硝酸甘油耐受大鼠心肌缺血再灌注过程中乙醛脱氢酶2表达水平变化的研究

目的乙醛脱氢酶2(ALDH2)是是一种重要的硝酸还原酶,在发挥硝酸还原酶的作用外,其可有效地清除缺血再灌注心肌内醛类物质的毒性,起到保护心肌细胞的功能。硝酸甘油作为一种用于缓解心绞痛的常用药物,被广泛用于心脏病患者中,但持续的硝酸甘油可使ALDH2被过剩的亚硝酸盐氧化,一氧化氮不能产生,从而产生硝酸甘油耐受现象。本研究通过构建硝酸甘油耐受动物模型及心肌缺血再灌注模型,研究大鼠ALDH2血清表达水平在硝酸甘油耐受大鼠缺血再灌注病理生理过程中的变化。方法本实验通过结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支建立大鼠心肌缺血缺氧模型,在缺血再灌实验开始7天前采用10 mg/kg/d尾静脉注射的方法构建硝酸甘油耐受模型。通过ELISA方法检测不同实验组心肌缺血再灌注30 min后ALDH2的表达水平,并通过心脏生理功能指标、病理组织切片进一步分析硝酸甘油耐受大鼠在ALDH2表达上的病理生理效应。结果心肌缺血再灌注30min后,硝酸甘油耐受组大鼠缺血再灌后血清中ALDH2水平低于硝酸甘油不耐受组大鼠(P0.05),病理组织切片显示硝酸甘油耐受组的大鼠心肌在缺血再灌后损伤对照组大鼠严重,心肌间出现断裂,排列松散,心肌细胞之间的间隙扩大。结论在心肌缺血再灌注损伤过程中,ALDH2对心肌具有保护作用,硝酸甘油耐受可加重心肌损伤。     

不同浓度硝酸甘油对心脏缺血/再灌注的作用及ALDH2的作用

目的 探讨不同浓度硝酸甘油(GTN)对离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤的作用,进一步分析线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)在其中的作用.方法 采用离体大鼠心脏Langendorff灌流方法,局部结扎冠状动脉左前降支30 min,复灌30 min复制缺血/再灌注模型.实验分五组,正常对照组,单纯缺血/再灌注组,GTN低浓度组(10 -8 mol/L GTN),中浓度组(10-7 mol/L GTN)及高浓度组(2×10 -6 mol/L GTN).测定心室动力学指标和复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase,LDH)含量,RT-PCR测定左心室前壁心尖组织线粒体ALDH2基因mRNA表达水平.结果 与单纯缺血/再灌注组相比,GTN低浓度组左心室发展压(LVDP)、室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)均增高,左心室舒张末压(LVEDP)降低,中浓度组无明显差异,高浓度组LVDP和±dp/dtmax均降低;LVEDP增高.与缺血/再灌注组相比,正常对照组和低浓度GTN组心肌组织ALDH2 mRNA表达增高,中浓度无明显差异,高浓度组大鼠心肌ALDH2 mRNA表达降低.结论 低浓度GTN可对抗心肌缺血/再灌注损伤,高浓度GTN加重损伤,中浓度GTN对损伤影响不大,此现象可能与不同浓度GTN引起心肌ALDH2的释放量不同有关.     

作者单位：030001山西省太原市 山西医科大学基础医学院生理学系,细胞生理学山西省重点实验室通讯作者：贺忠梅,E-mail：hezmei@126.com

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)稳定表达对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡的影响及可能机制。方法 采用结扎冠脉左前降支45min,再灌注3h的方法,构建大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;实验分为假手术组(Sham)、心肌缺血/再灌注组(MI/R)、HIF-1α活化剂DMOG 心肌缺血/再灌注组(D MI/R)、HIF-1α抑制剂YC-1 心肌缺血/再灌注组(YC-1 MI/R);采用全自动生化分析仪测定血清心肌酶(CK-MB,LDH)活性;Western blot检测心脏组织HIF-1α蛋白表达;Evens blue/TTC染色测定心肌梗死面积;TUNEL染色及Caspase-3,8,9活性测定心肌细胞凋亡。结果 (1)与MI/R 组相比,D MI/R 组的HIF-1α蛋白表达量明显增加,心肌酶CK-MB、LDH的活性降低,心肌梗死面积明显减小,并且心肌组织的病理损伤减轻;(2)稳定HIF-1α表达可明显降低心肌细胞凋亡率,且部分逆转了缺血再灌注后心肌组织Caspase-9与Caspase-3的活性升高。结论 HIF-1α稳定表达可抑制线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤的心脏保护效应。     

