IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养,探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用.方法 取对数生长期细胞,分为3组:A组(KM3细胞组),B组(RAW264.7细胞组),C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组).分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后,检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例.RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量.ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量.结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后,与对照组相比,M2 型巨噬细胞比例显著增加(P<0.05);予以ACTA处理后M2型巨噬细胞表达明显下降(P<0.05);而予以rIL-6处理后M2型巨噬细胞表达明显上调(P<0.05).与B组(RAW264.7细胞组)相比,C组(RAW264.7细胞+KM3细胞)M2型巨噬细胞相关细胞因子CCL22,IL-10的mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而M1型巨噬细胞相关因子IL-12,TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.05).与A组、B组相比,C组细胞上清液中IL-6含量在24 h、48 h、72 h时间点均明显上调(P<0.05).通过浓度梯度改变RAW264.7细胞或KM3细胞的数量,发现RAW264.7细胞数量的改变显著影响了IL-6的表达水平.结论 将RAW264.7细胞和KM3细胞共培养后,后者能诱导RAW264.7细胞向肿瘤相关M2型巨噬细胞转化, IL-6在上述转化过程中发挥重要作用.     

新藤黄酸干预肺腺癌血管生成的细胞学研究

目的 通过对人脐静脉内皮细胞HUVEC和人肺腺癌A549的培养,检测含新藤黄酸(GNA)条件培养基对血管内皮细胞存活率、成管和生长的影响.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和平板克隆实验法研究GNA对HUVEC存活率和克隆形成率的影响;应用薄层胶原建立血管内皮细胞的二维培养模型,观察GN A对于血管内皮细胞成管现象的影响;采用细胞划痕愈合和小室迁移实验考察GNA对HUVEC的迁移能力影响;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,HUVEC细胞存活率和克隆形成率随GNA剂量增加而降低.GNA可抑制HUVEC细胞的迁移.还可抑制HUVEC管腔样结构形成.此外,GNA可下调HUVEC中VEGF和HIF-1α蛋白的表达.结论GNA可在体外抑制血管生成,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞分泌的HIF-1α和VEGF有关.     

雌二醇调控VEGFα表达诱导肺腺癌A549细胞血管形成

目的研究雌二醇(17β-estradiol,E2)在肺腺癌A549细胞微环境中,通过血管内皮生长因子α(vascular endothelial growth factorα,VEGFα)诱导肿瘤血管形成的发生机制。方法将A549细胞分为3组:PBS组、10 nmol·L~(-1) E2组、10 nmol·L~(-1) E2+5μmol·L~(-1)雌激素受体拮抗剂(ICI)组。Western blot和ELISA法检测肺腺癌A549细胞和培养基中VEGFα的表达;MTT法检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的增殖能力;划痕实验检测HUVEC细胞迁移能力;小管生成实验检测HUVEC细胞的体外血管生成能力。结果与对照组(PBS)相比,E2刺激后的A549细胞中VEGFα的表达量增加,而加入ICI后,VEGFα表达量明显下降;同时,E2诱导A549细胞及上清液中VEGFα的表达,促进了HUVEC细胞的增殖、迁移和小管形成能力,ICI则相反。结论 E2通过作用于A549细胞中雌激素受体,刺激肺腺癌微环境中VEGFα的表达,促进肺腺癌血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成能力,诱导肺腺癌血管形成。     

新藤黄酸干预肺腺癌血管生成的研究

［］目的 通过对人脐静脉内皮细胞HUVEC和人肺腺癌A549的培养,检测含新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)条件培养基对血管内皮细胞存活率、成管和生长的影响。方法 采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法和平板克隆实验法研究新藤黄酸对HUVEC存活率和克隆形成率的影响;应用薄层胶原建立血管内皮细胞的二维培养模型,观察新藤黄酸对于血管内皮细胞成管现象的影响;采用细胞划痕愈合和小室迁移实验考察新藤黄酸对 HUVEC的迁移能力影响;Western-blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白的表达。结果 MTT检测结果显示,HUVEC细胞存活率和克隆形成率随GNA剂量增加而降低。新藤黄酸可抑制HUVEC细胞的迁移。还可抑制HUVEC管腔样结构形成。此外,新藤黄酸可下调HUVEC中VEGF和HIF-1α蛋白的表达。结论 新藤黄酸可在体外抑制血管生成,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞分泌的缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)有关。     

