冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

降钙素相关基因肽在小鼠巨噬细胞炎症调控中的作用研究

目的 探讨降钙素相关基因肽（CGRP）在炎症调控中的作用,验证CGRP可通过活性氧簇-核苷酸结合低聚体结构域样受体3（ROS-NLRP3）信号通路抑制小鼠巨噬细胞炎症因子的分泌。方法 实验分为对照组、脂多糖（LPS）100?ng/ml组（LPS组）、CGRP 10?ng/ml组（CGRP 10组）、CGPR 30?ng/ml组（CGRP 30组）、CGRP 100?ng/ml组（CGRP 100组）及CGRP 30?ng/ml+LPS 100?ng/ml组（CGRP 30+LPS组）。作用12?h后,分别收集各组细胞的培养上清,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白表达。同时收集各组细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测炎症因子IL-1β、TNF-α和炎症复合体NLRP3 mRNA的表达水平。流式细胞术检测各组细胞内活性氧簇（ROS）水平,Western blotting检测ROS-NLRP3信号通路相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β及TNF-α的蛋白表达。结果 与对照组比较,LPS组细胞中IL-1β、TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平升高,培养上清液中IL-1β和TNF-α的蛋白表达水平升高,细胞内ROS水平升高,且细胞内NLRP3、Caspase-1、IL-1β及TNF-α的蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与LPS组比较,CGRP 10组、CGRP 30组、CGRP 100组、CGRP 30+LPS组细胞中IL-1β、TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平降低,培养上清液中IL-1β和TNF-α蛋白表达水平降低,细胞内ROS水平降低,且细胞内NLRP3、caspase-1、IL-1β及TNF-α蛋白表达水平也降低,所有指标中CGRP 30组降低最明显（P?<0.05）。结论 CGRP可降低巨噬细胞内ROS和NLRP3的表达,使炎症因子IL-1β和TNF-α的释放减少,CGRP可能在减弱局部炎症反应中发挥重要的调控作用。     

Notch1信号参与脂多糖诱导的巨噬细胞活化

[目的]探讨Notch1对脂多糖(LPS)介导巨噬细胞活化的影响.[方法]体外培养RAW264.7细胞,给予LPS 100μg/L处理8h后利用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞Notch1和Hes1 mRNA表达水平;给予Notch1信号抑制剂DAPT10μmol/L预处理1 h后利用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-6水平,采用Western blot法检测细胞TNF-α和IL-6蛋白表达水平.[结果]给予LPS刺激RAW264.7细胞后可明显提高Notch1和Hes1 mRNA表达(P<0.05),LPS提高RAW264.7细胞TNF-α和IL-6的表达和释放作用可明显被DAPT抑制(P<0.05),但TNF-α和IL-6表达水平仍显著高于对照组(P<0.05).[结论]巨噬细胞中Notch1信号参与LPS诱导细胞因子TNF-α和IL-6的表达和释放过程.     

多索茶碱对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性损伤及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的探讨多索茶碱对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎症损伤及NOD样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路的影响。方法体外培养人肺泡上皮细胞(AEC),将细胞分为对照组(不做处理)、LPS组(10μg/mL LPS处理)、LPS+低剂量多索茶碱组(10μg/mL LPS+5 mg/L多索茶碱处理)、LPS+中剂量多索茶碱组(10μg/mL LPS+10 mg/L多索茶碱处理)、LPS+高剂量多索茶碱组(10μg/mL LPS+30 mg/L多索茶碱处理)。溴脱氧尿苷(BrdU)掺入实验检测细胞增殖比例,流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白印迹(WB)法检测各组细胞的IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NLRP3、凋亡相关斑点蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)蛋白表达,用凝胶电泳迁移率转变分析(EMSA)检测各组细胞核转录因子-κB(NF-κB)活性。结果与对照组比较,LPS组细胞增殖比例均下降,细胞凋亡率、细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达及NF-κB活性均升高,差异均有统计学意义(P0.05);与LPS组比较,LPS+低剂量多索茶碱组、LPS+中剂量多索茶碱组、LPS+高剂量多索茶碱组细胞增殖比例依次升高,细胞凋亡率、细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达及NF-κB活性均依次降低,差异均有统计学意义(P0.05),且呈剂量依赖性。结论多索茶碱可能通过抑制NLRP3/IL-1β通路活化,减轻脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性损伤。     

红景天苷介导p38 MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的心肌细胞焦亡及氧化损伤

目的 探究红景天苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞焦亡和氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组、LPS组、LPS+10、20、40、80μmol/L红景天苷组,筛选出最佳浓度红景天苷后,又分组：对照组、LPS组、LPS+20μmol/L红景天苷组、SB203580组、LPS+20μmol/L红景天苷+SB203580组和LPS+20μmol/L红景天苷+C16-PAF组。干预24 h后,用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、氧化应激因子丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)的表达水平。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力;实时荧光定量PCR测定细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法测定p38 MAPK信号通路相关蛋白、Cyclin D1、Caspase-3、Caspase-1、Gasdermin-D(GSDMD)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体...     