米诺环素后处理对大鼠缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的探讨米诺环素后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其可能机制。方法 96只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、低剂量米诺环素组(3 mg/kg)和高剂量米诺环素组(10 mg/kg)。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支45 min,再灌注2 h及24 h。再灌注2 h,检测各组心肌缺血危险区、梗死范围;血清、心肌组织TNF-α、IL-1β含量及心肌组织MPO活性;心肌凋亡指数(AI)以及心肌组织形态学改变。再灌注24 h,检测大鼠心脏血流动力学、心肌缺血危险区、梗死范围。结果与缺血再灌注组比较,低剂量、高剂量米诺环素均能降低左心室舒张末压、心肌梗死范围、AI以及血清、心肌组织TNF-α、IL-1β含量及心肌组织MPO活性,同时升高心率、左心室收缩压、±dp/dtmax(P0.05或P0.01)。结论米诺环素后处理能够显著抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的大鼠心肌细胞凋亡,减少梗死范围,明显改善心功能,其机制与减少局部与系统的炎症反应有关。     

预缺血对大鼠心肌缺血再灌注凋亡的影响

为观察大鼠心肌缺血再灌注的致凋亡作用和再灌注早期不同阶段中性粒细胞浸润与凋亡的关系及预缺血对凋亡的影响 ,制备在体大鼠心肌缺血再灌注模型 ,实验分为四组 :缺血 1h再灌注组、缺血 2h再灌注组 ,缺血 3h再灌注组及预缺血组 ,观察分析心功能、梗死面积、中性粒细胞计数、心肌髓过氧化物酶活性及凋亡指数等指标。结果发现 ,缺血再灌注明显引起心脏功能损伤、中性粒细胞浸润和心肌细胞凋亡 ,且随再灌注时间延长而加重 ,预缺血明显减轻其损伤并抑制凋亡。心肌细胞凋亡与中性粒细胞浸润存在显著正相关关系。结果提示 ,预缺血可通过减轻凋亡对心肌发挥保护作用。     

新型卤酚化合物3',4'-二羟基-3-氯二苯甲酮对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的 明确新型卤酚化合物3',4'-二羟基-3-氯二苯甲酮(LM46)对缺血/再灌注损伤后大鼠心肌的保护作用.方法 利用大鼠心脏局部缺血/再灌注模型,检测LM46处理后大鼠心肌梗死面积和血清酶学指标的变化.结果 在再灌注早期静脉给予LM46能有效减轻心肌缺血/再灌注损伤.表现为梗死面积减小,超氧化物歧化酶(SOD)活力升高,显著降低血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)水平.结论 在5 mg/kg~15 mg/kg剂量范围内,LM46有显著的心肌保护作用.     

激活乙醛脱氢酶2抑制硝酸甘油耐受大鼠缺血再灌注心肌损伤

目的:探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）激动剂（Alda-1）对硝酸甘油耐受(NT)大鼠心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)的影响。方法: 24只成年雄性SD大鼠随机分为4组:Con组、Alda-1组、NT组和NT+Alda-1治疗组，每组6只(n=6)。经静脉给予硝酸甘油10 mg/(kg·day)处理7 d，建立NT大鼠模型，治疗组在硝酸甘油给药的第5天起，同时输注Alda-110 mg/(kg·day) 3 d。模型建立后，采用冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注4 h建立在体大鼠急性心肌缺血/再灌注(MI/R)模型。术中监测血流动力学指标，再灌结束后检测血清乳酸脱氢酶(LDH)并取心肌组织检测心肌梗死面积、蛋白质羰基化程度和心肌内活性氧簇(ROS)的水平。结果: 离体血管灌流显示，硝酸甘油连续处理7 d，可导致大鼠血管内皮依赖性和内皮非依赖性舒张能力显著降低，提示出现NT。定量检测心肌ALDH2的活性发现Alda-1可显著改善NT导致的心肌ALDH2活性抑制。在NT情况下，MI/RI较对照组显著加重，表现为心肌收缩舒张速率显著降低，血清LDH的水平显著增加，心肌梗死面积扩大（均P<0.05）。与NT组相比，采用Alda-1治疗，可显著改善NT组大鼠的MI/RI（均P<0.05）。并且，Alda-1治疗可显著抑制NT情况下缺血/再灌注心肌中蛋白质羰基化程度和ROS的含量。结论: 激活ALDH2可显著抑制NT导致的MI/RI加重，其机制可能与减轻心肌蛋白质氧化损伤有关。     