比卡鲁胺对乳腺癌细胞周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响

目的 探究比卡鲁胺对乳腺癌细胞凋亡周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响。方法 CCK-8检测不同浓度(25、50、100 μmol/L)比卡鲁胺对乳腺癌细胞和巨噬细胞增殖能力的影响。将细胞随机分为RAW264.7细胞组、RAW264.7细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组、MCF-7细胞组、RAW264.7细胞+MCF-1细胞组、RAW264.7细胞+MCF-1细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组。流式细胞仪检测极化指标CD86和CD206表达;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞中p-p38、p21、p-STAT蛋白表达。结果 卡鲁胺可抑制乳腺癌MCF-7细胞和巨噬细胞RAW264.7细胞增殖能力,且呈剂量相关性(P<0.05)。与RAW264.7细胞组相比,RAW264.7细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组CD86阳性表达、IL-6和TNF-α水平显著升高,CD206阳性表达和IL-10水平显著降低...     

高盐对血管内皮生长因子受体-3+巨噬细胞表型及功能的影响

目的 观察高盐对血管内皮生长因子受体（VEGFR）-3+巨噬细胞表型、淋巴管内皮细胞特性及功能的影响。方法 利用流式分选将小鼠RAW264.7巨噬细胞中VEGFR-3+亚群分选出来，分为Control组、低盐组（LS组，20mmol/L NaCl）和高盐组（HS组，40 mmol/L NaCl）。利用CCK-8法观察不同组VEGFR-3+细胞活性；Real-time PCR检测NaCl干预后VEGFR-3+巨噬细胞表型变化及淋巴管内皮细胞标志物mRNA表达水平；Transwell实验检测各组细胞的迁移功能，流式细胞术检测不同组细胞的吞噬能力。结果 与Control组相比，高盐干预可以使VEGFR-3+巨噬细 胞的白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、CC类趋化因子配体（CCL）2、血管内皮生长因子（VEGF）-C及张力应答性增强子结合蛋白（TonEBP）mRNA表达水平上调（P＜0.05）；HS组在高盐干预24、48 h后细胞活性均显著低于LS组（P＜0.05）；同时，HS组细胞迁移能力及细胞的吞噬能力与Control组相比显著增强，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 高盐可使VEGFR-3+巨噬细胞向M1型巨噬细胞偏移并表现出促淋巴管生成的特性，其迁移及吞噬能力显著增强，为进一步研究该亚群与淋巴管生成及心血管疾病的关系提供了依据。     

粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

目的:研究粉防己碱对人肺癌A549细胞血管生成拟态的影响。方法:采用细胞黏附试验观察粉防己碱对A549细胞黏附作用的影响;通过细胞迁移试验检测粉防己碱对A549细胞迁移能力的影响;通过血管生成拟态试验观察粉防己碱对A549细胞体外类血管生成的作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测粉防己碱对A549细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果:5、10、20μmol/L粉防己碱作用A549细胞30 min后,细胞的黏附作用受到抑制,并与浓度呈正相关;与对照比较,5、10、20μmol/L粉防己碱处理A549细胞12、24 h后,A549细胞迁移数减少,A549细胞管腔形成数明显减少,管腔长度明显缩短;A549细胞以粉防己碱处理后,血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达减弱。结论:粉防己碱可抑制A549细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态,其机制可能与抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、VEGF的表达有关。     

三七总皂苷调控巨噬细胞对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)通过调控巨噬细胞对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移的影响。方法:培养MDA-MB-231和Raw264.7细胞,给予不同浓度PNS,采用MTT与流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)分别检测不同浓度PNS对MDA-MB-231与巨噬细胞Raw264.7增殖与凋亡的影响;划痕实验检测不同浓度PNS处理的Raw264.7细胞的条件培养基对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的影响;Transwell实验检测不同浓度PNS与巨噬细胞共同作用对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭的影响;ELISA与流式细胞术检测不同浓度PNS对巨噬细胞相关细胞因子分泌及蛋白表达的影响。结果:PNS可以剂量依赖性地抑制MDA-MB-231与Raw264.7细胞的增殖,高浓度PNS溶液可以显著增加细胞凋亡;低浓度(20,50μg·mL^-1)PNS巨噬细胞条件培养基可以抑制MDA-MB-231的迁移;低浓度(20,50μg·mL^-1)PNS与巨噬细胞共培养可以明显抑制MDA-MB-231的侵袭;低浓度(20,50μg·mL^-1)PNS促进巨噬细胞IL-6与TNF-α的分泌,并上调巨噬细胞表面CD86的表达水平。结论:PNS可通过调控巨噬细胞抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭、迁移,并可通过调控巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化,进而发挥抑制肿瘤的作用。     

