胰岛素受体亚型改变及相关通路活化在糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖中的作用

 目的:探讨胰岛素受体亚型改变及其相关下游通路活化情况在糖尿病小鼠肠上皮细胞异常增殖中的作用。方法:用腹腔注射链脲霉素的方法制作糖尿病小鼠模型,采用增殖细胞核抗原标记法比较糖尿病小鼠及对照组小鼠肠上皮细胞的增殖情况。利用RT-PCR法测定胰岛素受体亚型表达比例在2组中的差异。采用real-time PCR及Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测2组之间胰岛素受体相关通路各分子MEK1/2、ERK1/2、PI3K以及Akt的表达情况。结果:糖尿病组小鼠的小肠上皮细胞增殖指数显著升高(P<0.05),且细胞中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值也明显升高(P<0.05)。糖尿病小鼠肠上皮细胞中MEK1、MEK2和ERK1/2的mRNA水平及磷酸化蛋白水平均高于对照组(P<0.05)。结论:糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖可能与其中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值增高及其相关MEK/ERK通路的激活有关。     

双氢青蒿素通过调控PI3K/AKT通路增强肝癌H22细胞荷瘤小鼠放疗效果

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝细胞癌H22细胞荷瘤小鼠放疗增效的影响。方法:构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型,实验分为模型组、单放疗组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和低、中、高剂量DHA组,每组8只,按照分组进行给药和放疗治疗。隔天测量各组荷瘤小鼠体重和瘤体积,给药结束后鼠尾取血后立刻脱颈处死小鼠。观察DHA对放疗的增效作用和对肿瘤生长的抑制作用,测定淋巴细胞转化程度和自然杀伤(NK)细胞活性,ELISA法检测小鼠血清白细胞介素2(IL-2)和IL-4水平,Western blot法测定小鼠肿瘤组织中PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:成功构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型。与模型组相比,单放疗组肿瘤3倍倍增时间(TGT3)显著升高(P0.05),瘤重、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性、IL-2和IL-4水平、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平均显著降低(P0.05);与单放疗组相比,随着DHA剂量升高,TGT3、增敏系数、抑瘤率、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性及IL-2和IL-4水平随之升高(P0.05),PI3K表达水平和AKT磷酸化水平随之降低(P0.05)。结论:DHA可能通过抑制PI3K/AKT信号通路活性,提高荷瘤小鼠免疫能力,从而增强放疗效果。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路、HIF-1α、ES观察新风胶囊对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的:观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法:将大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组、XFC组。采用免疫组化法检测滑膜微血管密度(MVD)表达,酶联免疫吸附法检测白介素(IL)-6、IL-10、HIF-1α、VEGF-A表达,免疫印迹法检测PI3K、AKT1、p-AKT1、mTOR、ES蛋白在滑膜血管中表达。结果:模型对照组滑膜组织MVD计数升高,血清IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜PI3K、AKT1、p-AKT1、mTOR、ES表达显著升高,血清IL-10表达量降低;治疗后,XFC组MVD呈高计数量,HIF-1α、IL-6、VEGF-A表达降低,滑膜PI3K、p-AKT1、mTOR、ES蛋白表达降低,血清IL-10升高。结论:XFC通过调节PI3K/AKT/mTOR信号通路、HIF-1α、ES表达改善AA滑膜血管新生。     

氧化苦参碱改善高脂诱导ApoE~(-/-)小鼠的胰岛素抵抗

目的:观察氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗小鼠的作用并初步探讨可能机制。方法:Apo E~(-/-)小鼠高脂喂养16周,分为胰岛素抵抗组以及氧化苦参碱25、50、100 mg/kg组,C57BL/6J小鼠设为对照组,每组10只。灌胃给药8周后,进行小鼠葡萄糖耐量实验;测定血清空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)和空腹胰岛素(FINS)的含量;实时荧光定量PCR测定肝组织胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和葡萄糖转运子2(GLUT_2)的mRNA表达;Western blot法测定肝组织GLUT_2、INSR、IRS-2、p-INSR、p-IRS-2、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)和p-AKT的蛋白水平。结果:氧化苦参碱能不同程度降低FBG、TG、TC、FFA和FINS水平,改善胰岛素抵抗;氧化苦参碱组INSR、IRS-2和GLUT_2的mRNA表达比胰岛素抵抗组升高(P0.05),p-INSR/INSR、p-IRS-2/IRS-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和GLUT_2的蛋白水平也升高(P0.05)。结论:氧化苦参碱能通过PI3K/AKT通路,改善高脂诱导小鼠的胰岛素抵抗。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

