黄芪提取物抑制胃癌细胞对腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的观察黄芪提取物抑制胃癌细胞上清对腹膜间皮细胞的凋亡作用。方法将胃癌细胞(MKN45)上清单独或与黄芪提取物联合作用于人腹膜间皮细胞HMrSV。光镜下观察人腹膜间皮细胞形态学变化;MTT检测黄芪作用后人腹膜间皮细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果 MTT及流式细胞仪检测出胃癌细胞(MKN45)上清诱导人腹膜间皮细胞凋亡呈时间依赖性;荧光显微镜观察胃癌细胞(MKN45)上清作用后,间皮细胞出现典型凋亡特征。结论黄芪提取物明显抑制胃癌上清促间皮细胞凋亡作用。     

汉黄芩素体外抗人喉癌 Hep2细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及机制研究

目的：研究汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。运用Hoechst染色法检测汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞核形态变化的影响。运用transwell侵袭实验比较汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞侵袭能力的影响。运用Western blot检测汉黄芩素对人喉癌Hep-2细胞hTERT、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。结果 CCK-8法发现汉黄芩素能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现汉黄芩素能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。 Hoechst染色发现汉黄芩素能诱导人喉癌Hep-2细胞核形态变化。 Transwell实验发现汉黄芩素能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。 Western blot 检测发现测汉黄芩素能有效降低人喉癌Hep-2细胞hTERT、Bcl-2蛋白表达水平以及增加Bax蛋白表达水平（ P ＜0．05）。结论汉黄芩素在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭能力。其作用可能与调控Bcl-2蛋白家族及hTERT蛋白表达水平相关。     

依维莫斯联合顺铂对喉癌细胞Hep-2的作用及机制研究

目的 观察特异性mTOR抑制剂依维莫斯联合顺铂对喉癌细胞Hep-2的作用,并探讨其内在的分子机制.方法 Hep-2细胞经依维莫斯和顺铂处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况,金正均法计算q值判断两药的相互作用.以流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2的表达.结果 依维莫斯联合顺铂可抑制Hep-2细胞增殖,与单独用药组相比差异有统计学意义 (P＜0.05),金正均法显示q值＞1.15,显示二者有协同作用.依维莫斯和顺铂均可使Hep-2细胞发生凋亡,并且但在两者联用时凋亡率达到最高.经依维莫斯和顺铂作用后的Hep-2细胞表达Bcl-2较处理前明显下降.结论 体外依维莫斯和顺铂均可抑制Hep-2细胞增殖,诱导其发生凋亡,并可使Bcl-2的表达下调,且两者联合应用时可显著增加其抑制作用,具有协同作用.     

钾通道阻滞剂对人喉癌上皮细胞凋亡的影响

目的研究钾通道阻滞剂对人喉癌上皮细胞（Hep-2）凋亡的影响。方法将钾通道阻断剂四乙胺TEA作用于Hep-2细胞,用MTT法检测细胞活性,采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,同时通过碘化丙啶（PI）染色,采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果TEA对Hep-2细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,并能诱导Hep-2细胞凋亡。结论钾通道对Hep-2细胞增殖具有重要调控作用,阻断钾通道可促进细胞凋亡,可为肿瘤治疗提供新的靶点。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

孕激素对人子宫内膜癌细胞体外增殖、凋亡的影响

目的探讨孕激素对人子宫内膜癌细胞对体外增殖及凋亡的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞,采用流式细胞仪观察不同浓度孕酮对细胞周期及凋亡率的影响、光学显微镜检测其形态学变化、MTT比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用。结果流式细胞仪分析,实验组G_0/G_1期上升,S期下降,细胞凋亡率上升;光镜可观察到细胞凋亡的形态学改变;MTT结果显示,随着孕酮浓度的增加,其对细胞生长的抑制作用明显增强,与对照组比较,差异有显著性,且具有剂量依赖性。结论孕酮抑制子宫内膜癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

三氧化二砷诱导喉癌细胞凋亡的体外研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导喉癌Hep-2细胞株凋亡的作用。方法体外培养的Hep-2细胞与不同浓度的As2O3作用不同时间,用流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳研究细胞凋亡的发生及对细胞周期的影响。结果流式细胞仪检测发现不同药物浓度和作用时间下均有细胞凋亡发生。2滋mol/LAs2O3引起细胞周期明显变化,作用24h后S期细胞比例增高,72h后S期细胞明显下降,细胞大量凋亡。结论As2O3可有效抑制人喉癌Hep-2细胞的体外生长,具有时间、浓度依赖性。As2O3诱导Hep-2细胞凋亡主要是S期的细胞。     

熊果酸对HL60细胞作用机制的初步研究

目的探讨熊果酸在体外对急性早幼粒白血病HL60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用体外细胞培养技术,荧光显微镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化。结果 MTT法证实熊果酸对HL60细胞具有增殖抑制和杀伤效应,并呈浓度和时间依赖性。显微镜下可见HL60细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期阻滞于G0/G1期。结论熊果酸在体外可抑制急性早幼粒白血病HL60细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

