微波在组织冰冻切片中的应用

微波在组织冰冻切片中的应用杨金镇我们应用微波代替福马林快速固定液（ＦＡＡ液）固定冰冻前的组织，并将冰冻切片在微波辐射下进行ＨＥ染色。一、材料与方法１．虹云牌微波炉：Ｈｙ７００１型，输出功率７００ｗ，十挡功率可调，在３５Ｃ～９５℃范围内，可自动恒温控制...     

OR-VB显示脂质和弹力纤维的组合染色法及其应用

在实验动物脂质代谢模型的建立中 ,分别对组织的脂质代谢和纤维进行染色与组合对照染色。本实验选用改进的ＯｉｌｒｅｄＯ乙醇饱和液 ,能较好的显示脂质成分 ,Ｖｉｃｔｏｒｉａｂｌｕｅ改造染色液 ,能显示冰冻切片组织中的弹力纤维。经过二种试剂组合染色后 ,能够同时显示血管组织内的脂质和管壁弹力纤维成分 ,色彩鲜艳 ,是较为理想的组合染色方法。1　材料和方法1 1　材料选用　材料来源于本学校实验动物中心的兔脂质代谢模型组织 ,经过 1 5 %中性甲醛固定液 ,能够使组织得到充分的固定[1] ,再进行冰冻切片和染色。1 2　试剂配制　 (1 )…     

微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用

微波修复法多用于石蜡切片 ,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中 ,实行改良 ,将微波抗原修复法用于冰冻切片 ,取得了满意的效果 ,方法如 :1.常规固定取脑组织冰冻切片。 2 .漂洗后 3%H2 O2 封闭 10分钟 ,蒸馏水洗 2分钟 3次。3.微波抗原修复 :入柠檬酸盐缓冲液 (PH6 .0 ) ,用微波或电炉加热 ,循环 3次后入 1% BSA孵育 15分钟。 4.入一抗 30分钟 ,转入二抗2 0分钟 ,三抗 2 0分钟 ,显色。结果讨论 :1.与对照切片成比 ,阳性细胞染色增强 ,背景变浅 ,阳性检出率提高。由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛 ,醛基与蛋白质中…     

组织包埋组织的冰冻切片方法

近几年我科采用大组织包埋小组织的冰冻切片,对小活检组织的快速诊断、免疫荧光组化检查,取得了较满意的效果,现介绍如下。1 方法我们将手术、尸检的肝、脾脏,切成1.5cm×1.0cm×0.2cm大的组织块,用纱布块     

大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究

应用 ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究 ,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶 ( Ch AT)免疫阳性神经元。材料与方法 ,成年大鼠 1 0只 ,雌雄不限 ,体重 1 5 0克左右 ,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉 ,经左心室 0 .9%Nacl灌洗 ,4%多聚甲醛 30 0 ml( p H7.2磷酸缓冲液 ) ,灌注固定。取心房后壁 ,后固定1 2 hr,常规石蜡包埋 ,切片厚 5 μm,切片脱蜡至水 ,用 SABC法免疫组织化学反应 :切片于 3% H2 O2 1 0 min,D· W洗 3次× 2 min,0 .0 1 M枸橼酸缓冲液 ( p H6 .0 )微波修复( 1 0 0℃ )…     

非降解性医用材料肌肉植入方法研究

将同一种非降解性医用材料按三种植入方法植入家兔肌肉内 ,观察并比较组织学反应。将材料样品制成 1mm×10mm的柱状 ,按不同方法植入家兔脊柱旁肌的肌肉组织内 ,分别于 2W、4W、12W ,用无痛法处死家兔 ,切取包括植入物及其周围足够多的未受到影响的组织 ,置 10 %甲醛液中固定 ,石腊包埋 ,切片 ,HE染色。置光镜下观察试样周围组织变化反应 ,根据组织变化反应评价哪一种方法对组织创伤小 ,更能反映非降解性医用材料的生物相容性。结论 ,用c)法最能反映材料与生物体的相容性     

