OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞的研究

目的比较OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集ICR小鼠生殖泡期（GV）未成熟卵和成熟卵,分五组行OPS（open pulled straw,开放式拉细麦管）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在体外培养16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达57．5％,显著高于Ⅱ组（34．1％）,Ⅲ组（32．0％）,Ⅳ组（29．6％）及Ⅴ组（31．0％）（P〈0．01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异不显著（P〉0．05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻小鼠卵母细胞,冷冻GV期卵较冷冻其它成熟时期卵效果好。     

超排卵周期未成熟卵体外培养的研究

目的研究来源于超排卵周期中的未成熟卵母细胞，观察其体外培养成熟、受精及胚胎发育能力，探讨IVM技术在超排卵周期中的未成熟卵母细胞体外成熟的临床应用。方法比较同源体内成熟卵和体外成熟卵进行IVF／ICSI后的正常受精、卵裂、优质胚胎和囊胚形成情况。结果体外培养中72．41％的GV期卵和76．08％的MI期卵在36h内达到成熟，两组成熟率无明显差异（P〉0．05）。体内成熟与体外成熟卵相比较，受精率无明显差异（P〉0．05），但卵裂、优质胚胎形成率低，差异有显著性（P〈0．05）。未成熟卵母细胞组共有13个囊胚培养形成。结论超排卵周期中的未成熟卵，能够继续在体外发育成熟。虽然优质胚胎的形成率低于体内成熟卵，但在同一促排周期增加了可移植胚胎数。同一促排周期所获的未成熟卵行体外成熟培养是可行的。     

控制性超排卵治疗对多囊卵巢综合征患者卵母细胞质量的影响

目的探讨辅助生育技术中控制性超排卵治疗对多囊卵巢综合征不孕患者卵母细胞质量的影响。方法对接受GnRH—a长方案降调控制性超排卵的多囊卵巢综合征患者50例（共52个周期）,和同期因输卵管因素不孕接受GnRH—a长方案降调的对照组患者57例（共60个周期）,观察取卵后卵-冠-丘复合物,对其卵母细胞质量进行评级,比较两组卵母细胞质量、成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠结局。结果PCOS组3级卵母细胞数、优质胚胎数高于对照组,有显著性差异（P〈0．05）,而3级卵母细胞率、优质胚胎率与对照组相比无明显统计学差异（P〉0．05）,PCOS组1级、2级和4级卵母细胞数及比例与对照组相比无明显统计学差异（P〉0．05）。PCOS组与对照组卵母细胞成熟率（88．0％vs88．3％）、受精率（79．3％VS82．1％）、卵裂率（76．9％VS80．3％）、临床妊娠率（38．5％VS40．0％）等,差异无明显统计学意义（P〉0．05）。结论PCOS患者经促排卵治疗后,其优质卵母细胞数、优质胚胎数目明显高于正常对照组,能获得与正常对照患者相同的优质卵母细胞率、卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率。     

改良短时受精在IVF—ET治疗周期中的应用分析

目的探讨改良短时受精在体外受精一胚胎移植（IVF—ET）周期治疗中对胚胎质量的影响及其I临床应用价值。方法回顾性分析2009年9月至2012年8月在唐山市妇幼保健院生殖中心接受体外受精助孕治疗的患者886例,其中短时受精不脱颗粒细胞组（A组）235例,短时受精并全部即刻脱颗粒细胞组（B组）315例,短时受精并部分（3～5枚）脱颗粒细胞组（c组）336例。分别比较3组的受精率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率、胚胎种植率和流产率。结果3组的受精率、卵裂率、胚胎种植率和流产率差异无统计学意义（P〉0．05）;B组的多精受精率高于A、C两组（P〈0．05）;C组的优质胚胎率和临床妊娠率高于A、B两组（P〈0．05）。结论短时受精并部分即刻脱颗粒细胞不影响受精率、卵裂率和胚胎种植率．但可提高优质胚胎率及临床妊娠率,并且能够降低多精受精率。     

