驻极体对瘢痕成纤维细胞生长及迁移能力的影响

目的：研究驻极体调控瘢痕成纤维细胞生长和迁移的作用及相关机制。方法：采用常温等离子体放电系统 将聚丙烯薄膜分别制成5 000 V 驻极体（5 000 V 组）和-5 000 V 驻极体（-5 000 V 组）,借助于等效表面电位测 量其电荷储存的稳定性。利用打孔器完整切除兔耳腹侧全层皮肤,并剥离软骨膜形成兔耳瘢痕模型。通过测量瘢 痕组织的增殖指数和CCK-8 实验研究正、负极性驻极体对瘢痕成纤维细胞增殖能力的影响,应用流式细胞仪研究 正、负极性驻极体对瘢痕成纤维细胞生长周期的影响。通过细胞迁移实验研究在静电场环境下生长的瘢痕成纤维 细胞的迁移能力。结果：正、负极性驻极体可提供稳定的静电场作用于瘢痕成纤维细胞。-5 000 V 驻极体不仅可 以促进G1 期细胞增殖,还可以抑制S 期DNA 的合成或缩短其停留时间,加速其进入G2 期,并促进瘢痕成纤维 细胞向伤口迁移。5 000 V 驻极体则通过抑制S 期DNA 的过度合成,抑制瘢痕成纤维细胞的生长与迁移。但驻极 体作用较长时间（4 ～ 6 周）,驻极体可以随着伤口愈合的不同阶段调控瘢痕增生,最终抑制其生长。 结论：电 场可引起瘢痕成纤维细胞的细胞周期发生变化,从而调控细胞的分化与增殖,且正、负极性驻极体对抑制瘢痕的 作用机制各有侧重,2 种不同极性的驻极体有望分别应用于不同时期的瘢痕生长过程,最终抑制病理性瘢痕增生。     

负极性驻极体与5-氟尿嘧啶对大鼠创面愈合的影响

目的:比较不同表面电位的负极性驻极体与5-氟尿嘧啶(5-FU)对大鼠创面愈合的影响。方法:利用电晕充电技术与药剂学方法制备不同表面电位的负极性驻极体贴剂、5-FU贴剂、-2 000 V驻极体5-FU贴剂,借助等温表面电位测量、光学显微镜等手段,研究负极性驻极体贴剂与-2 000 V驻极体5-FU贴剂外静电场的稳定性以及上述三类贴剂对大鼠创面愈合的影响。结果:不同表面电位负极性驻极体贴剂与-2 000 V驻极体5-FU贴剂的等效表面电位随时间增加,均按指数规律衰减,能够给创面提供较为稳定的外静电场;不同表面电位负极性驻极体贴剂对创面愈合具有促进作用,而且等效表面电位越大,创面愈合越快;5-FU对创面愈合具有抑制作用,而将-2 000 V驻极体与5-FU联用可减轻5-FU对创面愈合的抑制作用。结论:负极性驻极体对创面愈合有促进作用,5-FU能延缓创面愈合,若合理利用两者,可以调控创面愈合和抑制增生性瘢痕生长。     

负极性聚丙烯驻极体对糖尿病大鼠皮肤结构的影响

目的:研究负极性驻极体作用在糖尿病大鼠皮肤两侧静电场的稳定性及其对糖尿病大鼠皮肤组织结构的影响,探讨负极性驻极体透皮给药的机制。方法:利用电晕充电技术将聚丙烯薄膜制备成不同表面电位的负极性驻极体,以糖尿病大鼠为模型,借助等温表面电位衰减测量和光学显微镜,研究大鼠皮肤两侧电场的稳定性及驻极体对大鼠皮肤显微结构的影响。结果:-1 500 V驻极体作用糖尿病大鼠24 h,透过糖尿病大鼠皮肤的电位是其初始电位的68%,显示糖尿病大鼠皮肤能处于较稳定的外电场中;糖尿病大鼠皮肤的角质层和全皮随-1 500 V驻极体作用时间的延长而逐渐恢复,表皮层和真皮层细胞排列变得逐渐清晰,但排列仍较为松散,皮下脂肪组织萎缩部分恢复。结论:负极性驻极体能为糖尿病大鼠皮肤两侧提供一定大小的静电场;驻极体产生的静电场可改善糖尿病大鼠皮肤的显微结构,使糖尿病皮肤角质层和真皮层细胞排列疏松,有利于药物透过皮肤。     

