人乳头状瘤病毒感染与结肠癌关系的探讨

人乳头状瘤病毒感染与结肠癌关系的探讨任景丽王宪远银平章祝庆蕃收集河南省人民医院结肠癌３９例，结肠腺瘤５例，正常结肠粘膜１２例，用ＡＢＣ法免疫组化标记（ＡＢＣ盒购自Ｖｅｃｔｏｒ公司）与ＤＮＡ分子杂交技术检测乳头瘤病毒（ＨＰＶ）抗原表达及ＨＰＶＤＮＡ。免...     

间接法原位PCR检测喉鳞癌组织HPV感染

建立稳定的原位ＰＣＲ方法，并探讨ＨＰＶ感染与喉鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂变、ＰＣＲ和间接原位ＰＣＲ技术，检测了５０例喉鳞癌中的ＨＰＶ感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性者６例（１２％），原位杂交阳性者１３例（２６％），ＰＣＲ阳性者１０例（２０％），原位ＰＣＲ阳性者１７例（３４％），综合上述方法的检出率为４２％（２１例）。结论ＨＰＶ感染与喉癌有着明显的关系，间接原位ＰＣＲ在检测ＨＰＶ感染     

喉癌发生中人乳头瘤病毒感染与Langerhans细胞、p53表达的关系

目的：探讨喉癌的发生机理。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法对３０例喉鳞状细胞癌人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染、Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）及ｐ５３蛋白表达进行了研究。结果：２６．７％的病例可以检测到ＨＰＶ抗原成分。ＨＰＶ感染的癌旁粘膜内ＬＣ数量明显少于无感染者，且形态也发生改变。ｐ５３蛋白表达阳性率在ＨＰＶ感染组（３７．５％）明显低于ＨＰＶ检测阴性组（８３．３３％）。结论：提示ＨＰＶ、ＬＣ、ｐ５３在喉癌发生发展过程中起一定作用，且相互影响，ＨＰＶ感染引起ＬＣ数量减少，局部免疫功能降低，ＨＰＶ感染还可能通过表达的肿瘤蛋白或其他机制使抑癌基因ｐ５３失活，进而导致肿瘤的发生。     

喉癌发生中人乳头瘤病毒感染与Langerhans细胞,p53表…

目的；探讨喉癌的发生机理。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法对３０例喉鳞状细胞癌人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染、Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）及Ｐ５３慢白表达进行了研究。结果：２６．７％的病例可以检测到ＨＰＶ抗原成分。ＨＰＶ感染的癌旁粘膜内ＬＣ数量明显少于无感染者，且形态也发生改变。Ｐ５３蛋白表达阳性率在ＨＰＶ感染组明显低于ＨＰＶ检测阴性组。结论：提示ＨＰＶ、ＬＣ、Ｐ５３在喉癌发生发展过程中起一定作用，且     

食管鳞状细胞癌中人乳头状瘤病毒感染的意义

探讨人乳头状瘤病毒感染在食管鳞状细胞癌发生发展听意义。方法采用原位杂交和免疫组化ＬＳＡＢ法检测３３例ＥＳＣＣ中的ＨＰＶＤＮＡ，ＨＰＶ属特异性结构抗原和增殖细胞核抗原。     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达…

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ一分别为８例（２９．６３＃），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性 本中Ｐ５３、ＲＢ、Ｐ     

HPV16L1／L2蛋白单克隆抗体的制备

用真核表达的ＨＰＶ１６Ｌ１／Ｌ２蛋白作为抗原，经免疫、融合、选择性培养、克隆化等过程，我们建立了两株抗ＨＰＶ１６Ｌ１／Ｌ２蛋白的杂交瘤细胞株（另有数株仍在建株中）。免疫斑点法检测证明，它们产生的抗体，只与ＨＰＶ１６Ｌ１／Ｌ２蛋白起反应，而不与ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７蛋白、人血清蛋白和牛血清蛋白起反应。另外，免疫组化试验证明，这种抗体可应用于临床ＨＰＶ１６感染的检验，具有敏感、特异、准确、快捷、经济的优点。     

肛管和肛周尖锐湿疣中人乳头状瘤病毒的检测及意义

将３２例肛管和肛周尖锐湿疣进行Ａｐｇａｒ评分和凹空细胞分型，应用聚合酶链反应和免疫组化技术检测ＨＰＶ抗原和ＤＮＡ，并观察ＨＰＶ在尖锐湿疣组织中的分布状况。结果发现Ａ型１４例，Ｂ型１８例，Ａ型与高积分尖锐湿疣的关系较Ｂ型密切。ＰＣＲ和免疫组化检测阳性率分别为２５％（８／３２）和２２％（７／３２）。我们发现在尖锐湿疣组织中，不论是否是凹空细胞或凹空细胞分型如何及Ａｐｇａｒ积分高低，均有ＨＰＶ分布，但阳性率不同。这表明在正确诊断尖锐湿疣时，凹空细胞核形态、组织学改变和特殊检测三者各起作用并彼此相关。本文还探讨了浆膜型抗原发生机制。     