胚胎早期卵裂观察在胚胎发育潜能评估中的应用分析

目的探讨取卵后第一天(Day1)胚胎早期卵裂的观察在胚胎发育潜能及临床妊娠结局的预测价值。方法分析2013年5月至2014年4月179个常规IVF周期,依据受精后28±1h双原核(2pn)受精卵早期卵裂情况,分为早期卵裂组(A组)、pn消失未早期卵裂组(B组)、pn未消失未早期卵裂组(C组),比较每组优质胚胎率、可利用囊胚形成率和临床妊娠率等,其中移植结局又根据移植胚胎来源分4组,a组全移植早期卵裂来源胚胎、b组1个为早期卵裂来源胚胎、c组为pn消失未早期卵裂来源胚胎、d组为pn未消失未早期卵裂来源胚胎。结果 1.Day3评分A组、B组、C组的优质胚胎率(61.3%vs 53.1%vs32.1%),差异有统计学意义(P0.05);胚胎可利用率为(72.2%vs 65.5%vs 39.1%),差异有统计学意义(P0.05);可利用囊胚形成率(41.6%vs 37.9%vs 22.2%),差异有统计学意义(P0.05)。2.早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎形成优质胚胎率、可利用囊胚形成率均高于早期卵裂细胞数≥3或评分≥3级的胚胎,差异有统计学意义(P0.05)。3.移植a组、b组、c组、d组的临床妊娠率为63.5%、48.3%、50.0%、44.6%,移植a组的临床妊娠率明显高于其它组别,但差异无统计学意义(P0.05)。结论早期卵裂组的优质胚胎率、可利用囊胚形成率及胚胎移植结局明显高于非早期卵裂组,提示胚胎早期卵裂的观察有助于预测胚胎发育潜能,而早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎发育潜能高。     

卵裂期胚胎质量对单囊胚移植结局的影响

目的研究辅助生殖技术体外培养第3天胚胎质量对所形成的囊胚临床结局的影响。方法回顾性分析本中心行单囊胚移植的483个复苏周期共432个病人的资料,根据所移植囊胚在第3天卵裂期胚胎的细胞数和碎片量进行分组,分析细胞数量和碎片量对囊胚移植临床妊娠率、流产率的影响。根据第3天细胞数分成≤6细胞组、7~9细胞组和≥10细胞组3组;根据细胞碎片量分成≤2级组和≥3级组。结果碎片量≤2级组和≥3级组在临床妊娠率(57.14%vs.58.65%)、流产率(13.50%vs.16.67%)方面均无统计学差异(P0.05)。≤6细胞组、7~9细胞组和≥10细胞组的临床妊娠率分别为49.30%、60.24%、52.5%;流产率为31.43%、11.5%、14.29%,各组间临床妊娠率无统计学差异(P0.05),≤6细胞组的流产率明显高于7~9细胞组(P0.05)。≤6细胞组优质囊胚的流产率(28%)仍明显高于7~9细胞组(P0.05)。结论经囊胚培养形成的囊胚的临床妊娠率和流产率与第3天胚胎碎片的多少关系不大;第3天6细胞以下胚胎形成的囊胚质量较差,即使形成优质囊胚其发生流产的风险也较高。     

激素替代治疗周期402例冻融胚胎移植的回顾性分析

目的回顾性分析激素替代治疗（hormone replacement therapy, HRT）周期冻融胚胎移植（frozen - thawed embryo transfer, FET）的妊娠结局并探讨其影响因素。方法回顾性分析2011年1月～2012年1月中山大学附属第一医院生殖中心接受激素替代治疗周期冻融胚胎移植的不孕患者的妊娠结局和其相关因素。结果研究期间366个患者行402个HRT周期冻融胚胎移植,临床妊娠率为41．5％,年龄≤35岁患者妊娠率为43．4％;〉35岁患者妊娠率为27．7％。多胎率为29．9％,种植率为22．4％,其中D3天胚胎种植率为19．7％,囊胚种植率为37．7％。接受单个胚胎移植的患者,D3天胚胎种植率为9．1％,囊胚种植率为53．3％。结论激素替代周期冻融胚胎移植能获得满意种植率,影响其临床妊娠率因素包括女方年龄、ET日雌激素水平,以及ET胚胎数目、类型和质量。     

