反义内皮素转换酶核酸对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞释放白细胞介素5的抑制作用

目的　探讨转导反义内皮素转换酶 (ECE)核酸的气道上皮细胞对尘螨过敏性患者外周血单个核细胞释放Th1/Th2相关细胞因子的影响。方法　尘螨过敏患者 2 1例 ,分离其外周血单个核细胞 (PBMC) ,根据实验要求分为 :未刺激组 (A组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs组 (A1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs组 (A2 组 )及螨刺激组 (B组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B2 组 ) ,共培养 72h ,螨刺激组同时加入尘螨提取液 2 0 μg/ml。培养上清用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测白细胞介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)。结果2 1例患者中有 12例患者经尘螨刺激后IL 5释放明显增加。将 12例患者进行统计学分析发现 ,未经尘螨刺激时 ,A1组IL 5和IFN γ水平分别为 [(6 0± 1 3)× 10 -9g/L]和 [(6 3± 2 6 )× 10 -9g/L],A2 组为 [(7 5± 1 1)× 10 -9g/L]、[(70± 5 2 )× 10 -9g/L],两组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;尘螨刺激后 ,B1组的IL 5水平和IFN γ分别为 [(8 2± 1 6 )× 10 -9g/L]、[(10 0± 4 1)× 10 -9g/L],B2 组分别为[(12 0± 1 8)× 10 -9g/L]、[(15 3± 71)× 10 -9g/L],两组IL 5比较差异有显著性 (P =0 0 4 7) ,而IFN γ水平比较差异无显著性 (P >     

紫外线照射充氧自血回输对脑梗死患者Th1/Th2细胞因子的影响

目的　探讨紫外线照射充氧自血回输(UBIO)治疗对脑梗死患者Th1/ Th2细胞因子的影响。方法　采用EL ISA法检测脑梗死患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液及血清中IFN-γ、IL - 4水平。结果　在PBMC培养上清液中,UBIO组治疗后IFN- γ水平为(177.2±11.9) ng/ L,与UBIO组治疗前的(191.1±19.9) ng/L、对照组(190 .8±2 5 .3) ng/ L和正常组的(198.5±16 .7) ng/ L相比较有显著性差异(P<0 .0 5 )。IL - 4水平UBIo组治疗前为(5 7.1±19.6 ) ng/ L、治疗后(5 4 .9±18.8) ng/ L 及对照组(5 9.4±2 1.4 ) ng/ L 均低于正常组(82 .8±30 .7) ng/ L (P<0 .0 5 )。血清中IL - 4水平UBIO组治疗后为(4.86±2 .31) ng/ L ,高于正常组(3.32±2 .0 9) ng/ L (P<0 .0 5 )。其余各组间无显著性差异(P>0 .0 5 )。结论　脑梗死患者Th1 / Th2 平衡倾向于Th1 ,UBIo治疗可下调Th1 细胞活性,使Th1 / Th2 趋于平衡。     