TNF-α抑制剂通过激活Notch1信号通路治疗创伤后心肌再灌注损伤的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制剂(依那西普)通过跨膜蛋白受体Notch1信号通路对小鼠创伤性心肌损伤的保护作用。方法选取c57系清洁级雄性小鼠36只(10~12周龄),采用随机数字表法分为假手术组(腹腔注射5 ml/kg生理盐水)、对照组(腹腔注射5 ml/kg生理盐水)、依那西普组(建立创伤后心肌缺血再灌注损伤模型,依那西普8 mg/kg)各12只,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠再灌注30 min后的血浆TNF-α、3 h后的血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,测定各组再灌注24 h后的左室射血分数(LVEF)、采用TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡率、采用TTC双染色检测各组心肌梗死面积比值,采用免疫印迹法(Western-blot)检测再灌注6 h后心肌跨膜蛋白受体Notch1胞内活性片段(Notch1-ICD)、细胞凋亡相关蛋白3(caspase-3)的表达。结果对照组、依那西普组大鼠的血浆TNF-α、血清cTnI水平、心肌Notch1-ICD、caspase-3蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积比值均显著高于假手术组(P0.05);依那西普组血浆TNF-α、血清cTnI水平、心肌caspase-3蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积比值显著低于对照组(P0.05),Notch1-ICD蛋白表达水平、LVEF值显著的高于对照组(P0.05)。结论 TNF-α抑制剂对创伤后心肌缺血再灌注损伤心肌具有保护作用,其作用机制与激活Notch1信号通路以调节caspase-3蛋白表达水平有关。     

内毒素诱导lrg表达对大鼠急性缺血/再灌注心肌的保护作用机制

目的:通过测定大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤模型中lrg表达水平与血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平及心肌梗死面积的变化,探索内毒素对缺血/再灌注心肌保护的分子机制。方法:将30只SD大鼠随机分为单纯缺血/再灌注模型组、内毒素预处理组和手术对照组,每组10只。采用戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用穿线结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌缺血/再灌注模型。采用免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算lrg分子表达水平的动态变化,放射免疫法测定血浆CGRP、ET-1和TNF-α浓度,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算心肌梗死面积。结果:大鼠左冠状动脉前降支缺血/再灌注1.5 h内毒素预处理组血浆ET-1和血清TNF-α浓度较缺血/再灌注组显著降低,心肌梗死面积也显著缩小(P0.01);而血浆CGRP浓度则显著增高(P0.01)。结论:内毒素预处理可诱导lrg分子表达水平上调,并显著降低ET-1而增加CGRP浓度,减小心肌梗死面积,对急性心肌梗死后再灌注心肌产生一定的保护效应。     

硝酸甘油耐受加重缺血再灌注所引起的主动脉损伤及其机制的实验研究

目的研究硝酸甘油耐受对缺血再灌注动脉损伤的影响及其机制。方法雄性SD大鼠尾静脉给予硝酸甘油(60μg·kg-1·h-1)或生理盐水12 h,测量平均动脉压和离体血管张力以确定硝酸甘油耐受是否产生。耐受大鼠的离体动脉随机接受以下处理:(1)模拟缺血再灌注,(2)模拟缺血再灌注+还原型谷胱甘肽(GSH,终浓度0.1 mmol/L),(3)对照处理(n=16-18)。未产生耐受的大鼠随机接受模拟缺血再灌注或对照处理(n=16-18)。为了确定硝酸甘油耐受对缺血再灌注血管损伤和内皮功能的影响,检测各组再灌注液中一氧化氮含量、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,并观测血管收缩功能和对乙酰胆碱的反应。免疫组化标记血管中的硝基化酪氨酸(过氧亚硝基阴离子标志物),灰度扫描分析标记强度。结果与其他各组相比,接受模拟缺血再灌注处理的硝酸甘油耐受血管内皮功能(乙酰胆碱舒张反应和合成一氧化氮能力)显著下降,组织损伤明显增加(CK、LDH活性增加,血管收缩功能降低),血管内硝基化酪氨酸含量显著升高。GSH显著抑制了硝酸甘油耐受的血管损伤作用。结论实验结果显示硝酸甘油耐受显著增加了缺血再灌注诱导的血管损伤,这种作用可能是过氧亚硝基阴离子介导的。此外,我们的结果还表明GSH不仅降低了硝酸甘油耐受的血管损伤作用,而且抑制了血管内过氧亚硝基阴离子的形成。     