干扰LOX基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响

目的 探讨抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响。方法 转染LOX干扰质粒的 Hep-2细胞株,RT-PCR 检测 LOX mRNA,Western blot检测喉癌Hep-2细胞中LOX蛋白及细胞增殖侵袭相关蛋白Ki-67、PCNA、MMP-2/9的表达情况;MTT法检测不同剂量射线对Hep-2细胞生存率的影响,流式细胞术（FCM）检测 Hep-2 细胞凋亡。结果 转染 LOX干扰质粒后 Hep-2细胞中,LOX蛋白和 mRNA 的表达水平下调;Western blot结果显示转染组细胞LOX、Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组;同时不同剂量射线对Hep-2细胞生存率影响呈剂量依赖性,转染组细胞转染后联合放疗细胞凋亡率明显高于空白及阴性对照组。结论 LOX干扰可特异下调LOX表达,抑制细胞增殖侵袭,作用机制可能与Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达下调有关,并且可增强放疗敏感性,为临床提供一个新的靶点,提高喉鳞癌治疗效果。     

MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇(PG490)进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术(Realtime-PCR)检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

吡非尼酮对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响(“豪森杯”优秀论文三等奖)

目的：研究吡非尼酮（pirfenidone,PF）对人肝癌细胞系HepG2增殖和凋亡的影响。方法：CCK-8法测定不同浓度PF对HepG2细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察PF处理后HepG2细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：PF对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色可见PF处理后细胞出现典型的凋亡形态学变化;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,PF处理后的HepG2细胞凋亡率显著增加（P﹤0.01）。结论：PF对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖具有抑制作用,且与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^-1)和不同干预时间(24、48、72 h)的AMP对SiHa细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258法、Annexin-FITC/PI法检测AMP对SiHa细胞凋亡的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Rh-123法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测AMP对SiHa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达的影响。结果AMP对SiHa细胞抑制率呈浓度和时间依赖性(P<0.05),最低IC 50值为40.33μmol·L^-1;随着AMP浓度的增加或作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);当AMP浓度为80μmol·L^-1时,细胞周期阻滞在G 2/M期,呈一定的时间依赖性;线粒体膜电位随AMP浓度上升而下降;Bax/Bcl-2和Cleaved-caspase-3表达水平均上调,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论AMP明显抑制SiHa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G 2/M期,可能通过线粒体途径诱导SiHa细胞凋亡。     

Apoptosis induction and cell cycle perturbation in human hepatoma hep G2 cells by 10-hydroxycamptothecin

10-Hydroxycamptothecin (HCPT), a DNA topoisomerase I inhibitor, is an antitumor alkaloid isolated from a Chinese tree, Camptotheca acuminata, and exhibits a remarkable antihepatoma effect. We studied HCPT to determine whether or not its anti-hepatoma activity occurs through apoptosis induction and cell cycle disturbance using the MTT method, DAPI staining, agarose gel electrophoresis and flow cytometric analysis. The results showed that HCPT inhibited proliferation of human hepatoma Hep G2, Bel-7402 and Bel-7404 cells at an optimal concentration of 0.1 microg/ml. This growth inhibition was dose and time dependent, and was accompanied by evidence of apoptotic changes and cell cycle perturbation in Hep G2 cells. Chromatin condensation and nuclear fragmentation were observed in Hep G2 cells by fluorescence microscopy. Agarose gel electrophoresis showed internucleosomal DNA fragmentation ('ladder pattern') of Hep G2 cells following treatment with HCPT, in a concentration- and time-dependent manner. Flow cytometry showed that HCPT induced a massive hypodiploid cell population and arrested cells in G2/M phase (at low dose) or in S phase (at high dose) in Hep G2 cells. The results of this study suggest that the anti-hepatoma effect of HCPT may result from apoptosis induction and cell cycle disturbance.     

补肾养骨汤诱导多发性骨髓瘤细胞株 KM3 的 凋亡及机制探讨

目的 探讨补肾养骨汤对人多发性骨髓瘤细胞株 KM3 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 取对数生 长期 KM3 细胞,分别加入 5%、10%、20% 的补肾养骨汤含药血清培养,培养 12、24、48 和 72 h 后,采用 Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测补肾养骨汤对 KM3 细胞增殖的影响;KM3 细胞经过不同浓度含药血清培养 72 h 后,采用流式 细胞术检测补肾养骨汤对 KM3 细胞周期和凋亡作用;RT-qPCR 和 Western blot 检测 B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、 Bcl-2 相关蛋白（Bax）和核转录因子（NF）-κB 的表达水平。结果 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞株的增殖,诱导 KM3 细胞株呈剂量依赖性凋亡,使 KM3 细胞周期停滞在 G0/G1 期,导致 KM3 细胞株 Bcl-2、NF-κB 表达下调,Bax 表达 上调。结论 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞的增殖,影响细胞周期,诱导其凋亡,此作用机制可能与 Bcl-2、Bax 和 NF- κB 表达异常有关。     

