Effects of taurine on L-type voltage-dependent Ca~(2 ) channel in rat cardiomyocytes infected with coxsackievirus B_3

目的：观察牛磺酸对正常和感染柯萨奇Ｂ３病毒大鼠心肌细胞Ｌ型钙通道的影响．方法：用膜片箝技术记录经Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流．结果：正常心肌细胞Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流密度为４１±０８ｐＡ／ｐＦ，柯萨奇Ｂ３病毒感染后Ｃａ２＋电流密度增加到４９±１４ｐＡ／ｐＦ．牛磺酸１６ｍｍｏｌ·Ｌ－１不仅使正常心肌细胞Ｌ型钙通道的Ｃａ２＋电流密度降为３５±０５ｐＡ／ｐＦ，也使感染柯萨奇Ｂ３病毒后心肌细胞的Ｃａ２＋电流密度降为３８±０８ｐＡ／ｐＦ．柯萨奇Ｂ３病毒感染使引起最大Ｃａ２＋电流的膜电压（Ｖｐ）由８±８ｍＶ减为５±３ｍＶ，牛磺酸可使降低的Ｖｐ恢复到８±４ｍＶ．结论：牛磺酸抑制柯萨奇Ｂ３病毒感染引起的Ｃａ２＋电流的增加，并使因感染而降低的引起最大Ｃａ２＋电流的膜电压正常化．牛磺酸对Ｌ型钙通道的影响是牛磺酸减轻病毒感染引起的细胞内Ｃａ２＋增加和异常电活动的机制之一．     

地塞米松对感染柯萨奇B-2病毒的人胚心肌细胞的保护作用

目的从细胞水平观察地塞米松对感染柯萨奇(CoxB_2)病毒的人胚心肌细胞的作用,从而对病毒性心肌炎患者应用激素治疗的问题作出评价。方法采用培养的人胚心肌细胞接种CoxB_2病毒,观察细胞生长、搏动情况及超微结构,测定心肌细胞释放的LDH活性。结果地塞米松治疗组的心肌细胞搏动较感染组者维持时间长,心肌细胞病变发展亦较缓慢,且LDH值明显低于感染组。结论地塞米松对感染CoxB_2病毒的人胚心肌细胞有明显的保护作用,提示临床上重症病毒性心肌炎,特别是早期阶段,应用激素有一定的治疗意义     

链球菌感染对病毒性心肌炎预后的影响

病毒性心肌炎是小儿心血管疾病的常见病，柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）检测多为阳性，称为ＣＶＢ性心肌炎。对ＣＶＢ性心肌炎的特征已有较多的文献报道［１～５］。在临床上也常发现高抗链球菌溶血素Ｏ（抗“Ｏ”）滴定度的ＣＶＢ性心肌炎患儿，但对ＣＶＢ与链球菌感染同时存在时对心肌炎病程的影响以及免疫学特征方面的报道较少。笔者对一组病毒性心肌炎患儿依据ＣＶＢ及抗“Ｏ”检测结果，分组观察了ＣＶＢ性心肌炎合并链球菌感染时的免疫状态和对临床的影响，旨在进一步认识心肌炎。１ 资料和方法１．１ 病例资料 ３３例均为１９８８－０１…     

地塞米松对感染柯萨奇B—2病毒的人胚心肌细胞的保护作用

目的：从细胞水平观察地塞米松对感染柯萨奇（CoxB-2)病毒的人胚心肌细胞的作用，从而对病毒性心肌炎患应用激素治疗的问题作出评价。方法：采用培养的人胚心肌细胞接种CoxB-2病毒，观察细胞生长、博动情况及超微结构，测定心肌细胞释放的LDH活性。结果：地塞米松治疗组的心肌细胞博动较感染组维持时间长，心肌细胞病变发展亦较缓慢，且LDH值明显低于感染组。结论：地塞米松对感染CoxB-2病毒的人胚心肌细胞有明显的保护作用，提示临床上重症病毒性心肌炎，特别是早期阶段，应用激素有一定的治疗意义。     

