Akt 在 Ang-1、Ang-2调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用

目的观察蛋白激酶B(PKB/Akt)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用。方法观察失血性休克后,以及Ang-1、Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性过程中肠系膜上动脉(SMA)中Akt蛋白表达和磷酸化变化,并观察Akt抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响。结果 (1)失血性休克后SMA中Akt蛋白表达无明显改变,但磷酸化水平逐渐增高(P<0.01);(2)Akt抑制剂(1×10-5mol/L)可显著抑制缺氧10min的血管高反应性,也可显著抑制Ang-1对缺氧10min血管高反应性的维持作用(P<0.01);但对缺氧4h的血管低反应性和Ang-2降低缺氧4h血管反应性的作用无显著影响;(3)缺氧10min时,降低血管高反应性的Ang-2可降低Akt磷酸化;缺氧4h时,恢复血管低反应性的Ang-1和Tie-2抑制剂可抑制Akt磷酸化(P<0.01)。结论 Akt参与了休克早期Ang-1和Tie-2受体对血管高反应性的调节。     

阿托伐他汀对大鼠血清VEGF、Ang-1以及Ang-2影响

目的通过研究阿托伐他汀对健康大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)以及血管生成素-2(Ang-2)水平影响的时间、剂量依赖性,探讨阿托伐他汀作为血管病预防用药在非病理情况下对血管新生的影响。方法将30只健康SD大鼠随机分成对照组、低剂量组与高剂量组,每组各10只,分别连续灌胃生理盐水、低剂量和高剂量的阿托伐他汀28 d。于第1天给药前、第7天给药后24 h、第28天给药后24 h采静脉血,分离血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清VEGF、Ang-1以及Ang-2。结果第7天,高剂量组血清VEGF、Ang-2的变化明显升高[(347.20±28.00)pg/ml,(1 915.00±543.30)ng/L,P<0.05];低剂量组血清VEGF、Ang-1的变化明显升高[(653.60±57.10)pg/ml,(1 718.00±283.00)pg/ml,P<0.05],Ang-2的变化明显降低[(-3 016.00±483.00)ng/L,P<0.05];对照组无明显变化。第28天各组血清VEGF、Ang-1、Ang-2水平无明显变化。结论健康大鼠短期应用阿托伐他汀明显改变血清血管特异性生长因子水平,且应用剂量不同变化效果不同。     

瘦素、血管内皮细胞及其相关因子在脑动静脉畸形破裂出血中的表达

目的研究瘦素（Leptin）、血管内皮细胞生长因子（vascularendothelial growth factor,VEGF）及其受体、Tie受体及血管生成素1（angiopoietin1,Ang1）和血管生成素2（angiopoietin2,Ang2）在脑动静脉畸形（CAVM）出血中的表达。方法收集手术切除的完整CAVM新鲜标本26例（SpetzlerⅡ～Ⅲ级）,其中13例CAVM有近期破裂出血史（病史和影像学诊断）,另13例无明显破裂出血史（病史和影像学表现除外）。采用免疫组化法检测瘦素、VEGF及其受体、Tie1、Tie2、Ang1、Ang2在CAVM中的表达。结果免疫组化法比较已出血和未出血CAVM内皮细胞中瘦素和瘦素受体、VEGF、Tie2和Ang2、Tie1及Ang1。已破裂出血CAVM的畸形团中VEGF、瘦素和瘦素受体、Tie2和Ang2表达显著,而Tie1及Ang1的表达较弱。结论瘦素、VEGF、Tie受体及Angl和Ang2在cAVM的畸形团中表达升高,而且在已破裂出血的CAVM中比未破裂出血的畸形团高。这表明VEGF、瘦素、Tie受体及Angl和Ang2在CAVM的畸形团中存在特异性表达升高,可能与CAVM的形成、进展及破裂出血有关。     

血管紧张素及受体在妊娠期高血压疾病孕产妇中检测价值

目的探讨血管紧张素及受体在妊娠期高血压疾病孕产妇中的检测价值。方法选择2015年11月至2016年10月收治的76例妊娠期高血压疾病孕产妇为A组,以同期的76例正常健康孕产妇为B组。比较两组孕产妇产前、产后的母血血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]水平,产后胎盘组织血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT2R)阳性表达率,并对A组中不同分类患者相关检测结果进行对比分析。结果产前A组的母血Ang-Ⅱ水平低于B组(P<0.05),母血Ang-(1-7)水平高于B组(P<0.05);产后母血Ang-Ⅱ及脐血Ang-(1-7)水平高于B组(P<0.05),脐血Ang-Ⅱ及母血Ang-(1-7)水平低于B组(P<0.05);A组产后胎盘组织AT1R及AT2R阳性表达率高于B组(P<0.05),妊娠期高血压、轻度子痫前期及重度子痫前期患者以上各指标的检测结果比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血管紧张素及受体在妊娠期高血压疾病孕产妇中的检测价值较高,对于疾病的发展变化也有一定的指导意义,应给予充分重视。     