BSO对内皮细胞氧化还原状态的影响

目的　探讨人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells, HUVEC)在慢性髓性白血病细胞株K562细胞条件培养基作用下氧化还原状态的变化与其增殖活性间的关系,观察谷胱甘肽合成抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(buthioninesulfoxine, BSO)在上述条件下对HUVECs的作用,为探索相应的抗肿瘤血管生成治疗策略提供新思路。方法　用K562细胞条件培养基、谷胱甘肽合成抑制剂共同或单独处理HUVEC,检测HUVEC细胞内氧化还原状态以及细胞活力的改变。结果　K562细胞条件培养基明显促进内皮细胞的增殖,并促进内皮细胞氧化型与还原型谷胱甘肽(GSSG与GSH)、辅酶Ⅱ(NADP+与NADPH)两对氧化和还原性物质同时增高,但GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值未变。BSO显示出对HUVEC生长的明显抑制,引起HUVEC中GSH、NADPH含量明显降低、GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值升高;在K562细胞条件培养基的同时作用下,BSO对HUVEC的生长抑制作用增强, 使细胞内GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值进一步提高。结论　慢性髓性白血病细胞条件培养基使得血管内皮细胞对BSO的生长抑制作用更加敏感,其机制与内皮细胞氧化还原状态的改变密切相关。     

CB-839通过抑制谷氨酰胺代谢对巨噬细胞向M1型极化的影响

目的:研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对巨噬细胞极化分型的影响.方法:准备小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)和RAW264.7细胞,分为对照组和CB-839处理组.以CCK8检测巨噬细胞的增殖,用ELISA法检测M1型巨噬细胞相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-...     

肿瘤微环境对肿瘤免疫的影响

恶性实体肿瘤组织内微环境不同程度的存在着低pH﹑低O2、营养贫乏状态,这种状态影响了恶性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,不利于细胞因子﹑免疫细胞抑制杀伤恶性肿瘤细胞.该文简要叙述恶性肿瘤组织的微环境形成﹑细胞内外液特点、肿瘤免疫以及肿瘤微环境对细胞因子﹑免疫细胞和单克隆抗体抗恶性肿瘤作用影响,探讨如何改善这种微环境状态以提高恶性肿瘤的治疗效果.     

肿瘤ECM纤维生成与肿瘤转移研究进展

肿瘤转移是恶性肿瘤最为重要的生物学特征之一,同时也是影响预后及导致治疗失败的主要因素。近年来研究表明,肿瘤微环境中的胞外基质(extracellular matrix,ECM)纤维生成在肿瘤转移过程中发挥极为关键的作用。肿瘤ECM纤维生成会形成相互交联的网状结构,这种网状结构不仅对肿瘤细胞起到支持和营养作用,同时对肿瘤的生长和浸润也起到相当重要的作用。因此,阻断肿瘤组织ECM纤维生成有可能对肿瘤转移产生抑制作用,这使得ECM纤维生成作为治疗靶标,备受人们关注。该文对肿瘤ECM纤维生成与肿瘤转移研究进展进行综述,并对靶向肿瘤ECM纤维生成进行肿瘤转移治疗的策略进行探讨,为后续研究及指导临床提供重要参考。     

Eph receptor tyrosine kinases in tumor and tumor microenvironment

Eph receptors are a unique family of receptor tyrosine kinases (RTK) that play critical roles in embryonic patterning, neuronal targeting, and vascular development during embryogenesis. In adults, Eph RTKs and their ligands, the ephrins, are frequently overexpressed in a variety of cancers and tumor cell lines, including breast, prostate, non-small cell lung and colon cancers, melanomas, and neuroblastomas. Unlike traditional oncogenes that often function only in tumor cells, recent data show that Eph receptors mediate cell-cell interaction both in tumor cells and in tumor microenvironment, namely the tumor stroma and tumor vasculature. As such, Eph RTKs represent attractive potential targets for drug design, as targeting these molecules could attack several aspects of tumor progression simultaneously. This review will focus on recent advances in dissecting the role of Eph RTKs in tumor cells, tumor angiogenesis, and possible contribution to trafficking of inflammatory cells in cancer.     

