小檗碱干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠息肉生长的研究

目的 观察小檗碱防治家族性腺瘤性息肉病(FAP)动物模型Apc(Min/+)小鼠息肉生长的疗效并探讨其可能的分子机制.方法 将16只4周龄Apc(Min/+)小鼠均分为对照组(不予处理)和小檗碱组(剂量为150 mg· kg-1·d-1).12周后处死小鼠,记录小鼠肠道息肉数量、大小及分布.免疫组织化学染色法检测小鼠肠道息肉中增殖细胞核抗原(PCNA)、β-链蛋白和细胞周期素D1的表达情况.Western印迹法检测小鼠肠道细胞周期素D1的表达情况.两组间比较行独立样本t检验.结果 小檗碱组小肠及结肠息肉总数较对照组减少66 ％(10.38±1.85比30.50±1.73,t=16.727,P＜0.01).小檗碱组息肉最大径[(1.08±0.65) mm]小于对照组[(1.54±0.62) mm,t=2.114,P=0.041].小檗碱组小鼠肠道息肉中PCNA阳性细胞比例(44.60％±2.88％)较对照组(65.80％±3.27％)减少32％(t=10.875,P＜0.01),β-链蛋白染色异常细胞比例(43.20％±1.63％)较对照组(63.00％±3.08％)减少31％(t=13.956,P＜0.01),细胞周期素D1阳性细胞比例(24.80％±3.11％)较对照组(54.40％±3.78％)减少54％(t=13.510,P＜0.01).小檗碱组肠道细胞周期素D1蛋白表达水平低于对照组.结论 小檗碱可通过干预Wnt通路抑制Apc(Min/+)小鼠肠道息肉的生长,可能成为FAP化学预防的备选药物.     

胆酸通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路在肠腺瘤癌变中的作用

目的探讨胆酸对APCMin/+小鼠肠道瘤癌变的影响及分子机制。方法将18只SPF级APCMin/+小鼠随机分为实验组和对照组各9只。对照组给予常规饮食,实验组在常规饲料中加0.5g胆酸。喂养12 w后断髓处死,观察肠道肿瘤数目和大小;苏木素-伊红(HE)染色评价肿瘤病理类型,Ki-67免疫组化染色检测肿瘤细胞增殖情况;qRT-PCR检测肠道炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA表达水平。培养永生化结肠上皮细胞系(IMCE),Western印迹检测IL-6/信号转导和转录激活因子(STAT)3蛋白及其下游细胞周期蛋白表达水平。结果实验组小鼠肠道腺瘤总数、小肠腺瘤数、结肠息肉数均明显多于对照组(P<0.01),肠道腺瘤直径明显大于对照组(P<0.05),肠道肿瘤组织中Ki-67阳性细胞率明显高于对照组(P<0.05)。HE染色未见小鼠肠道组织中存在明显炎性细胞浸润,但qRT-PCR检测显示,实验组小鼠肠道IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。胆酸可显著上调IMCE磷酸化的STAT3蛋白表达水平和下游细胞周期蛋白表达水平,胆酸刺激组磷酸化STAT3(Tyr816)和细胞周期调节蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P<0.01)。结论胆酸可通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路促进肿瘤细胞增殖,诱发APCMin/+小鼠肠道瘤癌变。     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌肥大的治疗作用及其机制

目的观察Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌肥大的作用并探讨这一过程的分子机制。方法 (1)动物实验:对8~10周龄(18~22g)的雄性C57B/L小鼠施行主动脉缩窄术(TAC)以诱导病理性心肌肥大。实验分4组:1对照组;2Wnt-C59组;3TAC模型组;4TAC+Wnt-C59组。(2)细胞实验:使用0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激新生大鼠心肌细胞(NRVM)诱导病理性心肌细胞肥大。实验分4组:1对照组;2Wnt-C59组;3AngⅡ模型组;4AngⅡ+Wnt-C59组。观察的实验指标:TAC术后4周小鼠的心脏质量/体质量、心功能、心肌细胞横截面面积;NRVM表面积、β-catenin核转位、β-catenin下游肥大相关基因C-myc、Cyclin-D1的mRNA表达量。结果 Wnt-C59明显降低由TAC所致的心脏质量/体质量增加[TAC+Wnt-C59:(6.02±0.48)比TAC:(7.45±1.15)mg/g,P0.05],改善心功能[射血分数:TAC+Wnt-C59:(59.29±4.61)%比TAC:(48.60±2.72)%,P0.05]。并减轻TAC诱导的心肌细胞横截面积增加。Wnt-C59明显减轻AngⅡ诱导的心肌细胞表面积增大,β-catenin入核[AngⅡ+Wnt-C59:(15.90±4.11)%比AngⅡ(25.27±6.69)%,P0.05]以及肥大基因C-myc、Cyclin-D1的高表达。结论 Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能是抑制β-catenin入核进而抑制其下游肥大基因C-myc、Cyclin-D1的转录。     