参麦注射液对感染柯萨奇B3病毒心肌细胞的影响

目的在细胞水平探讨参麦注射液（SMI）对实验性病毒性心肌炎的治疗作用。方法采用原代培养的SD大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒（CVB3）造成实验性病毒性心肌炎细胞模型;设立正常对照组、模型组、SMI高剂量（10g／L）组、SMI中剂量（5g／L）组及SMI低剂量（2．5g／L）组,观察心肌细胞感染CVB,后第3天和第5天的搏动频率、细胞病变、细胞超微结构、上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性和CVB,滴度。结果感染CVB,后心肌细胞的搏动频率明显减慢;第5天模型组有半数细胞搏动停止,细胞病变明显,线粒体肿胀且形态不完整,内质网扩张,部分肌原纤维损坏,上清液中LDH的活性显著升高;SMI各剂量组心肌细胞均维持搏动,且高剂量组细胞病变程度、LDH活性和CVB,滴度均明显低于模型组,除部分肌原纤维损坏外,线粒体形态完整,内质网未见扩张。结论SMI对感染CVB,的培养心肌细胞搏动功能具有保护作用,并能降低心肌细胞上清液中CVB3滴度和减轻CVB,对心肌细胞的损伤。     

大黄醇提液对培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒的影响

目的探讨大黄醇提液对由柯萨奇B3病毒感染的大鼠心肌细胞的保护作用,为该药的临床应用提供理论依据.方法取新生SD乳鼠心室肌制备搏动心肌细胞,48 h后接种柯萨奇B3病毒做为实验性病毒性心肌炎模型.结果表明大黄醇提液使感染柯萨奇B3病毒心肌细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)(P＜0.05)的释放降低,对搏动停止、细胞病变(CPE)均有恢复作用,并使损伤细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性得到恢复.结论大黄醇提液具有保护心肌细胞的作用.     

高山红景天多糖对病毒感染小鼠心肌细胞的抑制作用

目的：观察高山红景天多糖对柯萨奇Ｂ２病毒感染ＳＤ大鼠心肌细胞的抑制作用，方法：采用原代培养乳鼠心肌细胞的方法，建立实验性病毒性心肌炎模型。结果：高山红景天多糖能明显的抑制休外培养心肌细胞在受到柯萨奇Ｂ３病毒感染后导致的心肌酶释放显著降低病毒在心肌细胞中的增殖量；其半数有效抑制浓度为１５０ｍｇ．Ｌ＾－１，有效浓度平均抑制率为７１．３％，结论：高山红景天多糖对ＳＤ大鼠心肌细胞内增殖的柯萨奇Ｂ３病毒具有     

大黄醇提液对培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒的影响

目的:探讨大黄醇提液对由柯萨奇B3病毒感染的大鼠心肌细胞的保护作用,为该药的临床应用提供理论依据。方法:取新生SD乳鼠心室肌制备搏动心肌细胞,48h后接种柯萨奇B3病毒做为实验性病毒性心肌炎模型。结果:表明大黄醇提液使感染柯萨奇B3病毒心肌细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)(P＜0.05)的释放降低,对搏动停止、细胞病变(CPE)均有恢复作用,并使损伤细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性得到恢复。结论:大黄醇提液具有保护心肌细胞的作用。     

高山红景天多糖对病毒感染大鼠心肌细胞的抑制作用

目的：观察高山红景天多糖对柯萨奇Ｂ３病毒感染ＳＤ大鼠心肌细胞的抑制作用。方法：采用原代培养乳鼠心肌细胞的方法，建立实验性病毒性心肌炎模型。结果：高山红景天多糖能明显的抑制体外培养心肌细胞在受到柯萨奇Ｂ３病毒感染后导致的心肌酶释放；显著降低病毒在心肌细胞中的增殖量；其半数有效抑制浓度为１５０ｍｇ·Ｌ－１；有效浓度平均抑制率为７１．３％。结论：高山红景天多糖对在ＳＤ大鼠心肌细胞内增殖的柯萨奇Ｂ３病毒具有一定的抑制作用。     

小柴胡汤对体外感染柯萨奇病毒心肌细胞琥珀酸脱氢酶的影响

为探讨小柴胡汤对病毒性心肌炎的治疗作用,以体外培养的新生大鼠心肌细胞感染柯萨奇病毒B3(CVB3)作为病毒性心肌炎模型,用酶组织化学方法及图像分析观测心肌细胞感染CVB348h后琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性,并观察小柴胡汤治疗后的影响。结果表明,CVB3感染心肌细胞48h,SDH活性明显下降;经小柴胡汤治疗后,SDH活性接近正常水平。结论:小柴胡汤具有抗柯萨奇病毒感染和保护心肌细胞作用。     

