1,25二羟维生素D3对肝癌HepG2细胞增殖侵袭影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]及PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)对人肝癌Hep G2细胞的增殖、侵袭影响及作用机制。方法实验设10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/L 1,25(OH)_2D_3组及2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L LY294002组,10~(-7)mol/L 1,25(OH)_2D_3+5μmol/L LY294002联合组,噻唑蓝法检测人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率;Compu Syn软件计算联合指数;Tanswell小室检测HepG2细胞侵袭数;Western blot检测Hep G2细胞增殖细胞核抗原(PCNA),细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、10号染色体缺失且与张力蛋白同源物磷酸脂酶基因(PTEN)蛋白。结果 1,25(OH)_2D_3及LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖抑制率呈时间-剂量依赖效应(P0.05);1,25(OH)2D3联合LY294002组细胞增殖抑制率明显高于二者单独处理组(P0.05),联合指数=0.728,2者具有协同效应;10-7mol/L 1,25(OH)2D3组、5μmol/L LY294002组以及联合组Hep G2细胞侵袭数[分别为(45.9±6.4)、(49.9±6.0)、(27.8±4.0)个]明显低于对照组[(64.6±8.0)个](P0.05)。与对照组比较,10-7mol/L 1,25(OH)2D3组及联合组HepG2细胞PTEN蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),10-7mol/L 1,25(OH)_2D_3组、5μmol/L LY294002组及联合组HepG2细胞PCNA、MMP-9、p-AKT蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P0.05),且联合组蛋白表达量低于二者单独处理组(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭,其机制可能与上调PTEN表达,抑制PI3K/AKT信号通路活性,下调PCNA、M M P-9蛋白有关;与LY294002合用具有协同效应。     

PI3K/Akt信号通路对二氧化硅诱导人胚支气管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用.方法 将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组;(2)SiO2处理组;(3)Akt磷酸化抑制剂组;(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组;(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞24 h再用SiO2处理组;SiO2暴露浓度为100 μg/ml,磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10 μmol/L;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、TGF-β 、α-SMA表达水平.用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况.结果 SiO2可以明显促使Akt磷酸化,48 h p-Akt表达增加了近l倍,72 h表达最高;TGF-β在12h明显增高,48 h达高峰;α-SMA表达在24 h开始增高,72h表达上调了1倍.Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化,明显降低α-SMA的表达,尤其是先加抑制剂与细胞作用24 h后再加SiO2,p-Akt和α-SMA表达均明显下调,分别下调了1.5倍和7.6倍,对TGF-p表达则无明显影响.免疫荧光结果显示,SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达,而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱.结论 SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的,Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达.     

硒对镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶和c-Myc及p53表达的影响

目的研究亚硒酸钠时氯化镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA、c-Myc蛋白、p53蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为6组，对照组、硒组（5μmol／kg亚硒酸钠）、5μmol／kg氯化镉组、10μmol／kg氯化镉组、研（5μ／kg亚硒酸钠）＋5μmol／kg氯化镉组、硒（5μmol／kg亚硒酸钠）＋10μmol／kg氯化镉组。每组动物5只，染毒48h后取出肝脏，用RT-PCR方法检测TERP基因的表达，用免疫组织化学方法检测c-Myc蛋白和p53蛋白的表达。结果与对照组比较，5μmol／Lkg氯化镉组和10μmol／kg氯化镉组TERP表达增多，10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达增多，5μmol／L kg氯化镉组和10μmol／L kg氯化镉组p53蛋白表达增多。TERT的表达，硒＋10μmol／Lkg氯化镉组与10μmol／L kg氯化镉组比较降低；硒＋10μmol／L kg氯化镉组比10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达降低；硒＋5μmol／L kg氯化镉组、硒＋10μmol／L kg氯化镉组与相对应的镉组比较p53蛋白表达降低。结论镉在5～10μmol／L kg的剂量条件下可以诱导大鼠肝脏高表达TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白，而硒对镉引起的TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白的表达增高具有一定的拮抗作用。     

