光激化学发光法检测甲胎蛋白实验性能评价

目的评价光激化学发光法（LICA）检测血清甲胎蛋白（AFP）的实验性能。方法利用定标品和质控品对LICA检测AFP的实验性能进行评价;利用358份含不同浓度AFP的血清标本对LICA和罗氏电化学发光免疫法进行方法学对比评价。结果LICA检测AFP的分析敏感性为0．25μg／L,在平均浓度10和500μg／L的检测总变异系数（CV）均〈5％。与参比方法所测AFP浓度差异无统计学意义,2种方法所测结果的对数值呈直线相关（r=0．966,P〈0．001）,对标本阴、阳性分类差异无统计学意义（P=0．824）,有较好的一致性（Kappa=0．886,P〈0．001）。结论LICA检测AFP具有良好的检测性能;与罗氏电化学发光法具有类似的实验性能。     

免疫比浊法用于全自动生化分析仪中产生钩状效应的防范

目的正确认识免疫透射比浊法应用于全自动生化分析仪上的抗原过量产生的钩状效应及对这种钩状效应的防范。方法首先对仪器的测量线性范围上限和仪器自动稀释重做功能进行设置,然后对设置前超过测量范围上限的样本进行设置测定及设置前且人工对倍稀释测定。结果设置前测定组平均值为2.49g/L设置后测定组平均值为3.31g/L设置前且人工对倍稀释测定组平均值为3.33g/L。结论高剂量钩状效应使强阳性标本误测为弱阳性,甚至假阴性结果,高浓度标本误测为低值,所以对仪器进行设置且对标本倍比稀释来进行测定,测出来的值更接近真值。     

AFP ELISA定量一步法应淘汰改用二步法

目的对目前国内市场上的AFPELISA定量一步法、两步法的"HOOK"效应进行评价。方法用化学发光法定量选取AFP430000μg/L不同浓度稀释后分别用ELISA一步法、二步法测定反应曲线。结果国产一步法在0～350μg/L浓度成线性，350～450μg/L出现平台现象，450～4000μg/L下降到线性范围吸光度，＞4000μg/L降到正常吸光度以下。国产二步法在0～400μl/L浓度成线性可定量，400～10000μg/L出现平台现象，430000μg/L吸光度仍能达到1.87。进口二步法在0～1000μg/L呈线性，1000～100000μg/L出现平台现象，430000μg/L吸光度仍能达到2.50。结论目前国内市场上AFPELISA定量一步法"HOOK"现象严重，漏检难以避免应淘汰。二步法中、低值线性范围较宽可定量，高值筛查后复检，基本满足临床要求。     

化学发光免疫法检测PCT的分析测量范围和临床可报告范围研究

目的研究化学发光免疫法检测降钙素原（PCT）的分析测量范围（AMR）和临床可报告范围（CRR）。方法随机收集临床病人高、低值两份PCT新鲜标本,参照美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的EP6-A文件要求制备不同实验样品,每个样品在罗氏CobasE601化学发光免疫分析系统上重复测定2次,利用多项式回归法确定PCT的分析测量范围;高值标本通过稀释回收实验确定最大稀释度,结合功能灵敏度和分析测量范围上限确定临床可报告范围。结果Co—basE601化学发光免疫分析系统的分析测量范围为0．02～108．375ng／ml,临床可报告范围为0．06-216．75ng／ml。结论厂商声明的CobasE601化学发光免疫系统检测PCT的分析测量范围得到验证确认,但对于超过分析测量范围的高值标本建议用低值血清1：2稀释。     

光激化学发光法检测甲胎蛋白实验性能评价

目的评价光激化学发光法(LICA)检测血清甲胎蛋白(AFP)的实验性能。方法利用定标品和质控品对LICA检测AFP的实验性能进行评价;利用358份含不同浓度AFP的血清标本对LICA和罗氏电化学发光免疫法进行方法学对比评价。结果LICA检测AFP的分析敏感性为0.25μg/L,在平均浓度10和500μg/L的检测总变异系数(CV)均<5%。与参比方法所测AFP浓度差异无统计学意义,2种方法所测结果的对数值呈直线相关(r=0.966,P<0.001),对标本阴、阳性分类差异无统计学意义(P=0.824),有较好的一致性(Kappa=0.886,P<0.001)。结论LICA检测AFP具有良好的检测性能;与罗氏电化学发光法具有类似的实验性能。     