玻璃化和程序化冻融人卵裂期胚胎结果分析

目的探讨冻融周期中玻璃化和程序化两种不同方法对人卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法回顾性分析35例玻璃化冷冻复苏周期和123例程序化冷冻复苏周期资料,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、完整性胚胎存活率,冻融前后的优质胚胎率,临床妊娠率、胚胎种植率。结果①玻璃化法与程序化法冷冻前优质胚胎率无显著性差异（70．83％和71．97％,P〉0．05）,冷冻后优质胚胎率差异显著（63．89％和47．75％,P〈0．05）,复苏后的胚胎存活率差异显著（95．83％和86．16％,P〈0．05）,完整性胚胎存活率差异极显著（90．28％和63．32％,P〈0．01）;②玻璃化法与程序化法临床妊娠率差异显著（48．57％和29．27％,P〈0．05）,种植率差异显著（31．88％和18．83％,P〈0．05）。结论在冻融人卵裂期胚胎的过程中,玻璃化优于程序化,可以更好的提高累积临床妊率。     

胚胎的形态学指标与囊胚形成的相关性分析

目的研究胚胎的形态学指标与囊胚形成的关系。方法收集321对行辅助生殖技术助孕的夫妇D3移植和冷冻后剩余胚胎共1208枚,放入培养液中继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率和优质囊胚形成率。结果共形成囊胚210枚,囊胚形成率17.4%,优质囊胚62枚,优质囊胚形成率为5.1%。D3卵裂球数目为6-10细胞组囊胚形成率和优质囊胚形成率极显著高于其它组(P0.01)。不同胚胎碎片组比较差异不显著(P0.05)。胚胎发育迟缓组囊胚形成率和优质囊胚形成率比正常发育组低,差异极显著(P0.01),其中延时受精组、发育阻滞组的囊胚形成率极显著低于发育迟缓组(P0.01)。结论 D3剩余胚胎仍有继续发育成囊胚的潜能,D3细胞数和胚胎发育速度与囊胚形成密切相关。     

形态学评分对胚胎发育潜能预测价值的探讨

目的探讨形态学评分对胚胎发育潜能预测价值。方法比较不同原核评分、不同卵裂球数及不同胚胎碎片的胚胎D5或D6囊胚形成情况。结果 D1天原核评分各组囊胚形成率及优质囊胚率无显著差异(P均0.05)。D3天不同碎片含量胚胎囊胚形成率有显著差异(P0.001)。S1组(碎片10-25%)、S2组(碎片25-50%)优质囊胚形成率显著高于S3组(碎片50%),P均0.001,S1与S2组相比,优质囊胚形成率则无显著差异(P0.05)。D3天C2组(7-9-cells)的胚胎囊胚形成率和优质囊胚率最高,与C1组(≤6-cells)相比差异有统计学意义(P0.001),但与C3组(≥10-cells)相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 D1天原核形态学评分不能有效预测胚胎发育潜能,D3天胚胎碎片少于50%,细胞数大于6的胚胎具有较高的发育潜能。     