PI3K-AKT信号传导通路与鼻咽癌的相关性的初步研究

目的探讨鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间的关系。方法按诊断标准选取我院门诊、健康体检和住院病人鼻咽癌患者研究组和空白对照组,各5例。比较2组鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)的相关性。结果研究组和空白对照组的PI3K和AKT的蛋白表达量明显高于正常值。而LY294002对CNE2细胞生长、增殖具有抑制作用,而且呈剂量依赖性。LY294002作用后鼻咽癌细胞株CNE2细胞的PI3K和AKT的蛋白表达均减弱。LY294002可以诱导CNE2细胞的凋亡。随着LY294002浓度的增加,凋亡率呈上升趋势,15、30、50nmol/L的LY294002作用后CNE2细胞所产生的凋亡率分别为(5.621±0.125)、(18.522±0.764)、(24.270±0.215),而空白对照组为(3.430±0.234),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LY294002与鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2间存在显著负相关,并可以抑制鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2的生长和增殖从而诱导其凋亡。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路的激活及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间存在显著正相关关系。     

PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中的相互作用机制

目的探讨磷脂酰肌醇3–激酶/蛋白激酶B/哺乳动物靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)两条信号通路对胃癌细胞功能的影响及相互作用机制。方法使用PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂AZD8055、MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用于胃癌MGC-803细胞。应用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;蛋白印迹法(Western blot)检测通路关键蛋白的表达。结果联合使用LY294002(25μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)、AZD8055(0.1μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖活性,且联用组比单独作用组具有更强的抑制效果(P 0.05);联用组诱导细胞凋亡数量和阻滞于G0/G1期的MGC-803细胞数量增多,高于单独作用组(P 0.05)。与LY294002、AZD8055和AZD6244单独作用相比,LY294002与AZD6244、AZD8055与AZD6244联用组MGC803细胞p-AKT、p-P70S6K和p-ERK1/2蛋白表达明显受到抑制(P 0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK两条信号通路在胃癌MGC-803细胞的生长中具有协同调控作用,对于两条信号通路的多靶点抑制能够更加明显的抑制癌细胞生长。     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路在苯醌致HL-60细胞增殖过程中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路在苯醌(BQ)致HL-60细胞增殖中的作用.方法 取对数生长期的HL-60细胞,分为对照组(PBS处理细胞)、BQ染毒组(3 μmol/L BQ染毒)、LY294002+BQ染毒组(3μmol/L BQ染毒前加20 μmol/L LY294002),用alamar blue 法检测细胞增殖率,免疫印迹(Western blot)法检测细胞内p-Akt、Akt蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期情况.结果 BQ染毒组细胞增殖率(185.00%±30.00%)和S、G2期细胞比例(分别为48.23%±1.37%、15.40%±1.21%)均高于对照组(分别为100.00%±0.00%、42.47%±0.45%、5.40%±0.40%),G1期细胞比例(36.37%±0.40%)低于对照组(52.13%±0.75%),差异均有统计学意义(P＜0.05);BQ染毒组细胞内p-Akt蛋白表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Akt表达量与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).LY294002+BQ染毒组细胞增殖率(82.59%±15.00%)和S、G2期细胞比例(分别为42.03%±0.50%、3.87%±0.47%)比BQ染毒组低,G1期细胞比例(54.43%±0.40%)比BQ染毒组高,差异均有统计学意义(P<0.05),细胞内p-Akt蛋白表达量明显低于BQ染毒组,差异有统计学意义(P<0.05);Akt蛋白表达量与BQ染毒组的差异无统计学意义(P>0.05).结论 PI3K/Akt信号转导通路在BQ致HL-60细胞增殖过程中可能起着重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effects of phosphatidylinositol 3-kinase/ Serine-threonine kinase (PI3K/Akt) signal pathway on the proliferation of HL-60 cells exposed to benzoquinone (BQ). Methods HL-60 cells were divided into 3 groups: control group (treated with PBS), BQ group (treated with 3 μmol/L BQ) and LY294002 plus BQ group (treated with 20 μmol/L LY294002 plus 3 μmol/L BQ). The cell proliferation was measured with alamar blue dye assay. Western blot assay was used to detect the expression of p-Akt and Akt proteins and flow cytometer was used to observe the cell cycle. Results The cell proliferation rate and the cell proportion in the S, G2 phase of BQ group were 185.00%±30.00%, 48.23%±1.37% and 15.40%±1.21%, respectively, which were significantly higher than those ( 100.00%±0.00%, 42.47%±0.45% and 5.40%±0.40%) of control group (P<0.05 ). But the cell proportion rate (36.37%±0.40% ) in the G1 phase in BQ group was significantly lower than that (52.13%±0.75% ) in control group (P<0.05). The expression level of p-Akt protein in BQ group was significantly higher than that in control group (P<0.05). The cell proliferation rate and the cell proportion in the S, G2 phase of LY294002 plus BQ group were 82.59%±15.00%, 42.03%±0.50% and 3.87%± 0.47%, respectively, which were significantly lower than those of BQ group (P<0.05). But the cell proportion rate (54.43%±0.40%) in the G1 phase in LY294002 plus BQ group was significantly higher than that in BQ group (P<0.05 ). Conclusion The PI3K/Akt signal pathway may play an important role in the proliferation of HL-60 cells exposed to BQ.     