胶体金试纸法和化学发光免疫法检测全分子HCG的观察

目的观察胶体金试纸法和化学发光免疫法检测全分子人绒毛膜促性腺激素（HCG）的异同。方法采用胶体金试纸法和化学发光免疫法检测187例血清标本中全分子HCG。结果187例血清标本用胶体金试纸法检测阴性64例（其中假阴性例10例），弱阳性24例，阳性37例，强阳性62例。化学发光免疫法检测〈5IU／L者54例、〉15～1830271 IU／L者133例。两种方法经配对X^2检验差异具有显著性（X^2=8．1，P〈0．005）。结论①胶体金试纸法较化学发光免疫法简便快速，但有假阴性。化学发光免疫法灵敏度、精密度较胶体金试纸法高，但线性范围稍窄。②胶体金试纸法测定结果结合临床可用于估计化学发光免疫法血清稀释倍数。     

Sysmex CS5100检测高浓度D-二聚体的稀释验证分析

目的探讨高浓度D-二聚体在抗原过剩情况下是否需要进行稀释处理及最适稀释倍数。方法采用Sysmex CS5100分析仪对D-二聚体质控品与校准品进行检测,计算批内与日间精密度。检测校准品进行线性范围及临床可报告范围验证。对D-二聚体水平小于5mg/L、纤维蛋白降解产物(FDP)20μg/mL的标本进行梯度稀释,检测并计算回收率。对D-二聚体水平大于5mg/L、FDP20μg/mL的标本进行梯度稀释,检测并计算回收率。结果批内及日间精密度分析结果显示,批内及日间变异系数均小于3%。线性范围验证结果显示,0.207~5.170mg/L范围内线性分布良好。临床可报告范围为0.207~165.440mg/L。D-二聚体水平小于5mg/L、FDP20μg/mL时,D-二聚体检测无抗原过剩现象,无需进行梯度稀释检测。D-二聚体水平大于5mg/L、FDP20μg/mL时,D-二聚体检测存在抗原过剩现象,需进行稀释处理。结论当标本D-二聚体水平大于5mg/L、FDP20μg/mL时,D-二聚体检测存在抗原过剩现象,需进行稀释处理,从而保证高浓度D-二聚体标本检测结果的准确性。     

酶联荧光分析法测定肌钙蛋白I的临床应用

目的 探讨酶联荧光分析(ELFA)法测定肌钙蛋白I(cTnI)的临床应用。方法 分别采用ELFA法和化学发光免疫分析(CLIA)法测定血清样品中cTnI的浓度,对ELFA法进行精密度试验、线性试验、回收试验和干扰试验;并对ELFA法与CLIA法测定cTnI的结果进行相关性分析。结果 ELFA法测定cTnI浓度,高值(30.00μg/L cTnI)和低值(0.12μg/L cTnI)的批内变异系数(CV)分别为2.81%和1.62%,批间CV分别为5.67%和3.52%。ELFA法检测cTnI的可信检测范围为0.00~30.00μg/L。当总胆红素浓度小于450μmol/L,血红蛋白浓度小于1.5g/L,三酰甘油浓度小于7.0mmol/L时,ELFA法测定cTnI无干扰。ELFA法与CLIA法测定cTnI浓度具有良好的相关性(r=0.971)。结论 ELFA法具有较好的精密度、回收率和线性范围,与CLIA法具有较好的相关性,且检测快速简便,适用于急诊检验,能满足临床要求。     