Pré-condicionamento isquémico remoto do miocárdio: dos mecanismos fisiopatológicos à aplicação na prática clínica

Short periods of myocardial ischemia followed by reperfusion induce a cardioprotective mechanism when the myocardium is subsequently subjected to a prolonged period of ischemia, a phenomenon known as ischemic preconditioning.As well as its application in the myocardium, ischemic preconditioning can also be induced by brief interruptions of blood flow to other organs, particularly skeletal muscle. Transient ischemia induced noninvasively by inflating a cuff on a limb, followed by reperfusion, helps reduce the damage caused to the myocardium by interruption of the coronary circulation.Remote ischemic preconditioning involves activation of humoral and/or neural pathways that open mitochondrial ATP-sensitive potassium channels in the myocardium and close mitochondrial permeability transition pores, making cardiomyocytes less vulnerable to ischemia-induced cell death.This cardioprotective mechanism is now being translated into clinical practice, with positive results in several clinical trials in coronary artery bypass surgery, surgical repair of abdominal aortic aneurysms, valve replacement surgery and percutaneous coronary intervention. However, certain factors weaken the subcellular mechanisms of preconditioning - age, comorbidities, medication, anesthetic protocol - and appear to explain the heterogeneity of results in some studies.Detailed understanding of the pathways involved in cardioprotection induced by ischemic preconditioning is expected to lead to the development of new drugs to reduce the consequences of prolonged ischemia.     

小剂量多巴酚丁胺超声心动图联合心肌声学造影对心肌梗死后存活心肌的诊断价值

目的前瞻性评价小剂量多巴酚丁胺超声心动图(LDDE)联合心肌声学造影(MCE)对心肌梗死后存活心肌的诊断价值。方法对24例心肌梗死者进行静态MCE、LDDE及3个月后静态超声心动图随访分析。MCE和室壁运动均用16段划分法进行目测半定量计分。心肌造影计分(MCS)回声均匀性增强为1分,回声低淡不均匀为0.5分,缺损为0分。室壁运动计分(WMS)用常规计分法。结果随访时,运动改善的心肌节段中MCS1分占49.4%、0.5分占50.6%,对LDDE均有反应;运动无改善的节段MCS0.5分占9.5%,0分占90.5%,对LDDE有反应者占13.3%,无反应占86.7%。预测存活心肌的敏感性、特异性及准确率分别为LDDE86%、86.7%、86.4%;MCE100%、89.7%、94.6%;LDDE联合MCE86.1%、100%、94.0%。结论心肌微血管结构与功能的完善是心肌存活的基本条件。MCE灌注正常和低灌注,且对多巴酚丁胺有反应的心肌有收缩力储备;而对多巴酚丁胺无反应的低灌注或无灌注心肌则多不能恢复收缩功能。LDDE联合MCE能提高检测存活心肌的特异性及准确率。     

经皮穿刺激光心肌血运重建术抗心肌缺血疗效的评价

探讨经皮穿刺激光心肌血运重建术 (PTMR)治疗严重冠心病患者心肌缺血的疗效。选择 2 1例不适应作冠状动脉成形术和旁路移植术的冠心病患者作PTMR ,观察PTMR手术前、后心肌缺血总负荷 (TIB)和缺血性ST段事件(STI) ,缺血阈值 (MIT)及其变异性 (VMIT)的变化。结果 :PTMR术后TIB降低 (1 7.34± 6 .2 3vs 35 .2 6± 4 .58mm·s,P<0 .0 1 ) ,STI发作次数明显减少 (2 1 .53± 7.34vs 42 .31± 6 .82次 ,P <0 .0 1 ) ;最高和最低MIT增加 ,VMIT降低(31 .2 %± 8.1 %vs 36 .1 %± 1 4 .2 % ,P <0 .0 5)。结论 :PTMR术后近期有较好的抗心肌缺血作用     

