地黄益知浸膏对老年性痴呆大鼠海马磷酸化CREB、GSK-3β表达的影响

目的观察地黄益知浸膏（Dihuang Yizhi Jingao,DHYZJG）对老年性痴呆（AD）大鼠学习记忆能力及海马组织环磷酸腺苷反应单元结合蛋白（cyclic AMP response element-binding protein,CREB）、pCREB Ser133、糖原合成酶激酶（glycogen synthase kinase,GSK）-3β、pGSK-3βSer9表达的影响,探索其防治AD的可能机制。方法采用右侧海马注射β淀粉样肽（Aβ）25~35制备AD大鼠模型,用穿梭箱及水迷宫检测其学习记忆能力;应用免疫印迹法测定其CREB、GSK-3β的磷酸化水平。结果DHYZJG可剂量依赖性地改善AD大鼠的学习、记忆能力;与AD组相比,DHYZJG高剂量组海马pCREB Ser133水平显著增高（P〈0.01）,pGSK-3βSer9水平明显增高（P〈0.05）。结论DHYZJG可明显改善AD大鼠认知功能障碍,其机制可能与其上调海马CREB、GSK-3β蛋白的磷酸化水平有关。     

p15^INK4B基因对人胰腺癌细胞系BxPC3增殖的影响

目的探讨p15^INK4B（p15）基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖的影响。方法采用脂质体将pCDNA3．1（＋）-p15质粒及阴性对照pCDNA3．1（＋）-neo质粒转染BxPC3细胞,以亲本细胞作为对照组。应用RT—PCR检测细胞p15^INK4B表达;Western blotting检测细胞p15蛋白表达;MTF法检测细胞增殖;透射电镜观察细胞超微结构变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果p15转染组细胞恢复p15^INK4B和蛋白表达。培养第2天生长被抑制,至第7天,生长抑制率达47．9％。G0／G1期细胞占（61．56±3．96）％,显著高于空质粒转染组的（47．44±6．35）％和对照组的（49．22±7．23）％（P〈0．05）。出现明显的G1凋亡峰,细胞凋亡率为（5．27±1．04）％,显著高于空质粒转染组的（0．11±0．06）％和对照组的（0．09±0．07）％（P〈0．05）。透射电镜观察到p15转染组发生细胞凋亡。结论体外p15基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖,并能诱导其凋亡。     

蛋白激酶B信号通路的干预在慢性脑低灌注大鼠中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(Akt/GSK3β)信号通路是否参与慢性脑低灌注(CCH)大鼠海马细胞凋亡过程。方法选择SD大鼠60只,随机分为假手术组、CCH组、LY294002组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组,每组15只,后3组制作大鼠CCH模型,LY294002组和IGF-1组分别以抑制剂LY294002及激动剂IGF-1进行干预。采用TUNEL检测海马细胞凋亡;Western blot法检测Akt、GSK3β、磷酸化Akt(P-Akt)和磷酸化GSK3β(P-GSK3β)表达。结果与假手术组比较,CCH组、LY294002组及IGF-1组细胞凋亡水平均升高(P<0.05);与CCH组比较,LY294002组细胞凋亡数明显增高(20.33±1.52 vs 15.00±1.00,P<0.05),而IGF-1组细胞凋亡数降低(12.00±1.73 vs 15.00±1.00,P<0.05)。与假手术比较,CCH组和IGF-1组P-Akt,P-GSK3β均明显增高(P<0.05),而LY294002组无明显变化(P>0.05);与CCH组比较,IGF-1组P-Akt,P-GSK3β表达量均升高(P<0.05);LY294002组均降低(P<0.05)。结论 Akt/GSK3β信号通路参与CCH大鼠海马细胞凋亡过程,上调该通路Akt与GSK3β这2种蛋白的磷酸化表达水平,可能是拮抗这种细胞凋亡方式之一。     

水杨酸钠对白介素1β致体外NIT-1胰岛β细胞损伤的保护作用

目的探讨水杨酸钠对白介素（IL）1β致NIT-1细胞损伤的保护作用以及可能的保护机制。方法采用流式细胞技术检测细胞凋亡，Western Blot方法检测细胞核内NF-KBp65蛋白的表达。结果IL-1β＋水杨酸钠（20mmol／L）组的细胞凋亡率和NF-KBp65蛋白含量较单-IL-1β组明显下降，与未干预组无显著差异。结论水杨酸钠能够显著抑制IL-1β诱导的NIT-1细胞凋亡以及IL-1β诱导的NF-KB的活化。     