牛磺酸对感染柯萨奇B3病毒大鼠心肌细胞L型电压依赖性钙通道的影响

AIM: To study the effects of taurine on L-type voltage-dependent Ca2+ channel (VDCC) in adult rat cardiomyocytes infected with coxsackievirus B3 (CVB3). METHODS: Whole-cell Ca2+ current of L-type VDCC was obtained by patch-clamp techniques. RESULTS: The density of L-type Ca2+ current was 4.1 +/- 0.8 pA/pF in normal cardiomyocytes, but increased to 4.9 +/- 1.4 pA/pF with CVB3 infection. At 16 mmol.L-1, taurine decreased the density to 3.5 +/- 0.5 pA/pF in normal cardiomyocytes, and to 3.8 +/- 0.8 pA/pF in CVB3-infected cardiomyocytes. In addition, CVB3 shifted the membrane potential depolarizing to peak current (Vp) from 8 +/- 8 mV to 5 +/- 3 mV which could also be reverted to 8 +/- 4 mV by taurine. CONCLUSION: Taurine inhibited the increase of Ca2+ inflow through L-type VDCC and normalized the decreased Vp induced by CVB3 infection. The effect of taurine on L-type VDCC was the mechanism of taurine attenuating the intracellular Ca2+ accumulation and abnormal electric activities induced by CVB3 infection.     

黄芪三萜皂苷对CVB3病毒所致细胞凋亡的保护作用

目的 应用分子生物学技术探讨黄芪三萜皂苷(total extract of astragalus,TEA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)致细胞凋亡的保护作用.方法 利用CVB3感染Vero细胞建立细胞凋亡模型并使用TEA对模型进行治疗,检测DNA Ladder以了解凋亡细胞DNA断裂情况;通过TUNNEL标记法、Annexin-V/PI染色、Hoechst33258染色观察细胞凋亡程度,比较各组间细胞凋亡的差异.结果 CVB3感染后,Vero细胞DNA的紫外成像呈现阶梯状条带,TEA组可观察到DNA断裂程度降低;TUNNEL检测可看到凋亡存在,病毒组显色较深,细胞凋亡程度较TEA组严重;Annexin-V/PI染色可见病毒组Vero细胞膜呈绿色荧光,细胞核显红色,核凝聚及裂解,并有凋亡小体存在,TEA组细胞状态改善;Hoechst33258染色结果表明,病毒组Vero细胞核显蓝色荧光,可看到凋亡中期核染色质凝聚、边缘化及晚期凋亡小体的典型变化.TEA组细胞状态改善,凋亡细胞数目减少.正常细胞对照组的细胞贴壁状态良好.流式细胞仪检测结果表明,黄芪三萜皂苷能够显著的降低试验组Vero细胞的凋亡率.结论 TEA对CVB3病毒感染的Vero细胞具有一定的保护作用,抑制细胞凋亡,其作用机制尚需做进一步探讨.     

槐果碱对感染CVB3搏动心肌细胞的保护作用

目的：应用柯萨奇病毒B3(CVB3)感染SD大鼠乳鼠心肌细胞造成病毒性心肌炎模型,观察槐果碱对该模型的作用。方法：(1)将乳鼠心肌细胞分成4组：感染组,感染CVB3；治疗组,感染病毒后加入100mg·L~(-1)的槐果碱；同时设立药物对照组和细胞对照组。在处理的d 2,3,5观察各组细胞病变效应(CPE)、细胞搏动频率并测定细胞上清液中乳酸脱氢酶浓度。(2)将心肌细胞感染CVB3后加入不同浓度的槐果碱(12．5～400mg·L~(-1)),设立病毒、细胞及药物对照。在处理后d 2,3,5观察CPE并测定细胞上清中的乳酸脱氢酶(LDH)浓度。结果：(1)100mg·L~(-1)的槐果碱对感染CVB3的乳鼠心肌细胞有保护作用,治疗组的CPE较感染组减轻,上清液中的LDH浓度降低。(2)槐果碱在12．5～300mg·L~(-1)之间均对感染CVB3的乳鼠心肌细胞有保护作用,它可以减轻病毒导致的CPE,并减少LDH释放。在400mg·L~(-1)反而会加重CPE,增加LDH释放。结论：一定浓度的槐果碱在体外对感染CVB3的心肌细胞有保护作用。     