IL-18对BALBc小鼠结直肠癌肝转移模型PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响

目的 探讨白介素18(IL-18)对BALBc小鼠结直肠癌肝转移模型PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响.方法 选取60只BALBc小鼠,采用随机数字表法将小鼠分为:空白对照组、低、中、高剂量IL-18组,每组15只;除空白对照组外各组采用脾内种植法构建结肠癌肝转移小鼠模型,低剂量、中剂量、高剂量IL-18组分别于构建前或构建后注射(20、40和80μg/kg)的IL-18结合蛋白(IL-18BP);检测各组小鼠转移灶大小、数目、质量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清和腹水中IL-18水平;采用蛋白质印记法及免疫组化检测各组小鼠结直肠癌肝转移组织中E-cadherin、N-cadherin表达;采用蛋白质印记法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达情况.结果 相比空白对照组,低剂量IL-18组小鼠腹水IL-18水平、血清IL-18水平、N-cadherin阳性率、p-AKT蛋白相对表达、PI3K蛋白相对表达水平显著升高,E-cadherin阳性率显著降低(P<0.05),总AKT蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);相比低剂量组,中剂量组小鼠瘤体积、转移灶数量、瘤重、腹水IL-18水平、血清IL-18水平、N-cadherin阳性率、p-AKT蛋白相对表达、PI3K蛋白相对表达水平显著升高且高剂量组上述指标高于中剂量组(P<0.05);相比低剂量组,中剂量组E-cadherin阳性率显著降低,且高剂量组上述指标低于中剂量组(P<0.05),低、中、高白介素18组总AKT蛋白相对表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 IL-18可以通过激活型PI3K/AKT信号通路促进BALBc小鼠结直肠癌的转移及生长.     

有氧运动通过激活PI3K(p110α)/Akt信号通路保护2型糖尿病小鼠心功能

目的:探讨高糖状态下有氧运动对小鼠心功能障碍的作用及相关机制,为糖尿病心功能障碍的运动疗法提供理论和实践依据。方法:将小鼠分成正常非运动组(NNC组)、正常运动组(ENC组)、糖尿病非运动组(NDM组)和糖尿病运动组(EDM组)。实验结束后,评估小鼠的心脏功能,观察心肌组织的病理改变、纤维化情况、ANP的mRNA表达、PI3K(p110α)及Akt的蛋白水平。结果:超声心动图可见糖尿病小鼠心功能降低(P0.05),运动干预后心功能逐渐恢复(P0.05)。HE和Masson染色后光镜下可见NDM组小鼠心肌结构极度紊乱,细胞排列不规整,纤维化程度增加,而EDM组心肌受损程度改善。与NNC组相比,糖尿病小鼠心肌组织中ANP的mRNA表达上调,PI3K(p110α)和Akt的蛋白水平受抑制(P0.05),级联失活。与NDM组相比,EDM组ANP的mRNA降低,PI3K(p110α)和Akt的蛋白水平升高(P0.01)。结论:糖尿病导致小鼠心肌损害,降低心功能;运动干预可能通过激活PI3K(p110α)/Akt信号通路,缓解高糖导致的心功能障碍,保护心肌细胞。     

APS通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察APS是否通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖。方法将神经干细胞,随机分为对照组、APS(5%)组、APS(5%)+LY294002组和LY294002组,用间接免疫荧光法检测Nestin和Brdu;CCK-8检测细胞增殖;Elisa检测VEGF、FLK-1含量;Western blot法检测FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达。结果 APS可以提高LY294002干预后神经干细胞增殖(P0.05),提高VEGF、FLK-1含量(P0.05),提高FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达(P0.05)。结论 APS可能通过促进Akt磷酸化,活化PI3K/AKT信号通路,调节PI3K/AKT信号通路下游靶基因,促进神经干细胞增殖。     