1，25二羟维生素 D3诱导喉癌细胞 Hep-2细胞凋亡及其对Bax／Bcl-2蛋白表达水平的影响

目的：研究1,25二羟维生素 D3抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖作用,诱导细胞凋亡及其凋亡相关机制。方法用不同剂量（10－8、10－7、10－6 mol／L）1,25二羟维生素 D3处理 Hep-2细胞24 h、48 h、72 h,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测 Hep-2细胞的增殖情况,计算抑制率。流式细胞术检测 Hep-2细胞的凋亡率。Western blot 检测用药前后细胞中 Bax 和 Bcl-2蛋白的表达水平。结果1,25二羟维生素 D3可以抑制 Hep-2细胞增殖（P ＜0．05）,最高抑制率可达30．71％,在上述浓度内随着浓度增加、时间延长抑制作用逐渐增强,呈时间－剂量依赖性。10－7、10－6 mol／L 1,25二羟维生素 D3作用48 h 后,Hep-2凋亡细胞比例显著增加,凋亡率高于空白对照组（P ＜0．05）。1,25二羟维生素 D3处理48 h 后,Hep-2细胞 Bax 蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论在一定浓度范围内1,25二羟维生素 D3能够抑制人喉癌 Hep-2细胞的增殖,呈时间－剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞凋亡有关;1,25二羟维生素 D3可通过上调 Bax 蛋白表达、下调 Bcl-2蛋白表达诱导 Hep-2细胞凋亡。     

鸦胆子油乳对肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对肺腺癌细胞SPA-A1的抑制作用。方法:本研究通过鸦胆子油乳处理肺腺癌细胞(SPA-A1),采用MTT法观察其对细胞生长的抑制效应;DAPI染色观察肺腺癌细胞SPA-A1凋亡的形态学改变;流式细胞术测定细胞凋亡率及分析细胞周期变化。结果:鸦胆子油乳对肺腺癌细胞SPA-A1的抑制呈剂量和时间依赖性;鸦胆子油乳作用后SPA-A1细胞呈凋亡形态学改变;不同浓度的鸦胆子油乳作用SPA-A1细胞后,可以有效地引起细胞凋亡,且具有明显的剂量依赖性;并可阻滞SPA-A1细胞于G0/G1期。结论:鸦胆子油乳可抑制肺腺癌SPA-A1细胞增殖,诱导肺腺癌SPA-A1细胞凋亡,并使肺腺癌SPA-A1细胞阻滞于G0/G1期。     

2-苯基-3,4-噻二唑[3,2-α]并嘧啶-7-酮对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及相关因子表达的影响

目的研究新化学合成药物2-苯基-3,4-噻二唑[3,2-α]并嘧啶-7-酮(TPh)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及相关因子表达的作用。方法MTT法检测空白对照组和不同浓度TPh(0.6、0.4、0.2、0.1和0.05μmol·mL^-1)组培养24、48、72 h后对HeLa细胞增殖的作用,流式细胞术检测TPh对HeLa细胞周期的影响,Annexin-V FITC/PI双染检测TPh对HeLa细胞凋亡的影响,JC-1染色观察TPh对HeLa细胞线粒体膜电位的影响,Western blotting法检测凋亡相关因子表达情况。结果与空白对照组相比,TPh组Hela细胞增殖被显著抑制,HeLa细胞G0/G1期比例增加、G2/M期比例减少,HeLa细胞线粒体膜电位降低,HeLa细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9表达增加、凋亡细胞比率增加(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性趋势。结论TPh可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并促进凋亡,这可能与其激活细胞内源性和外源性凋亡途径有关。     

黄芩素对星形细胞瘤SHG-44细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:观察黄芩素干预人星形细胞瘤SHG-44细胞株后,肿瘤细胞形态、增殖、凋亡、细胞周期以及运动侵袭能力的变化.方法:以体外培养的人星形细胞瘤SHG-44细胞为研究对象,用黄芩素干预后,显微镜观察细胞形态变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,侵袭小室实验观察细胞侵袭力改变.结果:黄芩素对SHG-44细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有明显的时间和剂量依赖性;随黄芩素浓度增加,凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05);黄芩素将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较S期细胞减少近18％,差异有统计学意义(P＜0.05);侵袭小室实验表明随着黄芩素干预浓度增加,SHG-44细胞48 h后穿过人工基底膜的细胞数量明显更少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:黄芩素能显著抑制SHG-44细胞的增殖、侵袭及迁移,提示黄芩素对星形细胞瘤治疗具有潜在应用价值.     

土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV_3细胞增殖并诱导G_2/M期阻滞

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响。方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real time-PCR和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和CyclinD1的表达变化。结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94μmol.L-1。5μmol.L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),Cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。