促血管生成素-2在胃肠道恶性肿瘤检测中的应用

目的：探讨血．清中促血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）在胃肠道恶性肿瘤检测中的意义。方法：应用ELISA法检测56例临床已诊断为胃肠道恶性肿瘤的实验组和12例健康对照血清中Ang-2的含量。SPSS 11.0统计软件行数据统计分析。结果：胃肠道恶性肿瘤患抒肌清中Ang-2表达水平显著高于正常对照组（P〈0．05）,胃癌与肠道恶性肿瘤患者血清中Ang-2表达水平无显著筹异（P〉0．05）。结论：血清Ang-2含量在胃肠道恶性肿瘤检测中具有一定应用价值。     

抗血管生成中药研究进展

许多疾病的发生、发展与血管生成关系密切,如恶性肿瘤生长中,肿瘤组织不断有新生血管生成,这些新生血管为肿瘤生长提供丰富的血供和营养。如果能抑制新生血管生成,就可阻断肿瘤血供,达到“饿死”肿瘤细胞的目的。其他如动脉粥样硬化、眼底病、银屑病等也与局部血管超常增生有关。作者就近年来抗血管生成中药的研究进展综述如下。     

大鼠右心室血管紧张素转换酶2在高原低氧适应过程中表达的变化

血管紧张素转换酶2（ACE2）在心脏中度表达，是一种含锌离子的单羧基肽糖蛋白酶，可以水解血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）羧基端脯氨酸与苯丙氨酸之间的肽键，生成Ang1-7。ACE2的主要作用是与ACE共同调节体内Ang1-7、AngⅠ、AngⅡ的水平，对体内血压、体液和内环境稳定起重要的调控作用，并可延缓心肌肥厚、心肌纤维化的发展，与心功能改变密切相关。     

重组ACE2基因对人血管内皮细胞中eNOS磷酸化水平的影响

目的 探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染对内皮源性一氧化氮(NO)合酶(eNOS)磷酸化水平的影响.方法 克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染入人血管内皮细胞中;采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的ACE2、eNOS的表达情况,同时使用硝酸还原酶比色法测定细胞中NO含量.结果 血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ,100 nmol/L)加入细胞后可抑制由胰岛素刺激的Ser1177-eNOS磷酸化与NO生成(n=5～6,P＜0.01).pACE2基因转染可逆转细胞中由Ang Ⅱ对胰岛素诱导eNOS磷酸化的抑制效应,同时伴NO水平上升(N=5～6,P＜0.01).结论 ACE2过表达可明显改善人血管内皮细胞中eNOS磷酸化的表达,伴有NO生成增加,提示ACE2可能通过调节血管Ang Ⅱ/NO的平衡,在改善血管内皮功能和胰岛素抵抗中起重要功效.     

Ang-Ⅱ对血管内皮细胞线粒体膜电位的影响及茶多酚的保护作用

目的 观察Ang-Ⅱ对血管内皮细胞线粒体膜电位的影响及茶多酚的保护作用.方法 将血管内皮细胞分为空白对照组(仅给予细胞培养液)、单纯Ang-Ⅱ组(细胞培养液中加入Ang-Ⅱ,使其终浓度为10-7mol·L-1)、Ang-Ⅱ+小剂量茶多酚组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入茶多酚,使茶多酚的终浓度为5mg·L-1)、Ang-Ⅱ+大剂量茶多酚组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入茶多酚,使茶多酚的终浓度为25mg·L-1).用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的线粒体膜电位水平.结果 (1)Ang-Ⅱ组的线粒体膜电位显著低于空白对照组(P<0．01);(2)Ang-Ⅱ+茶多酚组的线粒体膜电位显著高于Aug-Ⅱ组(P<0．01);(3)Ang-Ⅱ+大剂量茶多酚组的线粒体膜电位水平高于Ang-Ⅱ+小剂量茶多酚组(P<0．05).结论 Ang-Ⅱ可引起血管内皮细胞线粒体膜电位的显著降低,而茶多酚可呈剂量依赖性的逆转Ang-Ⅱ的这一作用.     