新风胶囊对关节炎模型大鼠PTEN / PI3K / AKT 信号通路及血小板活化的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂关节炎(AA)大鼠PTEN/PI3K/AKT通路及血小板活化的影响。方法:将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、PI3K阻滞剂LY294002(LY294002)组、新风胶囊(XFC)组,每组6只构建AA大鼠模型,每组给药30 d(NC、MC组给予等体积生理盐水),流式细胞术检测血小板微粒标志物,电镜观察血小板超微结构,ELISA法检测血清细胞因子水平,免疫组化、RT-qPCR法检测腹主动脉PDGF,免疫印迹法检测血小板细胞PTEN/PI3K/AKT蛋白变化。结果:电镜观察发现,NC组血小板超微结构完整,胞质α颗粒、线粒体均匀散在分布;MC组血小板结构破坏明显,欠规整,胞质α颗粒、线粒体显著减少;LY294002组血小板细胞外形不规整,少量伪足伸出,胞质可见α颗粒、线粒体分布; XFC组血小板呈椭圆形,状规整,胞质中α颗粒、线粒体较MC组明显增多。与NC组相比,MC组血小板活化物PMPs及血小板参数(PLT、PCT)显著升高(P0.01);血清VEGF、HIF-1α、TNF-α表达明显升高,ES、IL-10表达降低(P0.01);MC组腹主动脉PDGF及PDGF mRNA表达升高(P0.01);血小板细胞PI3K、AKT、p-AKT、BCL-2蛋白表达升高,PTEN、BAD蛋白表达降低(P0.01)。与MC组相比,LY294002组、XFC组PMPs、PLT、PCT、VEGF、HIF-1α、TNF-α、PDGF及血小板细胞PI3K、p-AKT、BCL-2蛋白水平显著降低,血清ES、IL-10水平及PTEN、BAD蛋白升高(P0.05或P0.01)。与LY294002组相比,XFC组血清TNF-α水平降低(P0.05)。结论:新风胶囊通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路平衡改善AA大鼠血小板活化。     

瑞舒伐他汀通过抑制PI3K/AKT信号通路活性缓解小鼠颈动脉粥样硬化

目的探讨瑞舒伐他汀缓解小鼠颈动脉粥样硬化的机制及相关信号通路。方法将75只Apo E-/-小鼠随机分为5组,采取不同的干预措施,分别为对照组、颈动脉粥样硬化模型组、瑞舒伐他汀低剂量组、中剂量组、高剂量组。检测5组小鼠的血脂相关指标;实验结束后,处死小鼠,采用PCR技术,检测各组小鼠颈动脉组织中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的表达差异;采用Western-blot检测颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白、PI3K蛋白、AKT蛋白的表达水平。结果①与模型组相比,3个瑞舒伐他汀治疗组小鼠的TC、TG、LDL-C水平明显下降,HDL-C明显升高(P0.05)。3个治疗组小鼠颈动脉总面积与模型组相比差异无统计学意义(P0.05),但斑块面积显著较小(P0.05),且高剂量组的斑块面积最小。②对照组小鼠颈动脉组织中MMP-2的阳性率较低,模型组的MMP-2的阳性率及染色强度明显较高。低、中、高剂量组的的染色阳性率及染色强度较模型组有明显下降。③模型组小鼠颈动脉组织中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的相对表达量显著最高,低剂量组次之,高剂量组表达水平最低。Western-blot检测结果趋势与RT-PCR一致。④与对照组相比,模型组小鼠颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达量明显升高(P0.05)。与模型组比较,瑞舒伐他汀3个治疗组的小鼠颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达量逐渐下降。结论瑞舒伐他汀可通过抑制PI3K/AKT信号通路活性对颈动脉粥样硬化小鼠发挥保护作用。     