Wnt-1在化学诱发肝癌过程中的表达及意义

目的:检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt-1在化学诱发小鼠肝癌过程中的表达,揭示Wnt/β-catenin通路与肝癌发生之间的关系.方法:95只C57BL/6J♂小鼠随机分为实验组(n=50)和对照组(n=45).实验组联合二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)/四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)/乙醇(ethanol)诱发小鼠肝癌.实验组和对照组每2周各随机抽取5只小鼠定期处死并取组织标本进行病理学观察,并通过Real-time PCR、Western blot、免疫组织化学动态监测肝组织的Wnt-1 mRNA及蛋白表达情况.结果:(1)化学诱导20 wk后,成功诱发小鼠肝癌;(2)Real-time PCR显示,Wnt-1 mRNA的表达在第4至12周实验组和同期对照组相比差异没有显著性,第14至20周实验组较同期对照组表达升高,且随着诱癌时间延长实验组第14、16、18周Wnt-1 mRNA表达逐渐升高(4.192±0.322 vs 5.630±0.579 vs 8.060±0.795,P0.05),第18周和第20周表达差异没有显著性(8.060±0.795 vs 8.038±0.649,P0.05);(3)Western blot显示对照组Wnt-1蛋白微弱表达;实验组Wnt-1蛋白第4至12周微弱表达,第14至18周随着诱癌时间延长Wnt-1蛋白表达逐渐升高,第18周和第20周蛋白表达差异没有显著性;(4)免疫组织化学显示,Wnt-1在实验组第8周和对照组仅见微弱表达,实验组从16 wk开始较对照组表达增加,至20 wk时表达最强.结论:Wnt-1参与了小鼠肝癌的发生发展,Wnt/β-catenin信号通路在肝癌的发生过程中可能扮演重要角色.     

基于血清胃功能3项及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白探索萎胃颗粒对胃癌前病变患者的作用

[目的]探讨基于Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白联合血清胃功能3项探索萎胃颗粒对胃癌前病变患者作用的影响。[方法]选取2018年1月~2019年6月于我院就诊并治疗的胃癌前病变患者120例为研究对象,按随机数表法将其分为观察组和对照组,每组各60例。对照组予以维酶素颗粒,观察组予以萎胃颗粒治疗,比较2组患者治疗疗效,治疗前后Wnt1、β-catenin及cyclin D1蛋白水平和血清胃功能情况。[结果]观察组患者治疗总有效率为85.00%显著高于对照组46.67%,差异有统计学意义(P<0.001)。2组患者治疗前、对照组患者治疗前后比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组患者PGⅠ及PGR、G-17显著高于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者治疗前、对照组患者治疗前后比较,Wnt1、β-catenin及cyclin D1蛋白各指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组患者显著低于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]萎胃颗粒治疗胃癌癌前病变可显著提高患者治疗疗效,其可能机制为通过调控Wntβ-catenin信号通路改善胃黏膜功能,对迟滞和降低胃癌发生风险有重要作用。     