携带Ang-1的MSCs双介入治疗ANFH的转染与表达

目的建立兔股骨头坏死模型,探讨双介入治疗方法的可行性,检测治疗后股骨头的转染率及表达。材料与方法用激素建立兔股骨头坏死模型80只,随机分为钻孔注入组、动脉灌注组、双介入组、对照组。实验组采用经皮穿刺于股骨头钻孔,直接注入携带血管生成素-1（Ang-1）的骨髓间质干细胞（MSCs）,或／和经颈动脉穿刺,行超选择插管至双侧股骨头供血动脉,缓慢注入携带Ang-1的MSCs,对照组不作治疗。术后2、4、6、8周分别处死动物,取股骨头进行组织学观察、荧光检测、免疫组织化学检测。结果介入组转染增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）／Ang-1质粒的MSCs分化的细胞在荧光显微镜下见高表达Ang-1基因,同时局部循环血管和成骨细胞增多。明显好于单独治疗组、对照组。结论携带Ang-1的MSCs经双介入治疗不仅能促进毛细血管的生成,而且能定向进行骨分化。     

脉管Ⅱ号胶囊对Ang-1/Tie2信号通路及人脐静脉内皮细胞的影响

目的研究脉管Ⅱ号胶囊对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的影响,探索其促进血管生成的可能机制。方法按照随机数表法将20只SPF级雌性SD大鼠随机分为高剂量血清组与低剂量血清组,每组10只,分别以90 mg·kg^-1·d^-1与30 mg·kg^-1·d^-1的剂量喂服脉管Ⅱ号胶囊,用于制备含药血清;将HUVECs随机分为空白组、空载组、低剂量组、低剂量+Ang-1干扰组、高剂量组及高剂量+Ang-1干扰组,其中空白组与空载组HUVECs置于含有10%胎牛血清、1%丙酮酸钠、0.1 mg/mL肝素和0.05 mg/mL血管内皮生长因子的F12K培养基内,并分别接种于96孔培养板中放在37℃、5%CO2环境内培养,每3d更换1次培养基,待HUVECs培养至融合度达到60%~80%时,按每孔102μL将空载质粒转染液加入空载组培养板中,充分混匀,放回培养箱中培养4h,去上清,再加入完全培养基,在37℃、5%CO2环境内继续培养;低剂量组与低剂量+Ang-1干扰组HUVECs培养时将空白组培养环境中的10%胎牛血清替换为10%低剂量含药血清(取自低剂量血清组大鼠),并于相同时间加入Ang-1-pReceiver-M98转染液培养;高剂量组与高剂量+Ang-1干扰组HUVECs培养时将空白组培养环境中的10%胎牛血清替换为10%高剂量含药血清(取自高剂量血清组大鼠),并于相同时间加入Ang-1-pReceiver-M98转染液培养。分别用MTT法检测HUVECs的增殖情况,Hoechst33258染色法观察HUVECs形态,Elisa法及Western blotting法检测血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)和酪氨酸激酶受体2(tyrosine kinase receptors 2,Tie2)的表达水平。结果与空白组对比,空载组HUVECs的相对增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均无明显变化(P均>0.05);高剂量组和低剂量组HUVECs的相对增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均显著增加(P均<0.05),且高剂量组显著高于低剂量组(P均<0.05);高剂量+Ang-1干扰组和低剂量+Ang-1干扰组HUVECs的增殖率及Ang-1、Tie2表达水平均显著降低(P均<0.05),且低剂量+Ang-1干扰组显著低于高剂量+Ang-1干扰组(P均<0.05)。空白组、空载组、高剂量组和低剂量组细胞均维持原有形态,细胞凋亡和细胞形态变化较少;高剂量+Ang-1干扰组和低剂量+Ang-1干扰组细胞凋亡增加,且以低剂量+Ang-1干扰组细胞凋亡数量较大。结论调节Ang-1/Tie2信号通路的表达可能是脉管Ⅱ号胶囊促进血管生成的作用机制,有待进一步深入研究证实。     

Angiopoietin-2 overexpression in morris hepatoma results in increased tumor perfusion and induction of critical angiogenesis-promoting genes.

