三步法提取纯化肺腺癌组织中HSPgp96多肽复合物

目的建立从人肺癌组织中提取,为肺癌肿瘤免疫治疗的临床应用提供实验依据纯化热休克蛋白（HSP heatshock protein）gp96多肽复合物的方法 ;并通过体外实验对其在肺癌肿瘤免疫中的作用进行初步研究。方法运用三步蛋白纯化法从肺腺癌（PAa）组织中提取、纯化HSPgp96肽复合物,SDSPAGE、Westernblot鉴定HSPgp96多肽复合物。提取的gp96-多肽复合物与树突状细胞共孵育培养3～10天后,第10天加入到由人外周血中分离的淋巴细胞,继续培养3～7天刺激细胞毒T淋巴细胞的产生;以gp96-多肽复合物致敏淋巴细胞作为阳性对照组;以未加入任何抗原成分的DC为阴性对照。收集被致敏淋巴细胞的上清,采用IFN-γELISA检测试剂盒分析淋巴细胞所释放的IFN-γ量作为CTL反应的指标。结果应用该方法提取的蛋白质经SDSPAGE和Westernblot特异性鉴定,证实是HSPgp96多肽复合物;蛋白产率为每克PAa肺癌组织可纯化HSPgp96肽复合物约50μg。肿瘤免疫学实验发现,以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原负载DC,以及单独以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原,分别致敏淋巴细胞后均可以诱导产生CTL反应;且gp96/DC为疫苗所释放的IFN-γ量高于单独以gp96为疫苗所释放的IFN-γ量,有显著性差异（P〈0.01）。结论三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSPgp96肽复合物具有高获率、高纯度、高免疫效应等优点。gp96-多肽复合物能诱导出肿瘤特异性CTL反应,而将其负载DC后能激发起更强的CTL,显示出gp96-多肽复合物/DC疫苗抗肿瘤作用的广泛前景。     

热休克蛋白gp96在原发性肝癌组织中的检测及其意义

热休克蛋白gp96的发现为肿瘤和病毒性肝炎等传染性疾病的免疫治疗开辟了新的途径。用免疫组织化学方法对gp96存原发性肝癌组织中的表达进行检测，探讨gp96在抗肝癌免疫反应中的作用。     

肝癌基因谱动态表达及HSPgp96异常的临床价值

目的:探讨肝细胞癌变过程中基因表达谱的动态变化, 观察热休克蛋白(HSP)gp96表达及其在肝癌早期诊断及判断预后方面的临床价值. 方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA, 0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌发生, 观察肝病理组织学(HE染色)改变, 用全基因组芯片分析肝基因表达谱的动态变化, 以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段.结果: SD大鼠在喂饲2-FAA后, 肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性, 中期出现不典型增生, 后期见大量癌巢结节. 肝癌发生过程中大鼠肝基因表达谱明显改变, 与对照大鼠比较, 癌变大鼠gp96上调3倍; 诱癌变过程中, 肝组织gp96 mRNA表达明显增加, 变性组, 癌前组和癌变组的肝组织中gp96基因表达均明显高于正常对照组(90.9%, 100%, 100% vs 16.67%, P<0.05). 结论:肝细胞癌变过程中基因表达谱明显改变, 其中gp96 mRNA呈过度表达, 其分析有利于肝癌的诊断和预后判断.     

人消化道癌组织HSP70的检测及其多肽复合物的分离研究

目的 分析人消化道癌组织蛋白表达谱的差异并分离纯化食管癌组织中HSP70-多肽复合物.方法 提取人食管、胃及大肠的癌组织、癌旁组织和正常组织的蛋白质,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行电泳分析;同时以食管癌组织为材料,通过层析柱分离纯化HSP70-多肽复合物.结果 相同器官的不同组织中不同分子量蛋白的种类基本一致,但丰度则表现出差异;同时分离到食管癌细胞的HSP70-多肽复合物.结论 不同分子量的蛋白质在不同组织中表达的丰度不同,可能与组织细胞生命活动状态相关.HSP70-多肽复合物的分离为提取肿瘤HSPT0-多肽复合物提供了具体方法,为深入研究和利用HSP70蛋白奠定了基础.     