全反式维甲酸对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白的影响及机制

目的：探讨全反式维甲酸（ ATRA）对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白（ Aβ）的影响及其机制。方法原代培养星形胶质细胞,使用Aβ42诱导原代星形胶质细胞凋亡,分别加入0．01、0．1、1、10μmol/L ATRA进行干预。采用MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测培养基和细胞内Aβ42含量,Western blot 法检测APOE、BACE1表达变化。结果不同浓度的ATRA对Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡作用不同,其中0．1、1μmol/L可以显著抑制Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡（P＜0．05）。细胞外培养基中Aβ含量、细胞内Aβ含量均明显下降（P均＜0．01）。实验组APOE表达上调（P＜0．01）,BACE1表达无明显变化。结论 ATRA可以上调APOE表达,促进星形胶质细胞清除Aβ;低浓度ATRA对星形胶质细胞有保护性作用。     

SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的 研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响.方法 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,以评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法 分别检测细胞中β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少.结论 α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用.     

缺氧诱导因子-1α在老年性痴呆模型鼠海马中的表达

目的 观察老年性痴呆(AD)大鼠行为学、海马神经细胞凋亡率及缺氧诱导因子(HIF)-1α表达水平的变化.方法 侧脑室注射Aβ25～35构建AD大鼠模型,Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习记忆能力,流式细胞术检测海马神经细胞凋亡率, Western印迹技术检测大鼠海马HIF-1α蛋白的表达.结果 Morris水迷宫实验结果显示AD组大鼠平均逃避潜伏期显著延长(P<0.05),流式细胞分析结果显示,AD组海马神经细胞凋亡百分率较正常对照组显著升高(P<0.05),Western印迹检测结果显示,AD组海马神经细胞HIF-1α蛋白表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05).结论 侧脑室注射Aβ25～35成功构建AD大鼠模型并上调海马神经细胞HIF-1α水平表达.     

Notch胞内域1对高糖诱导小鼠肾小球足细胞凋亡的影响

目的通过体外高糖培养小鼠肾小球足细胞,检测Notch胞内域1（NICDl）的表达与肾小球足细胞凋亡的关系并了解其他信号通路是否介导高糖对Notch通路的激活,以探讨治疗糖尿病肾病的潜在方向。方法高糖培养小鼠足细胞,于刺激0、12、24、48、72h后收集细胞,检测NICDl蛋白表达情况。将细胞分为7组：正糖组、高糖组、高糖＋1分泌酶抑制剂（GSI,抑制NICDl活化）组、高糖＋p38细胞分裂素活化蛋白激酶抑制剂组、高糖＋Janus激酶2抑制剂组、高糖＋转化生长因子B,I型受体抑制剂组和高糖＋磷酸肌醇3激酉每／蛋白激酶B抑制剂组。分别采用免疫细胞化学和Westernblotting法检测NICDl的表达,流式细胞术和原位缺口末端标记法（TUNEL）观察足细胞凋亡情况。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高糖培养足细胞NICDl蛋白较正糖组（0．079±0．010）增加,12h开始增加（0．443±0．075）,48h达峰（0．746±0．034）,72h略下降（0．658±0．056,F=6．235,P〈0．01）。流式细胞术及TUNEL显示48h时足细胞凋亡率升高,给予GSI后抑制NICDl的活化及足细胞凋亡（P〈0．01）;给予Janus激酶2（0．193±0．096）和转化生长因子B,I型受体抑制剂（0．225±0．067）可抑制高糖对NICDl蛋白的活化（t=6．781、4．287,均P〈0．叭）。结论高糖通过Notch通路诱导足细胞凋亡,高糖对Notch通路的激活可能通过Janus激酶／转录激活因子和转化生长因子β1／Smad通路。     

当药醇苷对β淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤模型GSK-3β及Akt表达的影响

目的研究当药醇苷对阿尔茨海默病(AD)细胞模型糖原合成酶激酶(GSK)-3β及蛋白激酶B(Akt)表达的影响及机制。方法10μmol/L Aβ作用于PC12细胞制作成AD细胞模型。实验分为正常对照组,模型组,当药醇苷低剂量组,当药醇苷高剂量组,LY294002组,LY294002+当药醇苷高剂量组。结果与正常对照组比较,模型组p-Akt蛋白水平明显下降(P<0.05),而p-GSK-3β蛋白显著升高(P<0.05)。与模型组比较,当药醇苷高、低剂量组p-Akt蛋白表达水平明显升高,p-GSK-3β蛋白表达显著下降(P<0.05);当药醇苷高、低剂量组间比较差异不显著(P>0.05);用LY294002处理的两组p-Akt蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平与正常对照组无显著差异(P>0.05),LY294002+当药醇苷高剂量组与当药醇苷高、低剂量组的p-Akt蛋白和p-GSK-3β蛋白表达水平比较有统计学差异(P<0.05)。结论当药醇苷可以拮抗Aβ导致的AD神经损伤,具有神经细胞保护作用,其作用机制可能通过激活PI3K/Akt信号通路,提高p-Akt蛋白表达水平,抑制该通路下游靶分子p-GSK-3β活性而实现。     