基础睾酮水平对IVF-ET结局的影响

目的分析输卵管因素继发不孕妇女的体外受精-胚胎移植（IVF—ET）的助孕过程和结局，探讨基础睾酮（T）的重要性。方法回顾性分析30岁～35岁的123例第一周期长方案IVF—ET的不孕妇女的临床资料，根据新鲜周期的妊娠情况T水平的ROC曲线切割值、本中心对高T水平预降调至理想范围高值0．7ng/ml及T正常高值分成3组（A、B、C组），同种方式将同期输卵管因素继发不孕病例271例分成3组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组），分别比较组间助孕过程和妊娠结局。结果A组2PN受精率、着床率、妊娠率、临床妊娠率明显低于B、C组（P〈0．05）；B组可利用胚胎率、优质胚胎率显著低于A、C组（P〈0．05）；I组可利用胚胎数、成熟卵子率、着床率、妊娠率、临床妊娠率明显低于Ⅱ、Ⅲ组（P〈0．05）。结论基础T水平较低时妊娠率明显下降。30岁～35岁妇女，基础T水平在0．45ng／ml～1．02ng／ml时能获得更好的妊娠结局。     

年龄对小鼠IVF早期胚胎发育的影响

目的比较不同年龄小鼠体外受精胚胎发育的结局,探讨以年龄因素为背景的IVF胚胎发育的影响。方法采用相同超数排卵方案,在相同的培养条件和培养时间下,对4-8周龄和44-48周龄小鼠进行体外受精和胚胎培养,观察并记录双原核卵率、≥4细胞率、囊胚率以及孵化囊胚率。结果老龄组在受精率、卵裂率以及孵化囊胚率上与年轻组比较存在极显著性差异（P〈0.01）,但在囊胚形成率上的差异无统计学意义;老龄鼠超数排卵后获卵数明显少于年轻小鼠。结论年龄对卵子数量以及IVF胚胎早期发育有较大影响。     

不同超排卵方案和小鼠品系来源的2-细胞期胚胎体外培养比较

目的比较激素注射间隔时间差异对昆明系小白鼠（KM小鼠）超数排卵的影响以及KM小鼠和ICR小鼠2-细胞胚胎的体外发育能力。方法29只KM小鼠随机分成两组,分别间隔48h和72h注射10IU的孕马血清（PMSG）和尿绒毛膜促性腺激素（HCG）,比较获取2-细胞胚胎数以及其体外发育能力的差异;分7次同时常规超排KM小鼠和ICR小鼠,体外培养2-细胞胚胎,记录囊胚形成数。结果48h超排卵组获取2-细胞期小鼠胚胎数目显著多于72h超排卵组（P〈0．01）,但前者的囊胚形成率却显著低于后者,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）。KM小鼠和ICR小鼠2-细胞胚胎的囊胚形成率间无显著差异（P〉0．05）。结论间隔48h超排KM小鼠可获取较多胚胎,但间隔72h超排所获2-细胞期小鼠胚胎体外发育潜能好;小鼠品系不影响2-细胞胚胎的体外培养结果。     

D3卵裂期优质胚胎与非优质胚胎培养形成囊胚率及临床应用价值

目的探讨D3卵裂期非优质胚胎与优质胚胎继续培养形成囊胚率及临床应用价值。方法收集本中心486个体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)治疗周期中受精后第3天(D3)移植、冷冻保存后剩余的404枚优质胚胎,528枚非优质胚胎继续囊胚培养,比较两种胚胎的囊胚形成率。玻璃化冷冻已形成的囊胚,如果患者新鲜周期移植妊娠失败,则在下一周期把囊胚解冻移植,比较两种冻融囊胚的种植率和临床妊娠率。结果 D3卵裂期优质胚胎囊胚形成率为88.37%,非优质胚胎囊胚形成率为42.42%(P0.01);其中优质胚胎的78枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为42.37%,妊娠率为63.53%;非优质胚胎的64枚囊胚在下一周期解冻移植,其种植率为39.65%,妊娠率为58.78%,两组比较差异没有统计学意义(P0.05)。结论⑴D3优质胚胎继续囊胚培养形成率明显高于非优质胚胎。⑵卵裂期优质胚胎培养形成的囊胚与非优质胚胎形成的囊胚冻融后移植的种植率及临床妊娠率没有明显差异。     