PI3K/Akt信号通路在虾青素调节LX-2细胞活化中作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在虾青素调节人肝星状细胞(LX-2细胞)活化中的作用。方法实验设对照组、低、中、高剂量虾青素组(5、10、20μmol/L)、抑制剂组(25μmol/L LY294002)、抑制剂+虾青素组(25μmol/L LY294002+20μmol/L虾青素),作用48 h后检测LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(col1a1)mRNA表达水平、各组细胞Akt及其磷酸化水平。结果与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中α-SMA和col1a1 mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖关系(P0.05);与对照组比较,抑制剂组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.42±0.05)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.23±0.05)、(0.35±0.06)]均明显降低(P0.05);与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.60±0.07)、α-SM A和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.48±0.07)、(0.61±0.04)]均明显降低(P0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.18±0.04)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.11±0.05)、(0.20±0.03)]均明显降低(P0.05)。结论虾青素可通过PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞活化,发挥抗非酒精性脂肪肝纤维化作用。     

1,4苯醌对K562细胞自噬的影响及机制

[目的]研究1,4苯醌(1,4-BQ)对人慢性髓系白血病K562细胞自噬的影响及其机制。[方法]选择人慢性髓系白血病K562细胞,采用1,4-BQ、自噬早期抑制剂LY294002和自噬晚期抑制剂氯喹(CQ)进行染毒处理,分为对照组、1,4-BQ染毒组(5、10、20μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)、CQ组(10μmol/L)、1,4-BQ(20μmol/L)+LY294002(10μmol/L)组和1,4-BQ(20μmol/L)+CQ(10μmol/L)组。应用MTT法检测细胞增殖率;采用CYTO-ID荧光探针并运用荧光染色法和流式细胞术法对细胞自噬水平进行定性、定量检测;采用丫啶橙染色法检测细胞溶酶体pH值;运用实时定量PCR法和Western blot法检测LC3-Ⅱ和P62自噬相关基因和蛋白的表达水平。[结果]10、20μmol/L的1,4-BQ分别作用K562细胞24、48、72 h后,细胞相对增殖率明显降低(P0.05)。CYTO-ID自噬荧光染料特异性聚集在K562细胞胞质内,随着染毒浓度增加荧光强度明显增强。流式细胞术结果显示,与对照组相比,5、10、20μmol/L 1,4-BQ组自噬水平均明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。丫啶橙染色结果显示,不同浓度1,4-BQ组红色荧光强度均高于对照组,即1,4-BQ组溶酶体pH明显降低。Western blot结果显示,当1,4-BQ浓度为10、20μmol/L时,LC3-Ⅱ和P62蛋白表达量明显高于对照组(P0.05),且在染毒24 h时增幅最大。干预自噬后,与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+LY294002组的自噬水平和LC3-Ⅱ蛋白表达量均降低(P0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组自噬水平增加(P0.05),而与CQ组的差异无统计学意义。此外,与对照组相比,CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达明显增加(P0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。[结论]1,4-BQ可引起K562细胞LC3-Ⅱ、P62蛋白表达增加,可能是通过增加自噬体的合成和减少自噬体的降解从而增加细胞自噬。     

