Effects of hypoxia on migration and invasion of esophageal carcinoma Eca109 cells

目的 探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用CoCl2化学低氧法模拟肿瘤低氧微环境,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、E-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA及蛋白的表达.Western印迹法检测雷帕霉素联合低氧处理Eca109细胞后,HIF-1α、E-钙黏蛋白及MMP-2的变化.细胞划痕试验和Transwell实验检测雷帕霉素联合低氧对Eca109细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 Eca109细胞在低氧状态下,HIF-1α mRNA无明显变化,仅蛋白表达增多;E-钙黏蛋白的mRNA表达明显降低(P＜0.05),蛋白表达减少;MMP-2 mRNA表达明显升高(P＜0.05),蛋白表达增多.雷帕霉素在低氧状态下可显著抑制HIF-1α及MMP-2表达,促进E-钙黏蛋白高表达.经雷帕霉素处理后,Eca109细胞在低氧状态下,迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少(P＜0.05).结论 低氧使Eca109细胞中HIF-1α蛋白表达增多,后者可能通过下调E-钙黏蛋白、上调MMP-2表达促进食管癌在低氧状态下的迁移及侵袭.     

HIF-1α对食管癌Eca109细胞体内外侵袭转移的影响及其分子机制

目的:采用RNA干扰技术(RNAi)观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对食管癌Eca109细胞及其裸鼠移植瘤侵袭转移的影响及其作用机制。方法:CoCl2模拟肿瘤低氧微环境,分别用RT-PCR和免疫细胞化学法检测体外低氧条件下Eca109细胞中HIF-1α、E-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA及蛋白的表达。RT-PCR检测RNAi沉默HIF-1α对E-钙黏蛋白及MMP-2 mRNA表达的影响。通过细胞划痕试验和Transwell试验检测RNAi对Eca109细胞侵袭和转移能力的影响。建立Eca109细胞裸鼠移植瘤模型,观察HIF-1α对肿瘤生长及淋巴结转移的影响;采用Western blot检测各组移植瘤中HIF-1α、E-钙黏蛋白及MMP-2的表达,分析HIF-1α在离体和在体对肿瘤生长、侵袭及转移的影响。结果:低氧诱导Eca109细胞的HIF-1α蛋白表达升高,E-钙黏蛋白的mRNA及蛋白表达降低和MMP-2 mRNA及蛋白表达升高,但对HIF-1αmRNA无明显影响。用RNAi能有效沉默HIF-1α,并可逆转低氧导致的E-钙黏蛋白及MMP-2的降低及升高,使Eca109细胞迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少(P<0.05);在体内使移植瘤生长减缓,淋巴结转移率降低(P<0.05)。结论:HIF-1α在体内外通过影响E-钙黏蛋白和MMP-2表达,来影响食管癌Eca109细胞的生长、侵袭和转移。     

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。     

MDA-MB-231乳腺癌细胞两种低氧模型的建立与比较分析

目的:由于实体瘤内的肿瘤细胞常处于低氧环境,本实验拟探究两种常用低氧模型对乳腺癌细胞影响的差异。方法:以不同浓度(0~300μmol/L)CoCl2处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞不同时间(24 h、48 h和72 h)建立化学低氧模型,以不同程度低氧(1%、2%和5%O2)处理MDA-MB-231细胞不同时间(4 h、16 h和24 h)建立物理低氧模型。采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力。结果:综合不同时间和浓度的HIF-1α蛋白表达结果,最终以100μmol/L CoCl2处理24 h建立化学低氧模型,以2%O 2处理24 h建立物理低氧模型;物理低氧细胞的HIF-1α蛋白表达明显高于化学低氧,且物理低氧细胞处于复氧环境后HIF-1α蛋白快速降解;物理低氧细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,而化学低氧细胞无明显变化;两种低氧细胞的MMP-2蛋白表达均升高,且化学低氧细胞的侵袭及迁移能力增强。结论:两种低氧细胞模型构建成功,并且两种低氧细胞在HIF-1α蛋白表达与稳定性、细胞活力、凋亡、侵袭及迁移等方面均存在差异。这些差异可为低氧模型的选择和研究低氧环境下的肿瘤细胞特性提供参考。     