白细胞介素7和15对肺结核患者Th1/Th2平衡的调节作用

目的探讨白细胞介素7(IL7)、IL15对肺结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌Th1型细胞因子γ干扰素(IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和Th2型细胞因子IL4、IL10的影响。方法选择2003年1至9月入院的60例肺结核患者和25名健康对照者,用葡聚糖泛影葡胺密度梯度离心法分离PBMC。按加入刺激物的不同,将每份标本分为6组:RPMI1640组、纯化蛋白衍生物(PPD组)、PPD+IL7组、PPD+IL7抗体组、PPD+IL15组、PPD+IL15抗体组。加入相应刺激物后培养72h,收集上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中IFNγ、TNFα、IL4、IL10的水平。结果与PPD组相比,加入IL7的患者组PBMC分泌IFNγ和TNFα显著增高,分别为(107±42)～(157±74)ng/L、(460±128)～(887±242)ng/L;显著抑制IL4和IL10的合成,分别为(58±15)～(31±9)ng/L、(153±40)～(112±32)ng/L。健康对照组PBMC分泌IFNγ和TNFα显著增高,分别为(211±57)～(292±92)ng/L、(1203±390)～(1722±503)ng/L;显著抑制IL4和IL10的合成,分别为(43±13)～(36±11)ng/L、(135±37)～(96±36)ng/L。加入IL15患者组PBMC分泌IFNγ和TNFα显著增高,分别为(107±42)～(231±62)ng/L、(460±128)～(843±208)ng/L;显著抑制IL4和IL10的合成,分别为(58±15)～(37±9)ng/L、(153±40)～(116±41)ng/L。健康对照组PBMC分泌IFNγ和TNFα显著增高,分别为(211±57)～(343±108)ng/L、(1203±390)～(1468±235)ng/L;显著抑制IL4和IL10的合成,分别为(43±13)～(36±8)ng/L、(135±37)～(90±35)ng/L。加入IL7抗体或IL15抗体均可抑制IFNγ和TNFα的分泌,促进IL4和IL10的合成。肺结核患者各组IFNγ、TNFα水平均低于健康对照各组,而IL4、IL10水平比较差异无统计学意义。结论IL7和IL15可作为免疫调节剂,诱导IFNγ及TNFα分泌,抑制IL4及IL10合成,从而调节Th1/Th2平衡,发挥对结核分枝杆菌感染患者的免疫保护作用。     

妊娠对乙型肝炎肝郁脾虚型患者血清细胞因子浓度的影响及临床意义

目的 :探讨妊娠对慢性乙型肝炎 (乙肝 )肝郁脾虚型患者血清白细胞介素 - 10、12 (IL - 10、IL - 12 )、γ-干扰素 (IFN-γ)浓度的影响及临床意义。方法 :用酶联免疫法 (EL ISA)检测孕期和非孕期患者 IL - 10、IL - 12及 IFN -γ血清浓度 ,并作同期肝功能指标检查。患者分为早孕期 (2 6例 )、晚孕期 (32例 )、非孕期 (31例 ) 3组。 2 0例非孕期健康者为对照组。结果 :早孕期组 IL - 10水平 [(2 6 .0± 9.8) ng/ L ]较非孕期组 [(18.0± 1.3) ng/ L ]升高 (P <0 .0 5 ) ,而与对照组 [(2 9.4± 5 .1) ng/ L ]相近 (P >0 .0 5 )。IL - 12、IFN -γ分别为 (5 4 .1± 2 6 .0 ) ng/ L和 (45 .5± 17.3) ng/ L ,较对照组 [(8.2± 2 .1) ng/ L、(2 4 .5± 6 .1) ng/ L ]和非孕期组 [(8.0± 2 .7) ng/ L、(16 .7± 3.7) ng/ L ]均明显升高 (均P <0 .0 1)。晚孕期组与其他各组比较 ,IL - 10 [(9.4± 1.9) ng/ L ]明显下降 (P <0 .0 1) ,但 IL - 12 [(16 6 8.0± 318.2 )ng/ L ]、IFN -γ[(46 1.0± 10 3.3) ng/ L ]显著升高。结论 :妊娠可使慢性乙肝肝郁脾虚型患者血清 IL - 12、IFN-γ浓度升高 ,在晚孕期表现更为明显。     

白细胞介素12重组腺病毒气道内应用对哮喘豚鼠治疗作用的研究

目的　探讨激发前气道内应用白细胞介素 12 (IL 12 )重组腺病毒对过敏性气道高反应的调节作用。方法　以C5 7BL/ 6小鼠经鸡卵蛋白 (OVA)免疫建立哮喘模型 ,实验分 6组 ,每组 6只。激发前气管内单次使用IL 12重组腺病毒 (10 8pfu/mouse) ,观察抗原激发后反应的变化。结果　 (1)小鼠气道内应用IL 12重组腺病毒在肺内可有效表达 ,48h血浆及肺泡灌洗液IL 12分别为 (5 40± 6 0 )U/ml和 (470 0± 80 0 )U/ml,对照病毒和PBS组未检出 ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。 (2 )在抗原激发阶段使用IL 12重组腺病毒 ,可明显抑制肺内IL 4[(3 5± 2 0 )ng/ml∶85 0± 2 5 0 )ng/ml]和IL 5[(6 5± 4 5 )ng/ml∶(5 4 0± 14 0 )ng/ml];γ干扰素 (IFN γ)的产生增加 [(6 90 0± 32 0 )ng/ml∶(12 5±3 2 )ng/ml];并明显抑制气道高反应性 [(36 0± 30 )cmH2 O∶(810± 5 0 )cmH2 O];抑制外周血 [(0 7±0 1) %∶(9 2± 0 5 ) % ]及肺泡灌洗液 [(3 5± 0 7)∶(2 1 6± 4 7)× 10 4 /ml]中的嗜酸细胞的水平 ;与对照组比较 (t分别 =7 97、7 92、5 1 6、18 9、9 33、47 1,P均 <0 0 1) ;但与总IgE[(6 5± 9) μg/ml∶(6 7± 10 )μg/ml]及抗原特异性IgE[(32± 8)∶(33± 8)U/ml]比较无明显影响 (P均 >0 0 5 )。     