聚岩藻多糖对小鼠巨噬细胞分泌炎症因子的影响及其机制

目的：探讨聚岩藻多糖对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌炎性因子的影响,并阐明其免疫调节作用。方法：取对数生长期RAW264.7细胞,分为对照组、LPS组和LPS+聚岩藻多糖组,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、单核细胞趋化因子1 (MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和MIP-1β水平。结果：与对照组比较,LPS组和LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显升高（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平均明显升高（P<0.01）。与LPS组比较,LPS+聚岩藻多糖组细胞存活率明显降低（P<0.01）,细胞培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β水平明显降低（P<0.01）。结论：聚岩藻多糖可抑制小鼠巨噬细胞对炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β分泌的影响,具有潜在的免疫调节作用。     

三七皂苷FC通过MAPK/NF-κB途径抑制RAW264.7细胞炎症及凋亡的机制研究

目的:基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)途径探讨三七皂苷FC对RAW264.7巨噬细胞炎症及凋亡的作用机制。方法:(1)采用不同浓度的三七皂苷FC(0、1、10、20、50、100μmol/L)分别干预RAW264.7细胞和脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞,CCK8法检测细胞活力,筛选合适的药物浓度。(2)将RAW264.7细胞分为对照组、LPS组、LPS+三七皂苷FC低剂量(20μmol/L)组和LPS+三七皂苷FC高剂量(50μmol/L)组。先给予相应剂量的三七皂苷FC预处理6 h,再加入1μg/ml LPS。干预24 h后,PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot检测TNF-α、iNOS、p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光检测NF-κB核转位;Transwell实验检测细胞迁移。结果:(1)20、50μmol/L三七皂苷FC干预24 h后,LPS诱导的RAW264.7细胞活力较对照组无显著差异(P0.05),用于后续实验。(2)与LPS组相比,低、高剂量的三七皂苷FC作用后,TNF-α、IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01);TNF-α、iNOS蛋白表达明显降低(P0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达比值显著下调(P0.05,P0.01);细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01);细胞核内NF-κB p65蛋白表达减少,阳性表达细胞数占比显著降低(P0.05);细胞迁移数显著减少(P0.01)。结论:三七皂苷FC能够显著改善LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,抑制巨噬细胞凋亡和迁移,其作用机制可能与下调MAPK/NF-κB通路磷酸化水平及抑制NF-κB核转位有关。     

白藜芦醇对LPS刺激下RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

目的 探讨白藜芦醇对LPS刺激下体外破骨细胞形成的作用途径和作用机制。方法 小鼠RAW264.7巨噬细胞分3组培养,即空白组(Sham组)、LPS组[空白组+LPS(1μg/ml)]和Res组[LPS组+白藜芦醇(10μmol/L)]。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测各组成熟破骨细胞数量,酶联免疫吸附试实验(ELISA)法检测各组上清液中TNF-α和IL-1β的含量,荧光定量聚合酶反应法(Q-PCR)检测各组中TNF-α和IL-1β mRNA的表达,Western blot法检测各组核转录因子κBp65(NF-κBp65)与IκBα中磷酸化蛋白的水平。结果 TRAP染色:Res组TRAP染色阳性的破骨细胞数目相比LPS组明显减少;ELISA检测:LPS组中各炎性细胞因子表达水平较Sham组显著升高(P＜0.05),Res组较LPS组各炎性细胞因子表达显著降低(P＜0.05);Q-PCR检测:LPS组TNF-α和IL-1β mRNA的表达水平较Sham组明显升高(P＜0.05),Res组中TNF-α、IL-1β的基因表达明显被抑制(P＜0.05);Western blot法检测结果显示,Res组IκBα和p65的磷酸化水平相对于LPS组显著降低(P＜0.05)。结论 白藜芦醇可以通过NF-κB信号通路下调LPS刺激下小鼠RAW 264.7巨噬细胞中TNF-α与IL-1β的表达,进而影响破骨细胞的形成,有望作为治疗无菌性松动引起的炎性骨溶解的关键靶点。     

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的 探究α-倒捻子素（α-mangostin）在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法 体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷（LPS/ATP）联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度（10、20、40μmol/L）的α-mangostin干预组（分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组）。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,Westernblot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC...     