热休克蛋白70在胶质细胞瘤中的表达以及与肿瘤病理分级的相关性

目的观察热休克蛋白(HSP70)在胶质细胞瘤中的表达以及与肿瘤病理分级的相关性。方法选取该院2010年1月至2013年1月50例胶质细胞瘤组织,采用SP免疫组化染色,进行HSP70蛋白检测。比较肿瘤分级与HSP70的相关性,同时,观察肿瘤复发对HSP70蛋白表达的影响。结果 HSP70蛋白阳性率,在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级肿瘤组织分别为33.33%、66.67%、84.62%、100%,随着分级的升高,其阳性率明显提高(P<0.05)。HSP70在局部复发组织中的阳性率为87.50%,无复发组为55.56%(P<0.05)。在复发组中,HSP70阳性患者复发时间明显早于HSP70阴性患者(P<0.05)。此外,HSP70阳性患者1年死亡率为65.79%,明显高于HSP70阴性组的16.67%(P<0.05)。结论 HSP70蛋白表达与肿瘤病理分级密切相关,分级越高,阳性表达越多。HSP70阳性能够提高局部肿瘤复发率及提前复发时间,对患者1年死亡率有较大的影响。     

热休克蛋白gp96、髓样细胞白血病-1和阻抑蛋白在肝硬化和肝癌组织中的表达

目的:分析热休克蛋白gp96、髓样细胞白血病-1(MCL-1)和阻抑蛋白(PHB)在LC和HCC组织中的表达及其临床意义.方法:免疫组化二步法分别检测19例LC,32例HCC和21例对照组肝组织中gp96,MCL-1和PHB的表达,并分析其与肝癌临床病理学特征的关系.结果:gp96在对照组、LC组和HCC组的表达逐渐增强(P＜0.05);HCC无包膜、有坏死和门静脉有癌栓者gp96表达较高;gp96表达与HCC分化程度呈负相关(r=-0.4655,P=0.0073),与TNM分期呈正相关(r=0.5157,P=0.0025).MCL-1和PHB在HCC组织中过表达,HCC有坏死者MCL-1表达高于无坏死者,HCC无包膜者PHB表达高于有包膜者(P＜0.05).结论:gp96,MCL-1和PHB的过表达可能与HCC的发生、发展有关.gp96可能E参与LC的发生、发展及向HCC的恶性转化,有助于判断HCC患者的预后.     

HSP60和p53在胃癌中的表达及意义

[目的]研究热休克蛋白60(HSP60)和p53在胃癌组织中的表达,并分析与胃癌临床病理特征的关系。[方法]采用免疫组化SABC法检测48例胃癌组织和14例正常胃黏膜中HSP60和p53的蛋白表达。[结果]胃癌组织中HSP 60和p53蛋白表达阳性率分别为81.3%、68.9%;HSP60在胃癌中表达与肿瘤分化程度及增殖能力有关(P0.05);p53蛋白在胃癌中表达与肿瘤大小、部位、浸润深度、淋巴结转移和肿瘤增殖能力有关(P0.05);HSP60与p53的表达无相关性。而HSP60在正常胃黏膜中有弱阳性表达(7.1%),在正常胃黏膜中未见p53表达。[结论]HSP60和p53表达与胃癌生物学行为有关,在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。     

热休克蛋白27/60在胃癌中的表达及意义

目的研究热休克蛋白27和60(HSP27/60)在胃癌组织中的表达及与胃癌生物学行为关系。方法采用免疫组化SABC法检测48例胃癌组织中热休克蛋白27和60的蛋白表达。结果胃癌组织中HSP27和HSP60蛋白表达阳性率分别为64.6%、81.3%;HSP27在胃癌中表达与肿瘤有无远处转移、淋巴结转移个数及浸润深度有关;HSP60表达与肿瘤细胞分化程度及Ki-67增殖指数有关;HSP27/60的表达存在相关性。结论 HSP27/60表达与胃癌生物学行为有相关性,在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。     

热休克蛋白70激发树突状细胞抗肝癌作用的实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为载体，用肝癌细胞提取的热休克蛋白70-肿瘤肽复合物（HSP-PC）刺激DC，观察经活化后的DC对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法用脐带血在体外培养诱导DC，用从SMMC-7721提取的HSP70—PC与DC共同培养，检测其对肝癌细胞的杀伤活性。结果经HSP70-Pc刺激后的DC对SMMC-7721的杀伤能力明显高于单纯DC对肿瘤细胞的杀伤能力。结论用HSP70—PC刺激的DC经体外实验证实具有明显的抗肿瘤效应，为临床肿瘤免疫治疗的开展提供了有效的数据。     

儿茶素单体对胃癌细胞热休克蛋白70和多药耐药蛋白1的影响

热休克蛋白70（HSP70）可抑制细胞凋亡，降低肿瘤热疗、化疗疗效，但其与化疗耐受性的关系不甚明确。多药耐药基因1（MDR1）的蛋白产物P-糖蛋白（P-gp）是一种耐药蛋白，在肿瘤耐药中起重要作用。本实验观察儿茶素单体（EGCG）及热休克对胃腺癌SGC7901细胞HSP70和P-gp表达的影响及其增强肿瘤化疗疗效的作用。     

