MYB基因沉默抑制子宫颈癌细胞侵袭、迁移及其作用机制探讨

目的:探究沉默转录因子MYB对子宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法:将携带MYB目的片段的siRNA转染入人子宫颈癌HeLa细胞中。实验分为对照组、阴性对照组和siRNA-MYB组。采用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测转染效果。细胞划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。Western Blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白N（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）水平。结果:与对照组相比,阴性对照组细胞中MYB的表达量、细胞侵袭、迁移均无显著变化,差异不具有统计学意义;siRNA-MYB组细胞中MYB的表达量显著降低（P<0.05）,沉默MYB显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭、迁移（P<0.05）,并下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达量（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白的表达量（P<0.05）。结论:沉默宫颈癌细胞中MYB的表达量可通过抑制EMT、下调MMP-2蛋白水平,从而降低细胞的侵袭、迁移能力。     

下调Skp2表达抑制骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验

 目的 通过使用小干扰RNA（siRNA）降低骨肉瘤中S期激酶相关蛋白2（Skp2）的表达，探讨Skp2对骨肉瘤恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法 转染Skp2 siRNA敲低骨肉瘤U2OS细胞中Skp2的表达。通过RT-qPCR和Western blot法检测细胞内Skp2的mRNA和蛋白表达水平，确定Skp2 siRNA的沉默效率。MTT法检测细胞增殖情况，PI单染及Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测对骨肉瘤细胞周期及凋亡的影响。Transwell实验和钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein-AM）染色检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测细胞内Skp2的下游基因p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达变化。结果 转染Skp2 siRNA在U2OS细胞中获得较高的敲除效率。Skp2表达下调抑制了骨肉瘤细胞的增殖，并且使细胞生长阻滞在G0/G1期，细胞的凋亡率明显增加。抑制Skp2后U2OS细胞的侵袭和迁移能力明显降低。U2OS细胞Skp2敲低后其下游调控分子p21、p27及E-cadherin的表达显著升高，而p-Akt的表达则明显减弱。结论 Skp2在骨肉瘤细胞中发挥癌基因的作用，通过调控其信号通路中p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达影响细胞生长、周期、凋亡、侵袭和迁移能力等恶性生物学行为。     

ROCK2调控骨肉瘤细胞的侵袭及迁移

目的 探讨骨肉瘤组织中ROCK2的表达对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学染色法检测骨肉瘤组织中ROCK2的表达;沉默骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,采用划痕愈合及Transwell实验分析骨肉瘤细胞的侵袭及迁移能力,并通过尾静脉转移实验检测降低ROCK2表达对体内转移的影响。检测骨肉瘤细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达,并在下调ROCK2的骨肉瘤细胞中加入EMT诱导剂TGF-β,检测其对细胞侵袭及迁移的影响。结果 ROCK2在骨肉瘤组织中的表达显著高于其相应的癌旁组织（P<0.05）,下调骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,其体内外侵袭及迁移能力明显被抑制（P<0.05）;EMT相关蛋白E-cadherin表达下降,而N-cadherin及Vimentin蛋白明显增加;诱导骨肉瘤细胞中EMT发生后能够减弱下调ROCK2对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的抑制作用。结论 ROCK2在骨肉瘤组织中表达升高,通过诱导EMT的发生进而促进骨肉瘤细胞的侵袭及迁移。ROCK2可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。     

NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及可能的作用机制。方法 人食管癌EC9706细胞分别转染NKX6.3（NKX6.3组）和空白质粒（miR-NC组），设空白对照组（Control组）。CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞内活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡情况，Transwell 法检测细胞侵袭能力，Western blot检测增殖相关蛋白Ki67、侵袭相关蛋白（Vimentin、E-cadherin及N-cadherin），凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表达。结果 Control组、miR-NC组和NKX6.3组食管癌EC9706细胞中NKX6.3表达、细胞增殖能力、细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞凋亡及侵袭能力，以及Ki67、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。其中，NKX6.3组NKX6.3表达量、细胞内活性氧，细胞凋亡率，Vimentin、E-cadherin、Bax及Caspase-3蛋白表达水平较miR-NC组升高；而线粒体膜电位、细胞增殖率、细胞侵袭数目、N-cadherin及Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 NKX6.3可抑制食管癌细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡，该作用可能通过调控食管癌细胞中的增殖凋亡相关蛋白表达及活性氧水平实现。     

SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路影响结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨SET和MYND域包含蛋白质2（SET and MYND domaincontaining protein 2,SMYD2）调控结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞迁移和侵袭的机制。方法:从徐州医科大学附属医院收集2019年08月至2020年03月的24对结直肠癌及癌旁组织,进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析SMYD2的表达量。构建SMYD2和腺瘤性息肉病蛋白2（adenomatous polyposis coli 2,APC2）的小干扰RNA,使用Transwell和蛋白免疫印迹实验检测转染后结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:癌组织中SMYD2的mRNA和蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.001,P＜0.05）,且结直肠癌细胞系SW480和HCT116中SMYD2的表达量显著高于正常结直肠细胞系FHC（P＜0.001）。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后细胞的迁移和侵袭能力减弱（P＜0.01）,同时E-cadherin的表达量升高（P＜0.001）,而N-cadherin和Vimentin的表达量降低（P＜0.01）。生物信息学分析显示,SMYD2与APC2的表达呈负相关（P＜0.001）,且APC2可以抑制WNT/β-catenin通路。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后APC2的表达量增高（P＜0.001）,而WNT/β-catenin通路中的β-catenin、c-MYC和CyclinD1表达降低（P＜0.01）。敲低APC2可以恢复SMYD2敲低引起的SW480和HCT116细胞的迁移和侵袭降低（P＜0.001）,E-cadherin升高（P＜0.001）和N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-MYC、CyclinD1降低（P＜0.01）。结论:在结直肠癌细胞中,SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路促进结直肠癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,从而影响细胞的迁移和侵袭能力。     