Monitoring of angiogenesis-relevant approaches with functional imaging and histomorphometric analyses is desirable to evaluate the biologic effects. In this study we wished to examine the complex effects of angiopoietin-2 (Ang-2) gene transfer in a rat hepatoma model. METHODS: Using a bicistronic retroviral vector for Ang-2, Morris hepatoma (MH3924A) cell lines with Ang-2 expression were generated (Ang-2-MH3924A). In human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) cocultured with Ang-2-MH3924A, the proliferative action with or without growth factors were determined. Furthermore, animal experiments were performed to measure effects on tumor growth and perfusion. Finally, tumors were examined by immunohistochemistry and DNA chip analysis. RESULTS: Ang-2-expressing MH3924A enhanced basic fibroblast growth factor-mediated endothelial cell proliferation. Perfusion, as measured by H(2)(15)O PET, was increased in genetically modified tumors. Consistent with the increased perfusion, micro- and macrovascularization were increased. However, tumor growth was similar to wild-type MH3924A (WT-MH3924A). Proliferating cell nuclear antigen and TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling) staining revealed an increased number of positive cells, indicating a compensation of increased proliferation by enhanced apoptosis. DNA chip analysis showed an induction of angiogenesis-promoting genes, including crucial vascular growth factor receptors, as well as genes related to extracellular matrix (ECM), apoptosis, signal transduction, and oxidative stress. CONCLUSION: Our results suggest that Ang-2 expression increases perfusion or vascularization, especially in interaction with the vascular growth factor system, without affecting tumor growth. Simultaneous, enhanced expression of genes for ECM, apoptosis, and signal transduction indicates Ang-2's versatile role in angiogenesis including its destabilizing function on ECM and endothelium.     

Pilot Study of Angiogenic Response to Yttrium-90 Radioembolization with Resin Microspheres

PurposeTo investigate the impact of radioembolization with yttrium-90 resin microspheres on the regulation of angiogenesis through observation of serial changes in a spectrum of angiogenic markers and other cytokines after therapy.Materials and MethodsThis prospective pilot study enrolled 22 patients with liver-dominant disease deriving from biopsy-proven hepatocellular carcinoma (HCC) (n = 7) or metastatic colorectal carcinoma (mCRC) (n = 15). Circulating angiogenic markers were measured from serum samples drawn at baseline and at time points after therapy ranging from 6 hours to 120 days. Using multiplex enzyme-linked immunosorbent assay, several classic angiogenesis factors (vascular endothelial growth factor [VEGF], angiopoietin-2 [Ang-2], basic fibroblast growth factor [bFGF], platelet-derived growth factor subunit BB [PDGF-BB], thrombospondin-1 [Tsp-1]) and nonclassic factors (follistatin, leptin, interleukin [IL]-8) were evaluated.ResultsIncreases in cytokine levels ≥ 50% over baseline were observed in more than half of all patients studied for many cytokines, including classic angiogenic factors such as VEGF, Ang-2, and Tsp-1 as well as nonclassic factors IL-8 and follistatin (range, 36%–82% for all cytokines). Baseline cytokine levels in patients with overall survival (OS) < 6 months differed significantly from patients with longer survival for Ang-2 (P = .033) and IL-8 (P = .041). Patients with OS ≤ 6 months exhibited transient increases in VEGF and PDGF-BB after therapy compared with patients with OS > 6 months.ConclusionsRadioembolization is associated with early transient increases in many angiogenic cytokines. In this small sample size, some of these changes were associated with worse OS. This research has important implications for future studies of radioembolization with antiangiogenic therapy performed during and after the procedure.     

血管紧张素-2对血管内皮细胞[Ca~(2+)]i的影响及合贝爽的保护作用

目的：观察血管紧张素-2（A增-2）对血管内皮细胞[Ca^2＋]i的影响及合贝爽的保护作用。方法：将血管内皮细胞分为空白对照组、Ang-2组、Ang-2＋合贝爽组。Ang-2组加入10^-7mogl/L Ang-2，Ang-2组＋合贝爽组加入10^-7mol／L Ang-2和1mg／L合贝爽。各组在药物作用60min后，用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca^2＋]i。结果：①Ang-2组的细胞内[Ca^2＋]i显著高于空白对照组（P〈O．01）；②Ang-2＋合贝爽组的细胞内[Ca^2＋]i显著低于Ang-2组（P〈0．01）。结论：Ang-2可引起细胞内[Ca^2＋]i的显著增加，而合贝爽对Ang-2所致的[Ca^2＋]i增加具有保护作用。     