大鼠皮肤对驻极体外静电场的影响

目的：研究聚丙烯驻极体透过大鼠皮肤的表面电位衰减情况,探讨大鼠皮肤对驻极体外静电场的影响及静电场对大鼠皮肤的作用机理。为研制优质的驻极体透皮给药贴剂奠定实验基础。方法：利用栅控恒压电晕充电系统将单电极和双裸面聚丙烯薄膜制备成正、负极性的驻极体,借助于等温表面电位衰减测量研究不同极性驻极体透过大鼠皮肤的等效表面电位衰减规律。结果：（1）＋1000V注极的单电极和双裸面聚丙烯驻极体透过大鼠皮肤的表面电位经过48小时保留了其初始值的92．9％和71．3％。（2）-1000V注极的单电极和双裸面聚丙烯驻极体透过大鼠皮肤的表面电位经过48小时后分别衰减了20．7％和18．8％。（3）聚丙烯驻极体透皮电位在72小时内具有和驻极体自身相近的稳定性。结论：（1）单电极和双裸面聚丙烯驻极体均具有优异的电荷储存稳定性。（2）驻极体的表面电位能很好的透过大鼠皮肤．相比双裸面驻极体,单电极驻极体透过大鼠皮肤的表面电位更高、稳定性更好。驻极体作为一种新的物理调控因子和驱动源可用于透皮给药贴剂的研制。     

驻极体5-氟尿嘧啶贴剂药物释放规律的线性回归分析

【摘 要】 目的:采用线性回归方法研究驻极体5-氟尿嘧啶（5-Fu）贴剂的药物释放规律。 方法:利用驻极体实验技术与药剂学方法研制驻极体5-Fu贴剂,采用高效液相色谱仪检测驻极体5-Fu贴剂药物累积释放量,并对相关实验数据进行回归分析,从而将驻极体5-Fu贴剂药物释放规律模型化。 结果:（1）驻极体可以为5-Fu贴剂提供稳恒静电场,该静电场大小与驻极体等效表面电位正相关。（2）驻极体5-Fu贴剂内静电场可改变贴剂黏性,从而实现对5-Fu药物释放量的调控;电场越强,贴剂黏性越小,贴剂累积释药量（Q）越大。（3）驻极体5-Fu贴剂的释药规律满足以下回归方程:V＞0时,Q=（0.003V+13.47）t1/2+0.136 6V1/2+47.574;V=0时,Q=13.767t1/2+48.052;V＜0时,Q=（-0.003 8V+13.471）t1/2+0.162 2（-V）1/2+48.442。 结论:驻极体静电场可对5-Fu贴剂释药量进行调节,其极性和等效表面电位是调控驻极体5-Fu贴剂释药速率的关键因素。     

负极性驻极体5氟尿嘧啶贴剂抑制兔耳增生性瘢痕的生长

目的 :探讨不同干预手段对兔耳增生性瘢痕的生长影响。方法 :负极性驻极体、5-氟尿嘧啶(5-Fu)以及联合负极性驻极体与5-Fu分别作用于兔耳创面,4周后检测瘢痕增生指数,H-E染色和免疫组织化学显色检测转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的平均光密度。结果 :负极性驻极体、负极性驻极体与5-Fu联合均可通过抑制TGF-β的表达抑制Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成;且均可通过影响成纤维细胞的密度、胶原的合成和胶原纤维束的排布,抑制创面形成增生性瘢痕。结论 :负极性驻极体可影响胶原束的排布,且通过抑制TGF-β的表达抑制胶原的合成。驻极体和5-Fu联用作用机制与驻极体类似,但抑制瘢痕形成的效果更佳。     

