外泌体在甲状腺癌的研究进展

外泌体是一种直径50~140 nm的细胞外囊泡,包含DNA、RNA、蛋白质等多种内容物,几乎来源于所有类型的细胞。外泌体存在于血液、乳汁、尿液,通过传递生物活性分子在细胞间通讯中起着关键作用。论文综述外泌体的概况、功能及应用,总结外泌体miRNAs和circRNAs对甲状腺癌的影响及作为一种新型生物标志物的潜能。     

外泌体在变态反应性疾病中的研究进展

外泌体是晚期内体起源的一种具有脂质双层膜结构的封闭囊泡,可以携带和分泌细胞内的蛋白质、核酸等并转运至受体细胞,是信号转导和细胞间通讯的重要载体,在多种生理和病理过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,外泌体可以调节免疫应答、传递炎症信号、释放细胞因子,在变态反应性疾病中起关键作用。由于外泌体存在于多种体液中,有望在疾病早期筛查、疗效评估及预后分析中提供帮助。因此,本文就外泌体在变态反应性疾病中的研究进展进行综述,希望为疾病的诊治和预防提供新的思路和有效靶点。     

外泌体环状RNA与肿瘤发生、发展及转移研究进展

外泌体是细胞分泌的一种具有双层膜结构的微小囊泡,含有丰富的蛋白质、脂质和核酸等多种生物活性物质,可作为信号因子参与包括增殖、侵袭、转移等多种肿瘤细胞过程。环状RNA（circRNA）是一类具有共价闭环结构的新型非编码RNA,稳定性高、表达丰富、功能多样,近年来引起学界广泛关注,成为生物医学领域研究的热点。研究发现circRNA在外泌体中富集并且发挥着特定的功能,本文对外泌体circRNA在肿瘤领域的研究进展做一综述。     

唾液外泌体在头颈恶性肿瘤中的研究进展

唾液外泌体是细胞通过主动分泌作用产生并排出胞外的圆形杯状囊泡，其内含有大量信息分子，参与和调节多种信号通路，在细胞间的信息交流以及物质传递方面发挥着极其重要的作用。唾液外泌体不仅可作为疾病诊断的标记物，还可能作为药物载体应用于疾病的治疗。本文主要就现阶段唾液外泌体的研究进展及其在头颈恶性肿瘤中的作用进行综述。     

外泌体miRNAs在鼻咽癌放射抵抗中的作用

目的　探讨外泌体microRNA在鼻咽癌放疗抵抗中的作用。方法　利用射线照射获得放疗抵抗性鼻咽癌CNE2细胞（R-CNE2），比较R-CNE2和CNE2细胞外泌体 中miRNA23-a和miRNA21表达水平。将R-CNE2细胞外泌体与CNE2细胞共培养，检测其对CNE2放疗抵抗的影响。结果　R-CNE2细胞外泌体产量为（11.97±1.8）μg/106细胞，高于CNE2细胞[（2.45±0.87）μg/106细胞，t =4.25，P =0.000]。R-CNE2细胞外泌体中miRNA23-a和miRNA21表达水平高于CNE2细胞外泌体（t miRNA23-a=3.47，P =0.000；t miRNA21=4.38，P =0.007）。抑制外泌体miRNA23-a后，CNE2细胞经射线照射后活力为56.75%±10.43%；而 抑制miRNA21后，CNE2细胞经射线照射后活力为24.25%±5.67%，明显低于外泌体+射线处理组（F =3.54，P =0.000）。miRNA-21模拟物组细胞活力为60.5%±5.92%大于单纯射线处理组（17%±2.55%，F =4.24，P =0.000）；而miRNA23 - a 模拟物组与单纯射线组无明显差异（26.25%±11.32%，F =2.28，P =0.27）。结论　外泌体miRNA21可能在CNE2细胞放疗抵抗中起主要作用。     

