磷脂酶Cγ的分子生物学研究进展

磷脂酶Cγ(PLCγ)是磷脂酶C(PLC)的一种,而磷脂酶C又是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶,在机体内分布极为广泛.许多细胞外因子,如细胞表面抗原、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以借助PLC的生化途径激活磷脂酰肌醇特异性途径作用于细胞,调控细胞代谢.PLCγ在B淋巴细胞的整个发育过程以及在其他生命活动中都起着重要的作用.     

NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

目的研究一氧化氮(NO)介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位(ΔΨm)和心磷脂(CL)含量变化的特点。方法以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松(DEX)作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白V(annexinVmAb)和碘化丙啶(PI)染色后,用流式细胞术(FCM)检测细胞磷脂酰丝氨酸(PS)外翻;用3,3’-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6(3)]和PE-anti-annexinVmAb检测凋亡中ΔΨm变化;用壬基吖啶橙(NAO)和PE-anti-annexinVmAb检测凋亡中线粒体CL变化。结果SNAP作用后6h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexinV阳性的细胞出现皱缩。DEX组ΔΨm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组(P<0.01);而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各组中约40%~50%的DiOC6(3)阴性细胞同正常细胞的大小。SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组(P<0.01),未见CL含量降低且未凋亡的细胞群。空白对照组和SNAP组中分别有(48.32±3.96)%、(43.64±4.90)%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞。结论NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩。同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂BKM120抑制U251神经胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂BKM120对U251神经胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法用(1、5、20)μmol/L BKM120处理U251细胞48 h后,采用CCK-8法检测BKM120对U251细胞增殖的影响,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果 BKM120能抑制U251神经胶质瘤细胞的增殖并呈一定的浓度依赖性,最大抑制率为78.3%。BKM120处理可引起U251细胞凋亡。Western blot结果显示BKM120处理可引起Bax蛋白水平增加,同时Bcl-2蛋白水平降低。结论BKM120能抑制U251细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

Gas6经PI3K/Akt通路对缺氧复氧诱导 H9c2细胞凋亡的影响

目的: 观察外源性重组人生长停滞特异性蛋白6(Gas6)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞系凋亡的影响,并初步探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系。方法: 对体外培养的H9c2细胞进行缺氧复氧(3 h/3 h),模拟大鼠心肌缺血再灌注模型,将细胞随机分为4组:正常对照组(control组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+ Gas6预处理组(A/R+Gas6组)及缺氧/复氧+ Gas6预处理+PI3K/Akt特异性阻断剂LY294002干预组(A/R+Gas6+LY294002组)。分别采用MTT法检测心肌细胞活力,生化法检测细胞中caspase-3活性水平,Annexin V/PI 双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western免疫印迹法检测胞内磷酸化Akt(p-Akt)蛋白含量表达情况。结果: A/R组较control组细胞活力下降,caspase-3活性、凋亡率及p-Akt水平均较control组增加(P<0.05)。但经Gas6预处理后,细胞活力及p-Akt表达水平较A/R组显著增加,caspase-3活性、凋亡率均减少(P<0.05),而Gas6的这些作用能被PI3K/Akt阻断剂抑制。结论: Gas6能减少缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡,此作用机制可能是通过提高Akt磷酸化水平而激活PI3K/Akt通路实现的。     

磷脂信使与细胞凋亡

近年来，磷脂类信号分子如磷脂酸，溶血磷脂酸，神经酰胺，神经鞘氨醇及1-磷酸-鞘氨醇等与其特异性的膜受体结合在调节细胞生长，分化及凋亡中的作用引起了人们的极大关注。根据靶细胞种类，磷脂分子剂量以及相关受体信号的不同其产生的生物效应各不相同，磷脂类信号分子与内皮分化基因（Edg)家族G蛋白耦联受体。MAPK/ERK，PI3K/Akt,JNK/SAPK等信号系统相互作用，从而影响细胞凋亡。磷脂酰丝氨酸暴露于细胞表面是细胞凋亡过程中的重要事件，氨基磷脂易位酶及磷脂scramblase酶与此事件密切相关。暴露于细胞表面的磷脂酰丝氨酸在鞍细胞的识别及凋亡细胞的清华中发挥重要的信号作用。对磷脂类信号分子及其受体信号系统的调节为某些相关疾病的防治提供了有意义的靶点。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨黄酮类化合物槲皮素(Que)对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用.方法应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用;AO/PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系;诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加;将细胞特异性地阻滞在S期,出现凋亡峰.结论槲皮素能抑制U937细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性.     