负极性聚丙烯驻极体美洛昔康贴剂对大鼠皮肤结构的影响

目的:比较负极性聚丙烯驻极体和驻极体美洛昔康贴剂对SD大鼠皮肤结构变化的影响,探讨负极性驻极体美洛昔康贴剂的透皮促渗机制.方法:以美洛昔康为模型药物,利用药剂学方法和栅控恒压电晕充电技术制备负极性驻极体美洛昔康贴剂,通过光镜、扫描电镜观察驻极体及其驻极体美洛昔康贴剂对大鼠皮肤结构的影响.结果:负极性聚丙烯驻极体及其驻极体美洛昔康贴剂具有良好的电荷储存稳定性,在12h内两者的等效表面电位均保持其初始电位的近85%以上;负极性驻极体产生的静电场能使大鼠皮肤角质层脂质分子的定向排列发生改变,并使细胞间隙增宽,毛囊口径扩大;驻极体美洛昔康贴剂作用大鼠皮肤2～4h后,出现皮肤角质层变薄,角质层之间连接松散,角质层外层细胞容易脱落,皮肤表面出现不连续性及裂隙增加、皮肤角质层层状类脂层的排列结构发生改变和毛囊口拓宽等现象.结论:聚丙烯驻极体美洛昔康贴剂产生的恒定静电场能减弱皮肤屏障功能、增加皮肤的通透性和加快药物的渗透速度,聚丙烯驻极体美洛昔康贴剂在透皮给药方面具有广阔的应用前景.     

寨卡病毒调控子宫成纤维细胞先天免疫的机制

目的探讨寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)逃避子宫成纤维细胞先天免疫的分子机制。方法使用ZIKV感染子宫成纤维细胞后,检测YWHAE-RIG-I-MAVS-IFN-β通路关键分子的表达情况。通过实时荧光定量PCR检测YWHAE mRNA的表达情况。通过高通量测序检测ZIKV感染子宫成纤维细胞后的miRNA表达谱。通过荧光素酶报告实验确定调控YWHAE的miRNA。结果 ZIKV感染子宫成纤维细胞后,IFN-β的分泌和IFN-β的启动子活性水平下降(P0.05),YWHAE、p-IRF3S396的表达水平下降,MAVS与RIG-I、RIG-I与YWHAE的相互作用水平下降。但是,YWHAE启动子活性没有显著改变(P0.05),而YWHAE mRNA水平下降(P0.05)。通过高通量测序发现ZIKV感染后子宫成纤维细胞miRNA的表达发生改变。其中hsamiR-15a-5p、hsa-miR-6780b-3p、hsa-miR-6845-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-590-3p、hsa-miR-575、hsa-miR-4674、hsamiR-371a-5p、hsa-miR-4642、hsa-miR-4676-5p的表达差异在5倍以上。子宫成纤维细胞中过表达上述差异miRNA后,miR-545-3p能够降低YWHAE mRNA的表达水平(P0.05)。敲低miR-545-3p后,YWHAE m RNA和蛋白的表达水平上升(P0.05)。此外,miR-545-3p靶向YWHAE的3端非编码区(P0.05)。ZIKV感染子宫成纤维细胞的同时过表达miR-545-3p后,YWHAE mRNA水平显著下降(P0.05)、IFN-β分泌水平显著下降(P0.05)、ZIKV复制水平均显著上升(P0.05);但是,ZIKV感染子宫成纤维细胞的同时敲低miR-545-3p后,YWHAE m RNA水平显著上升(P0.05)、IFN-β分泌水平显著上升(P0.05)、ZIKV复制水平均显著下降(P0.05)。结论 ZIKV通过miR-545-3p靶向YWHAE促进了自身的复制。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的乳兔软骨细胞中p53mRNA表达的影响