四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

γ-GT酶组织化学染色中低熔点石蜡切片代替冰冻切片的方法

酶组织化学染色的效果取决于标本组织中酶的含量和活性 ,标本组织的处理及制片过程对于酶的保存十分重要。常规石蜡切片因组织浸蜡温度高 ,易使酶变性 ,因此酶组织化学染色通常选用冰冻切片。寻找一种较理想的切片方法 ,是研究人员的迫切愿望和要求 ,我们在谷氨酰转肽酶 (γ -ＧＴ)染色中 ,摸索采用低熔点石蜡切片代替冰冻切片 ,取得了良好的效果 ,现介绍如下 :1　材料与方法正常兔肾新鲜标本 ,①冰冻切片 :取 1ｃｍ× 0 5ｃｍ×0 2ｃｍ组织 ,立即放入 - 2 0℃恒冷冰冻切片机 ,冷冻 10ｍｉｎ ,切片厚 8μｍ ,放 4℃冰箱备用 ;②低熔点石蜡…     

硬质酸石蜡包埋组织观察

本实验采用取10％甲醛、Bouin液分别固定新鲜兔的肾上腺和肺，常规脱水。取硬质酸按比例加入石蜡。置入恒温箱内溶解，然后放入彻底脱水组织，取消用二甲苯和石蜡完成对组织透明、浸蜡。用石蜡包埋、常规切片、染色。显微镜下观察；用甲醛固定的组织切片符合教学用片要求，而用Bouin液固定的则存在大量针尖大小的颗粒。     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶(ATPase)和AchE是在科学研究中常用的两种酶,在科学研究中为了同时观察肌肉和神经中两种酶的分布和酶的活性,经实验研究,将两种酶是时显示在一张切片上,收到良好效果,特介绍如下。1　材料和方法1.1　组织的制备,取新鲜的动物肌组织,平铺于滤纸上,用冰冻切片机上,行纵行切片,厚度可切10～30μm,用4%中性甲醛固定保存在0～4℃的冰箱内,时间不宜过长,如固定24～48小时内,仍可收到良好效果。1.2　结合染色程序(1)ATPase显色,将切片放在下列的孵育液内。孵育液为:0.1巴比妥纳20ml,0.1gM氯化钙10ml,双蒸溜水30ml,ATP钠盐152mg。…     

消除组织切片中甲醛色素方法的探讨

在组织切片中 ,常见体内各种生理性和病理性色素以及组织离体后经化学试剂溶液的固定、染色过程中产生的各种色素 ,如甲醛色素、汞、铬和苏木精的沉着物等。在组织切片中这些色素多不溶于水、乙醇和二甲苯中。然而汞、铬等重金属盐的结晶仅见于特定含铬、汞类的固定液浸泡时的标本内 ,而甲醛溶液是病理学、组织学、解剖学常见的固定液 ,尤其是含血丰富或坏死组织的固定中甲醛色素特别多见 ,它将直接或间接地影响日常病理组织切片的观察和诊断工作 ,所以 ,鉴别和消除组织切片中的甲醛色素有其重要意义。1　材料和方法1 1　标本　取新鲜的心脏…     

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞,并与Grimelius嗜银法和M-H亲银法进行了比较研究.结果表明,Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞优于Grimelius嗜银法,其所显示的胃肠内分泌细胞的形态及胞质嗜银颗粒清晰可辨,背景浅染,反差明显.此法特异性强,结果可靠,简便省时,不失为神经内分泌细胞研究与教学的一种简便可行的方法.1材料和方法(1)标本制备与处理 采用5～6个月新鲜胎儿与成年大鼠的胃和小肠,分别固定于下述固定液中,10%甲醛钙液、Bouin液、4%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.2)、Carnoy液和IFAA液.然后,分别制备8μm厚的恒冷箱连续冰冻切片和7μm     

微波固定技术在冰冻切片中的应用

微波固定技术在冰冻切片中的应用惠延平，杨淑杰，刘爱平１９９１年１２月～１９９２年３月我们应用微波辐射对手术送检的３６例标本，进行了冰冻切片固定。一、材料与方法３６例标本均来自本院手术送检的新鲜组织，包括脑、肺、乳腺、卵巢、骨、软组织等不同组织器官的良...     