IVF中胚胎分裂迟缓的影响因素及妊娠结局分析

目的探讨体外受精(IVF)中影响胚胎分裂迟缓的影响因素,分析分裂迟缓胚胎的妊娠结局。方法回顾性分析2017年1月至12月十堰市人民医院生殖医学研究中心的186例患者的病史资料,将D3胚胎分裂迟缓的66例作为B组,胚胎分裂正常的120例作为A组-对照组。对可能影响胚胎分裂迟缓的相关因素及其受精后胚胎参数、妊娠结果进行统计。结果分裂迟缓组男、女方年龄低于正常组(P0.01),原发性不孕的比例高于正常组(P0.05)。两组的基础激素水平和hCG日激素水平比较均无统计学意义(P0.05)。A组获卵数多于B组(P0.01);但采用ICSI的比率和卵泡数6的比率均低于B组(P0.05);B组的可用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率以及妊娠率均低于A组(P0.01)。结论年轻患者合基础卵泡较少的患者可能会发生胚胎分裂迟缓现象,且分裂迟缓胚胎后期继续培养的可用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率会显著下降,同时卵裂期分裂慢的胚胎明显影响妊娠结局。     

精子DNA碎片指数对冷冻胚胎移植临床结局的影响

目的通过评估精子DNA碎片指数(DFI),探讨精子DFI对冷冻胚胎移植结局的影响。方法采用改良精子染色质扩散实验(SCD)对530例接受体外受精(IVF)和153卵细胞浆单精子注射(ICSI)的男方进行精子DFI检测,并根据精子DFI值将上述IVF患者分组(DFI≤30%,DFI30%),根据单因素方差分析统计方法分析各组IVF受精率、卵裂率、优质胚胎率和冷冻胚胎移植的妊娠结局的差异。结果精子碎片指数DFI≤30%组在临床妊娠率,生化妊娠率和流产率与DFI30%组相比没有显著变化。在精子DNA碎片指数≤30%的ICSI组,囊胚形成率显著高于DFI30%组。结论精子染色质扩散试验(SCD)方法测定的精子DNA碎片指数与冷冻胚胎移植(FET)结局无关,但是与ICSI周期的囊胚形成率有关。     

雌激素受体抑制剂对小鼠囊胚形成的影响

目的观察雌激素受体（estrogen receptor,ER）抑制剂对昆明（Kunming,KM）小鼠体外囊胚形成的影响,为进一步探讨雌激素受体在小鼠囊胚形成中的作用和机制提供实验依据。方法以空白KSOM培养液为对照组,KSOM中添加浓度为1、2、3、4、5p~mol／L的ER仪抑制剂MPP,以及浓度为1、10、50、100μmol／L的ERB抑制剂PHTPP为实验组,收集KM小鼠8．细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至桑葚胚和囊胚两个阶段的数目,比较各组发育到囊胚的比率。结果添加浓度为1~mol／L、2Ixmol／L的MPP实验组囊胚发育率分别为86．36％、86．40％,与对照组（82．26％）相比无明显差别（P〉O．05）,而添加浓度为3μmol／L、4μmol／L、5μmol／L的MPP实验组囊胚发育率分别为46．58％、7．50％、0,发育率显著下降（P〈0．01）。添加浓度为1μmol／L、10μmol／L、50~mol／L的PHTPP实验组囊胚发育率分别为82．61％、87．04％、83．98％,与对照组（82．09％）比较没有明显差异（P〉O．05）,而添加高浓度（100μmol／L）的PHrrPP实验组囊胚发育率（51．39％）较明显下降。结论低浓度（5μmol／L）的ERo的抑制剂MPP可完全抑制KM小鼠8一细胞胚体外发育到囊胚,而50~mol／L的ERB抑制剂PHTPP对KM小鼠囊胚形成无明显影响,高浓度（100μmol／L）的PHTPP才可部分抑制囊胚形成。提示在小鼠囊胚形成中,ERα起着更为主要的作用。     