肝门阻断对大鼠肠道肌间神经丛内NOS阳性神经元的影响

目的:研究肝门阻断后大鼠肠道肌间神经丛内一氧化氮合酶(NOS)神经元表达的变化,以探讨肝门阻断对肠道功能影响的神经机制.方法:SD大鼠分成实验组(根据阻断时间分为肝门阻断20min组、40min组及60min组)和对照组,取各组相同部位的小肠和结肠,制作肠肌间神经丛标本行NADPH-d组化染色,观察和比较各组NOS阳性神经元的分布密度和染色情况.结果:与对照组比较,实验组小肠(28.89±5.49,32.22±7.03,36.89±8.58vs21.78±4.56,P<0.01)和结肠(34.22±8.82,39.39±8.91,44.61±9.94vs25.94±5.59,P<0.01)的肠肌间神经丛内NOS阳性神经元数量增多,胞体大而染色深;实验组之间比较,肝门阻断60min组的NOS阳性神经元数量多于肝门阻断20min组(小肠:36.89±8.58vs28.89±5.49;结肠:44.61±9.94vs34.22±8.82,P<0.05),肝门阻断60min组和40min组的NOS阳性神经元胞体较大,染色较深,但节间束NOS阳性神经纤维稀少.结论:肝门阻断会影响或损伤肠神经系统的NO能神经,这可能是术后肠道运动功能障碍发生的神经机制.     

CAV1在人肺动脉成纤维细胞增殖调控中的作用

目的研究小窝蛋白1(CAV1)在缺氧相关肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖调控中的作用。方法将体外培养的人PAFs分为:对照组(C:21%O_2);10%氧浓度组(10%O_2);5%氧浓度组(5%O_2)及2%氧浓度组(2%O_2)进行细胞增殖实验,选取细胞增殖最明显组为缺氧组(H)进行后续实验。并构建CAV1高表达质粒(pCAV1),然后再将PAFs分为对照组(C:21%O_2),缺氧组(H),空白对照组(NC:缺氧+空质粒转染组)和CAV1高表达组(pCAV1:缺氧+pCAV1转染组),采用Western-blot法检测各组细胞中CAV1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法检测细胞增殖情况。结果缺氧能刺激PAFs增殖,并呈浓度依赖性,于2%氧浓度刺激48小时PAFs增殖达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(1.20+0.02 vs 0.54+0.04,P0.01);缺氧组PAFs中CAV1表达下调(1.23±0.04 vs 0.90±0.02,P0.01),cyclin D1(0.19±0.03 vs 1.15±0.06,P0.01)和c-IAP2(0.63±0.04 vs 0.78±0.09,P0.01)表达上调,细胞增殖增加(MTT:0.78±0.04 vs 1.20±0.02,P0.01;PCNA:0.29±0.03 vs 0.54±0.03,P0.01);CAV1在PAFs中高表达后(0.55±0.03 vs 0.90±0.03,P0.01),cyclin D1(0.88±0.02 vs 0.52±0.02,P0.01)和c-IAP2(0.87±0.02 vs 0.72±0.02,P0.01)表达下调,PAFs增殖减少(MTT:1.20±0.02 vs 1.00±0.06,P0.01;PCNA:0.52±0.03 vs 0.38±0.03,P0.01)。结论缺氧能通过下调CAV-1在PAFs中的表达,促进PAFs的增殖、抑制其凋亡。cyclinD1和cIAP2可能是CAV1调控PAFs增殖和凋亡的下游靶点。     

食物过敏对小鼠肠道屏障功能及CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:观察卵清蛋白肠道致敏BALB/c小鼠时肠道屏障功能变化,研究有无细菌易位现象发生;观察其脾细胞中CD4 CD25 调节性T细胞数量的变化以期进一步探讨食物过敏机制.方法:无受试蛋白喂养的BALB/c小鼠20只,随机分为实验组和对照组.实验组给予以卵清蛋白(OVA),对照组给予等量生理盐水.培养法分析粪便菌群、ELISA法测定肠黏液分泌型免疫球蛋白A (sIgA)含量及血清二胺氧化酶(DAO)含量.对肠系膜淋巴结(MLN)、腹腔灌洗液及肝、肾、肺组织进行培养以探讨有无细菌易位的发生.同时,采用流式细胞术分析其脾细胞悬液中CD4 CD25 调节性T细胞的数量变化结果:与对照组相比,实验组小鼠肠道固有菌群中益生菌乳酸杆菌、双歧杆菌的含量显著降低(P=0.006, P=0.016),条件致病菌大肠杆菌、类杆菌的含量显著升高(P=0.001, P=0.001);肠道黏液中sIgA的含量(A值)显著升高(0.107±0.012 vs 0.086±0.008, P=0.001);血清DAO含量(A值)显著升高(0.357±0.025 vs 0.179±0.035, P=0.001);MLN及外周器官细菌易位率显著升高(47.8% vs 15.6%, P=0.001);脾细胞悬液中CD4 CD25 T细胞数量显著降低(4.350%4±0.618% vs 6.488%±2.313%, P=0.001).结论:OVA肠道致敏小鼠肠道菌群失调,肠通透性增高反映肠屏障功能受损,OVA肠道致敏小鼠存在肠道细菌易位现象.CD4 CD25 调节性T细胞细胞的下调可能在食物过敏的发生中起重要作用.     