联合抑制PI3K和MEK的活性可协同抑制顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖

目的研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)特异性抑制剂AZD6244对顺铂耐药卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)增殖的影响。方法 (5、10、20、40、80)μmol/L LY294002、(1、2、4、8、16)μmol/L AZD6244单独及联合作用于SKOV3/DDP细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50)及合用指数(CI);根据结果确定联合用药的浓度,将实验分为对照组、LY294002组(5μmol/L)、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY294002 5μmol/L+AZD6244 7μmol/L);作用48 h后,采用MTT法确定细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;平板克隆检测集落形成能力;annexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并测定细胞周期;Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)、AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及激活型caspase-3蛋白的水平。结果 LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP细胞增殖,两药联合作用IC50明显降低,此时CI1,具有协同作用;联合组细胞的生长速度较单独作用组及对照组慢;倍增时间延长;集落形成数减少(P0.01);FCM显示联合组凋亡率增高,阻滞于G1期的细胞增多,S期明显减少(P0.05);Western blot结果显示,AKT、ERK1/2蛋白表达水平在各组间无明显差异(P0.05);LY294002组p-AKT水平降低,p-ERK水平增高;AZD6244组p-ERK水平降低,p-AKT水平增高;联合组p-AKT、p-ERK水平均降低,cyclin D1表达较其余各组低,激活型caspase-3较其余各组高。结论 PI3K抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞生长。     

Nrf2 激动剂EGCG 对糖尿病伤口愈合障碍的治疗作用研究

目的:建立糖尿病及糖尿病伤口愈合障碍动物模型,研究EGCG对糖尿病伤口愈合障碍的治疗作用,探讨相关的免疫学机制和分子生物学机制。方法:腹腔注射STZ,检测空腹血糖,建立糖尿病小鼠模型。高糖高脂饮食长期饲养,使其处于稳定的糖尿病状态。人工制造皮肤创口,动态观察伤口愈合率,建立糖尿病伤口愈合障碍动物模型。期间,按照分组要求,应用EGCG进行药物治疗,根据伤口愈合率研究治疗效果。治疗期满,取创面皮肤进行相关指标检测。应用Western blot技术检测Nrf2、HO-1、NQO1、ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白质相对表达量;免疫组化技术检测3-NT;对各检测指标进行统计学分析,阐述EGCG治疗糖尿病伤口愈合障碍的作用机制。结果:糖尿病组伤口愈合率明显低于正常对照组(P0.01),证明糖尿病伤口愈合障碍建模成功;糖尿病小鼠EGCG治疗组的伤口愈合率明显高于非治疗组(P0.05)。糖尿病组的Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量均低于正常对照组(P0.05);ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白表达量均高于正常对照组(P0.05)。糖尿病小鼠中,EGCG治疗组Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量均高于其非治疗组(P0.05);ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白表达量均低于其非治疗组(P0.05)。免疫组化实验检测3-NT结果显示,糖尿病组3-NT阳性率明显高于Control组,证明糖尿病机体皮肤伤口处于较高水平的氧化应激状态。糖尿病小鼠EGCG治疗组3-NT阳性率明显少于其非治疗组(P0.05)。结论:Nrf2是糖尿病并发症的关键保护性因子;上调机体Nrf2表达可有效减轻糖尿病并发症;EGCG作为Nrf2激动剂具有对抗糖尿病引起的氧化应激、炎症和细胞凋亡的作用,对DNHW有明显的治疗作用。     

脂联素抑制高浓度胰岛素诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的探讨脂联素(APN)是否通过上调AdipoR1/AMPK/PI3K/AKT抑制高浓度胰岛素诱导的大鼠心肌细胞肥大。方法分离新生SD大鼠心肌细胞并连续培养9 d,按干预条件不同将心肌细胞分为4组:对照组(培养基)、模型组(1×10-6mol/L胰岛素)、干预组(1×10-6mol/L胰岛素+7.5mg/L脂联素)和转染组(AdipoR1 siRNA转染后胰岛素+脂联素处理)。48 h后检测各组心肌细胞的平均蛋白含量、3-甲基组氨酸(3-MH)含量及心肌细胞表面积;Western blot检测脂联素受体1(AdipoR1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组心肌细胞平均蛋白含量增多(P0.05)、3-MH含量减少(P0.05)及心肌细胞相对表面积增大(P0.01);与模型组相比,干预组上述变化显著减轻,干预组AdipoR1、AMPK、PI3K和AKT蛋白表达量增加(P0.05)。结论脂联素可通过上调AdipoR1/AMPK/PI3K/AKT抑制高浓度胰岛素诱导的大鼠心肌细胞肥大。     