三种固定液对Feulgen反应显示DNA的比较

<正>本实验用10%福尔马林(10%FA),FAA液(甲醛、95%酒精、冰醋酸按10:85:4体积比)及Carnoy氏液作为固定液,对一个月SD大鼠睾丸组织(约3mm~2/块)进行固定.制得5μm的切片后,分别用Felugen反应显示DNA和H—E染色法染切片,并对Feulgen染色切片中的糖原细胞用图象分析仪进行DNA定量测定.结果发现:(1)选择60个左右大小、染色深浅均相近的精原细胞进行图象分析,用平均光密度值进行比较.发现Carnoy固定的切片,其均值最大而变异系数(CV)最小;10%FAA固定的居中,FAA固定的切片均值最小而CV最大.在镜下观察中,发现10%FA及FAA液固定后的切片染色均匀而Carnoy所染切片中曲细精管着色深浅不一.所以我们认为,(1)用10%FA作固定液对DNA的定量分析较适合.(2)对细胞核及细胞质的形态而言,经FAA液和Carnoy氏液固定的组织,其染色效果较由10%FA固定的组织好.经 FAA液和Carnoy氏液固定的切片,低倍镜下可见曲精小管管腔内初级精母细胞的丝状染色体及其他细胞的颗粒状染色质,高倍镜下核的结构更加清晰.而经10%FA固定的组织切片,低倍镜下管腔内的各级生精细胞的胞核呈现均匀成片的紫红色,观察不到丝状染色体,高倍镜下仔细分辨,才可隐约见到.但因Carnoy氏液固定的组织块脆性大,不易切片,所以FAA液固定最适于形态观察.     

全自动密闭式组织脱水机的使用改进

全自动密闭式组织脱水机以其卓越的性能和良好的处理效果 ,特别是安全、高效 ,将逐渐被各级医院病理科广泛使用。我科自 1997年使用全自动密闭式组织脱水机以来 ,标本的处理效果明显改观 ,切片质量显著提高。一、材料与方法1.仪器和设备∶(1)进口全自动密闭式组织脱水机 ,附不锈钢脱水篮 2只 ,分别可容 15 0个包埋盒。 (2 )塑料包埋盒。2 .试剂∶(1)ＡＡＦ固定液 :70 %乙醇 85ｍｌ,冰乙酸 5ｍｌ,4 %甲醛液 10ｍｌ。 (2 ) 95 %乙醇 ,(3)无水乙醇 ,(4)硬脂酸 ,(5 ) 5 8～ 6 0℃熔点石蜡。3.处理过程∶新鲜组织取材后 ,放入写有检验号码的塑料…     

骨骼肌m-ATPase染色改良法

我们在实验中发现 ,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中 ATP酶的活性 ,且 ATP酶对固定非常敏度 ;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象。固定液的张力很重要 ,而蔗糖是把张力提高到足够水平的最适当添加物。我们将原 ATP酶钙钴法作了如下改进 :1.固定 :将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约 1 mm厚的薄片 ,入固定液中固定1 0 min,4℃。固定液配制 :多聚甲醛 4g;二甲砷酸钠 3.0 8g;氯化钙 0 .75 g;蔗糖 1 1 .5 g;双蒸水加至 1 0 0 ml,调节 p H值为 7.2。2 .OCT包埋 ,- 2 0℃恒冷箱切片( 8μm) ,室温下自然干燥 30 min。3.切片预处理 1…     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…     

一种新冰冻切片制片方法

冰冻切片制片技术的优劣不同程度地影响快速病理诊断水平。我们在工作中发现,切出的冰冻切片略微吹干后,经30s福尔马林处理及5s乙醇处理,再进行HE染色,其镜下观察效果与石蜡切片较为接近。 1 材料和方法 半导体冰冻切片机,HE染色液及福尔马林等。对下述三种方法制得的冰冻切片进行比较。 1.1 新鲜组织置冰冻切片机切片,贴于载玻