高迁移率族蛋白B1/Toll样受体9途径在重症急性胰腺炎肠黏膜屏障损伤中的作用及机制分析

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体(TLR) 9信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制。方法将20只KM小鼠随机分为对照组和SAP组,每组10只。SAP组小鼠采用雨蛙素及脂多糖联合腹腔内注射建模,12 h后取材。HE染色观察小鼠胰腺病理学变化; ELISA检测小鼠血清二氨氧化酶(DAO)和内毒素核心抗体(Endo CAb)水平; TUNEL法检测小鼠小肠黏膜凋亡变化; Western Blot检测各组小鼠小肠HMGB1、TLR9、NF-κB蛋白水平的变化。计量资料2组间比较采用t检验。结果 SAP组小鼠均造模成功。SAP组小鼠血清DAO和EndoCAb水平明显高于对照组,差异有统计学意义(12. 172±1. 356 vs 4. 341±0. 521、32. 480±3. 054 vs 13. 281±2. 105,t值分别为16. 613、14. 725,P值分别为0. 001、0. 025); SAP组小鼠小肠黏膜细胞凋亡较对照组明显增加,差异有统计学意义(6. 25±2. 10 vs 19. 54±3. 63,t=11. 582,P 0. 05); SAP组小鼠小肠HMGB1、TLR9、NF-κB蛋白表达水平较对照组均明显升高,差异均有统计学意义(0. 590±0. 004 vs 0. 059±0. 035、0. 530±0. 043vs 0. 070±0. 023、0. 670±0. 059 vs 0. 170±0. 032,t值分别为47. 336、30. 565、23. 655,P值分别为0. 001、0. 034、0. 014)。结论 SAP小鼠小肠HMGB1表达水平升高,其可能通过激活下游TLR9信号通路,在SAP肠黏膜屏障损伤中发挥重要作用。     

β连环蛋白在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制研究

目的探讨肝硬化大鼠心肌中的β连环蛋白(β-catenin)表达,以阐明β-catenin在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制。方法建立肝硬化大鼠模型,通过模型组和对照组比较,免疫组化法检测各组心肌组织中β-catenin表达水平; Western blot检测大鼠心肌中的β-catenin和Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1)表达差异。结果模型组体重增长较慢,且小于对照组。免疫组化及Western blot结果显示对照组β-catenin蛋白的表达水平低,肝硬化模型组β-catenin蛋白的表达水平高,二者比较差异有统计学意义(P 0. 01)。结论 Wnt/β-catenin(Wnt/β-连环蛋白)信号通路参与肝硬化所致心肌肥厚的病理过程。     

DNA甲基转移酶及分泌型卷曲相关蛋白1在糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织中的表达研究