和厚朴酚对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的急性肝损伤大鼠NLRP3炎症通路及肝细胞自噬的影响

目的探究和厚朴酚对D-氨基半乳糖(D-Gal N)/脂多糖(LPS)诱导的急性肝损伤大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路及肝细胞自噬的影响。方法 48只SPF级大鼠随机分为阴性对照组、模型组(500 mg/kg D-Gal N+10μg/kg LPS)、和厚朴酚低剂量组(500 mg/kg D-Gal N+10μg/kg LPS+10μg/kg和厚朴酚)、和厚朴酚中剂量组(500 mg/kg D-Gal N+10μg/kg LPS+40μg/kg和厚朴酚)、和厚朴酚高剂量组(500 mg/kg D-Gal N+10μg/kg LPS+80μg/kg和厚朴酚)、阳性药物组(500 mg/kg D-Gal N+10μg/kg LPS+0.42 g/kg护肝片),每组8只。建模后,采用全自动生化分析仪检测大鼠肝功能指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR和免疫印迹检测肝脏组织中NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,模型组血清中AST、ALT、TBA、IL-1β、TNF-α,肝脏组织中NLRP3、ASC mRNA和蛋白,LC3 mRNA,pro-caspase-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平升高(P0.05);与模型组比较,和厚朴酚各剂量组血清中AST、ALT、TBA、IL-1β、TNF-α,肝脏组织中NLRP3、ASC mRNA和蛋白,pro-caspase-1蛋白水平逐渐降低(P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P0.05)。结论和厚朴酚可能通过下调NLRP3炎症通路从而减缓炎症水平,同时促进肝细胞自噬实现对急性肝损伤的保护。     

Cx43调控NLRP3炎性小体参与α1-AR激活诱导的心脏急性交感应激

目的 观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在苯肾上腺素(PE)过度激活心肌细胞α1-肾上腺素受体(α1-AR)诱导急性交感应激中的作用。方法 将H9C2大鼠心肌细胞随机分为对照组(control组)、PE单独处理组、Gap26(Cx43特异性抑制剂)干预组、Gap26单独处理组,其中PE单独处理组给予50μmol/L PE作用15 min, Gap26干预组先给予0.5μmol/L Gap26预处理30 min,再给予50μmol/L PE作用15 min。Western blot法及qRT-PCR法检测心肌细胞Cx43、NLRP3炎性小体、白介素-1β(IL-1β)、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-18(IL-18)蛋白及mRNA表达水平,免疫荧光法观察心肌细胞Cx43的表达和共定位,ELISA法检测心肌细胞炎症因子IL-1β、IL-18的表达。结果 与control组相比,PE单独处理组Cx43及NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白及mRNA水平均升高;与PE单独处理组比,Gap26干预后Cx43及NLRP3、Caspase-1、IL-18的蛋白及mRN...     

LPS激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用研究

目的 探讨脂多糖(LPS)激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用.方法 用佛波酯诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞.实验分为对照组、LPS组、LPS+NLRP3 siRNA组、LPS+Scrambled siRNA组.采用免疫荧光染色检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白ASC的共定位、Western blotting检测NLRP3蛋白的表达、ELISA检测细胞培养上清白介素1β(IL-1β)的浓度.结果 与对照组相比,NLRP3和ASC蛋白的共定位明显增多,LPS组NLRP3蛋白的表达增强.LPS还能使细胞培养上清IL-1β的浓度显著升高,NLRP3 siRNA干扰后细胞培养上清IL-1β的浓度显著降低.结论 LPS可以促进炎性小体成分NLRP3、ASC的表达,激活NLRP3炎性小体,刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β.     

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录启动因子3（STAT3）信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组（不做干预）、LPS组（1 μg/mL LPS）和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组（1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷）;酶联免疫吸附试验（ELISA）和活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组：对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）］表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低（P＜0.05）,干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高（P＜0.05）,选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化（P＜0.05）;与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著（P＜0.05）,LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反（P＜0.05）。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关     

NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...     

胆绿素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的作用

目的 探讨胆绿素（biliverdin,BV）对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的影响及其作用机制。方法 用不同浓度胆绿素（10、20、30μmol/L）处理小鼠RAW264.7巨噬细胞30min后再用LPS （1μg/ml）处理细胞6h,ELISA法检测培养上清液IL-β和IL-18中的分泌量。30μmol/L胆绿素处理细胞30min后再用LPS处理细胞6h,Western blot法检测胞内NLPR3、caspase-1、ASC和磷酸化IκB （p-IκB）的蛋白表达水平;NF-κB抑制剂BAY11-7082处理细胞1h后,然后给予细胞30μmol/L胆绿素孵育30min,经1μg/ml LPS孵育6h,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-β、IL-18的表达水平。结果 （1）在受到LPS作用后,RAW264.7巨噬细胞分泌IL-β、IL-18水平显著升高;而在预先给予胆绿素后,抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18表达,并且呈剂量依赖性（P < 0.05）。（2）与空白对照组相比,LPS处理巨噬细胞6h后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达明显上调（P均<0.05）,在同时间点,巨噬细胞在LPS处理前经过胆绿素预处理后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达都显著降低（均P<0.05）。（3）与LPS组相比,BAY+胆绿素明显抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18的表达（P<0.05）,并且BAY和胆绿素的对于LPS诱导炎性反应对的联合抑制作用显著的高于BAY或者胆绿素的单独作用（P<0.05）。结论 在RAW264.7巨噬细胞中,胆绿素可以通过抑制NF-κB的活性进而抑制NLRP3炎性体的形成,从而发挥抗炎作用。     