生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路影响自发性高血压大鼠m TOR和Caspase-3表达

目的研究生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对自发性高血压大鼠mTOR、Caspase-3表达的影响。方法选择自发性高血压清洁级雄性大鼠12只为研究对象,根据随机数字表将患者分为两组,分别为观察组和对照组,适应性喂养3周后,13周龄起,观察组给予皮下注射生长激素释放肽,对照组每日给予注射相同剂量生理盐水,4周后观察两组大鼠尾动脉舒张压,临床生化指标、血清PI3K、AKT、m TOR、Caspase-3表达水平以及心肌细胞凋亡系数之间的差异。结果 4周后,观察组大鼠尾动脉舒张压明显下降,对照组大鼠舒张压之间的差异不存在统计学意义,且随着治疗的延长,观察组大鼠血压明显下降(P0.05);观察组大鼠临床生化指标BUN、Cr、MDA明显下降,SOD水平明显上升(P0.05);观察组大鼠PI3K、AKT、mTOR、Caspase-3明显降低(P0.05);观察组大鼠AI(2.67±0.98)%明显低于对照组(4.01±1.03)%。结论生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,降低大鼠机体氧化应激反应,降低血清PI3K、AKT、m TOR、Caspase-3表达水平,改善大鼠血压。     

奥美拉唑治疗大鼠胃炎中PI3K/AKT通路的变化

目的探讨奥美拉唑对大鼠胃炎的治疗作用,以及其改善大鼠胃部损伤是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来实现。方法将60只成年雄性SD大鼠用幽门螺杆菌(Hp)构建胃炎,并随机分为对照组、胃炎组和治疗组,每组20只。胃炎构建1周后处死大鼠并收集胃部组织,HE染色法检测大鼠胃部炎症情况;凋亡蛋白Caspase 3表达活性使用试剂盒检测;使用Western blot法和Real-Time PCR法检测PI3K、AKT的基因和磷酸化蛋白的表达。结果与对照组相比,HE染色结果显示胃炎组和治疗组中胃组织中腺体减少,胃黏膜损伤,治疗组情况明显优于胃炎组。与对照组相比,胃炎组和治疗组Caspase 3活性明显升高(P<0.05),PI3K和AKT的磷酸化蛋白表达和mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);与胃炎组相比,治疗组中PI3K和AKT的磷酸化蛋白表达和mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论奥美拉唑可能有明显缓解大鼠胃炎的损伤作用,且可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠胃部损伤。     

PI3K/AKT通路在刺五加保护大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤中的作用

目的研究刺五加注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用机制中PI3K/AKT信号通路的作用。方法取Wistar大鼠幼鼠心室肌细胞进行体外培养,缺氧及复氧各3h建立缺血再灌注损伤细胞模型。培养的心肌细胞分成:正常对照组(Co),缺血再灌注组(I/R),I/R+复方刺五加注射液组(Pi)和I/R+复方刺五加注射液+LY294002(Pi+Ly)。采用免疫细胞化学染色法和Western-bloting检测细胞内P-AKT蛋白含量。结果免疫细胞化学染色法及Western-bloting结果均显示,IR组P-AKT蛋白表达水平明显高于正常对照组;实验组(Pi)与其他各组(IR、Pi+Ly)比较,实验组(Pi)P-AKT蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论刺五加注射液减轻心肌缺血再灌注损伤可能与其激活PI3K/AKT信号通路有关。     