目的 探讨在乳兔关节软骨细胞体外培养过程中，成纤维细胞生长因子（bFGF）对p53mRNA表达水平的影响及意义。方法 原代体外培养乳兔关节软骨细胞并传代，实验组加入10ng／ml的bFGF，光镜下观测各代细胞形态学变化，RT—PCR检测各代细胞中p53基因在mRNA水平上的表达。结果光镜观察体外培养的软骨细胞，对照组第4代培养细胞始出现凋亡细胞，bFGF组第7代出现少量凋亡细胞；RT—PCR检测bFGF组p53的目的基因指数（p53吸光光度值，β—actin吸光光度值）明显低于对照组（P〈0．05）。结论 在体外培养的兔关节软骨细胞中bFGF下调p53基因mRNA水平表达。     

Intermedin_(1-53)抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞合成胶原

目的探讨IMD1-53对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原代谢的调节作用。方法培养新生SD大鼠心肌成纤维细胞,将其分成对照组、AngⅡ+不同浓度IMD1-53组。Westem blot法检测心肌成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达。SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测IMD1-53受体样受体(CRLR)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达。结果 IMD1-53呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白(P0.01,P0.05)。IMD1-53呈剂量依赖抑制成纤维细胞TGF-β表达(P0.05)。结论 IMD1-53抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞胶原的合成,下调TGF-β表达,可能与IMD1-53抗心肌纤维化作用有关。     

体外培养人角膜缘上皮细胞抑制激活态角膜基质细胞的生长

背景：角膜受到损伤后,角膜基质细胞激活转变为成纤维细胞,引起角膜基质瘢痕化,导致视力下降甚至丧失。 目的：观察角膜不同部位上皮细胞与角膜基质细胞的相互作用,探索角膜缘上皮细胞群能否抑制激活态角膜基质细胞的生长。 方法：采用酶消化及机械外力相结合的方法获取人角膜中央、角膜旁中央及角膜缘处角膜上皮细胞与浅层角膜基质细胞,进行体外培养。相差显微镜下观察细胞形态及生长变化。待培养角膜上皮细胞与基质细胞发生接触抑制时,记作“0 周”,采用免疫荧光染色技术检测培养细胞中PCNA及p63蛋白的表达。 结果与结论：培养的角膜上皮细胞与成纤维细胞发生接触抑制时,两种细胞间有明显分界线。角膜缘组上皮细胞中PCNA及p63蛋白均有较高的表达;角膜旁中央组PCNA有较高的表达,p63蛋白阴性表达;角膜中央组PCNA表达较低,p63蛋白阴性表达;从鉴定结果中可以得出只有角膜缘组中存在一定比例的角膜缘上皮干细胞。角膜缘组上皮细胞逐渐包围并化解成纤维细胞,在相互作用4周后,成纤维细胞聚集成死细胞团,缺乏角膜缘干细胞的中央组及旁中央组中成纤维细胞生长面积增加,上皮细胞生长受到抑制甚至死亡。说明体外培养的角膜缘上皮细胞群可以抑制激活态角膜基质细胞的生长。     

Surface charge in foreign body carcinogenesis.

The importance of surface charge in foreign body carcinogenesis was evaluated by implanting in C3H/HeJ male mice, bipolar polystyrene thermoelectrets formed in variously charged electrical fields. Charged electrets had tumor rates similar to control groups. The cumulative probability of tumor development was highest in the charged electret group being 0.58 at 133 weeks after implantation. The tumor rate for all charged electrets was 27% as compared to 17% and 6% for the control groups. The latent period of tumor induction varied little between groups and averaged approximately 700 days. No conclusions regarding the tumorigenic effect of electropositive versus electronegative sides of the electret were made although the majority of tumors arose on the electronegative (body) side of the electrets. An occasional tumor (2/25) arose on both sides of a single electret. The antigenicities of tumors tested by excise and challenge techniques were weak. The immunologic relationship between top and bottom growing tumors on a single electret could not be adequately determined because of the weak antigenicity.     