热休克蛋白27和p53在胃癌中的表达及意义

[目的]研究热休克蛋白27(HSP27)和p53在胃癌组织中的表达及与胃癌生物学行为关系。[方法]采用免疫组化SABC法检测48例胃癌(胃癌组)、20例正常胃黏膜(对照组)组织中HSP27和p53的蛋白表达。[结果]HSP 27、p53蛋白表达阳性率,胃癌组分别为64.6%、68.9%,对照组分别为7.1%、0%,2组比较差异有统计学意义(P0.01);HSP27在胃癌中表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(P0.05),p53蛋白在胃癌中表达与肿瘤大小、部位、浸润深度、淋巴结转移和肿瘤增殖能力有关(P0.05),HSP27与p53的表达无相关性。[结论]HSP27和p53表达与胃癌生物学行为有关,在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。     

热休克蛋白gp96在慢性乙型肝炎组织中的检测及其意义

对慢性乙型肝炎进行gp96检测 ,探讨gp96表达状况与肝炎病变进展过程的相关性及其在抗乙型肝炎病毒免疫反应中的作用。采用免疫组织化学 (IHC)方法 ,对 77例慢性乙型肝炎病例的活检肝组织标本进行gp96检测 ,其中轻度慢性肝炎者 37例 ,中度 2 0例 ,重度 2 0例。以 16例非肝炎肝组织作为本实验对照。gp96在对照组正常肝组织和慢性乙型肝炎中的平均阳性细胞率分别为 0 5 3%和 15 94 % ,两组间具有非常显著性差异。在慢性肝炎轻、中、重三组 ,阳性细胞平均率分别为 6 14 %、2 1 39%及 2 9 18% ,统计学检验表明组与组之间有显著差异 ,gp96表达率随着炎症程度的加重而上升。提示gp96与机体抗乙肝病毒的免疫应答程度有一定的相关性     

胃癌组织中HSPgp96的表达及意义

目的检测胃癌组织中热休克蛋白-糖蛋白96（HSPgp96）的表达，并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法和RT-PCR技术分别检测37例胃癌患者肿瘤组织及癌旁正常黏膜组织中HSPgp96蛋白和mRNA的表达，并分析其与胃癌临床病例指标的关系。结果胃癌组织中HSPgp96蛋白和mRNA的表达均显著高于癌旁正常组织（P均〈0．01）。胃癌组织中HSPgp96蛋白和mRNA的表达与胃癌分化程度、临床分期和淋巴结转移情况有关。结论胃癌组织中HSPgp96蛋白和mRNA的表达升高。胃癌组织中HSPgp96蛋白和mRNA的表达情况可作为评估患者病情和估计预后的参考指标。     

HBV相关肝细胞癌肿瘤组织中热休克蛋白mRNA表达水平与肿瘤分期的相关性分析

目的分析肝细胞癌(HCC)肿瘤组织中热休克蛋白(HSP)mRNA表达水平与HCC肿瘤分期的相关性。方法从NCBI网站的基因表达数据库(GEO)下载GSE14520数据集。从GSE14520基因数据库中获取HSP基因25种,通过与数据库下载的临床资料比对,纳入具有HSP基因mRNA表达水平和有对应临床资料的220例HCC患者。提取220例患者癌组织HSP基因的mRNA表达水平及对应的TNM分期及BCLC分期并进行相关性分析。采用Kruskal-Wallis H非参数检验进行多组间比较,采用单因素及多因素logistic回归分析HSP与HCC肿瘤分期的相关性。结果 HSPA12A、HSPA5、HSP90AA1与HSPA13 mRNA随着TNM分期增高,表达逐渐升高(P值均0.05);HSP90AA1 mRNA随着BCLC分期增高,表达逐渐升高(P0.05)。HSPA4L(OR=1.019,P=0.005)、HSPA12A(OR=1.077,P=0.026)与HSP90AA1(OR=1.001,P=0.002)是影响TNM分期的危险因素;HSPA9 mRNA升高与HCC患者TNM分期呈负相关(OR=0.995,P=0.011)。HSPH1(OR=1.005,P=0.041)、HSPA1B(OR=1.002,P=0.048)与HSPA5(OR=1.000,P=0.001)是影响BCLC分期的危险因素;HSPA9 mRNA升高与肝癌BCLC分期呈负相关(OR=0.995,P=0.005)。结论 HSP与HCC患者肿瘤临床分期存在一定相关性。     

HSP27与消化系统肿瘤耐药相关性的研究进展

热休克蛋白27(HSP27),又名热休克蛋白B1(HSPB1),是热休克蛋白家族的重要成员。为了顺应肿瘤个体化诊疗的趋势,HSP27的相关研究得到不断地拓展和加深,其对肿瘤的发生发展、化学治疗耐药以及预后判断的作用已得到广泛证实。此文就HSP27与消化系统肿瘤化学治疗耐药关系的最新进展作一综述。     