增敏化学发光法测定血清Ⅲ型前胶原

目的 应用增敏化学发光法检测血清Ⅲ型前胶原,了解其检测特性和临床应用前景.方法 对检测血清Ⅲ型前胶原的增敏化学发光法和放射免疫分析(RIA)法进行重复性试验、线性范围试验和回收试验的比较,采用两种方法平行检测108例慢性乙肝病人血清Ⅲ型前胶原含量进行相关性分析,并用增敏化学发光法检测60例正常人血清Ⅲ型前胶原含量.结果 两种方法都有较好的重复性,但增敏化学发光法明显优于RIA法;增敏化学发光法和RIA法具有良好的相关性(R=0.928,p＜0.001,相关方程Y=1.107X-3.312 ,回收率均在95%以上,增敏化学发光法略高于RIA法;增敏化学发光法的线性范围(＜900 μg/L﹞较RIA法(＜600μg/Lμ要宽;增敏化学发光法检测血清Ⅲ型前胶原的参考范围为 4.5～126.5μg/L.结论 增敏化学发光法检测血清Ⅲ型前胶原的准确性和精确度都明显优于RIA法;具有敏感性高、稳定性好、方便快速的优点,适宜在医院推广使用.     

基于磁微粒化学发光法的sST2检测性能验证

目的对磁微粒化学发光法检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)进行性能验证,评价该方法的稳定性与可靠性。方法采用基于磁微粒化学发光法的试剂盒,对患者及健康人群的血清及厂家提供的质控物质进行检测并对该方法进行性能评价。结果经试验检测,该方法的精密度(血清:低值及高值CV分别为2.2%及2.3%、质控品:低值及高值CV分别为1.7%及1.5%)、重复性(血清:低值及高值CV分别为1.07%及1.41%、质控品:低值及高值CV分别为0.98%及1.23%)、线性范围(血清:1.00~300.00 ng/mL范围内方法一r为0.9999、方法二r为0.9998,质控品:6.40~200.00 ng/mL范围内方法一r为0.9999、方法二r为0.9999)、最低检测限(0.028 ng/mL)、临床可报告范围(40倍稀释)、参考区间验证(健康人样本靶值均在参考区间内)、临床样本对比测试(与参照方法对比阳性及阴性符合率分别为96.88%及96.55%)、样本稳定性测试(高、低值样本室温静置3 d相对偏差为-15.3%及-14.6%,而2~8℃静置7 d相对偏差为-0.44%及0.39%,-20℃静置7 d相对偏差为-2.08%及-0.72%),具有较好稳定性、干扰实验(胆红素≤1 mmol/L、血红蛋白≤10 g/L、脂肪乳≤20 g/L时,对样本检测无明显干扰作用)结果均符合临床应用需求。结论基于磁微粒化学发光法检测试剂盒符合临床应用要求,适于临床应用推广。     

Development and validation of an automated particle-enhanced nephelometric immunoassay method for the measurement of human plasma c1q

We have developed a sensitive immunoassay based on latex particle agglutination for measuring C1q concentrations in human plasma. In this simple and fast particle-enhanced immunoassay, we used carboxylated latex particles (diameter 210 nm) covalently coated with F(ab)₂ fragments of anti-C1q antibodies. These particles are incubated with diluted sample (400-fold) for 6 min at room temperature, with the resulting agglutination quantified by measuring the change of light-scatter produced. The assay has been automated on the Behring nephelometer analyzer with a sampling rate of 150 samples/hr. This assay generates a standard curve in the range of 24–775 mg/L, showing intraassay and interassay precision of <8% and <10%, respectively. Dilution linearity was validated throughout the dynamic range of the assay. There were no interferences from bilirubin, Intralipid, haemoglobin, and rheumatoid factor. Results obtained in 45 clinical samples correlated well with those obtained by a commercial radial immunodiffusion method (r=0.936), and with those obtained by the Behring immunoprecipitation nephelometric test (r=0.950). The mean concentration in plasma from healthy subjects was 180 mg/L and the reference interval was from 128 to 237 mg/L. This latex nephelometric procedure is a convenient method and an interesting alternative to other immunoassays for routine measurement of human C1q.     

