者合用对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞(RMPs)生长的影响。方法取体外培养第3代大鼠RMPs,饥饿培养24 h后,分为空白组(5.5 mmol/L葡萄糖的低糖DMEM)、对照组(50 mmol/L葡萄糖的高糖DMEM)、不同浓度PDGF-B组(0.25 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL+高糖DMEM)、不同浓度黄芪注射液组(0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL+高糖DMEM)和PDGF-B+不同浓度黄芪注射液组(1.00 ng/mL PDGF-B+0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液+高糖DMEM),培养48 h后,采用CCK8法检测各组RMPs增殖情况,并用免疫荧光法鉴定增殖后的细胞。结果与对照组比较,不同浓度PDGF-B组,2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液组及1.00 ng/mL PDGF-B+2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液各组均能促进体外高糖培养的RMPs增殖,并在一定浓度内呈剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P均0.05);其中1.00 ng/mL PDGF-B组及200 mg/mL黄芪注射液组促增殖作用均优于1.00 ng/mL PDGF-B+200 mg/mL黄芪注射液组(P均0.05)。加药培养后各组细胞表达周细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β),不表达血管性血友病因子(vWF),几乎不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论 PDGF-B及黄芪注射液均对体外高糖培养大鼠RMPs的生长有促进作用,短期内未使RMPs发生变异,单用PDGF-B或黄芪注射液促生长作用优于两者合用。     

丹参注射液对人血清培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 探讨丹参注射液对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者血清培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA FLSs）增殖的影响。方法 常规培养良好的RA FLSs,传代时用10%未灭活人血清（健康人血清和RA患者血清）作用24 h后,加入终浓度为0.4 mg/mL 丹参注射液,继续培养24 h。以10%胎牛血清作对照,光学显微镜观察人血清培养后和丹参注射液作用后的细胞形态变化;采用MTT法分析其增殖变化;流式细胞仪检测其凋亡;提取各组总RNA并逆转录,荧光定量PCR检测Bax mRNA表达。结果 （1） 无论是加入健康人血清还是RA患者血清后,细胞均能贴壁生长。相比而言胎牛血清组细胞背景较为干净,而人血清组细胞密度较胎牛血清组高,细胞形态无明显改变。（2）与胎牛血清组比较, MTT增殖实验显示, 健康人血清组和RA患者血清组的吸光度（OD）值均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）;加终浓度为0.4 mg/mL丹参注射液后,3组不同来源血清作用的细胞均受到不同程度的抑制（OD值显著降低,P<0.05）,且健康人血清组和RA患者血清组与胎牛血清组比较,OD值显著增加,差异有统计学意义（P<0.01）,健康人血清组与RA患者血清组比较,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（3） 与胎牛血清组比较,RA血清组凋亡率明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）;胎牛血清组和RA患者血清组,经0.4 mg/mL丹参作用后,与相应未加丹参组比较,凋亡率均显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）; FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,与胎牛血清组比较,健康人血清组和RA患者血清组的凋亡率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（4） FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,RA血清组和胎牛血清组Bax mRNA表达均增加,差异有统计学意义（P<0.01）; 与胎牛血清组比较,健康人血清组及RA患者血清组,Bax mRNA的表达变化明显,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 （1）虽然健康人血清能更好的利于RA FLSs的生长,但对于特定疾病的细胞生物学研究,如无相应疾病患者血清前提下,胎牛血清更能反映真实结果;（2）丹参注射液可通过促进RA FLSs凋亡而抑制其增殖。     

葛根素联合盐酸丁咯地尔治疗椎基底动脉供血不足性眩晕

目的观察联合使用葛根素注射液和盐酸丁咯地尔注射液及单纯使用复方丹参注射液治疗椎基底动脉供血不足性眩晕的效果。方法将127例患者随机分为2组,治疗组用盐酸丁咯地尔注射液200 mg加入5%葡萄糖液250 mL中并联合使用葛根素注射液500 mL静脉滴注,每日1次。对照组使用复方丹参注射液20 mL加入5%葡萄糖液500 mL中静脉滴注,每日1次。结果治疗组有效率为95.4%,对照组有效率为67.7%,2组比较有显著性差异(P<0.05)。结论葛根素联合盐酸丁咯地尔治疗椎基底动脉供血不足性眩晕的效果明显优于丹参注射液。