低氧增加人皮肤微血管内皮细胞系迁移并促进凋亡

目的研究低氧环境对人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)迁移、凋亡及相关因子HIF-1α、VEGF、i NOS基因及蛋白表达的影响。方法低氧培养人微血管内皮细胞,分为常氧组(对照组)和低氧组(Co Cl2模拟化学低氧)。CCK-8细胞生存实验确定合适处理浓度(200μmol/L Co Cl2),划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞技术观察细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α、VEGF、i NOS mRNA和蛋白表达。结果与常氧组比较,低氧组细胞迁移能力增加(P0.05),凋亡增多(P0.05),均呈时间依赖性。低氧组HIF-1α、HIF-1β、VEGF、i NOS mRNA表达较常氧组比较均增加(P0.05),HIF-1α、VEGF、i NOS蛋白表达较常氧组比较均增加(P0.05),具有一定时间依赖性。结论低氧能增强人皮肤微血管内皮细胞迁移能力,并促进其细胞凋亡,其可能机制与HIF-1α、VEGF、i NOS蛋白表达升高有关。     

低氧诱导因子1α诱导卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞周期的阻滞作用。方法: 采用化学性低氧诱导剂氯化钴（CoCl2）和物理性低氧培养箱两种方法对体外培养的卵巢癌SW626细胞诱导低氧，用诱骗法（decoy）阻断HIF-1α功能，Western blotting、RT-PCR和流式细胞术分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平和细胞周期比率。结果： B1组(3.75±1.31)和C1组(3.48±1.01) HIF-1α蛋白表达水平明显高于A1组(0.97±0.31)（P<0.05), decoy法对HIF-1α蛋白表达没有明显影响(P>0.05)；A1组（0.65±0.32）和B1组（0.64±0.34）HIF-1α mRNA表达水平明显低于C1组（1.28±0.62）（P<0.05），decoy法对HIF-1α mRNA 表达没有明显影响（P>0.05）；流式细胞术检测发现B1组（81.78±24.33）和C1组（77.62±22.76）G0/G1期细胞比率显著高于A1组（49.49±18.54）（P<0.05）；B2组（61.54±20.84）明显低于B1组（P<0.05），C2组明显低于C1组（56.03±21.42），而A1组和A2组之间无明显差异（P>0.05）。结论：CoCl2或物理性低氧均能明显诱导卵巢癌细胞SW626 G0/G1期细胞周期阻滞和HIF-1α的表达，HIF-1α在低氧引起的卵巢癌细胞SW626的细胞周期阻滞中起重要作用。     

低氧通过HIF-1α上调卵巢癌细胞SKOV3中HPA的表达

目的探讨低氧条件下卵巢癌细胞株SKOV3中低氧诱导因子-1α(HIF-1α),乙酰肝素酶(HPA)的表达变化及相互作用关系。方法分组孵育细胞株,用免疫细胞化学定性检测HPA蛋白,Western-blot和RT-PCR检测HIF-1α、HPA蛋白和mRNA。结果HPA蛋白定位于胞质。低氧12~36 h HIF-1α蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),而mRNA变化不明显,HIF-1α抑制剂雷帕霉素可抑制蛋白表达水平。在低氧后各时间点HPA蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05),雷帕霉素显著抑制HPA蛋白及mRNA表达。结论低氧可依赖HIF-1α途径增强HPA的表达,进而促进肿瘤的浸润转移。     

HIF-3α在骨肉瘤组织中的表达及低氧状态对MG-63细胞侵袭能力的影响

目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响。方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3α的表达情况;用细胞黏附实验、细胞迁移实验及细胞侵袭实验检测MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。在MG-63细胞中,敲降HIF-3α或过表达HIF-3α后,检测低氧对细胞的黏附、迁移及侵袭能力的影响。结果 免疫组化结果显示骨肉瘤组织中HIF-3α高表达而骨软骨瘤组织中HIF-3α低表达。与常氧条件相比,低氧促进MG-63细胞中HIF-3α mRNA和HIF-3α蛋白的表达,低氧增强MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。MG-63细胞中HIF-3α的敲降减弱了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力而HIF-3α的过表达增强了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。结论 低氧促进了MG-63细胞中的HIF-3α的表达,增强了MG-63细胞的侵袭转移能力,HIF-3α在低氧诱导的MG-63细胞侵袭转移中具有重要作用。     

miR-15b靶向LPAR3对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR-15b靶向LPAR3调控食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 取对数生长期的人食管癌Eca109细胞分为对照组、miR-15b mimic组、miR-NC组、miR-15b mimic+pcDNA3.1组、miR-15b mimic+pcDNA-LPAR3组;另设对数期生长的人食管上皮细胞HEEpiC为空白组。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-15b和LPAR3 mRNA的表达;应用MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;Western blot检测Eca109细胞中LPAR3和增殖、迁移、侵袭相关蛋白(Cyclin D1、MMP-2、MMP-9)的表达。结果 与空白组相比,对照组Eca109细胞中miR-15b水平明显降低(1.00±0 vs 0.42±0.03,t=33.486,P<0.01),LPAR3 mRNA水平显著升高(1.00±0 vs 2.33±0.15,t=15.358,P<0.01);与对照组相比,miR-15b mimic组细胞miR-15b水平显著升高(0.42±0.03 vs ...     