Targeting tumor endothelial hyperglycolysis enhances immunotherapy through remodeling tumor microenvironment

Vascular abnormality is a hallmark of most solid tumors and facilitates immune evasion. Targeting the abnormal metabolism of tumor endothelial cells (TECs) may provide an opportunity to improve the outcome of immunotherapy. Here, in comparison to vascular endothelial cells from adjacent peritumoral tissues in patients with colorectal cancer (CRC), TECs presented enhanced glycolysis with higher glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) expression. Then an unbiased screening identified that osimertinib could modify the GAPDH and thus inhibit its activity in TECs. Low-dose osimertinib treatment caused tumor regression with vascular normalization and increased infiltration of immune effector cells in tumor, which was due to the reduced secretion of lactate from TECs by osimertinib through the inhibition of GAPDH. Moreover, osimertinib and anti-PD-1 blockade synergistically retarded tumor growth. This study provides a potential strategy to enhance immunotherapy by targeting the abnormal metabolism of TECs.     

Early destruction of tumor vasculature in tumor necrosis factor-alpha-based isolated limb perfusion is responsible for tumor response

Addition of high-dose tumor necrosis factor-alpha to melphalan-based isolated limb perfusion enhances anti-tumor effects impressively. Unfortunately, the mechanism of action of tumor necrosis factor-alpha is still not fully understood. Here, we investigated the effects of tumor necrosis factor-alpha on the tumor microenvironment and on secondary immunological events during and shortly after isolated limb perfusion in soft-tissue sarcoma-bearing rats. Already during isolated limb perfusion, softening of the tumor was observed. Co-administration of tumor necrosis factor-alpha in the isolated limb perfusion with melphalan induced a six-fold enhanced drug accumulation of melphalan in the tumor compared with isolated limb perfusion with melphalan alone. In addition, directly after perfusion with tumor necrosis factor-alpha plus melphalan, over a time-frame of 30 min, vascular destruction, erythrocyte extravasation and hemorrhage was detected. Interstitial fluid pressure and pH in the tumor, however, were not altered by tumor necrosis factor-alpha and no clear immune effects, cellular infiltration or cytokine expression were observed. Taken together, these results indicate that tumor necrosis factor-alpha induces rapid damage to the tumor vascular endothelial lining resulting in augmented drug accumulation. As other important parameters were not changed (e.g. interstitial fluid pressure and pH), we speculate that the tumor vascular changes, and concurrent hemorrhage and drug accumulation are the key explanations for the observed synergistic anti-tumor response.     

恶性肿瘤特异性生长因子检测在肿瘤诊断中的应用

目的：探讨恶性肿瘤特异性生长因子（TSGF）在肿瘤诊断中的应用价值。方法：采用TSGF试剂盒对临床诊断为恶性肿瘤的患者60例，炎症患者60例，健康人30例进行了检测。结果：恶性肿瘤平均阳性检出率为75．0％，与炎症组及正常对照组比较差异有显著意义P＜0．01。结论：TSGF检测对恶性肿瘤的早期诊断具有广谱性和敏感性，在恶性肿瘤辅助诊断中有较为重要的价值。     

儿童非典型畸胎样/横纹肌样瘤临床病理分析

目的探讨儿童非典型畸胎样/横纹肌样瘤（AT/RT）的临床病理特征、免疫组化表型、诊断及鉴别诊断。方法分析AT/RT患者临床表现、病理形态和免疫组化染色特征。结果男2例,女2例,年龄3～15岁,平均年龄6.7岁;影像学检查肿瘤均位于幕上,其中1例位于脑室内。组织学上,肿瘤由横纹肌样细胞及肿瘤间叶组织和（或）原始神经外胚层成分构成,未见类似上皮样组织分化。免疫组化染色示波形蛋白、上皮细胞膜抗原、S-100、神经元特异性烯醇化酶和突触素阳性,且所有病例均显示INI1蛋白表达缺失。结论 AT/RT是好发于儿童的罕见的高度恶性胚胎性肿瘤,其形态及免疫组化表型多样,需与多种肿瘤相鉴别。免疫组化检测INI1表达失活为诊断该病的敏感性及特异性指标。     

肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤发病过程及治疗中的研究进展

巨噬细胞是机体内参与免疫反应的重要免疫细胞之一, 随着人们对巨噬细胞研究的深入, 肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)这一概念被提出。TAMs是肿瘤微环境(TME)中复杂而异质的细胞群, 与肿瘤相关炎症的发生有密切关系, 可影响肿瘤的生长、侵袭、转移和肿瘤内血管形成, 也可分泌多种细胞因子和趋化因子抑制抗肿瘤免疫反应的发生。由此可见, TAMs与肿瘤的发生发展有密切的关系, 因此成为肿瘤治疗的有趣靶点。本文就TAMs如何参与肿瘤进展、如何在临床中用于肿瘤治疗的靶点进行综述。