罗氏 Cobas e601与雅培 Architect i2000检测乙肝表面抗原的比较

目的：比较罗氏电化学发光检测仪Cobas e601与雅培化学发光微粒子免疫分析仪Architect i2000检测乙肝表面抗原的结果。方法选取在雅培 i2000检测仪上检测乙肝表面抗原结果为有反应性,且定量结果小于250 IU/mL 的标本,同时在罗氏 e601进行检测,分析比较检测结果间的差别,并进行直线相关和回归分析。结果共检测46份临床标本,剔除1份两台仪器上检测结果反应性不符的标本外,其余结果具有很好的相关性。其中雅培检测值为0．05～1．00 IU/mL 的15份,两者的直线回归方程为Y ＝17．49X ＋0．843,相关系数 r＝0．979;1．1～10．00 IU/mL 的15份,两者的直线回归方程为Y ＝15．72X ＋21．06,相关系数 r＝0．952;11～250 IU/mL 的15份,两者的直线回归方程为Y ＝29．17X -129,相关系数 r＝1．000。结论两种方法的检测结果具有很好的相关性,并可以通过公式进行相互换算。     

酶增强免疫分析法与微粒子酶联免疫吸附法检测他克莫司药物浓度的结果对比研究

目的对酶增强免疫分析法（EMIT）与微粒子酶联免疫吸附法（MEIA）进行比对实验,评估SYVAViva-E临床化学分析仪（简称SYVA Viva-E）和Abbott IMX分析仪（简称Abbott IMX）2种检测系统测定他克莫司（FK506）药物浓度的一致性。方法将Tac/Csa CONTROL质控品分别用SYVA Viva-E（EMIT）和Abbott IMX（MEIA）进行批内、批间精密度测定。FK506的靶值（检测范围）：A1水平为4.3（2.1～6.5）ng/mL、A2水平为8.9（5.3～12.5）ng/mL、A3水平为18.0（14.0～22.0）ng/mL。将158份临床患者样本分为极低浓度（0.1～〈2.0 ng/mL）、低浓度（2.0～〈8.0 ng/mL）、中浓度（8.0～〈14.0 ng/mL）、高浓度（14.0～〈20.0 ng/mL）和极高浓度（20.0～24.0 ng/mL）5个组,用SYVA Viva-E和Abbott IMX平行测定FK506浓度,观察2种检测系统测定临床样本的相关性。结果当FK506浓度处于A1水平时,SYVA Viva-E的批内、批间精密度及检测结果均值均高于Abbott IMX（P〈0.05）;处于A2、A3水平时,2种检测系统批内、批间精密度及检测结果均值相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。Abbott IMX的检测精密度优于SYVA Viva-E。当临床样本浓度〈8.0 ng/mL时,SYVAViva-E检测结果的均值比Abbott IMX约高1.0 ng/mL,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与测定质控品的结果一致;当样本浓度≥8.0 ng/mL时,SYVA Viva-E检测结果的均值与Abbott IMX相近,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。2种检测系统测定临床样本的总体相关性较好（r=0.977）,但SYVA Viva-E检测结果均略高于Abbott IMX。结论应用EMIT检测FK506时,其检测结果略高于MEIA,尤其在低浓度范围更加明显。2种检测系统在检测FK506浓度时可能存在系统偏差。     