CaSR在oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移中的作用

目的:探讨钙敏感受体(calcium-sensing receptor,Ca SR)在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及迁移中的作用及信号机制。方法:Brd U掺入法检测细胞增殖;伤口愈合实验及Transwell迁移分析检测细胞迁移情况;Western blot方法检测Ca SR、PCNA、ERK MAPK通路及PI3K/AKT通路的蛋白表达。结果:(1)小剂量(10 mg/L)ox LDL作用A7r5细胞24 h促进细胞的增殖和迁移;(2)ox LDL增加A7r5细胞的Ca SR表达;(3)Ca SR拮抗剂NPS2390抑制了ox LDL的作用,而激动剂Gd Cl_3进一步增强了ox LDL的作用;(4)ox LDL可促进p-AKT、pERK蛋白表达;(5)PI3K/AKT通路抑制剂LY294002、ERK MAPK通路抑制剂PD98059能够抑制ox LDL诱导的细胞增殖和迁移效应;(6)NPS2390抑制了ox LDL诱导的p-AKT和p-ERK蛋白表达,而Gd Cl_3作用相反。结论:(1)ox LDL诱导A7r5细胞增殖及迁移效应;(2)Ca SR参与ox LDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用;(3)Ca SR通过活化PI3K/AKT通路及ERK MAPK信号通路参与ox LDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用。     

MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭

目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/AKT）通路的作用。 方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物（mimics）组和negative-mimics组（miR-NC）以及antago miR-145组（抑制剂组）和antago miR control 组（antago-NC）,采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3K/AKT通路的影响。此外,采用细胞外调节蛋白激酶（ERK）及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变。 结果 miR-145 mimics组穿过细胞数（90.67±10.33）明显少于miR-NC组（175.33±23.67）,miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数（153.33±22.33）少于miR-NC组 (77.33±13.67）,P<0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组（P<0.05）,结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90%、78%以及73%的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115%、125%以及129%,而当抑制MAPK通路及PI3K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降。 结论 miR-145通过MAPK和PI3K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭。     

人参二醇组皂苷对再生障碍性贫血小鼠造血组织MAPK/ERK信号通路的诱导作用

目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对免疫介导型再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路蛋白激酶及脾脏调节性T细胞的诱导作用,探讨其治疗再障的作用机制。方法:用[60Co]-γ射线5.0 Gy全身照射BALB/c小鼠,后经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液,制备免疫介导型再障小鼠模型。60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,PDS低、中、高剂量组,环孢素组。不同浓度药物灌胃治疗14 d测定各组小鼠外周血象,观察骨髓病理切片,Western blot法及免疫组织化学法测定骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平,流式细胞术检测脾脏调节性T细胞比例。结果:再障小鼠外周血全血细胞减少,骨髓呈抑制状态;PDS治疗能够显著升高再障小鼠外周血象,增加脾脏调节性T细胞比例,呈剂量依赖性(P0.05)。PDS中、高剂量组显著上调骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(P0.05)。结论:PDS能有效促进造血,上调再障模型小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路多种蛋白激酶的表达,可能是PDS促进骨髓造血功能恢复的作用机制之一。另外,PDS对再障模型小鼠的免疫功能有一定的调节作用。     

槲皮素对大鼠肾小管上皮细胞增殖、线粒体功能的影响及其机制研究

目的:探讨槲皮素对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)增殖、线粒体功能的影响及PI3K/AKT通路的调控作用。方法:体外培养NRK-52E细胞,将其分为空白对照组(N组)、0.4mmol/L尿酸组(U组)、0.4mmol/L尿酸+15mg/L槲皮素组(Q组),每组设6个复孔。培养24h后,倒置显微镜观察细胞的形态,MTT法测定各组细胞的增殖率,荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况,JC-1染色法于荧光显微镜下观察线粒体膜电位变化,Western blot检测磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白的表达。结果:与N组相比,U组NRK-52E细胞的增殖率下降(P0.01),Q组的增殖率较U组明显上升(P0.05)。与U组相比,Q组细胞ROS生成减少(P0.01),线粒体膜电位增加(P0.01)。与U组相比,Q组AKT磷酸化水平增加,PI3K、AKT、mTOR的表达亦增加(P0.01)。结论:槲皮素对尿酸致NRK-52E细胞凋亡有保护作用,其保护作用可能是通过PI3K/AKT信号途径改善线粒体功能,从而减少细胞凋亡,促进细胞增殖来实现的。