荷肺癌裸鼠化疗后凋亡指标表达的变化

众所周知,细胞凋亡是不同类型细胞受到程序化因素控制而发生的细胞死亡过程,它是不同于坏死的一种细胞死亡的过程.细胞凋亡在肿瘤发生和生长过程中具有重要作用[1].在细胞凋亡的早期检测中,主要检测的指标是Caspase-3和Annexin-V.Caspase-3是天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族的成员之一,Annexin-V是磷脂结合蛋白.而细胞周期（DNA）法则用于晚期凋亡的检测.本文研究了Caspase-3和Annexin-V、细胞周期检测在常规化疗药物紫杉醇的抗癌机理中所起的作用.     

诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究

目的 研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体（McAb）。方法 以可溶性人死亡受体（death receptor，DR）5胞外段免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备抗人DR5的McAb；MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞；亲和层析方法纯化McAb；夹心ELISA法测定McAb亚型；Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型；间接ELISA法检测McAb的特异性；流式细胞仪检测FITC-annexinⅤ／PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化。结果 获得1株杂交瘤细胞，其分泌的McAb命名为mDRA-6，为IgG1；其抗原表位类型为构象表位；其特异性识别hDR5，与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用；经McAb mDRA-6处理后，Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂，并导致Jurkat细胞中的DNA片段化。结论 mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体，在以TRAIL／DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。     

Delta阿片受体激活对体外培养大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的:研究delta阿片受体激活对体外培养新生大鼠软骨细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法:体外分离培养新生大鼠软骨细胞,用delta阿片受体进行干预,MTT法测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡;免疫印迹分析caspase-3和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达水平.结果:delta阿片受体激动剂DADLE(1 μmol/L)可增强软骨细胞ERK蛋白的磷酸化,抑制软骨细胞凋亡,但这种现象可被delta阿片受体阻断剂Naltrindole(10μmol/L)所逆转,并且给予ERK特异性抑制剂U0126(10 nmol/L)亦可逆转DADLE抑制细胞凋亡的作用.结论:Delta阿片受体激活可抑制大鼠软骨细胞凋亡,其机制可能与激活ERK途径相关.     

细胞凋亡检测方法的研究进展

研究细胞凋亡的方法不断涌现 ,分析手段日趋完善和成熟。按方法学可将细胞凋亡的检测方法分为形态学、生物化学、免疫化学和分子生物学测定法。现就这方面的进展作一简述。一、ＤＮＡ降解分析细胞凋亡过程中有一系列特征性的形态学、生物化学、细胞学及分子生物学改变。其中最重要和特征性的改变是Ｃａ2 /Ｍｇ2 依赖性核酸内切酶的激活导致染色质ＤＮＡ在核小体连接部位断裂 ,形成以 180～ 2 0 0ｂｐ为最小单位的单体或寡聚体片段。因而细胞凋亡过程中ＤＮＡ降解所产生的ＤＮＡ片段大小具有独特的性质 ,常作为细胞凋亡特异性生化指标而被…     

抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入 ,发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势 ,如高度的特异性与敏感性 ,低廉的费用 ,故而有着广阔的应用前景     

核因子-κB的结构和功能研究进展

1986年,Sen和Baltimore首先从B淋巴细胞核抽提物中,检测到一种能与免疫球蛋白κ链基因增强子κB序列(5'- GGGATTTCC-3')特异结合,并能促进κ链基因表达的核蛋白因子,称之为核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB).此后,NF-κB在许多领域被受关注.近来发现,NF-κB能与调控免疫应答、炎症反应、细胞分化和生长、细胞粘附和细胞凋亡所必需的许多细胞因子、粘附因子等基因启动子或增强子部位的κB位点发生特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎症反应和细胞的生长发育等方面发挥着重要的作用[1].     

抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入，发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势，如高度的特异性与敏感性，低廉的费用，故而有着广阔的应用前景。     

凋亡过程中膜联蛋白V（AnnexinV）的检测

1原理 细胞凋亡具的各种不同的形态学特征,细胞膜的改变是最早的变化之一.在凋亡细胞,位于细胞膜内的磷脂酰丝氨酸( phospholipid phosphatidyl-serine, PS)转位到细胞膜外.膜联蛋白V是一种35～36kDa的钙依赖的.磷脂结合蛋白,其与PS有高度的亲和性,能与表达ps的细胞结合.膜联蛋白可与萤光染料异硫氰酸FITC或生物素(biotin)结合.因此可用于流式细胞术检测凋亡过程中的细胞.     