鼻息肉组织中血管内皮细胞的定量研究

摘要］目的：探讨鼻息肉中微血管生成准确定量的新方法，了解糖皮质激素对鼻息肉中CD34的表达及微血管密度的影响。方法：采用抗CD34单克隆抗体标记法检测了13例鼻息肉组织和11例鼻喷布地奈德的鼻息肉中CD34蛋白的表达，同时应用流式细胞仪行定量分析，与免疫组化法测定的MVD比较，对CD34阳性血管行MVD计数，并了解微血管的分布情况。结果：流式细胞术表明，鼻息肉组与激素治疗组平均检测值（%）差异有统计学意义（P＜0.05）。相关分析提示，流式细胞术测定血管内皮细胞百分率与免疫组化测定的MVD相关（r=0.675， P=0.011）。结论：糖皮质激素可能通过调控CD34蛋白，抑制血管内皮生长，这可能为阐明糖皮质激素治疗鼻息肉的机制提供了新的研究方向。也提示流式细胞术可准确、快速、定量地测定鼻息肉组织中血管内皮细胞，这为了解鼻息肉生物学特性提供了较准确的信息和检测指标，为预测其预后和可能的抗血管治疗提供了可靠的依据。     

喉癌细胞来源外泌体通过微小核糖核酸-21-5p促进巨噬细胞M2极化的作用及机制研究#br#

目的　研究喉癌患者术前及术后血清来源外泌体及其微小核糖核酸-21-5p（miR-21-5p）的变化，探讨喉癌细胞通过miR-21-5p促进巨噬细胞M2极化的机制。方法　收集正常人群血清以及喉癌患者术前和术后1个月及6个月血清样本，分离外泌体，纳米流式细胞仪揭示粒子粒径和数量，BCA和Western blot分析外泌体的含量和标记分子表达。建立人喉癌细胞系AMC-HN-8和巨噬细胞共培养体系 以及外泌体处理巨噬细胞体系，流式分析巨噬细胞极化情况，qRT-PCR检测外泌体和细胞中miR-21-5p水平。结果  喉癌术前和术后1个月及术后6个月血清来源外泌体CD9、CD63和CD81阳性表达，术前喉癌血清来源外泌体数量和蛋白浓度均高于对照组，而患者术后血清来源外泌体数量和蛋白浓度均比术前低。细胞水平发现AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或者其来源外泌体处理巨噬细胞均降低了M1型巨噬细胞比例，提升M2型细胞比例。分子水平检测发现术前喉癌血清来源外泌体中miR-21-5p水平升高，术后则明显下降，AMC-HN-8与巨噬细胞共培养或其来源外泌体处理巨噬细胞均能升高巨噬细胞中miR-21-5p水平。抑制AMC-HN-8中miR-21-5p水平，其分泌的外泌体中miR-21-5p也受到抑制，处理巨噬细胞后，巨噬细胞中miR-21-5p水平和M2型细胞比例下降，而M1型细胞比例有所恢复。结论  喉癌患者血清外泌体含量以及miR-21-5p水平较高，喉癌细胞可通过外泌体传递miR-21-5p作用于巨噬细胞，促进巨噬 细胞M2极化。     

鼻息肉中单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子的表达

目的明确单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在鼻息肉组织中的表达及其相关性，初步探讨MCP-1与鼻息肉发生的关系。方法取40例鼻息肉组织和25例下鼻甲组织，应用原位杂交和免疫组织化学等方法检测MCP-1和VEGF mRNA及蛋白质的表达。结果鼻息肉组织中MCP-1和VEGF mRNA及蛋白质的表达均高于对照组下鼻甲组织（P值均〈0．01）；鼻息肉组织中MCP-1和VEGF蛋白质的表达呈正相关（r=0．871，P〈0．05）。结论鼻息肉组织中MCP-1和VEGF表达增加，二者协同作用可能是鼻息肉形成的原因之一。     