Basigin(CD147)剪接异构体3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭和迁移

目的研究basigin(BSG,CD147)剪接异构体3(BSG3)在食管癌组织中的表达水平,及其对食管癌细胞功能的影响。方法免疫组织化学染色检测食管癌组织及正常食管组织BSG3的表达;实时定量PCR分析BSG1、BSG3在食管癌组织及正常食管组织中转录水平的差异;通过真核表达载体转染的方法在Eca109食管癌细胞中过表达BSG3,MTT法检测Eca109食管癌细胞的增殖活性,TranswellTM侵袭小室实验检测Eca109细胞的侵袭能力,划痕实验检测Eca109细胞的迁移能力。结果与正常食管组织相比,食管癌组织中BSG1和BSG3均高表达,过表达BSG3能够有效抑制Eca109细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结论 BSG3在食管癌组织高表达,且能够拮抗BSG1的功能,抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。     

低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1/2途径促进Ⅰ型胶原的表达

目的：探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）的影响及其可能的信号通路。方法：（1）采用正常大鼠肾成纤维细胞系（NRK-49F），应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。（2）原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞，Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下，HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂 PD98059的阻断效应；RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平；细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化；明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP -9）的活性。结果：（1）低氧刺激6 h，NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达，核内更明显。（2）低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高，是正常氧组的187%±32%（P<0.05），验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。（3）低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加，分别为正常氧组的171%±27%（P<0.05）和256%±61% （P<0.05）；低氧刺激4 h、6 h，Ⅰ型胶原mRNA表达增加，为正常氧组的189%±28%（P<0.05）和221%±44%（P<0.05）。（4）低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h，培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。（5）低氧刺激肌成纤维细胞15 min 即可使ERK1/2活化，阻断实验显示，PD98059可以使低氧12 h引起Ⅰ型胶原增加（低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%，P<0.05)显著减少（PD98059 +低氧组为正常氧组的108%±19%，P>0.05)。结论： 低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。     

大鼠缺氧性肺动脉高压过程中缺氧诱导因子1α和血红素氧合酶1的变化

目的：观察缺氧大鼠肺小血管壁缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血红素氧合酶1（HO-1）基因表达。方法： 40只雄性Wistar大鼠随机分成缺氧0、3、7、14和21 d组。测平均肺动脉压（mPAP），血管形态学指标，右室肥大指数(RVHI)，HO-1活性和HIF-1α, HO-1 基因表达。结果： 缺氧7 d mPAP高于对照组，缺氧14 d达到高峰并维持于此水平。肺血管重塑，RVHI改变在缺氧14 d后出现。HIF-1α蛋白在对照组表达不明显，各缺氧组血管内膜均为阳性。在中膜，HIF-1α蛋白缺氧3 d开始增高，第7 d达到高峰，14 d和21 d后下降，HIF-1α mRNA缺氧14 d增高, 此后维持于高水平。HO-1蛋白在缺氧7 d后增高，14 d后达到高水平，并持续于高水平。HO-1 mRNA缺氧3 d增高，7 d达高峰，之后下降。结论： HIF-1α和HO-1 均在大鼠缺氧性肺动脉高压的发病机制中发挥作用，且HIF-1α与HO-1基因表达可能有相互调控。     

乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性

目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定最RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.     

曲古抑菌素A通过上调原钙黏蛋白9表达抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭

目的 探讨曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,及其可能的分子机制。 方法 体外常规培养SGC-7901细胞至对数生长期,给予不同浓度TSA（5、10、20、40、80、160 nmol/L）处理48 h,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,脂质体介导法将人原钙黏蛋白9（PCDH9）真核表达质粒转染SGC-7901细胞并筛选出稳定表达的细胞系,Transwell实验检测迁移率和侵袭率,RT-PCR法检测PCDH9 mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测PCDH9、Snail、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的蛋白表达水平。 结果 TSA在80 nmol/L以上时对人胃癌SGC-7901细胞活力有显著的抑制作用（P<0.05）;而在较低浓度下（5～20 nmol/L）可剂量依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）,下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平（P<0.05）,上调E-cadherin和PCDH9蛋白表达水平（P<0.05）,上调PCDH9 mRNA表达水平（P<0.05）;PCDH9高表达也可抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白表达并下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达（P<0.05）。 结论 TSA可在体外抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭,这可能与其促进PCDH9基因表达,继而下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。     