HIF-1α和VEGF在稽留流产患者血清和绒毛中的表达研究

目的:探讨稽留流产患者缺氧诱导因子(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)在其血清和绒毛中的表达情况并进行二者相关性研究。方法:采用ELISA试验和SP法分别测定66例稽留流产患者(流产组)与54例正常早孕孕妇(对照组)血清和绒毛中HIF-1α和VEGF的表达水平,并将稽留流产组按有无明确原因分为有因组和无因组;同时根据胚胎死亡后稽留宫内时间分为>4周组、2~4周组和<2周组分析相关性。结果:流产组血清HIF-1α和VEGF的水平分别为(317.3±116.8)ng/L和(34.2±4.9)ng/L,对照组分别为(416.8±121.1)ng/L和(51.4±55.2)ng/L,两组差异有统计学意义(P<0.05);流产组患者绒毛中HIF-1α和VEGF的表达量分别为(3.1±2.2)ng/L和(3.7±2.1)ng/L,对照组分别为6.1±4.2和6.9±3.4,两组差异有统计学意义(P<0.05)。两组血清VEGF和HIF-1α的表达成呈正相关(P<0.05),两组绒毛中VEGF与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05);但稽留宫内时间<2周组、2~4周组和>4周组血清和绒毛中HIF-1α和VEGF的表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α和VEGF在血清和绒毛中的低表达可能是导致稽留流产的重要原因之一。     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

缺氧对肝癌细胞HepG2中HIF-1α和HK11表达的影响

目的探讨缺氧对肿瘤细胞周期调控的机制及乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）表达的影响。方法人肝癌细胞HepG2分成3组：缺氧12h组、缺氧24h组及对照组。缺氧组分别在缺氧条件下（37℃，5％CO2、2．0％O2饱和度）培养12h和24h，对照组置于正常氧浓度条件下（37℃。5％CO2、21．0％O2饱和度）培养24h。流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达，荧光定量PCR法检测HKⅡ mRNA表达量。结果缺氧情况下细胞周期分析处于G0／G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，并且可见到较明显的凋亡峰的形成，缺氧12h组、缺氧24h组的CO／G1期比例显著高于对照组（p〈0．05）；HIF-1α和HKⅡ在两组缺氧组与对照组比较，其表迭量明显增加（p〈0．05），缺氧24h组与缺氧12h组比较有显著性差异（p〈0．05）。结论HIF-1α可刺激人肝癌细胞HKⅡ表达的增加，细胞阻滞在Go／G1期，以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗肝癌基因治疗的新途径。     

复发性流产妇女围植入期子宫内膜HIF-1α、VEGF及微血管的表达和意义

目的探讨复发性流产妇女围植入期子宫内膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及微血管的表达及意义。方法选择2016年4月-2018年1月邵阳市中心医院妇产科收治的58例不明原因复发性流产妇女作为病例组,生育正常妇女40例为正常组,使用Pipelle取样器获得受试者围植入期子宫内膜活组织样本,RT-PCR检测子宫内膜HIF-1α和VEGF mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测子宫内膜HIF-1α和VEGF蛋白表达水平,并计算微血管密度(MVD),分析病例组子宫内膜HIF-1α和VEGF表达水平及意义。结果病例组子宫内膜HIF-1α、VEGF mRNA均显著高于正常组,MVD显著高于正常组,子宫内膜HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率显著高于正常组,差异均有统计学意义(P0. 05)。HIF-1α蛋白主要在子宫内膜胞质中表达,VEGF蛋白主要在子宫内膜腺上皮中表达。病例组再次流产患者子宫内膜HIF-1α和VEGF表达水平显著高于未流产患者,差异有统计学意义(P0. 05)。病例组子宫内膜HIF-1α、VEGF表达水平与MVD分别呈显著正相关关系(r=0. 687、0. 724,P0. 05)。结论复发性流产妇女围植入期子宫内膜HIF-1α和VEGF表达及MVD异常升高,可能是复发性流产发生的病理机制之一。     

