表达hCGβ的乳酸杆菌经阴道粘膜免疫的研究

目的 :用乳酸杆菌表达人绒毛膜促性腺激素 β亚单位 (hCGβ) ,并经阴道粘膜免疫小鼠 ,分析阴道局部hCGβ抗体水平。方法 :在获得稳定、分泌性表达hCGβ的菌株后 ,接种于 8周龄BALB C雌性小鼠的阴道粘膜。于免疫后 2周取阴道洗液 ,放免法检测hCGβ水平 ,间接ELISA检测抗hCGβIgA抗体水平。结果 :Lb casei工程菌在无选择压力下培养 5 0代并冻存后 ,仍可分泌性表达hCGβ蛋白。阴道免疫 2周后 ,小鼠阴道洗液中可检测到hCGβ ,阴道洗液中的抗hCGβIgA抗体OD值为 0 2 97,明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,而与DNA免疫组无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :hCGβ在Lb caseiCECT5 2 76中得到了稳定的分泌性表达。重组hCGβ乳酸杆菌可在阴道粘膜局部定居 ,并通过粘膜免疫在局部刺激产生抗hCGβIgA抗体。     

特异性抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚单位的单克隆抗体与hCG包被红细胞的凝集能力

用人绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫BALB/C小鼠的脾细胞与NS—1小鼠骨髓瘤细胞融合,产生杂交细胞系,经放射免疫试验(RIA)和血凝抑制试验(HAI)筛选分离出分泌抗hCG单克隆抗体(MAb)的PE4克隆。在双抗体放射免疫试验帮助下,确定了PE4—MAb能识别hCG的β亚单位。PE4—MAb能识别hCG的β亚单位。PE4—MAb的亲和力常数为0.4×10~(10)L/M,而与其它有关的人糖肽激素的交叉反应为0.1％。PE4—MAb凝集hCG包被的羊红细胞(SRBC),可用于检测hCG的HAI试验。如此,通过双重筛选过程产生了在RLA和HAI试验中都显示高度敏感性,因而能用于定量检测,而且能通过这两种不同的方法定量检测hCG的一种单克隆抗体。     

CCR9/CCL25介导小鼠经生殖道hCGβ避孕疫苗粘膜免疫后B细胞归巢

目的：探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法：分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6～8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果：经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。     

重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6~8周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。     

分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合增强hCGβ基因疫苗体液免疫应答

目的：提高hCGβ在真核细胞中的表达效率，观察分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗的体液免疫应答。方法：构建带有增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(DPPISS)的高效真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3。分别用pCMV4-DPPLSS-hCGβ-C3d3、pcMV4-DPPLSS-hCGβ和pcMV4-DPPISS-hCGβ联合pcMV4-DPPISS-C3d3免疫BALB／c小鼠，各组免疫剂量分别为5、10、50、100、500μmol，间隔3周相同剂量加强免疫1次。间接ELISA法分析免疫小鼠外周血抗hCGβ抗体动态变化以及IgG亚型。结果：含有DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3较无DPPISS的pCMV4-hCGβ-C3d3在COS-7细胞中的表达效率明显提高。50μmol是BALB／c小鼠hCGβ基因免疫的最佳免疫剂量。C3d3使得BALB／c小鼠hCGβ的免疫原性增强了400倍。hCGβ-C3d3免疫组IgG1／IgG2a比值明显高于hCGβ免疫组和hCGβ与C3d3联合免疫组。结论：分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合能够显著增强hCGβ基因避孕疫苗的体液免疫应答及抗体类型转换。     

hCGβ-C3d3基因免疫BALB/c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hCG-βC3d3和pCMV4-hCGβ免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为50 pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周,MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖;ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hCGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周,hCG-βC3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组;而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hCG-βC3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。     

融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性

目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性.     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经阴道免疫小鼠后的体液免疫应答

目的 用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经阴道黏膜途径免疫不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答及机制。方法 用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb hCGβ经阴道黏膜免疫6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液中抗hCGβ IgG和IgA抗体滴度。分离免疫小鼠脾、子宫、阴道黏膜的淋巴细胞，流式细胞仪分析其中B和T细胞的增殖情况，ELISPOT分析分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞的克隆数。结果 对不同品系小鼠黏膜接种10^9、10^10 Lb hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10^8诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10 Lb hCGβ诱导的抗血清中和hC邰抗原的能力〉100ng／ml。LbhCGβ阴道黏膜免疫后T和B细胞增殖；脾脏、子宫及阴道内均存在抗hCGβIgG及IgA抗体分泌细胞。结论 重组乳酸杆菌活疫苗LbhCGβ可经阴道黏膜免疫诱导有效的免疫应答，产生的应答与免疫剂量呈正相关。黏膜局部及全身T和B细胞克隆增殖；子宫及阴道内抗hCGβIgG和IgA分泌细胞可能是Lb hCGβ阴道黏膜免疫诱导体液免疫的主要来源。     

分泌抗人C_(1q)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以人C_(19)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用固相C_(19)-ELISA筛选和有限稀释法克隆化以后,获得三株(A_4、B_6及D_5)分泌抗人C_(19)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价分别为10~(-3)、10~(-5)及10~(-7)。单克隆抗体与人IgG无交叉反应,与灭活C_(19)呈阴性反应,经人C_(19)吸收后,OD值明显下降,能阻断补体经典途径的活化,从而抑制溶血活性。根据上述结果表明,三株细胞所分泌的单克隆抗体是针对人C_(19)特异性的。经鉴定单克隆抗体A_4属小鼠IgG_(2b)、B_6及D_5属IgG_1亚类。杂交瘤细胞系核型分析表明,染色体数为87～91条。 三株杂交瘤细胞系贮存液氦6个月,体外培养传20代,仍保存分泌特异性单克隆抗体的能力。     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。