葛根素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨葛根素（puerarin, PUE）在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞中的抗炎作用,并揭示其分子机制。方法 采用CCK-8比色法分别设置不同浓度的LPS和PUE,观察对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出合适的LPS造模浓度及PUE的给药浓度。将细胞分为正常对照组、模型组（1μg/mL）、PUE给药组（12.5、25、50μmol/L）。Griess法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）释放量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的含量;qRT-PCR法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2) mRNA水平;Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, i NOS）、COX-2、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平。结果 与正常对照组比...     

Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

不同剂量氯化镧对氧化铝陶瓷颗粒诱导RAW264.7细胞产生炎症反应的保护作用

目的观察不同剂量氯化镧（LaCl3）对氧化铝（Al2O3）陶瓷颗粒诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生炎症反应的作用效果,为研究LaCl3在Al2O3陶瓷颗粒诱导无菌性松动中的作用提供理论基础。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7。根据培养液的不同分成8组：空白对照组（培养基中不含LaCL3和Al2O3）、Al2O3组（含1 mg/mL Al2O3）、LaCl3＋Al2O3组（加入1 mg/mL Al2O3后分别加入2.5、10、100μmol/L LaCl3）以及LaCl3组（含2.5、10、100μmol/L LaCl3）。分别采用ELISA、RT-PCR及Western blotting法检测炎症因子白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白的表达。结果 ELISA检测结果显示：与空白对照组比较,Al2O3组和100μmol/L LaCl3组IL-1和TNF-β的蛋白分泌量均显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与Al2O3组比较,Al2O3＋2.5μmol/L LaCl3组、Al2O3＋10μmol/L LaCl3组均显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;2.5和10μmol/L LaCl3组均明显低于100μmol/L LaCl3组,差异也有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR和Western blotting检测结果显示IL-1β、TNF-α、NF-κB mRNA以及NF-κB蛋白表达的变化趋势与ELISA检测结果一致。结论 10μmol/L LaCl3可在一定程度上抑制巨噬细胞IL-1β和TNF-α的分泌。LaCl3的炎症抑制作用可能与NF-κB信号转导通路的抑制有关。     

小白菊内酯对巨噬细胞抗氧化能力的影响研究

目的 探讨小白菊内酯(PTN)对炎症模型小鼠的巨噬细胞抗氧化能力的影响.方法 对15只8周Balb/c小鼠灌服大肠杆菌脂多糖构建炎症模型动物,对成功获取的15只炎症模型动物进行腹腔冲击收集巨噬细胞进行编号和体外共培养,然后体外培养巨噬细胞,随机分为对照组、A组、B组、C组、D组,每组3只,分别对应为空白对照、7.5μmol/L PTN+1 mg/L LPS、15μmol/L PTN+1 mg/L LPS、30μmol/L PTN+1 mg/L LPS及200μmol/L维生素C+1 mg/L LPS.上述各组细胞在相同的培养条件下实施体外共培养试验,在培养第24、48及72小时收集细胞上清液进行炎性因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)酶联免疫吸附试验检测,同时对细胞抗氧化能力指标(SOD、MDA、GSH-Px)水平进行检测.结果 炎症模型动物的体外分离获得的巨噬细胞墨汁吞噬染色的吞噬率为95.5％,碱性磷酸酶染色阳性率为91.5％;在与PNT共培养24 h,C组TNF-α均显著高于其他各组(P<0.05);共培养24、48 h,C组IL-1β显著低于其他各组(P<0.05),C组GSH-Px水平显著高于其他各组(P<0.05),C组MDA水平显著低于其他各组(P<0.05);共培养72 h,对照组IL-1β、TNF-α水平均显著高于其他各组(P<0.05),且对照组SOD水平均显著低于其他各组(P<0.05),C组TNF-α、MDA均显著低于其他各组(P<0.05),且C组GSH-Px水平均显著高于其他各组(P<0.05).各组在与PNT共培养第24、48及72小时期间的IL-6水平比较差异均无统计学意义.结论 小白菊内脂可提升巨噬细胞的抗氧化活力,抑制炎性因子分泌,以30μmol/L PTN+1 mg/L LPS进行体外抗氧化效果最佳.