西罗莫司对CVB3感染大鼠心肌成纤维细胞增殖及mTOR表达的影响

目的:观察西罗莫司(又名雷帕霉素,Rap)对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的心肌成纤维细胞增殖及哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白表达的影响。方法:SD大鼠心肌成纤维细胞分对照组、CVB3组、Rap组及CVB3+Rap组,用重复感染率(MOI)为0.5噬斑形成单位(PFU)/cell的CVB3诱导心肌成纤维细胞,采用四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,RT-PCR及Western Blot分别检测其mTOR mRNA表达及mTOR蛋白表达。结果:MTT法测得对照组、CVB3组、Rap组及CVB3+Rap组的D值分别为0.55±s 0.09、0.66±0.09,0.42±0.09、0.36±0.12,CVB3组高于对照组,Rap组和CVB3+Rap组均低于对照组及CVB3组(P<0.05)。用RT-PCR检测上述4组的mTOR mRNA表达,mTOR/β-actin光密度比值分别为0.25±0.09、0.87±0.15、0.19±0.04、0.22±0.06,CVB3组高于对照组(P<0.05),Rap组和CVB3+Rap组低于对照组及CVB3组(P<0.05)。Western Blot显示mTOR蛋白表达结果与RT- PCR结果相符。结论:Rap可抑制CVB3病毒诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及mTOR表达,Rap抑制细胞增殖可能是通过mTOR信号途径起作用的。     

黄芪三萜皂苷对CVB3诱导病毒性心肌炎的保护作用研究

目的：研究黄芪三萜皂苷（Astragalus saponins,AST）对CVB3病毒诱导病毒性心肌炎的保护作用及机制。方法：利用CVB3病毒、原代心肌细胞及小鼠构建病毒性心肌炎模型并使用AST进行干预,在实验过程中记录小鼠的生存率和体质量变化,体外超声评价小鼠的心脏功能及检测心肌蛋白中LDH和CK-MB水平。心肌组织天狼星红染色评价纤维化水平及TUNNEL染色检测心肌凋亡情况。Western Blot检测心肌蛋白中Caspase-3和Fas表达情况以研究AST保护病毒性心肌炎的机制。结果：AST能够显著增加CVB3注射后的小鼠生存率、缓解CVB3诱导小鼠的体质量减轻。体外超声结果显示,AST能够显著改善CVB3诱导小鼠心脏的收缩功能障碍。CBV3诱导组小鼠心肌蛋白中LDH和CM-KB水平较正常小鼠显著增加,而AST对此有显著的抑制作用。心肌组织病理染色结果显示,AST对CVB3诱导的心肌扩张和纤维化具有显著的保护作用。CVB3诱导组小鼠心肌组织的凋亡水平显著高于正常小鼠,而AST对此有显著的抑制作用。在CVB3感染的心肌组织中,Caspase-3和Fas表达水平显著的升高,而AST能够显著的抑制CVB3诱导的二者在心肌组织中的表达。结论：AST通过提高小鼠的生存率、抑制心肌扩张、心肌组织纤维化和心肌细胞凋亡对CVB3诱导的病毒性心肌炎具有显著的保护作用,这种作用可能与抑制CVB3诱导的Caspase-3和Fas在心肌组织中表达有关。     

牛磺酸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的观察牛磺酸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion，RIR）的影响及其作用机制。方法将120只大鼠随机分为3组：对照组、缺血组、保护组，采用前房灌注液体形成14．63kPa高眼压1h的方法，建立RIR模型，连续3d，2次／d，腹腔注射10％的牛磺酸，剂量为100mg／kg，于手术前30min加注1次。对照组给予同等剂量的生理盐水。两组缺血60min后，分别再灌注0、2、6、12、24、48、72h用比色法进行视网膜SOD、MDA、NO的测定；用光镜测量包埋切片的平均视网膜内层厚度（meanthicknessofinnerretinallayer，MTIRL）。结果牛磺酸能显著对抗大鼠视网膜缺血再灌注后MDA和NO水平的升高，同时能改善平均视网膜内层厚度的变化，但对SOD的作用不确定。结论牛磺酸可减轻大鼠视网膜缺血再灌注后的损伤。     

维拉帕米对CVB_3感染心肌细胞Ca~(2+)内流及CVB_3-RNA含量的影响

观察了维拉帕米(Verapamil,Ver)对感染柯萨奇B_3病毒(CVB_3)的大鼠培养心肌细胞Ca~(2+)内流及CVB_3-RNA复制的影响。结果发现在感染48h后,Ver对感染细胞及正常对照的Ca~(2+)内流均有显著的抑制作用(P<0.01);若在病毒感染同时加入Ver,经48h培养后,细胞中CVB_3-RNA含量显著高于病毒对照组(P<0.05)。提示钙拮抗剂(如Ver)可减少病毒感染引起的心肌Ca~(2+)内流增加,有可能减轻感染细胞的继发性Ca~(2+)损伤;但Ver会促进病毒RNA的复制,提示在急性病毒性心肌炎临床上用Ver治疗心律失常时宜慎重。     