多发伤患者早期促血管生成素-2的变化及临床意义

目的 探讨创伤早期促血管生成素-2(Ang-2)的变化及临床意义. 方法 遴选20～60岁、伤后1 h内就诊入院的多发伤患者45例,按损伤严重度评分(ISS)分为3组,入院后立即采血,对比分析各组血浆Ang-2、TNF-α、IL-6含量变化.同时,观察临床指标,对比分析不同氧合指数、休克指数和碱缺失状况下的血浆Ang-2含量变化. 结果 血浆Ang-2与ISS评分呈正相关(r=0.878,P＜0.01),与炎症因子TNF-α、IL-6变化具有高度的一致性(r=0.720,r=0.758,P＜0.01);休克指数增加或氧合指数下降时,血浆Ang-2值显著升高(P＜0.01);碱缺失升高,血浆Ang-2值也随之显著升高(P＜0.01). 结论 Ang-2是创伤后早期出现内皮激活和机能失调的重要标志,与炎症介质释放和组织氧合灌注密切相关,可能与创伤后病情进展和预后密切相关.     

VEGF和Ang-1在皮肤创伤和放射性烧伤愈合过程中的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）和促血管生成素-1（Ang-1）在皮肤单纯性创伤和放射性烧伤中表达的动态变化,了解其在血管再生中的作用,为深入探讨放射性烧伤的愈合机制及其治疗提供有意义的实验资料。方法在大鼠背侧切开皮肤全层制备大鼠创伤模型（单创组）,应用电子线照射臀部皮肤,建立放射性烧伤模型（放伤组）。于伤后1-60d不同时间活体伤口取材,HE染色组织病理学观察,应用Western blot法检测VEGF和Ang-1蛋白的表达。结果在单纯性皮肤创伤愈合过程中,VEGF和Ang-1蛋白表达变化均在伤后第1天开始上升,伤后第5-7天达高峰,然后逐渐下降到接近正常水平。在放射性烧伤愈合过程中,VEGF是先降低后升高然后再降低,而Ang-1的变化与此相反。与单创组比较,放烧组VEGF蛋白表达在第1、7和14天明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;在第1、7、14、21、28和35天Ang-1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）,此后渐升高。结论放射性烧伤愈合早期阶段VEGF和Ang-1的蛋白表达明显降低,是放射性烧伤愈合延迟的重要原因之一。     

运动训练对大鼠局部脑缺血再灌注后血管生成素及其受体表达的影响

目的:探讨运动训练对大鼠局部脑缺血再灌注后血管生成素及其受体表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠42只,随机分成运动组、对照组和假手术组,每组14只。运动组和对照组采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法造模24h后,运动组进行跑台训练,速度为12m/min,每天30min,连续2周;假手术组进行相同的造模手术,但不造成缺血。2周后采用免疫组化法观察大鼠脑缺血再灌注后Ang-1、Tie-2表达的空间分布情况,Western blot定量检测Ang-1及其受体Tie-2的表达。结果:免疫组化染色显示,Ang-1及其受体Tie-2阳性细胞主要分布在缺血侧的额顶叶皮层。Western blot结果显示,2周后,运动组Ang-1及其受体Tie-2的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:运动训练可上调Ang/Tie-2通路的表达,这可能是其促进脑缺血性损伤后大鼠神经功能恢复的内在原因之一。     

被动吸烟所致小鼠肺癌中Angiopoietin-3基因过表达及其意义的初步探讨

目的 初步寻找新的与肺癌相关的基因,为全面揭开肺癌发病机制、进一步诊断和治疗肺癌提供依据.方法 （1）通过基因表达芯片筛选被动吸烟致小鼠肺癌中异常表达的基因;（2）荧光实时定量PCR验证部分基因芯片结果;（3）应用western blotting分析方法检测小鼠肺组织中Angiopoietin-3（Ang-3）基因的蛋白表达量变化.结果 实时荧光定量PCR结果显示Ang-3基因的mRNA相对表达量在肺癌组（30.6544±15.2245）明显高于在正常对照组（1.0469±0.3441,P〈0.05）.Western blotting结果进一步表明吸烟导致Ang-3基因蛋白高表达（1.2724±0.1493）,尤其是在肺癌组织中（1.5901±0.1189）明显高于正常肺组织中（0.9054±0.0523）,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 Ang-3基因在被动吸烟所致小鼠肺癌的发生、发展中发挥一定的作用.