类风湿关节炎患者外周血疱疹病毒DNA的检测及其Th亚群激活状况研究

目的　研究类风湿关节炎 (RA)患者疱疹病毒感染情况以及Th亚群的激活状况。方法　通用引物PCR扩增 32份RA患者和 36份健康对照者全血和血清标本EB病毒 (EBV)、巨细胞病毒(CMV)、疱疹病毒 (HSV) 1、HSV 2DNA ,并用限制性内切核酸酶SmaⅠ、BamHⅠ进行酶切鉴定 ;酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测 36例RA患者和 2 5名健康对照血清干扰素 (IFN) γ、白细胞介素 14(IL 4)水平 ,并与健康对照组进行比较。结果　①RA患者全血与血清标本疱疹病毒DNA检出率分别为6 2 %和 3 1% ,健康对照组分别为 0和 2 8%。②RA患者血清IFN γ水平 (2 1± 33)pg/ml及IFN γ/IL 4比值 2 5± 2 0显著高于健康对照 (10 1± 2 6 ) pg/ml和 17± 8,P均 <0 0 5。IL 4在两组间的差异无显著性。③IFN γ水平及IFN γ/IL 4比值与RA病情严重程度显著相关。结论　①HSV、EBV、CMV等疱疹病毒DNA检出率与RA发病无相关性。②RA患者体内存在Th1(主要分泌IFN γ)与Th2 (主要分泌IL 4)激活比例失衡的现象。主要分泌致炎性细胞因子的Th1细胞活性增高而主要分泌抗炎性细胞因子的Th2细胞活性相对不足 ,这可能与RA患者慢性持续性关节炎症有关。     

白细胞介素-18在类风湿关节炎外周血单个核细胞中的表达

目的　探讨类风湿关节炎 (RA)外周血白细胞介素 18(IL 18)的表达及其与Th1/Th2平衡和疾病活动的关系。方法　以 β actin为内参照 ,用半定量反转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定 16例RA患者及 15名正常对照外周血单个核细胞 (PBMC)中IL 18、IL 4、IFN γmRNA水平 ,观察IL 18与IL 4、IFN γ及疾病活动指标红细胞沉降率 (ESR)、C反应蛋白 (CRP)的相关性。结果　①RA患者PBMC中IL 18mRNA表达与正常组相比增高非常显著 (1 82± 0 39比 0 45± 0 30 ,P <0 0 0 1)。②RA组IFN γ、IL 4均显著高于对照组 ,但IL 4/IFN γ显著低于对照组。③相关分析显示 :RA组IL 18mRNA与IFN γ、ESR显著正相关 (16例 ,r分别为 0 836 ,0 75 3,P均 <0 0 5 )。结论　RA患者外周血IL 18mRNA表达水平显著高于正常对照组 ,且与RA患者外周血IFN γ的产生及疾病活动性相关。     

结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗转染人气道上皮细胞对哮喘患者Th1/Th2平衡的调节作用