目的 探讨DKD大鼠肾组织中DNA甲基转移酶(Dnmts)及分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)的表达变化及意义。方法 16只雄性SD大鼠随机分为DKD组与正常对照(NC)组,每组8只。造模成功10周后处死,检测相关生化指标并计算肾脏指数(KI);HE、Masson染色观察肾组织病理学改变;Western blot检测Dnmts、Sfrp1、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、col-Ⅲ、col-Ⅳ蛋白表达变化;q-PCR检测Sfrp1mRNA表达水平;分析Sfrp1与Dnmts相关性。结果 与NC组比较,DKD组血糖[(8.51±1.19)vs(21.00±2.24)mmol/L]、24hUAlb[(12.22±4.91)vs(65.31±18.03)mg]、KI[(6.80±0.53)vs(12.15±1.57)mg/g]均增高(P0.01);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b、β-catenin、p-GSK3β蛋白表达水平上调(P0.05);Dnmt3l未见明显变化;Sfrp1 mRNA和蛋白表达水平均下调(P0.05);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b与Sfrp1的蛋白表达呈负相关(r=-0.811、-0.692、-0.855、-0.858;P0.01);与Dnmt3l无相关性(r=-0.262,P=0.411)。结论 DKD大鼠肾组织Dnmts蛋白表达增加,可能引起sfrp1表达下调,导致对Wnt信号通路的抑制作用减弱,Wnt信号通路异常活化并促进DKD时肾纤维化的发生发展。     

E3泛素连接酶32调控血管平滑肌细胞增殖及迁移的作用机制

目的探讨E3泛素连接酶32(Trim32)调控血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的作用机制。方法选择C57雄性野生型小鼠40只,其中10只小鼠从胸主动脉获得VSMC后,分为空白组、对照组、转染组、模型组、对照1组、转染1组和激动剂组(β-catenin激动剂同时处理),后4组用重组人血小板衍生生长因子30 mg/L干预24 h,再按分组分别转染阴性干扰siControl和siTrim32,用PCR和Western blot检测各组Trim32、β-catenin mRNA和蛋白表达。观察各组细胞增殖和迁移情况。另30只小鼠左颈动脉损伤处理,取右、左颈动脉分为假手术组、假手术对照组、假手术转染组、损伤组、损伤对照组和损伤转染组,每组10只,按分组处理后,检测Trim32表达和血管内膜增生情况。结果与空白组比较,模型组Trim32 mRNA和蛋白表达升高(1.89±0.30 vs 0.99±0.06,1.82±0.30 vs 1.02±0.05,P0.01)。与对照组比较,转染组细胞增殖、阳性细胞、β-catenin蛋白表达降低,对照1组各项明显升高(P0.05,P0.01);与转染1组比较,对照1组和激动剂组阳性细胞升高(P0.01)。与假手术组比较,损伤组Trim32 mRNA和蛋白明显升高(P0.01)。与损伤对照组比较,假手术对照组和损伤转染组内膜/中膜面积比值降低(P0.01),损伤转染组内膜/中膜面积比值较假手术转染组升高(2.11±0.64 vs 0.37±0.04,P0.05)。结论 Trim32可能通过β-catenin途径促进VSMC增殖及迁移。     

miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡

目的]探讨miR-301影响冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制。 [方法]SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-301激动剂组(agomir miR-301组)、miR-301激动剂对照组(agomir NC组)、Wnt/β-catenin通路抑制剂组(Dkk1组)及agomir miR-301＋Dkk1组,每组10只。除对照组外,其余各组均高脂喂养建立大鼠冠心病模型,连续给药1周后,超声检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)等心功能指标。HE染色观察大鼠心肌组织形态,TUNEL检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-301表达,Western blot检测大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Wnt3a及β-catenin蛋白表达。 [结果]与对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS降低49.2%、49.1%,心肌组织miR-301表达水平降低69.0%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低60.7%、39.7%(P＜0.05),LVEDD、LVESD升高32.2%、99.6%,心肌细胞凋亡率升高1362.6%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高100.0%、114.6%(P＜0.05);与模型组相比,agomir miR-301组大鼠LVEF、FS升高71.4%、71.8%,心肌组织miR-301表达水平升高1935.5%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高102.4%、45.1%(P＜0.05),LVEDD、LVESD降低15.6%、39.2%,心肌细胞凋亡率降低65.0%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低70.2%、78.4%(P＜0.05),而Dkk1可逆转这种现象。 [结论]miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡。     