前庭神经鞘膜瘤外泌体对小鼠耳蜗基底膜的影响研究

目的 研究前庭神经鞘膜瘤（vestibular schwannoma, VS）外泌体对小鼠耳蜗基底膜的影响,探讨其在VS患者听力下降中的潜在作用。方法 收集2020年9月至2021年6月于上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科手术治疗的6例Ⅱ、Ⅲ期中小型VS患者的肿瘤组织及临床资料,根据AAO-HNS听力分级分为听力好组（Good Hearing, GH）和听力差组（Poor Hearing, PH）;采用超速离心法提取VS原代细胞上清中的外泌体,通过Western-blot、透射电镜、纳米流式鉴定外泌体;免疫荧光染色技术探究VS外泌体对小鼠耳蜗基底膜毛细胞形态及数量的影响。结果 在一定浓度下,PH组外泌体造成小鼠基底膜毛细胞数量减少,细胞形态异常,细胞排列紊乱;而GH组外泌体对毛细胞的形态及数量几乎无影响;当外泌体浓度下降,PH组外泌体仅造成毛细胞出现极少数量的丢失。结论 VS外泌体具有不同程度的耳毒性,对小鼠耳蜗毛细胞的损伤具有浓度依赖性。     

鼻息肉、鼻息肉病及对照鼻黏膜蛋白质双向电泳图谱的建立

目的　建立鼻息肉、鼻息肉病及对照鼻黏膜组织蛋白质双向凝胶电泳 (2 DE)图谱。方法　收集并- 80℃冻存鼻息肉、鼻息肉病及鼻黏膜组织样本各 3例 ,双向凝胶电泳分离样本总蛋白、银染凝胶显色 ,扫描图像 ,ImageMaster 2 DEElite4 .0 1软件分析。结果　鼻息肉、鼻息肉病和鼻黏膜组织同一样本三块凝胶平均蛋白质点数分别为 82 5± 78个 ,891± 6 7个和 936± 6 2个 ;平均匹配点数分别为 6 82± 96个 ,76 7± 83个和 82 1± 78个 ,其平均匹配百分率分别为 82 .7%、86 .1%和 87.7% ;位置重复性分析 ,IEF方向平均偏差为 1.13± 0 .16mm ,SDS PAGE方向平均偏差为 1.4 5± 0 .2 1mm。鼻息肉、鼻息病和鼻黏膜三种组织各 3例样品的平均蛋白质点数分别为 876± 95个 ,95 3± 84个和 10 16± 79个。三种组织的 2 DE平均凝胶图谱 :鼻息肉、鼻息肉病和鼻黏膜蛋白质点数分别为116 2个、12 74和 1336个 ,平均匹配点数为鼻息肉与鼻黏膜之间 75 7个 ;鼻息肉病与鼻黏膜之间为 82 5个 ;鼻息肉与鼻息肉病之间为 883个。结论　本实验建立了图像清晰、分辨率高和重复性好的鼻息肉、鼻息肉病及鼻黏膜组织的固相PH梯度 2 DE图谱 ,有助于进一步识别鉴定三者差异表达的蛋白质。     

外泌体在变应性鼻炎发病机制中的研究进展

变应性鼻炎是一种常见的慢性气道炎症性疾病。外泌体是由膜包绕的纳米级囊泡，其可通过旁分泌等途径在细胞间传递信息并调节受体细胞功能，还可参与变应性鼻炎的炎症反应，诱导炎症细胞的迁移。本文拟从外泌体的结构和功能入手，阐述其在变应性鼻炎发病机制中的作用，期待为探寻变应性鼻炎的诊断及治疗提供支持。     

慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉与正常鼻黏膜差异蛋白质的检测及其意义

目的采用蛋白质组学技术筛选慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉和正常鼻黏膜组织之间差异表达的蛋白质,初步鉴定出慢性鼻-鼻窦炎和鼻息肉的候选蛋白质标记物。方法应用固相pH4~7胶条行双向凝胶电泳,胶体考马斯亮蓝染色后,扫描2-DE胶,应用PDquest图像分析软件比较慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉和正常鼻黏膜组织2-DE图谱,得到三组之间差异表达的蛋白质点。经MALDI-TOF-MS鉴定后获得这些差异表达蛋白质的肽质量指纹图谱,用Mascot软件查询NCBInr和SWISS-PROT数据库,得出被测蛋白质的鉴定结果。结果所获双向凝胶电泳图谱分辨率高、重复性好。测得鼻息肉、慢性鼻-鼻窦炎及正常鼻黏膜组织的蛋白质平均斑点数分别为1020±40、1112±10和1008±25;平均匹配率分别为(93±2)%、(95±1)%和(90±3)%。三组之间共计有13个明显差异表达的蛋白质点。初步筛选出角蛋白8和阿朴脂蛋白AI作为鼻息肉的候选标志物,以及PLUNC蛋白、超氧化物歧化酶、自然杀伤细胞促进因子B、垂体腺苷酸环化酶激活肽为慢性鼻-鼻窦炎的候选标志物。结论用蛋白质组学技术能高通量筛选慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉和正常鼻黏膜间存在的差异表达蛋白质,这将为慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉分类、分型分期和预后判断标准寻找新的客观参考指标。     

E-选择素在鼻息肉中的分泌与表达

目的:检测黏附分子E选择素在鼻息肉中的分泌水平与表达部位,借以探讨其与鼻息肉可能的病理机制的相关性。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测25例鼻息肉(鼻息肉组)组织匀浆中E选择素水平,以9例鼻中隔手术患者之代偿肥大的下鼻甲后端黏膜作为对照(对照组);同时对上述标本进行苏木精伊红染色及E选择素免疫组织化学染色,观察其表达情况。结果:鼻息肉组大量嗜酸粒细胞浸润。E选择素浓度为(42.58±13.52)μg/L,对照组为(11.35±3.17)μg/L,差异有统计学意义(P<0.01)。E选择素主要表达于血管内皮、腺体上皮、间质和浸润炎症细胞上。鼻息肉组腺体上皮阳性表达率为92.0%,对照组为55.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻息肉组在血管内皮上阳性表达率为84.0%,对照组为44.4%;鼻息肉组在间质及浸润炎症细胞阳性表达率为92.0%,对照组为33.3%,差异均有统计学意义。Spearman相关性分析E选择素在血管内皮上的表达和在间质及浸润炎症细胞上的表达呈正相关(r=0.544,P<0.01)。结论:高表达的E选择素可能通过参与嗜酸粒细胞等炎症细胞的浸润、活化、增殖,从而在鼻息肉的形成过程中起重要作用。     

鼻息肉病与正常鼻黏膜组织的蛋白质组差异分析

目的:建立分辨率高和重复性好的鼻息肉病及对照鼻黏膜双向凝胶电泳(2DE)图谱,筛选鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉病(鼻息肉病组)及对照鼻黏膜标本(对照组)各7例,固相pH梯度2DE、凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2DEElite4.01软件分析,识别差异表达蛋白质,质谱仪得到相应肽质指纹图谱(PMF),PeptIdent软件查询SwissProtandTreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:①鼻息肉病组和对照组各自随机挑选的1个样本3次重复2DE,平均蛋白质点数分别为891±67和936±62;匹配点数为767±83和821±78,平均匹配百分率为86.1%和87.7%;同一鼻息肉病的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦电泳(IEF)方向偏差为(1.13±0.16)mm,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)方向偏差为(1.45±0.21)mm。分析2种组织各7例样本的2DE图谱的平均凝胶图谱,鼻息肉病组和对照组蛋白质点数为1532和1617,匹配点数为1065个。②质谱分析差异蛋白质点20个,获取16张PMF,查询数据库鉴定出差异蛋白质11个。结论:本研究建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉病及鼻黏膜的2DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的差异表达蛋白质。     

鼻息肉中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的表达

目的探讨血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)在鼻息肉发病过程中的意义。方法将鼻息肉患者分为A、B2组,A组为Ⅰ型及Ⅱ型1、2期鼻息肉患者,B组为Ⅱ型3期及Ⅲ型鼻息肉患者,采用免疫组化SP法对2组39例鼻息肉患者鼻息肉组织中VEGF、bFGF的表达进行检测。结果正常鼻粘膜中VEGF、bFGF的染色呈阴性,而在A、B组鼻息肉组织中的阳性率分别达到59%、41%和71%、80%,B组中阳性率和阳性细胞数均高于A组;VEGF和bFGF在鼻息肉组织中主要定位于基底膜周围的炎性细胞和上皮细胞以及血管周围和血管壁内皮细胞。结论 VEGF、bFGF通过在鼻息肉组织中的过度表达,促进息肉组织内的血管增殖和炎性细胞聚积,促进鼻息肉的发生发展,可能是鼻息肉病区别于鼻息肉的重要组织学特征之一。     