柴胡皂苷D通过逆转EMT抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制.方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷D对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷D细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴胡皂苷D对细胞侵袭能力的影响,Western-blot检测柴胡皂苷D对EMT相关蛋白的影响.结果:对MG-63增殖无明显影响浓度的柴胡皂苷D显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001),柴胡皂苷D上调E-cadherin的表达而下调N-cadherin和Vimentin的表达.结论:柴胡皂苷D通过逆转EMT改变抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭.     

FOXC2对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的: 探讨叉头框（FOX）C2对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法: 选择人食管癌细胞CaES-17，Eca-109，TE13及人食管上皮细胞（HEEC），选择FOXC2较高表达的食管癌细胞（CaES-17）作为转染细胞，设siRNA FOXC2组、pcDNA-FOXC2组及未转染组和转染阴性对照组。采用qRT-PCR检测细胞FOXC2表达；CCK-8检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell小室实验检测细胞侵袭能力；WB检测MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin的蛋白表达水平。结果: 食管癌细胞FOXC2蛋白表达明显高于食管上皮细胞；与对照组相比，上调FOXC2表达可使MMP9、Snail表达明显升高，下调FOXC2表达可抑制食管癌细胞增殖，并抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力及降低Wnt3a蛋白表达。结论: 下调FOXC2抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，作用机制可能与调控MMP-9、Snail水平及Wnt/β-catenin通路有关。     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达；双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系；将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组），均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞，MTT法检测细胞增殖；Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭；Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比，SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高，而miR-186表达降低，两者存在负相关性。与si-con组比较，si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降，迁移和侵袭细胞数明显减少，CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达，抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中，SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中，SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后，细胞E-cadherin的表达增高，N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05），同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

PFKFB3通过调控PI3K/AKT信号通路促进骨肉瘤细胞的增殖及转移

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及其相...     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制.方法:应用0、2.5、5、10、20μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC...     

小檗碱通过上调miR-145-5p抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移和谷氨酰胺代谢北大核心

目的:探索小檗碱(berberine,BBR)对宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞增殖、侵袭、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法:qRT-PCR法检测miR-145-5p表达水平;MTT法和集落形成实验检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白水平;使用相应的试剂盒测量谷氨酰胺消耗量、α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)产量和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)产量。初步在小鼠体内,探究BBR对异种移植物及miR-145-5p表达水平的影响。结果:BBR能够抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢,且可显著下调MMP-9、N-cadherin和Vimentin水平,上调miR-145-5p、E-cadherin水平(P<0.05)。抑制miR-145-5p表达能够逆转BBR对CC细胞的影响(P<0.05);另外,在小鼠体内,BBR可显著降低肿瘤组织的重量及体积,同时上调miR-145-5p表达水平(P<0.05)。结论:BBR通过上调miR-145-5p抑制CC细胞的增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢。     

pan-RAF抑制剂LY3009120对分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制

目的:探讨pan-RAF抑制剂LY3009120对甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法:以不同浓度的LY3009120作用于MDA-T32细胞，应用CCK-8法检测细胞的增殖能力。以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）作用于细胞，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blotting法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin和Snail的表达。结果:通过CCK-8法检测显示LY3009120能明显抑制MDA-T32细胞的增殖。划痕实验和Transwell实验结果显示LY3009120能抑制细胞的迁移和侵袭。Western blotting结果显示LY3009120促进MDA-T32细胞中E-cadherin的表达，抑制N-cadherin和Snail的表达。结论:LY3009120能够抑制甲状腺癌细胞系MDA-T32的增殖，可能通过上皮间质转换机制抑制细胞的侵袭和迁移。     

WBP5在胃癌组织中的表达与临床病理特征的相关性及其对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的:探讨WBP5在胃癌组织中的表达与临床病理特征的相关性及其对胃癌细胞迁移、侵袭等的影响。方法:通过免疫组化检测WBP5在胃癌癌组织及癌旁组织中的表达，分析WBP5与胃癌临床病理特征的关系。通过细胞转染技术，建立WBP5稳定高表达和低表达的细胞，分析WBP5对癌细胞划痕愈合、迁移及侵袭能力的影响，及其对EMT相关指标的影响。结果:WBP5在癌组织中呈低表达，在癌旁组织中高表达，WBP5的表达和胃癌患者的T分期及TNM分期显著相关。上调WBP5后癌细胞划痕愈合比例显著降低，迁移、侵袭能力显著降低；下调WBP5后癌细胞划痕愈合比例显著上升，迁移、侵袭能力显著升高。上调WBP5后E-cadherin表达上调，N-cadherin及Vimentin表达下调；下调WBP5后E-cadherin表达下调，N-cadherin及Vimentin表达上调。结论:WBP5表达与患者的临床分期显著相关，WBP5表达与胃癌细胞的迁移、侵袭能力有重要关系，其机制可能是通过影响EMT过程实现的，具体机制需要进一步研究。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。