Toll样受体4激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖

目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。     

干细胞因子对糖尿病小鼠小肠平滑肌细胞慢波的影响

目的:探讨外源性干细胞因子(stem cell factor,SCF)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠小肠动力障碍时小肠平滑肌细胞慢波的影响.方法:♂Balb/c小鼠一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ,150 mg/kg)造模,将小鼠分为正常组、DM组、DM+外源性SCF组(DM+SCF组);DM+SCF组ip SCF 0.20 μg/(kg·d),正常组和DM组每天ip等量的磷酸盐缓冲液(pH7.40).所有小鼠干预6 wk结束后,给予印度墨水灌胃测定小肠传输速率,用微电极细胞内记录仪记录各组小鼠十二指肠平滑肌细胞内慢波的变化.结果:DM组小肠推进率比正常组的明显降低(44.05%±5.48% vs 82.75%±6.56%,P<0.01);DM+SCF组比DM组的小肠推进率显著增加(75.89%±3.61% vs 44.05%±5.48%,P<0.01).但比正常组的降低(75.89%±3.619% vs 82.75%±6.56%,P<0.05);DM组与正常小鼠相比,十二指肠平滑肌细胞内慢波频率明显减慢(13.33±4.27 vs 30.67±3.33,P<0.01),波幅明显减小(15.17±3.71 vs 35.17±3.71,P<0.01).且波形杂乱不规则.DM+SCF组小鼠十二指肠平滑肌细胞内慢波频率和波幅比DM组增加(26.50±1.87 vs 13.33±4.27;27.50±2.26 vs 15.17±3.71,均P<0.01),但比正常组减慢和降低(26.50±1.87 vs 30.67±3.33,P<0.05;27.50±2.26 vs 35.17±3.71,P<0.01).结论:外源性SCF对DM小鼠的小肠动力障碍有一定的改善作用.     

二甲双胍、塞来昔布对小鼠结直肠息肉预防作用的比较

[目的]比较二甲双胍、塞来昔布对氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的小鼠结直肠息肉的预防作用。[方法]66只6周龄BALB/c雌性小鼠适应1周后予腹腔注射AOM(10mg/kg),每周1次,连续6周;后随机分为对照组、二甲双胍组、塞来昔布组,对照组、二甲双胍组、塞来昔布组分别予0.9%氯化钠溶液(0.5ml/只)、二甲双胍250mg·kg~(-1)·d~(-1)、塞来昔布20mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃处理。30周后取出小鼠结直肠记录小鼠结直肠息肉发生的数目、大小,通过PCNA免疫组化染色及TUNEL染色检测息肉组织的增殖及凋亡的情况;检测小鼠胰岛素的抵抗状态以评估二甲双胍的间接作用。[结果]二甲双胍组小鼠息肉数量为(1.85±0.80)个,塞来昔布组小鼠息肉数量为(3.00±0.93)个,均较对照组的(4.13±1.06)个少(P0.05);二甲双胍组息肉大小为(1.74±0.48)mm,塞来昔布组为(2.07±0.88)mm,也均较对照组的(2.54±0.82)mm小(P0.05);与塞来昔布组相比,二甲双胍组可更加显著地减少AOM诱导的息肉的数量(P0.05),但塞来昔布组与二甲双胍组间息肉大小比较差异无统计学意义(P0.05);对照组增殖指数(PI)为67.50±5.04,高于二甲双胍组和塞来昔布组的37.90±3.48和46.10±6.19(P0.05),且二甲双胍组显著低于塞来昔布组(P0.05);对照组凋亡指数(AI)为3.60±1.17,低于二甲双胍组、塞来昔布组的6.20±1.40、5.80±1.03(P0.05);另外,经二甲双胍、塞来昔布治疗后的小鼠胰岛素抵抗指数与对照组相比未出现明显的改变(P0.05)。[结论]二甲双胍、塞来昔布均对AOM诱导的小鼠结直肠息肉具有预防作用,且二甲双胍的预防作用更显著,预防效果更稳定。     