7种半胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测系统的分析性能评价

目的评估7种半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）检测系统的分析性能。方法应用美国临床实验室标准化协会（CLSI）系列文件评估5个颗粒增强免疫透射比浊（PETIA）检测系统和1个均相溶胶颗粒免疫法（SPIA）检测系统的精密度、正确度、空白限（LoB）、抗干扰性以及与SIEMENSBNⅡ颗粒增强免疫散射比浊（PE—NIA）检测系统（简称BNⅡ系统）的相关性和偏差。结果6个检测系统（以A—F表示）和BN1I系统在CysC浓度为0．8～5．0mg／L时的总批内变异系数（CV）均〈3．75％,总批间CV除E系统外均〈5％;正确度验证显示A—E系统和BNⅡ系统测定ERM—DA471的绝对偏倚分别为0．00、0．00、1．01、-0．01、-0．50和-0．35mg／L,相对偏倚分别为0％、0％、18．43％、-0．18％、-9．12％和-6．39％;测定CAP室间质评物显示仅D系统和BN1I系统较为理想。A～F系统及BNⅡ系统的LoB分别为0．00、0．00、0．31、0．01、0．10、0．06和〈0．05mg／L。干扰分析显示Hb≤13g／L、TG≤28mmol／L时,对A、B系统及BNⅡ系统无明显影响（干扰〈±10％）,其他系统均有不同程度干扰。相关分析显示A～F系统与BN1I系统相关性较好[相关系数（r）均〉0．975,P〈0．01]。偏差分析显示,A～F系统与BNII系统的平均偏差分别为－0．02、－0．10、－0．31、0．05、0．04、0．36mg／L。结论CysC各检测系统测定有证参考物质ERM—DA471的最大偏倚可达到lmg／L,最大相对偏倚为18．43％;其中PENIA在测定ERM—DA471和CAP室间质评物时结果低于PETIA;部分检测系统分析性能存在不足。     

Are immunoassays for digoxin reliable?

The specificity of radioimmunoassay and fluorescence polarization immunoassay procedures for the measurement of digoxin has been assessed. Many steroids and lipids have been found to interfere and give false positive results for digoxin under the conditions of the study. Caution is recommended in the interpretation of digoxin measurements made by immunoassay procedures.     

Evaluation of the highly sensitive chemiluminescent enzyme immunoassay “Lumipulse HBsAg‐HQ” for hepatitis B virus screening

Background

Ongoing efforts in the development of HBsAg detection kits are focused on improving sensitivity and specificity. The purpose of this study was to evaluate an improved, highly sensitive quantitative assay, “Lumipulse HBsAg‐HQ”, a chemiluminescent enzyme immunoassay designed for a fully automated instrument, the “Lumipulse G1200”.

Methods

Serum samples for reproducibility, dilution, correlation, sensitivity, and specificity studies were obtained from patients at the Osaka University Hospital. Seroconversion and sensitivity panels were purchased from a commercial vender. Subtype, sensitivity panels, and HBsAg recombinant proteins with one or two amino acid substitutions were prepared in‐house.

Results

The coefficients of variation for the low, medium, and high concentration samples ranged from 1.93 to 2.55%. The HBsAg‐HQ reagent for dilution testing showed good linearity in the 0.005‐150 HBsAg IU/mL range and no prozone phenomenon. All 102 HBV carrier samples were positive by HBsAg‐HQ, while other commercial reagents showed one or more to be negative. In the seroconversion panel, the 14‐day blood sample was positive. The sensitivity against HBsAg‐HQ “ad” and “ay” subtypes was 0.025 ng/mL. Comparisons among the HBsAg‐HQ, HISCL, and Architect HBsAg reagents were performed using the Bland‐Altman plot. Specificity for 1000 seronegative individuals was 99.7%. HBsAg‐HQ detected 29 positive serum among 12 231 routinely obtained serum samples, which showed concentrations of 0.005‐0.05 HBsAg IU/mL.

Conclusions

According to these results, the Lumipulse HBsAg‐HQ assay, with a highly sensitive limit of detection of 0.005 IU/mL, may facilitate the development of a better management strategy for a considerable proportion of infected patients.

     

胰岛素化学发光法测定的建立与评价

目的：建立化学发光法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定的可行性评估。方法：CLISA采用一步免疫分析夹心法与RIA的测定结果进行比较,并将该法运用于临床非胰岛素依赖型糖尿病进行观察。结果：CLISA测胰岛素的批内与批间的变异系数分别为4．8％和6．4％,平均回收率为98．6％,与RIA的相关系数0．8505（P＞0．05）。结论：CLISA法测胰岛素的各技术参数优于RIA法,能及时有效地满足糖尿病患者胰岛素治疗的临床需要。