膀胱癌患者Survivin和HSP70的表达及其与临床病理特征的关系

目的观察生存素（Survivin）和热休克蛋白（HSP70）在膀胱癌中的表达,并探讨其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测48份膀胱癌组织标本（其中初发患者标本18份,复发患者30份）和13份正常膀胱组织标本Survivin和HSP70的表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。结果膀胱癌组织中Survivin和HSP70的表达明显高于正常膀胱组织（P均〈0.01）。Survivin和HSP70阳性表达率在不同年龄、性别、肿瘤大小及数目的患者之间无统计学差异（P均〉0.05）;但随着肿瘤病理分级分期的增加;Survivin蛋白表达率及表达强度均增加;两者在膀胱癌复发患者与初发患者中的表达差异有统计学意义（P均〈0.01）。在膀胱癌组织中,Survivin和HSP70蛋白表达具有正相关性（Pearson列联系数C=0.345 7,P〈0.05）。结论 Survivin和HSP70在膀胱癌组织中出现特异性表达上调,参与了膀胱癌发生和发展。     

肝细胞癌组织中HSP27、VEGF的表达变化及意义

目的观察肝细胞癌（HCC）组织中热休克蛋白27（HSP27）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测68例HCC组织及癌旁组织中的HSP27、VEGF。结果 HCC组织中HSP27、VEGF阳性表达率分别为75.0%、72.0%,癌旁组织中分别为61.8%、36.8%,两者比较,P均〈0.05。HCC组织中,HSP27表达与乙肝表面抗原（HBsAg）阳性、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关（P均〈0.05）,VEGF表达与肿瘤直径、淋巴结转移有关（P均〈0.05）;HCC组织中,HSP27与VEGF的表达呈正相关（r=0.248,P均〈0.05）。结论 HCC组织中HSP27、VEGF表达均升高;二者在HCC发生发展中具有重要作用,检测HSP27、VEGF对HCC的预后判断有一定参考价值。     

小鼠肝癌细胞H22源exosomes的制备及其免疫相关蛋白的初步研究

目的 分离提取和电镜观察小鼠肝癌细胞H22分泌的exosomes,并检测其含有的蛋白成分,为exosomes作为肿瘤疫苗提供理论依据。方法 超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化得到exosomes,并经透射电镜观察鉴定,运用肽质量指纹谱质谱分析和Western blot检测exosomes含有的蛋白成分。结果 从小鼠肝癌细胞H22中提取出exosomes,直径约为20-90 nm的膜性囊泡,呈圆形或椭圆形。该exosomes含有热休克蛋白（HSP）70、ICAM-1、延伸因子G2、动力蛋白轻链A、C-myc和Vav-2蛋白。结论 超速分级离心和蔗糖密度梯度离心提取纯化exosomes的方法具有可行性,小鼠肝癌细胞H22源exosomes表达有与抗原呈递相关蛋白（HSP70、ICAM-1）,迁移相关蛋白（动力蛋白轻链A）,粘附相关蛋白（ICAM-1）,细胞骨架相关蛋白（延伸因子G2）,肿瘤相关蛋白（C-myC蛋白、Vav-2蛋白）,具有免疫原性。     

p16和HSP70在原发性肺鳞癌中的表达及其临床意义

目的研究原发性肺鳞癌组织中p16及HSP70的表达及其临床意义。方法采用SABC免疫组织化学技术检测46例原发性肺鳞癌组织中p16和HSP70的表达。结果随着原发性肺鳞癌组织学分级越高、临床分期越高，p16蛋白表达缺失率越高，而与其发病年龄、性别无相关性。HSP70在原发性肺鳞癌组织表达率高达91．3％，与肿瘤发病年龄、性别、组织学分型、组织分化程度及临床分期没有明显相关性。结论认为p16和HSP70均与原发性肺鳞癌的发生发展有密切关系，故p16和HSP70的检测将有助于临床医师评估原发性肺鳞癌的生物学行为和预后，对指导治疗和提高疗效有重要意义。     

热休克蛋白与宫颈癌放射敏感性的相关性

目的探讨热休克蛋白（HSP）在不同放射敏感性宫颈癌组织中的表达。方法将152例宫颈癌放疗前病理标本依据放疗效果分为敏感组46例、不敏感组106例,采用免疫组化法检测各组标本中的HSP27、HSP70和HSP90的表达。结果宫颈癌组织中HSP27、HSP70和HStD0表达明显高于癌旁组织（P均〈0．01）;肿瘤组织病理分级与HSP70表达强度呈正相关（P〈0．05）。不敏感组HSP27、HSP90表达明显高于敏感组（P〈0．01）。结论检测HSP27、HSP70和HSP90表达水平可以作为宫颈癌细胞的放射敏感性及预测疗效的指标。