胚胎发育对囊胚移植妊娠结局影响的临床研究

目的研究胚胎发育对囊胚移植妊娠结局的影响。方法回顾性分析IVF-ET助孕中囊胚培养和移植的60例病例,根据是否妊娠分为2组,妊娠组34例,未妊娠组26例,比较并分析2组正常受精率、第2d卵裂球数量、第3d卵裂球碎片率、第4d紧密化程度和第5d天胚胎发育阶段的差异。结果妊娠组和未妊娠组正常受精率、第2d卵裂球数量、第4d紧密化程度无明显差异,但第3d卵裂球碎片率妊娠组明显低于未妊娠组,而第5d优质囊胚移植率妊娠组也高于未妊娠组,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。结论第5d天胚胎发育阶段和第3d卵裂球碎片率影响囊胚的植入率,同时通过观察第5d天胚胎发育阶段和第3d卵裂球碎片率来选择优质胚胎移植将有助于提高妊娠率。     

不孕患者心理状态对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的比较不孕患者心理状态对体外受精-胚胎移植（IVF—ET）妊娠结局的影响。方法采用症状自评量表（SCL-90）对在我中心接受ART治疗并接受新鲜胚胎移植的114周期进行心理状态测评。统计SCL-90自评量表总分,以SCL-90自评量袁全国常模分数129分为参照,分为心理健康组（≤129分）与心理亚健康组（〉129分）,分析2组病人卵母细胞受精、胚胎发育情况以及临床妊娠结局。结果心理亚健康组不孕患者平均Gn量显著高于心理健康组,统计学差异显著（P〈0.05）;2组不孕患者卵母细胞的受精率为77．47％和78．97％（P〉0．05）,无统计学差异;心理健康组不孕患者卵母细胞利用率显著高于心理亚健康组（40.00％vs35．97％）,统计学差异显著（P〈0.05）;心理健康组不孕患者临床妊娠率与胚胎着床率也显著高于心理亚健康组,分别为60．98％vs55．56％（P〈0.05）、45．36％vs42．28％（P〈0.05）,统计学差异显著。结论不孕患者心理状态虽然不影响其卵母细胞受精率,但影响受精后胚胎发育潜能及临床妊娠结局,同时由于心理亚健康组（知量增加,可能会导致心理状况差的不孕患者治疗费用增加。因此,建议不孕患者在进行IVF—ET治疗同时,辅以心理疏导等干预措施。     

应用荧光原位杂交技术(FISH)对罗伯逊易位携带者进行胚胎着床前遗传学诊断

目的用FISH对罗伯逊易住携带夫妇行胚胎着床前遗传学诊断，选择正常／平衡核型的胚胎移植。方法对14例罗伯逊易位携带者（男性9例，女性5例）行IVF／ET／PGD共15周期。9例男性和2例女性罗伯逊易位携带者体外受精后第3天卵裂球活检，3例女性携带者极体活检或极体活检加卵裂球活检；用特异位点探针或全染色体涂抹探针荧光原位杂交，选择信号正常或平衡的胚胎移植。结果15个PGD周期，共活检胚胎或MII卵母细胞120枚；取出卵裂球120个、第一极体18个，固定成功率92．8％（128／138）；杂交成功率为96．1％（123／128）。活栓后胚胎继续发育69．2％（83／120）；15例PGD周期中，移植13例；6例获得妊娠（6／13）；其中女性携带者妊娠4例（4／4），男性携带者妊娠2例（2／9），二者差异具有显著性（P〈0．05）。结论1、对存在不孕因素的罗伯逊易住携带者做胚胎着床前遗传学诊断，选出正常／平衡核型的胚胎移植可有较好的临床预后。2．对女性罗伯逊易住携带者哥首选极体活检，使患者有机会避免罗伯逊易位携带者出生。