β细胞复制的分子机制

β细胞复制是维持β细胞量的重要形式.本文从Cyclin(细胞周期蛋白)、PDK(磷脂酰肌醇-3-激酶,phosphatidylinositol-3-kinase)、AKT(蛋白激酶B,protein kinase B)、GSK3(糖原合成酶激酶3,glycogen synthase kinase 3)和Wnt信号转导通路,以及抑癌蛋白menin因子等角度讨论β细胞复制的分子机制.     

单硝酸异山梨酯注射液通过调控PI3K/AKT/GSK3β通路改善急性心肌缺血大鼠心功能的研究

目的 探讨单硝酸异山梨酯注射液（isosorbide mononitrate injection,ISMI）对急性心肌缺血（acute myocardial ischemia,AMI）大鼠心功能及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase 3 beta,PI3K/AKT/GSK3β)信号通路的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、AMI模型组、AMI+ISMI组、AMI+PI3K抑制剂组、AMI+ISMI+PI3K抑制剂组，每组8只，冠状动脉结扎法构建AMI大鼠模型，构建成功后各组连续干预14 d。超声心动图检测大鼠心功能指标，多导生理记录仪检测大鼠血液流变学指标，苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin,HE）染色、Masson染色观察大鼠心肌组织损伤情况，TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况，蛋白质印迹（Western blot,WB）法检测大鼠心肌组织中PI3K/AKT/GSK3β通路蛋白表达。结果 与假手术组相比，AMI...     

淀粉蛋白前体β位分解酶1与阿尔茨海默病胶质细胞相关性研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种以进行性认知功能减退为特征的神经变性疾病.大量研究发现AD发病和胶质细胞密切相关,胶质细胞在神经变性病的发病机制中有着不可忽视的作用.在AD疾病早期,它们可局限、分解、吞噬β-淀粉样蛋白(Aβ),阻止Aβ聚集和沉积,维护中枢细胞微环境如转运兴奋性氨基酸、清除自由基等发挥脑保护作用.随着疾病进展,胶质细胞本身受到损伤,不但不能发挥保护作用,反而释放各种有害因子,参与氧自由基形成及兴奋性毒性作用,加重神经元损伤.同时,激活的星形细胞和反应性星形胶质细胞增生本身也会产生β-分泌酶即淀粉蛋白前体β位分解酶1(β-site APP-cleaving enzyme 1,BACE1),分解淀粉前体蛋白(APP),产生Aβ.Aβ在AD发病机制中发挥着决定性作用,Aβ是一种由APP剪切而成的肽,Aβ是在BACE1蛋白切割酶作用下形成的[1].最新研究发现,缺乏BACE1的动物甚至在APP过量表达的时候都不能产生Aβ肽.大量研究表明抑制BACE1表达,AD就会得到控制.因此,BACE1倍受医学界的关注,成为研究AD的一个热点.     

阿托伐他汀通过PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌TNF-α表达的研究

目的：观察阿托伐他汀下调老年大鼠心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的作用及其与过氧化物酶体增殖物激活型受体β／δ（PPARβ／δ）信号通路之间的关系。方法：分离培养24个月龄大鼠的心肌细胞,将心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋PPARβ／δ拮抗剂GSK0660组。各组细胞分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋GSK0660处理。用RT—PCR方法检测各组大鼠衰老心肌细胞的TNF-αmRNA表达水平,用westernblot方法检测各组TNF-α蛋白含量。结果：（1）与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠衰老心肌细胞的TNF-α mRNA和蛋白水平均无显著差异;（2）与空白对照组相比,阿托伐他汀组的TNF-α mRNA和蛋白水平含量均显著降低（P〈0．01）;（3）阿托伐他汀＋GSK0660组的TNF-α mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀可通过激活PPARβ／δ信号通路下调衰老心肌细胞TNF—d的表达。     

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠海马区糖原合酶激酶-3β和磷酸化-tau蛋白的影响

目的观察山茱萸多糖(CFPs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区糖原合酶激酶(GSK)-3β和磷酸化tau(p-tau)蛋白的影响,探讨CFPs对AD大鼠神经元的保护机制。方法将Wistar大鼠100只随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、CFPs组。采用D-半乳糖联合Aβ1~40制备AD模型,采用免疫组化(SABC)法检测海马CA1区GSK-3β和p-tau蛋白表达量,Western印迹法检测海马GSK-3β和p-tau蛋白表达量。结果与模型组比较,CFPs和多奈哌齐可显著降低AD大鼠海马区GSK-3β和p-tau蛋白表达量(P<0.05),CFPs组和多奈哌齐组GSK-3β和ptau蛋白表达量无显著差异(P>0.05)。结论 CFPs通过抑制大鼠海马区GSK-3β蛋白表达从而降低tau蛋白过度磷酸化,实现其对AD大鼠神经元的保护作用。     