下瘀血汤对酒精性肝病小鼠肝脏炎症和脂肪变性的改善作用

目的观察下瘀血汤对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)小鼠肝脏炎症和脂肪变性的改善作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、对照美他多辛组、对照下瘀血汤组、酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组,每组各8只。对照组、对照美他多辛组和对照下瘀血汤组造模过程中全程给予液体对照饲料。酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组采用4周慢性乙醇喂养加急性乙醇灌胃法造模,造模第3周第1 d起,对照下瘀血汤组和酒精下瘀血汤组小鼠以0.4678 g/kg下瘀血汤灌胃,对照美他多辛组和酒精美他多辛组小鼠以2.857 mg/kg美他多辛灌胃。其余组小鼠以等体积蒸馏水灌胃。第32 d酒精组、酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组小鼠以31.5%乙醇灌胃,对照组、对照美他多辛组、对照下瘀血汤组小鼠以45%糊精灌胃。9 h后处死小鼠,留取静脉血和肝脏。计算各组小鼠肝体比值,检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、血清甘油三酯(triglyceride,TG)及肝脏TG水平。采用HE染色和油红染色观察肝脏病理形态学变化。采用免疫组织化学法检测中性粒细胞标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肝组织白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP1)mRNA的相对表达量。采用Western blot和RT-PCR检测脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1α(carnitine palmitoyltransferase 1α,CPT-1α)和过氧化物酶体增殖激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)的表达。结果与对照组相比,酒精组小鼠肝体比值[(4.78±0.48)%vs(3.71±0.36)%]、ALT [(44.71±25.37)U/L vs(20.41±7.11)U/L]、血清TG [(4.16±1.27)mmol/L vs(1.44±0.23)mmol/L]和肝脏TG [(27.15±6.43)mmol/g vs(10.74±9.83)mmol/g]均显著升高(P均0.05)。与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组小鼠ALT[11.79(10.17,24.48)U/Lvs(16.76±1.64)U/Lvs(44.71±25.37)U/L]、血清TG[(1.89±1.54)mmol/L vs 2.40(2.39,2.67)mmol/L vs(4.16±1.27)mmol/L]及肝组织TG [(14.18±5.88)mmol/g vs 19.77(5.92,20.90)mmol/g vs(27.15±6.43)mmol/g]水平均显著降低(P均0.05),肝体比值[(4.49±0.43)%vs(4.82±0.14)%vs(4.78±0.48)%]差异无统计学意义(t值分别为1.099、-0.165,P值分别为0.283、0.871)。HE和油红染色提示酒精组小鼠肝组织脂肪变性明显。免疫组织化学结果表明酒精组小鼠肝脏MPO阳染较对照组显著增加。与对照组相比,酒精组小鼠IL-6(1.95±0.74 vs 1.00±0.47)、IL-1β(2.06±0.64 vs 1.00±0.26)和MCP1(2.98±1.13 vs 0.99±0.30)及FAS [2.40±0.53 vs 0.916(0.876,1.221)] mRNA相对表达量均显著升高(z=-2.242,P=0.025;z=-3.695,P 0.001;z=-2.867,P=0.004;z=-3.838,P 0.001),CPT-1α(0.39±0.75 vs 1.00±0.22)和PPARα(0.27±0.08 vs 1.00±0.26)m RNA相对表达量显著降低(z=-4.392,P 0.001;z=-4.392,P 0.001);与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组IL-6(1.16±0.42 vs 0.93±0.42 vs 1.95±0.74)、IL-1β(0.75±0.19 vs 0.59±0.07 vs 2.06±0.64)、MCP1(1.27±0.25 vs 1.23±0.50 vs 2.98±1.13)及FAS(1.41±1.05 vs 1.43±0.30 vs 2.40±0.53)mRNA相对表达量均显著降低,CPT-1α[0.81(0.79,0.81)vs 0.72±0.14 vs 0.39±0.75]和PPARα(0.63±0.30 vs 0.69±0.41 vs 0.27±0.08)mRNA相对表达量显著升高(P均0.05)。Western blot表明,与对照组相比,酒精组小鼠FAS蛋白相对表达量(0.56±0.07 vs 0.20±0.02)上调(z=-2.309,P=0.021),CPT-1α蛋白相对表达量(0.24±0.02 vs 1.03±0.06)和PPARα蛋白相对表达量(0.17±0.01 vs 1.02±0.08)下调(P均0.05);与酒精组相比,酒精美他多辛组和酒精下瘀血汤组FAS蛋白相对表达量(0.31±0.02 vs 0.29±0.04 vs 0.56±0.07)均显著降低,CPT-1α蛋白相对表达量(0.43±0.01 vs 0.65±0.10 vs 0.24±0.02)和PPARα(0.55±0.07 vs 0.39±0.04 vs 0.17±0.01)显著升高(P均0.05)。结论下瘀血汤可通过抑制中性粒细胞浸润及炎症反应减轻酒精引起的脂肪生成并促进脂肪酸氧化,从而发挥保护肝脏的作用。     