The comparison of α-bromo-4-chlorocinnamaldehyde and cinnamaldehyde on coxsackie virus B3-induced myocarditis and their mechanisms

Early experiments showed cinnamaldehyde had obvious therapeutic effect on viral myocarditis, but cinnamaldehyde was unstable in vivo. To overcome this limitation, we used cinnamaldehyde as a lead compound to synthesize α-bromo-4-chlorocinnamaldehyde (BCC). In the present study, we compared the therapeutic effects of BCC with cinnamaldehyde on coxsackie virus B3 (CVB3)-induced viral myocarditis (VMC), as well as investigated the possible mechanism. The antiviral and cytotoxic effects in vitro were evaluated on HeLa cells infected by CVB3 and rat cardiomyocytes respectively. Our results showed that IC50 were 0.78±0.13 μM and 48.16±5.79 μM in BCC and cinnamaldehyde-treated cells. 50% toxic concentration (TC) in BCC-treated cells was 22-fold higher than in the cinnamaldehyde group. In vivo BALB/c mice were infected with CVB3 for establishing VMC models. The results demonstrated that BCC reduced the viral titers and cardiac pathological changes in a dose-dependent manner. Myocardial virus titers were significantly lower in the 50 mg/kg BCC-treated group than in cinnamaldehyde groups. In addition, BCC could significantly inhibit the replication of CVB3 mRNA and the secretion of inflammatory cytokines TNF-α, IL-β and IL-6 in CVB3-infected cardiomyocytes. We further observed that BCC suppressed CVB3-induced NF-κB activation, IκB-α degradation and phosphorylation in a concentration-dependent manner, and reduced Toll like receptor (TLR) 4 protein level in hearts. These results suggest that BCC had a promising therapeutic effect on VMC with a highly significant favorable effects and less toxicity than cinnamaldehyde. Furthermore, the effect of BCC on VMC might be through inhibition of inflammatory signaling.     

Astragaloside IV exerts antiviral effects against coxsackievirus B3 by upregulating interferon-gamma

Coxsackievirus B3 (CVB3) is a major pathogen for viral myocarditis and dilated cardiomyopathy in children and young adults. The aim of this study was to determine the antiviral effects of astragaloside IV against CVB3, and the underlying mechanism. First, we evaluated antiviral effects of astragaloside IV in vitro by measuring the virus titers of CVB3 in primarily cultured myocardial cells infected with CVB3, and in vivo by assessing the morbidity, mortality, heart-to-body weight ratio (HW/BW), and virus titers in BALB/c mice infected with CVB3. Then, we performed serum pharmacological experiments by testing the effect of sera from SD rats treated with astragaloside IV on proliferation of CVB3 in primarily cultured myocardial cells. Finally, we determined the effect of astragaloside IV on IFN-gamma mRNA expression in the hearts of infected BALB/c mice. We observed that astragaloside IV decreased virus titers of CVB3 in primarily cultured myocardial cells. Morbidity, mortality, HW/BW, and virus titers all decreased, and necrosis and mononuclear cell infiltration were alleviated in CVB3-infected mice treated with astragaloside IV, compared with those infected mice without the treatment. In addition, proliferation of CVB3 was inhibited by the sera of rats treated with astragaloside IV. Moreover, we observed that IFN-gamma mRNA expression was increased in mice treated with astragaloside IV. Therefore, we conclude that astragaloside IV exerts antiviral effects against CVB3 by upregulating expression of IFN-gamma mRNA.     

益心康对体外心肌细胞感染柯萨奇病毒B_3影响的实验研究

目的观察益心康对体外心肌细胞感染柯萨奇病毒B3的影响。方法益心康药液作用于乳鼠心肌细胞,观察心肌细胞的搏动、形态及酶学水平的变化。结果利巴韦林组(C组)CK-MB、LDH、AST水平低于病毒感染组(B组),P<0.01。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)细胞中的CK-MB、LDH、AST水平明显低于B组,同时低于C组。D组、E组的酶学水平与B组比较,P<0.01;与C组比较,P<0.05;D组、E组之间比较,P>0.05。结论益心康对柯萨奇病毒感染的心肌细胞具有保护作用。