丙戊酸钠对Aβ25～35诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨丙戊酸钠(VPA)对β淀粉样蛋白(Aβ25～35)诱导的PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞随机分为正常组,Aβ25～35组(20μmol/L的Aβ25～35),VPA低、中、高剂量组(2.5、5.0,10.0μmol/L VPA+20μmol/L的Aβ25～35)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式双染检测细胞凋亡,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Caspase9活性,Western印迹检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(PI3K/AKT/GSK3β)信号通路激活情况。结果与正常组比较,Aβ25～35组细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡率、Caspase3、Caspase9活性显著提高(P0.01),Bax、p-GSK3β表达量显著上调(P0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT表达量显著下调(P0.01)。与Aβ25～35组比较,VPA低、中、高剂量组细胞活力显著提高(P0.01),细胞凋亡率、Caspase3、Caspase9活性显著降低(P0.01),Bax表达量显著下调(P0.01),Bcl-2、p-AKT表达量显著上调(P0.01),VPA中、高剂量组细胞中p-GSK3β表达量显著下调(P0.01),PI3K表达量显著上调(P0.01)。结论 VPA可能通过抑制PI3K/AKT/GSK3β信号通路抵抗Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡。     

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。     

二十烷酸对大鼠皮质神经元Aβ生成的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α的干预作用

目的 观察二十烷酸(EA)对神经元Aβ生成途径的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的干预作用.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元分为3组:对照组、EA组、EA+ Wy14 643组.EHSA法检测培养液中Aβ含量,Western印迹法检测神经元β-淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)蛋白表达,RT-PCR法分析脂酰辅酶A氧化酶(ACOX1)mRNA表达.结果 EA组细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成增多(P ＜0.01,P＜0.05),ACOX1 mRNA表达加强(P＜0.05);应用PPARα激活剂Wy14 643干预后,ACOX1 mRNA表达进一步加强(P＜0.05),细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成减少(P＜0.01,P＜0.05).结论 饱和脂肪酸可能通过促进Aβ生成在AD发病机制中起重要作用,激活PPARα有效降低了饱和脂肪酸所致的Aβ生成.     

2-4脱氧葡萄糖在内质网应激预处理诱导脑缺血耐受中的作用

目的观察2-脱氧葡萄糖（2-DG）诱导内质网应激（ERS）预处理时GRP78、Bcl-2、Bax的变化,探讨2-DG在脑缺血耐受中的作用。方法将64只SD大鼠随机均分为假手术组（SH组）、缺血/再灌注组（I/R组）、ERS预处理组（IP组）、IP＋I/R组。采用原位末端标记法检测海马CA1区凋亡细胞,免疫组化法、Western-Blot法检测GRP78、Bcl-2及Bax蛋白在海马CA1区的表达。结果与I/R组比较,IP＋I/R组GRP78、Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达及细胞凋亡明显减少（P〈0.05或〈0.01）。结论 2-DG上调GRP78时也上调Bcl-2表达,减轻神经细胞凋亡,起到脑保护作用;2-DG可抑制Bax表达,减弱其对神经细胞的损害,使细胞存活。     

JNK抑制剂SP600125对游离脂肪酸诱导β细胞凋亡的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP60012,5在游离脂肪酸（FFA）诱导的胰岛G细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法观察FFA对小鼠13Tc3细胞生长的抑制作用,流式细胞术观察细胞凋亡率,免疫细胞化学和Westernblot法检测β—JNK、p-c-Jun在FFA作用下及SP600125阻断JNK信号通路情况下的表达。结果FFA可诱导体外生长的βTc3细胞凋亡,与对照组比较明显增加（P〈0．05）。FFA诱导βTc3细胞凋亡过程中,β—JNK和p-c-Jun蛋白显著增加（P〈0．05）;用SP60012s预处理βTc3细胞后,β—JNK和p-c-Jun蛋白含量较未处理组明显减少（P〈0．05）。结论FFA可诱导小鼠βTc3细胞凋亡,凋亡过程通过JNK途径实现。     

原花青素对β-淀粉样肽（25—35）诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β-淀粉样肽（25-35）（hi325弗）诱导凋亡PCI2细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT—PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h，可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡，增加细胞存活率，减少Aβ25-35引起的细胞核固缩、核碎裂，降低baxmRNA及Bax蛋白表达，增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。