目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE ,并收集转化细胞培养上清液 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85BmRNA水平的表达 ,螨过敏哮喘组 (18例 )和正常组 (13例 )PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其培养上清液中白介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　RT PCR法扩增转染的 16HBE细胞中有 992bp长度的预期片断。无刺激状态下 ,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL 5、IFN γ无差异 ,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL 5 ,刺激和未刺激处理分别为 (17 1± 1 9)pg/ml和 (11 9± 0 9)pg/ml(P =0 0 2 ) ;螨 +Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较 ,前者IFN γ水平显著高于后者 ,分别为 (111 5± 15 9)pg/ml和 (5 8 8± 7 8)pg/ml(P =0 0 4 ) ,IFN γ/IL 5的比值分别为 7 2± 4 8和 4 9± 2 5 (P =0 0 8)。正常人不同刺激方法间比较 ,所有指标差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　螨过敏的变应性     

尘螨主要变应原DNA疫苗对其提取液诱导小鼠肺部变应性炎症的免疫保护作用

目的　探讨尘螨主要变应原DNA疫苗对尘螨提取液诱导的小鼠肺部变应性炎症的免疫治疗作用。方法　分别构建表达Derp1和Derp 2的真核表达质粒pCMV Derp 1和pDerp 2 IRES Derp1。 30只BALB/c小鼠随机分为正常组 (6只 )、对照组 (12只 )、单质粒组 (6只 )和混合组 (6只 )。后三组分别用空白质粒、pDerp 2 IRES Derp 1或混合的pDerp 2 IRES Derp 1和pCMV Derp 1免疫 ,4周后用尘螨提取液致敏、激发 ,观察肺部炎症、计分、肺泡灌洗液 (BALF)细胞总数和分类计数 ;酶联免疫吸附法 (ELISA)检测BALF中白细胞介素 4 (IL 4 )和γ干扰素 (IFN γ)水平。结果　细胞总数和嗜酸细胞(EOS)计数 :混合组 [(6± 4 )× 10 5/ml、0 0 5± 0 0 4 ]和对照组 [(2 1± 13)× 10 5/L、1 80± 1 39]比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;IL 4水平 :混合组 [(16 8± 2 33)g/L]与对照组 [(5 38± 2 5 6 )g/L]比较差异有显著性 (P<0 0 5 ) ,各组间IFN γ比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　尘螨主要变应原的DNA疫苗可有效抑制尘螨提取液诱导的肺部变应性炎症 ,能表达两个主要变应原的DNA疫苗其抑制变应性炎症效果优于只表达一种变应原的疫苗。     

细辛脂素体外免疫抑制作用的实验研究

目的　探讨细辛体外免疫抑制作用的有效成分和作用机制并与环孢素 (CsA)进行比较。方法　提取中药细辛中的细辛脂素 ,分离成年Wistar大鼠的心肌细胞 (2× 10 6个 /ml)和SD大鼠的脾细胞 (1× 10 7个 /ml ) ,前者做刺激细胞 ,后者做反应细胞 ,各 0 1ml于 96孔板进行混合细胞培养 ,加入 0 1ml含细辛脂素大鼠血清 ,培养 10 8h后MTT法测定脾细胞增殖抑制率 ;培养液上清中IL 2、IFN γ及IL 4水平 ;并用光镜、电镜观察心肌细胞。结果　含细辛脂素的动物血清可在体外抑制脾细胞增殖反应 (抑制率达 6 0 37% ) ,心肌细胞损伤减轻 ,使培养液上清中IL 2和IFN γ浓度[(6 9 11± 17 4 7)pg/ml;(183 11± 95 2 4 ) pg/ml]与阳性对照组相比降低 [(16 0 4 4± 19 79) pg/ml;(5 2 1 89± 133 18) pg/ml],IL 4浓度 [(5 3 14± 11 80 ) pg/ml]与阳性对照组相比 [(14 4 4± 4 2 1)pg/ml]升高。与CsA组相比各指标相似 [IL 2 :(5 3 11± 18 35 )pg/ml;IFN γ :(16 6 2 2± 6 1 5 6 ) pg/ml;IL 4 :(44 2 0± 11 5 6 ) pg/ml],P >0 0 5。 结论　中药细辛提取物细辛脂素与CsA有相似的免疫抑制作用 ,并能够产生保护受体器官作用 ;细辛提取物体外抗排斥反应时IL 2和IFN γ降低的同时使IL 4升高可能与提高移植耐受有关。