110 抗单链DNA单克隆抗体在细胞凋亡检测中的应用研究

随着对细胞凋亡研究的深入，发现凋亡与机体的健康和疾病状态息息相关。因而建立一种简便有效的检测凋亡细胞的生物学方法对于临床与基础研究非常重要。最近研究发现抗单链DNA的特异性单克隆抗体在检测细胞凋亡方面具有其它方法无可比拟的优势，如高度的特异性与敏感性，低廉的费用，故而有着广阔的应用前景。     

caspase-2:一种特殊的半胱天冬酶

半胱天冬酶(caspases)依赖的凋亡途径是细胞程序性死亡的一种重要方式,涉及到多个半胱天冬酶的级联反应。其中caspase-2是最早被鉴定的caspase家族成员之一,但是由于缺乏关于cas-pase-2活化机制的知识以及缺少特异性检测活性的方法,其研究受到限制。最近几年,对该酶的研究取得了一些新的重要进展,大量证据表明caspase-2在细胞凋亡调控中发挥着关键而独特的作用,本文对此予以概述。     

caspase-2：一种特殊的半胱天冬酶

半胱天冬酶(caspases)依赖的凋亡途径是细胞程序性死亡的一种重要方式，涉及到多个半胱天冬酶的级联反应。其中caspase-2是最早被鉴定的caspase家族成员之一，但是由于缺乏关于caspase-2活化机制的知识以及缺少特异性检测活性的方法，其研究受到限制。最近几年，对该酶的研究取得了一些新的重要进展，大量证据表明caspase-2在细胞凋亡调控中发挥着关键而独特的作用，本文对此予以概述。     

Aβ激活caspases引起老年性痴呆脑的神经元凋亡

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶 (ｃａｓｐａｓｅ)又称半胱氨酸蛋白酶家族 ,在执行和控制细胞凋亡的过程中发挥着重要作用。活性的ｃａｓｐａｓｅ可将细胞中许多重要的功能蛋白质作为降解的底物 ,一些被降解的多肽片段又可在细胞中形成一种新的促凋亡因子。最近发现脑内神经元的凋亡或与老年性痴呆 (ＡＤ ,Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓｄｉｓｅａｓｅ)发生有关凋亡的细胞学机制是ｃａｓｐａｓｅｓ通过一个大家熟悉的小分子肽所激活 ,这个肽就是 β 淀粉样肽 (β ａｍｙｌｏｉｄ ,Ａβ)。最近ＪｅａｎＭａｒｘ这方面的研究进行了综述。ＡＤ细胞凋亡…     

PKC在结核杆菌抗原诱导人γδT细胞凋亡中的作用

采用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡的方法,分别观察Mtb-Ag(10.0μg/ml)刺激特异性激活的人γδT细胞不同时间凋亡情况,并研究Rottlerin(PKC抑制剂)预处理对Mtb-Ag诱导γδT细胞凋亡的影响。结果显示Mtb-Ag刺激3h、6h、12h、24h均可显著诱导γδT细胞凋亡(P<0.01),凋亡细胞比例在44.21%～51.76%之间;Mtb-Ag诱导γδT细胞凋亡可被Rottlerin(40.0μmol/L)抑制,凋亡抑制率为98.6%。提示PKC途径参与Mtb-Ag激发活化的γδT细胞凋亡过程。     

凋亡细胞的清除与TIM基因家族的研究进展

快速有效清除体内的凋亡细胞对多细胞正常生长发育和维持内环境稳定起着至关重要的作用.目前研究发现体内吞噬细胞通过磷脂酰丝氨酸受体识别凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸而与之直接或者间接结合,从而使得凋亡细胞被吞噬清除.最新研究结果表明,T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白基因家族可能是一个新的磷脂酰丝氨酸受体家族,参与体内凋亡细胞的识别与清除的调控.因而研究TIM基因家族与凋亡细胞间的相互关系,为进一步了解TIM基因家族在凋亡细胞的识别与清除中扮演的角色及其作用奠定了基础.