人乳头瘤病毒感染与消化道恶性肿瘤的相关性研究

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）中高危型（ＨＰＶ１６、１８型等）与某些恶性肿瘤的发生密切相关〔１，２〕，为探讨ＨＰＶ感染与消化道恶性肿瘤的关系，我们采用免疫组化技术检测１８６例不同部位消化道恶性肿瘤组织中ＨＰＶ１６和１８型Ｅ６特异性蛋白，用聚合酶链反应（ＰＣＲ...     

人乳头状瘤病毒感染与食管癌的关系

人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）的感染是上皮性肿瘤发生的一个重要原因。特别是ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８型感染与宫颈癌的发生。但ＨＰＶ的感染与食管癌的关系仍不清楚。我们采用免疫组织化学和敏感的ＨＰＶ共同引物、ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８型特异性引物的ＰＣＲ方法及３２Ｐ标记特异性探针Ｓｏｕｒｈｅｒｎ杂交检测食管癌中的ＨＰＶ及其亚型。结果显示，１２７例食管鳞癌标本免疫组化方法检测，ＢＰＶ阳性者占６０．６（７７／１２７），ＨＰＶＥ６蛋白抗原阳性者占４３％（５４／１２７）。其阳性染色明确定位于鳞癌组织内，并与肿瘤的分化有着密切的关系。经β球蛋白引物扩增证实不含ＰＣＲ抑制标本共１０３例，其中ＨＰＶ共同引物ＰＣＲ扩增阳性者为３７例，占３５．９％，经型特异ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实其中ＨＰＶ１６阳性者２１例，占２０．４％；ＨＰＶ１８阳性者８例，占７．８％。仅一例为ＨＰＶ１６和１８均阳性。以上结果显示ＨＰＶ感染的确存在于食管癌中，并可能在食管癌发生中起一定的作用。     

食管鳞癌HPV感染与病毒致癌基因E6的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与食管鳞状细胞癌的关系。方法：采用多重引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）的免疫组化技术、对１０４例食管鳞癌进行ＨＰＶ ＤＮＡ和病毒癌基因Ｅ６蛋白检测。结果：ＨＰＶ ＤＮＡ阳性者占５０．９６％（５３／１０４），其中ＨＰＶ１６型ＤＮＡ４９．０６％（２６／５３），ＨＰＶ１８型 ＤＮＡ５．６％（３／５３），ＨＰＶ６／１１ ＤＮＡ７．５％（４／５３）；两上或三个类型的混合感染占３７．     

应用共有引物的PCR法检测宫颈癌组织中的人乳头…

目前已知有６８种类型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ），其中２７种类型ＨＰＶ与生殖道损害有关，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８和宫颈癌关系密切。我们建立了快速敏感检测多型ＨＰＶ感染的方法，运用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），分析Ｌ１区共有引物ＰＣＲ扩增的产物。通过ＰＣＲ／ＲＦＬＰ法，我们检测５０例宫颈癌标本，ＨＰＶ阳性率为６４％；ＨＰＶ１６占４６％；ＨＰＶ１８占６％；ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８混合感染占６％。该法简便快速     

pcDNA3/HPV16 E6真核表达质粒的构建及裸DNA注射动物实验观察

目的探讨ＨＰＶ１６Ｅ６基因ＤＮＡ诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了ＨＰＶ１６Ｅ６真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／Ｅ６，脂质体法转染Ｃｏｓ７细胞，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫组化技术检测抗体产生及抗原表达。结果被转染的Ｃｏｓ７细胞表达ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白免疫小鼠产生抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体。结论这一结果为ＨＰＶ１６相关宫颈癌治疗性ＤＮＡ疫苗的研制提供了资料。     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达状态及相关性

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＯＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为８例（２９．６３％），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性标本中Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为７例（４１．１７％），９例（５２．９４％）、１２例（７０．５８％）。而在５例正常宫颈组织中未测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ，ＰＣＮＡ只在宫颈组织上皮基底层细胞中表达。统计学分析表明，ＨＰＶ１６Ｅ６与宫颈癌密切相关（Ｐ＜０．０５），ＰＣＮＡ在宫颈癌与正常宫颈组织中有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。未能发现宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ与Ｐ５３蛋白相关性（Ｐ＞０．０５）。     

尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒的检测

用免疫组织化学、ＤＮＡ原位杂交和聚合酶链反应技术，检测人生殖器尖锐湿疣和女阴假性湿疣组织中人乳头状瘤病毒衣壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）和病毒核酸序列（ＨＰＶ－ＤＮＡ），并观察了ＨＰＶ在尖锐湿疣组织中的分布特点与病变组织学改变的关系。结果显示尖锐湿疣中ＨＰＶ－Ａｇ阳性率为７１．４％（３５／４９）；原位杂交ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ阳性率为９６．５％（２８／２９）；ＰＣＲ扩增后尖锐湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为１００％（５３／５３）；假性湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为２１．４％（３／１４）。观察ＨＰＶ－Ａｇ和ＨＰＶ－ＤＮＡ分布，表明ＨＰＶ增殖性感染和尖锐湿疣特异的病理改变密切相关。     

地高辛配基人乳头瘤病毒DNA探针的制备和应用

采用非同位素标记物地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ），通过随机引物法制成地高辛配基人乳头瘤病毒ＤＮＡ（Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ）探针。用斑点杂交法检测宫颈组织中的ＨＰＶＤＮＡ。经试验证明，该探针检测ＨＰＶＤＮＡ的灵敏度与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针相近。经与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针同时对６５份临床标本进行比较，结果附合率达９５％以上。３５份宫颈癌组织中ＨＰＶ１６／１８型检出率为３４．２９％。Ｄｉｇ标记的探针检测ＨＰＶＤＮＡ特异性高，重复性好，背景显色低。     

食管癌发生中人乳头瘤病毒感染与Langerhans细胞的关系

为了解人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）对免疫Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的影响及ＨＰＶ的致癌机理，采用地高辛配基标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１ＤＮＡ及ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ探针和抗Ｓ－１００蛋白抗体，分别用原位分子杂交和免疫组化ＬＳＡＢ法，检测了４０例食管鳞状细胞癌中ＨＰＶＤＮＡ序列及分布，重点观察了ＨＰＶ感染时局部癌旁上皮内Ｓ－１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞的分布、数量及形态改变。结果显示：在有ＨＰＶ感染时，上皮内ＬＣ数量明显少于无感染者。上皮内残留的少数ＬＣ的分布及形态也有改变。我们认为，ＨＰＶ可能通过减少局部的ＬＣ，破坏机体局部的免疫监视系统，并与其它致癌因素协同作用，进而导致食管癌的发生。     

低危及高危型HPV感染对宫颈低度鳞状上皮内病变细胞周期的不同调节

应用免疫组化、分裂间期细胞遗传学及原位杂交技术对６０例宫颈低度鳞状上皮内病变（ＳＩＬｓ）进行研究，比较ｋｉ６７抗原在细胞周期中的形态学分布、细胞周期素Ａ、Ｂ、Ｄ１、Ｅ在低危型ＨＰＶ及高危型ＨＰＶ感染的ＳＩＬｓ中的表达及其蛋白表达与ＨＰＶ类型及染色体数目异常之间的关系。结果：低危型ＨＰＶ（６、１１、４２、４３及４４型）感染者２６例，高危型（１６、１８、３１、３３、３９、５１、５２、５６、５８及６６型）感染者２９例，双重感染者３例（分别为ＨＰＶ６＋８、１８＋３１及１１＋５２感染）。ｋｉ６７表达频…     

人乳头瘤病毒与P 53协同致膀胱移行细胞癌关系的研究

目的 研究人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６和１８型及Ｐ５３与膀胱移行细胞癌的关系。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了７５例膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ的感染,免疫组化ＳＰ法检测Ｐ５３蛋白表达情况。结果 膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ６、１１、１６和１８的阳性率分别为６．７％（５／７５）,５．３％（４／７５）,３３．３％（２５／７５）和６．７％（５／７５）。低危型ＨＰＶ（６或１１）阳性率为９．３％（７／７５）,高危型ＨＰＶ（１６或１８）阳性率为３４．７％（２６／７５）。同一膀胱癌组织中两种以上（包括两种）ＨＰＶ亚型感染８例,占１０．６％。ＨＰＶ６、１６和１８型之间感染阳性率在肿瘤有无转移组中差异显著（Ｐ〈０．０５）,ＨＰＶ１６、１８的阳性率在肿瘤病理分级中差异有极显著性（Ｐ〈０．０１）。ＨＰＶ ＤＮＡ型别     

原位PCR和原位杂交技术在HPV基因诊断中的应用

目的：探讨原位杂交法与间接法原位ＰＣＲ法在检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染中的应用及意义。方法：对２０例福尔马林固定的、石蜡包埋、怀疑ＨＰＶ６Ｂ／１１型感染的外阴湿疣组织进行了比较研究。结果：用原位杂交方法检测的２０例中有１３例ＨＰＶ阳性（阳性率６５％）；用间接法原位ＰＣＲ检测的２０例中有１８例ＨＰＶ阳性（阳性率９０％）。结论：用间接法原位ＰＣＲ检测外阴湿疣组织中的ＨＰＶ感染具有灵敏