重型肝炎肝性脑病患者血氨和肿瘤坏死因子-α的相关性研究

目的 研究重型肝炎肝性脑病患者血氦和TNF-α的相关性。方法 采用ELISA法检测60例重型肝炎患者血清TNF-α含量，用酶法测定静脉血氦值。结果 在肝性脑病0级（15例）患者中血氨和，TNF-α分别是（39．1±6．5）μmol／L和（72．34±7．25）ng／L，Ⅰ级（10例）分别是（55.3±9．2）μmol／L和（91．25±10．16）ng／L，Ⅱ级（16例）分别是（82．5±12．5）μmol／L和（128．25±13．45）ng／L，Ⅲ级（13例）分别是（124．6±21．3）μmol／L和（155．38±19．76）ng／L，Ⅳ级（6例）分别是（198．3±36．7）μmol／L和（186.39±23.54）ng／L。血氨和TNF-α之间具有显著的相关性（r=0.68，P〈0．01），并且血氨和TNF-α与肝性脑病的严重程度具有明显的相关性（r=0.91，P〈0．01和r=0．85，P〈0．01）。结论 重型肝炎肝性脑病患者血氨和TNF-α具有显著的相关性，TNF-α可能参与肝性脑病的发病机制。     

芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及HIF-1α/NF-κB信号通路的影响

目的探讨芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养人肾癌A498细胞, 分为不同浓度芹黄素(10、20、40 μmol/L)组、芹黄素(40 μmol/L)+HIF-1α激动剂二甲基二酰氨基乙酸(DMOG)组、HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)组、对照组。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖, Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot实验检测凋亡蛋白及HIF-1α/NF-κB通路蛋白表达。结果芹黄素显著抑制A498细胞增殖, 且抑制作用呈浓度依赖性(P<0.001)。与对照组比较, 10、20、40 μmol/L芹黄素组和YC-1组A498细胞凋亡率[(4.35±1.04)% vs (10.06±1.13)%、(18.52±2.58)%、(32.17±2.63)%、(26.94±2.41)%]、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达量均显著升高, B淋巴细胞瘤2(Bcl-...     

锌对L6细胞葡萄糖消耗量和蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β表达的影响（英文）

目的以L6细胞为研究对象,观察锌对正常L6细胞及棕榈酸诱导的胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖消耗量及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK3β)表达的影响。方法培养L6成肌细胞,分化后用0.4 mmol/L棕榈酸作用24h造胰岛素抵抗细胞模型,用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50,100μmol/L)作用3h,葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下细胞对葡萄糖的摄取量;用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50μmol/L)作用15 min,Western blot法检测磷酸化AKT及磷酸化GSK3β表达水平。结果 10⁵0μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,1050μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,10⁵0μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,1050μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,10⁵0μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论1050μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论10⁵0μmol/L的锌可提高L6细胞的葡萄糖消耗量,这种作用可能与其增强AKT和GSK3β磷酸化水平有关。     

无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的诱导作用

[目的]观察亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达的诱导作用。[方法]以5μmol／L和10μmol／L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况。[结果]5μmol／L和10μmol／LNaAs02暴露2h开始出现HO-1mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组（P〈0．01）。其中,10μmol／LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组（P〈0．01）;但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高。NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组（均P〈0．01）;5μmol／L和10μmol／L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2．80、9．34、18．15和3．97、12．92、23．29倍;此外,10μmol/LNaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol／L组（P〈0．01）。[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应。     