心理应激模型小鼠小肠推进运动和肠源性细菌变化及意义

将48只小鼠适应性饲养7 d,随机分为对照组和应激组各24只,应激组用猫恐吓小鼠的方法 制备心理应激模型.15 d后用碳素墨水肠道染色法观察两组小肠运动,取近端小肠组织进行细菌培养.结果 应激组和对照组小肠推进百分率分别为43.68%±11.96%和61.81%±12.55% ,P＜0.01;应激组近端小肠大肠杆菌数量明显多于对照组(P＜0.01),乳酸杆菌与大肠杆菌比值明显低于对照组(P＜0.01).认为心理应激后出现的胃肠道症状可能与小肠运动功能紊乱和小肠菌群失调有关.     

去甲斑蝥素对梗阻性肾病Wnt/β-catenin表达的影响

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对梗阻性肾病(UUO)大鼠模型及人近端肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化模型Wnt/β-catenin表达的影响。方法:(1)动物实验:第一批SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、UUO 3d组、UUO 7d组及UUO 14d组,每组各4只。将第二批SD大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(UUO 14d)、NCTD 0.05 mg/kg干预组,NCTD 0.1 mg/kg干预组,每组4只。(2)细胞实验:体外培养HK-2细胞,分对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/ml刺激组、TGF-β1 5 ng/ml刺激+NCTD(2.5 mg/L、5 mg/L)干预组。免疫组化、Western Blot检测Wnt4、β-catenin蛋白表达情况,Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达情况。结果 :随着UUO大鼠梗阻时间延长,β-catenin蛋白表达逐渐升高,UUO14 d表达最强。与UUO组相比,NCTD组Wnt4、β-catenin蛋白及mRNA表达明显下降(P0.05);与对照组相比,TGF-β1刺激组Wnt4、β-catenin蛋白表达上调;与TGF-β1刺激组相比,NCTD不同浓度干预组Wnt4、β-catenin蛋白表达下调,且呈浓度依赖(P0.05)。结论:NCTD干预可以下调梗阻性肾病大鼠肾组织及TGF-β1刺激的HK-2细胞中Wnt4和β-catenin的表达。     

Wnt/β-catenin通路在大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中的作用

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用。 方法 选BMMSCs为种子细胞培养到第3代,分为血管紧张素(Ang) Ⅱ+ 5-氮杂胞苷(5-aza)组及对照组,共诱导24 h,再用完全培养液共培养4周。用倒置显微镜、MTT法检测、流式细胞、免疫荧光染色、透射电镜依次检测细胞的形态变化、生长能力、诱导分化率、α肌动蛋白（α-actin）的表达以及超微结构,用Western blot法检测诱导后Wnt及其下游分子β-catenin的表达水平。 结果 BMMSCs原代培养时呈现多种形态,经过传代体积增大,诱导后呈长梭形且均匀一致生长。MTT结果表明AngⅡ + 5-aza组细胞的生长速度比对照组快。流式细胞检测示:AngⅡ + 5-aza组的心肌细胞诱导率是（31.2 ± 1.7）%,而对照组是（1.1± 0.2）%。免疫荧光染色结果示AngⅡ + 5-aza组诱导后的BMMSCs阳性表达α-actin。透射电镜观察可见肌丝和缝隙连接。Western blot提示AngⅡ + 5-aza组的Wnt以及β-catenin的表达明显高于对照组（P < 0.05）。 结论 AngⅡ+ 5-aza在诱导BMMSCs向心肌细胞的分化中有促进作用,其可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。