Heat-treated membranes with bioelectricity promote bone regeneration

The barrier membranes maintain a secluded space to prevent the ingrowth of connective tissue and direct the growth of new bone into a desired site; however, they do not stimulate or induce bone regeneration. To enhance the bone bioactivities of membranes, we developed chitosan electret membranes with bioelectricity by grid-controlled constant voltage corona charging. The electret membranes charged with heat treatment (HT electret membranes) exhibited superior electret charge storage stability than the ones charged without heat treatment (RT electret membranes). Human bone marrow stromal cells (hBMSCs) demonstrated better growth on HT electrets membrane. Moreover, hBMSCs osteoblastic differentiation was enhanced on HT electret membranes, as evidenced by osteocalcin and osteopontin expression as assessed by immunocytochemistry, quantitative RT-PCR and western blot analysis. The rabbit calvarial defect model demonstrated that HT electret membranes induced a significantly enhanced bone regeneration compared with RT electret membranes. New bone formation was found at both the periphery and in the center of the defects four weeks after implantation. These results indicated that the chitosan electret membrane has osteogenic potential and could be applied as a novel barrier membrane.     

Nerve growth factor regulation and production by macrophages in osteoarthritic synovium

Nerve growth factor (NGF) functions to modulate osteoarthritis (OA)‐associated pain. Although recent studies suggest that tumour necrosis factor (TNF)‐α and interleukin (IL)‐1β mediate NGF activity in human synovial fibroblasts, the regulation of NGF expression in human synovial macrophages remains unclear. Here, we examined the role of macrophages in the production and regulation of synovial (SYN) NGF in osteoarthritic knee joints by examining the mRNA expression of TNF‐α and IL‐1β in freshly isolated CD14‐positive (macrophage‐rich fraction) and CD14‐negative cells (fibroblast‐rich fraction) in synovial tissue from OA patients by quantitative polymerase chain reaction. We also examined the effects of IL‐1β and TNF‐α on NGF mRNA expression in cultured CD14‐positive (macrophage‐rich fraction) and CD14‐negative cells (fibroblast‐rich fraction). In addition, to examine the contribution of macrophages to NGF, TNF‐α and IL‐1β expression, we injected clodronate liposomes systemically into STR/Ort mice, an osteoarthritis animal model, to deplete macrophages. TNF‐α and IL‐1β mRNA levels in CD14‐positive cells from the SYN of OA patients was significantly higher than that in CD14‐negative cells, while NGF expression did not differ markedly between the two cell fractions. In addition, treatment of human cultured CD14‐positive and ‐negative cells with IL‐1β and TNF‐α enhanced NGF mRNA and protein levels. Expression of NGF, IL‐1β and TNF‐α was also reduced significantly in STR/Ort mice upon macrophage depletion. These findings suggest that IL‐1β and TNF‐α regulate NGF expression and production in synovial macrophages and fibroblasts in osteoarthritic joints.     

负极性静电荷-聚四氟乙烯高分子体膜联合腰椎牵引治疗根性腰痛

背景：负极性静电荷高分子材料、聚四氟乙烯微孔驻极体膜贴于患处表面,可形成高压静电和负静电场,中和患病局部聚集的正电荷。 目的：验证负极性静电荷-聚四氟乙烯高分子体膜联合腰椎牵引治疗根性腰痛的临床效果。 方法：将120例根性腰痛患者随机分为3组：牵引组、负极性静电荷-聚四氟乙烯高分子体膜组(简称体膜组)和结合组。结合组患者联合上述两种方法治疗。治疗1个月后,通过日本矫形外科学会(JOA)评分评估治疗效果。 结果与结论：治疗1个月后3组患者JOA评分为：结合组> 牵引组> 体膜组,差异均有显著性意义(P < 0.05)。结合组患者腰痛改善指数、改善率明显高于与其他两组。提示负极性静电荷-聚四氟乙烯高分子体膜联合腰椎牵引治疗根性腰痛效果好于单纯牵引或负极性静电荷-聚四氟乙烯高分子体膜治疗。