抗氧化剂对砷诱导人正常膀胱上皮细胞HIF-1α 表达的影响[

目的探讨抗氧化剂对砷诱导人正常膀胱上皮细胞HIF-1α表达的影响。方法人膀胱上皮细胞(SVHUC-1)暴露于0、0.5、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠(Na As O2)24 h,RT-PCR检测HIF-1α的mRNA水平;选择4和10μmol/L剂量组,分别处理4、12、24、48、72 h,再以RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平;SV-HUC-1细胞同时暴露于Na As O2和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、维生素C(VC),检测HIF-1α的蛋白含量。结果经砷处理后,SV-HUC-1细胞HIF-1α的mRNA含量显著升高(P0.05),并与染砷剂量呈显著剂量-反应关系;抗氧化剂NAC和VC均显著降低了HIF-1α的蛋白水平。结论砷能诱导人正常膀胱上皮细胞HIF-1α表达增加,抗氧化剂NAC和VC对砷诱导的HIF-1α表达具有显著的抑制作用。     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:初步阐述缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈鳞癌组织中异常表达的可能机制及两者与各种临床病理因素的关系及其预后价值。方法:应用免疫组化S-P法和蛋白印迹免疫分析法测定HIF-1α及VEGF,所得数据应用SPSS11.0系统软件包进行处理。结果:免疫组化结果:HIF-1α和VEGF在宫颈组织中阳性表达率分别为62.07%和49.43%;HIF-1α和VEGF的表达随着临床分期的增高及病理分化的降低表达增强,两者在原位癌、早期浸润癌和晚期浸润癌中的表达差异有统计学意义,脉管内见癌栓者HIF-1α的表达增强,两者的表达与淋巴结转移情况无关。VEGF的表达与HIF-1α的表达呈正相关。蛋白印迹免疫分析显示:在120KD和23KD位置可见HIF-1α和VEGF的蛋白条带,早期宫颈鳞癌组织中HIF-1α蛋白表达量是正常宫颈组织中蛋白表达量的(5.1±1.62)倍,早期宫颈鳞癌组织中VEGF蛋白表达量是正常宫颈组织中蛋白表达量的(4.2±1.62)倍。结论:HIF-1α和VEGF的联合检测对判断宫颈鳞癌的病情和预后具有重要的意义。     

肝细胞生长因子对铅致人肾小球系膜细胞损伤的保护效应的机制

目的初步探讨肝细胞生长因子（HGF）防护铅处理致人肾小球系膜细胞（HMC）损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组（C组）、Pb10μmol／L组和HGF＋Pb10μmol／L组,在6、12、24、48h分别通过噻唑蓝（MTY）法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量一PCR检测各组细胞中Caspase-3的表达水平。结果MTr检测结果显示。Pb10pμmol／L组HMC在6、12、24、48h细胞生长存活率均显著低于HGF＋Pb10μmol／L组（P〈0．01）;流式凋亡检测结果显示,HMC在10μmol／L醋酸铅染毒6、12、24和48h后,HGF＋Pb10μmol／L组在各个时间点细胞凋亡率显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。实时荧光定量-PCR检测结果显示,在HMC铅染毒48h后,HGF＋Pb10μmol／L组Caspase-3的表达量显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。结论铅促进HMC细胞的凋亡,而HGF通过降低Caspase．3的表达抑制HMC的凋亡,从而发挥对铅致HMC细胞损伤的保护作用。     

扛板归对肝纤维化大鼠肝组织缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响

目的研究中药扛板归对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。方法72只SD大鼠,按随机数字表法分为六组,每组12只,用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度扛板归干预后,肝脏常规制片并HE染色观察病理形态学改变,免疫组织化学方法检测各组大鼠肝组织HIF-1α及VEGF蛋白表达的情况。结果扛板归高剂量组中HIF-1α及VEGF蛋白表达情况从（-）～（3＋）分别为1只,9只,1只,0只和1只,8只,2只,0只、中剂量组大鼠肝组织HIF-1α及VEGF蛋白表达从（-）-（3＋）分别为1只,7只,2只,0只和1只,6只,3只,0只,与模型组比较均明显降低（P〈0．01）。结论扛板归具有显著的抗肝纤维化,其机制可能通过降低HIF—1α及VEGF蛋白的表达而调控细胞外基质的代谢有关。