鼻息肉药物治疗的现状及进展

鼻息肉常与慢性鼻窦炎同时存在，是多种因素共同作用于鼻腔、鼻窦黏膜导致长期慢性炎症的结果。在这一过程中，由免疫活性细胞及其释放的多种细胞因子相互作用形成导致持续性炎性反应的复杂恶性循环网络。此网络中有多个关键结点，诸如致病原攻击、树突状细胞和Th2细胞激活、细胞因子和炎性介质的释放、终末器官的炎症反应（细胞浸润、腺体分泌、血管新生、组织水肿以及组织重塑等）等。由于鼻息肉的形成过程就是中鼻道内炎性反应的过程，故外科手术只能摘除已形成的息肉，不能从根本上阻抑鼻息肉形成的病理过程，术后表现的高复发率便在一个侧面证明了此点。只有适当应用药物干预，才能有效地控制鼻息肉。本文结合鼻息肉的病理生理学综述了药物治疗鼻息肉的现状及某些研究进展。     

鼻息肉病的细胞病理学研究

鼻息肉病发病机制至今不清，本文从鼻息肉的细胞形态学，细胞生物学及分子生学方面作一综述，推测算息内的发生是多种复杂因素在不同水平使某些基因的表达调控失调，很可能是一种基因病。     

红霉素干预对离体人鼻息肉嗜酸粒细胞凋亡基因表达的影响

目的　本实验探讨人鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡基因的表达以及红霉素干预对其表达的影响。方法　采用免疫组化方法检测 4 0例离体人鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡基因的表达 ,及15例经红霉素干预后 (外植块培养 )的离体人鼻息肉组织中嗜酸粒细胞凋亡基因表达的变化。结果　鼻息肉组织Bcl 2表达 5 % (2 / 4 0 ) ,Bax表达 6 5 % (2 6 / 4 0 ) ,Bcl xL 表达 4 0 % (16 / 4 0 ) ,Fas表达90 % (36 / 4 0 )。与下鼻甲黏膜相比 ,Bax和Fas表达差异有显著性 (P <0 0 5 )。经红霉素干预后 ,鼻息肉组织Bax表达明显上调 (93 3% ,14 / 15 ) ,与单纯用RPMI16 4 0培养者比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,但Bcl xL和Fas表达差异无显著性。结论　Bax可能是鼻息肉组织嗜酸粒细胞凋亡抑制机制中最有意义的调控基因 ,红霉素可增强Bax的表达 ,是促进嗜酸粒细胞凋亡因素之一。     

平阳霉素对鼻息肉病组织中肿瘤坏死因子表达的影响

目的通过观察平阳霉素对鼻息肉病组织中肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)表达的影响,探讨平阳霉素治疗鼻息肉病的机制。方法应用TNF单克隆抗体分别对19例鼻息肉病患者平阳霉素治疗前和治疗后鼻息肉病组织标本进行免疫组化染色,观察TNF在鼻息肉病组织中的表达和分布。结果平阳霉素治疗后鼻息肉病组织中的腺体数和血管数比治疗前明显减少,差异有显著性意义(P<0.05);平阳霉素治疗后鼻息肉病鼻息肉组织中腺体和血管TNF阳性表达率明显降低(P<0.05);上皮细胞TNF阳性表达率治疗前为(45.37±12.16)%,治疗后为(28.49±11.93)%,差异有显著性意义(P<0.05)。结论平阳霉素可减少鼻息肉病组织中腺体和血管数量以及减少上皮细胞、腺体和血管中TNF表达。