An Experimental Study of Myocardial Viability with MyocardialContrast Echocardiography

Background Myocardial blood flow(MBF) can be quantified with myocardial contrast echocardiography (MCE) during a venous infusion of microbubble. A minimal MBF is required to maintain cell membrane integrity and myocardial viability in ischemic condition. Thus, we hypothesized that MCE could be used to assess myocardial viability by the determination of MBF. Methods and ResultsMCE was performed at 4 hours after ligation of proximal left anterior descending coronary artery in 7 dogs with constant venous infusions of microbubbles. The video intensity versus pulsing interval plots derived from each myocardial pixel were fitted to an exponential function: y=A(1-e-βt), where y is Ⅵ at pulsing interval t, A reflects microvascular cross - sectional area (or myocardial blood volume), and (3 reflects mean myocardial microbubble velocity. The product of A·β　represents MBF. MBF was also obtained by ra-diolabeled microsphere method servered as reference. MBF derived by radiolabeled microsphere - method in the re     

实验性顿抑心肌的微循环障碍

为了探讨顿抑心肌微循环改变及机制，制备左前降支冠状动脉不同阻断时间(15min和60min)后再灌注犬心肌顿抑模型，在不同观察时间点静脉注射舍全氟丙烷声振白蛋白微泡造影剂，采用二次谐波成像和间歇发射技术行心肌声学造影，计算心肌声学造影图像上心肌视频密度峰值、心肌声学造影曲线上升斜率和曲线早期下降斜率，测定相应时间点冠状静脉窦血乳酸浓度，结果发现，心肌顿抑早期心肌视频密度峰值显著增高，1h后恢复至结扎前水平；再灌注期顿抑区与正常区视频密度峰值比值、心肌声学造影曲线上升斜率比值、心肌声学造影曲线早期下降斜率比值显著高于左前降支冠状动脉结扎前，随着再灌注时间的延长比值逐渐回降；再灌注期冠状静脉窦血乳酸浓度明显增高。以上结果提示，心肌顿抑早期心肌微循环处于“高动力”状态，血流灌注增加与排空加快并存；顿抑心肌缺氧代谢加强；心肌内微循环短路可能是心肌顿抑微循环障碍的机制。     

经静脉心肌声学造影评价心肌梗死后存活心肌的价值

目的　探讨经静脉心肌声学造影 (MCE)对心肌梗死后存活心肌的诊断价值。方法　 2 4例心肌梗死患者用二维超声评价室壁运动情况 ,同时经静脉进行MCE ,以 3个月后静态超声心动图左室心肌节段性运动改善为依据评价MCE对心肌梗死后存活心肌的诊断价值。结果　在 2 4例病人的 384个心肌节段中 ,运动异常节段 184个。在运动异常的 184个节段中 ,MCE1分 39段 ,0 5分 5 0段 ,0分 95段。 3个月复查 79个节段有运动改善 ,其中 39段来自MCE1分的心肌 ,4 0段来自MCE0 5分的心肌。MCE对预测心肌梗死后室壁运动改善的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确率分别为 :10 0 %、89 7%、84 8%、10 0 %和 94 6 %。结论　MCE能比较准确地预测心肌梗死后心肌的存活性     

心肌梗塞溶栓治疗对某些神经内分泌递质的影响

目的 探讨急性心肌梗塞患者早期冠状动脉（冠脉）再灌注对循环中内皮素、心钠素及肾素－血管紧张素系统的影响。方法 接受静脉溶栓治疗的３１例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者在发病后１２、２４、４８小时、第７及１４天分别取血测定血浆中内皮素、心钠素、肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮及血管紧张素转换酶。依冠脉早期再灌注指标，将患者分为再灌注组（Ａ组）和非再灌注组（Ｂ组）。比较两组患者血中神经内分泌递质的动态变化。并设正