磷酸肌醇3－激酶调控缺氧诱导因子1α对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用

目的:观察缺氧性肺动脉高压（HPH）大鼠肺组织中蛋白激酶B（AKT））和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨磷酸肌醇3-激酶（PI3K）通路与HIF-1α和VEGF的关系及其在HPH发病中的可能机制。 方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、低氧3、7、14和21 d组，每组8只，测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右室肥大指数（RVHI）、血管形态学指标Western印迹检测磷酸化AKT(P-AKT)；原位杂交和免疫组化检测HIF-1α的表达。免疫组化检测P-AKT和VEGF水平。 结果:① 低氧7 d起大鼠mPAP、管壁厚度与血管外径比值及管壁面积与血管面积比值分别为(23.53 ±1.78)mmHg, (45.5±3.1)%和(54.7±3.2)%,与对照组［(16.15±1.97)mmHg、(36.8±2.5)%、(63.2±2.5)%］比较差异显著(P＜0.05),低氧14 d起稳定于高水平;低氧14 d RVHI为(26.5±2.9)%,与对照组［(22.9±2.2)%］比较差异也显著(P＜0.05)。②p-AKT蛋白在对照组表达不明显，缺氧3 d后表达上升，与对照组比较差异显著(P＜0.05)，且在缺氧3 d、7 d、14 d、21 d组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性。③HIF-1α蛋白对照组表达不明显，缺氧3 d、7 d、14 d、21 d组肺血管内膜均为阳性，肺血管中膜，缺氧3 d组表达开始升高（0.209±0.009），与对照组比较差异显著(P＜0.05),缺氧7 d达高峰（0.232±0.008,P＜0.05），14 d和21 d下降；HIF-1α mRNA在对照组肺动脉血管壁内表达弱阳性，缺氧3 d和7 d肺血管中表达无明显变化，与对照组比较差异无显著(P＞0.05)。缺氧14 d后表达增高(0.305±0.104, P＜0.05),并持续维持于高水平。VEGF蛋白水平在低氧7 d显著高于对照组(0.188±0.018, P<0.05),14 d达高峰(0.238±0.017, P<0.05)。相关分析表明mPAP与肺血管重塑呈正相关(r=0.983, P<0.01)。在肺小血管内膜:P-AKT与 HIF-1α蛋白呈正相关(r=0.883, P<0.01)， HIF-1α与VEGF蛋白呈正相关(r=0.897, P<0.01)。 结论:磷酸化AKT与HIF-1α和VEGF均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用。磷酸化AKT可能通过使HIF-1α蛋白表达增加的方式上调HIF-1α，进而上调下游目标基因VEGF，导致HPH的发生和发展。     

不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞侵袭和转移能力的影响

目的: 探讨不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞黏附、侵袭和转移能力的影响及其可能机制。方法: 不同浓度的低氧处理对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用MTT法、Transwell膜侵袭系统、免疫细胞化学方法、明胶酶谱分析和反转录PCR检测变异型白细胞分化抗原CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异。结果: HepG2细胞经低氧处理后,细胞的基质黏附率、穿透基底膜与游走迁移的细胞数均增高,以3%氧浓度最为显著(P<0.05);3%和5%氧处理还可显著促进CD44v6的表达,增加MMP-2和MMP-9的表达,并可上调HIF-1α和VEGF。结论: 适度缺氧能增强人肝癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,其机制可能与CD44v6、基质金属蛋白酶、HIF-1α和VEGF的表达改变有关。     

慢性缺氧应激可能通过EMT增强乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为

目的:探讨慢性缺氧应激对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分为缺氧组(1%O_2、5%CO_2和94%N_2)和正常对照组(常氧)进行培养。利用MTT法、CCK-8实验、细胞直接计数法及细胞侵袭和迁移实验对MCF-7细胞活力、增殖及侵袭和迁移能力进行检测;用软琼脂集落形成实验及Matrigel 3D培养技术检测MCF-7细胞非锚定生长能力及极性改变情况;利用MCF-7细胞构建裸鼠皮下种植瘤模型,检测慢性缺氧应激对体内肿瘤生长及肺转移的影响;利用倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;Western blot检测低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)和磷酸化的糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在缺氧环境下表达水平的改变,以及E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、N-钙黏连蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、MMP-9等上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比较,慢性缺氧组MCF-7细胞活力、增殖能力及侵袭迁移能力增强,细胞非锚定生长能力提高且在3D培养系统更容易发生极性改变,呈现侵袭样生长,体内生长及转移能力增强;除了HIF-1被缺氧诱导表达升高外,GSK-3β呈现活化趋势,且上皮样标志物E-cadherin蛋白表达水平明显下降,而间充质样标志物N-cadherin、vimentin、MMP-3和MMP-9蛋白表达水平明显升高。结论:慢性缺氧应激促进了乳腺癌细胞恶性生物学行为,且其机制可能与EMT有关。