产妇子宫平滑肌组织RhoA/Rho激酶及Hsp27表达和宫缩乏力性产后出血的关系探讨

选取我院在2011年4月²012年4月收治的80名产妇为研究对象,其中30名产妇出现宫缩乏力性产后出血,作为试验组,另外50名产后未出现宫缩乏力性出血产妇作为对照组。分别测定两组的子宫平滑肌收缩幅度和频率,应用荧光定量法测定两组的子宫平滑肌组织RhoA/Rho、Hsp27的mRNA表达水平,运用蛋白印迹法测定子宫平滑肌组织Hsp27、Ser15位点磷酸化Hsp27的蛋白表达的水平。结果试验组的子宫平滑肌收缩幅度、频率以及RhoA/Rho、Hsp27的mRNA表达水平和RhoA/Rho、Hsp27、Ser15位点磷酸化Hsp27的蛋白表达的水平均低于对照组,比较有明显差异(P<0.05),有统计学意义。试验组子宫平滑肌组织RhoA/Rho、Hsp27的mRNA表达水平与子宫收缩幅度、频率有正相关,而两个指标在试验组都较低,同时试验组RhoA/Rho、Hsp27、Ser15位点磷酸化Hsp27的蛋白表达水平较低,说明RhoA/Rho激酶、Hsp27表达降低与宫缩乏力性产后出血有关。     

5种mRNA和蛋白表达水平在宫缩乏力性产后出血诊断中的价值

目的探索热休克蛋白27(Hsp27)、间隙连接蛋白43(CX43)、RhoA、Rho相关激酶(ROCK)Ⅰ、ROCKⅡmRNA和蛋白表达水平在宫缩乏力性产后出血诊断中的价值。方法将2015年9月至2018年4月于该院分娩后发生宫缩乏力性产后出血的产妇纳入观察组(n=89),未发生产后出血的产妇纳入对照组(n=90)。比较两组产妇临床资料,子宫平滑肌收缩频率、幅度和活动力,子宫平滑肌Hsp27、CX43、RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡmRNA与蛋白的表达量,并分析其与子宫平滑肌收缩活动力的相关性。结果两组产妇年龄、体质量指数、产次、新生儿体质量、孕周、凝血4项和国际标准化比值水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。观察组子宫平滑肌收缩频率、幅度和活动力小于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组子宫平滑肌Hsp27、CX43、RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡmRNA和蛋白表达量小于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Hsp27、CX43、RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡmRNA及蛋白表达量均与子宫平滑肌收缩活动力呈正相关(P0.05)。结论 Hsp27、CX43、RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡmRNA及蛋白表达量的检测与子宫平滑肌的收缩能力相关,对诊断宫缩乏力性产后出血具有重要价值。     

RhoA/ROCK信号通路在人骨关节炎软骨中的表达

目的探讨RhoA/ROCK信号通路在人骨性关节炎中的作用。方法行关节置换手术的骨性关节炎患者20例,取其骨性关节炎软骨组织为骨性关节炎组;行髋关节置换手术股骨颈骨折患者20例,取其正常软骨组织为对照组。2组取软骨组织培养软骨细胞,采用免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原蛋白表达情况,采用Western blot法检测软骨细胞RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达情况,采用RT-PCR检测软骨细胞RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA表达情况,并进行比较。结果细胞免疫组织化学结果显示,2组Ⅱ型胶原蛋白均阳性,其中骨性关节炎组细胞染色明显深于对照组;骨性关节炎组软骨细胞RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA(0.772±0.160、0.979±0.152、0.916±0.143)和蛋白(1.15±0.04、1.65±0.68、1.94±0.45)表达水平高于对照组(mRNA:0.501±0.136、0.762±0.125、0.683±0.114,蛋白:1.02±0.09、1.11±0.4、1.41±0.46),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 RhoA/ROCK信号通路在人骨性关节炎软骨中的表达明显高于正常软骨,可能是导致骨性关节炎形成的重要原因之一。     

法舒地尔和RhoA沉默对神经干细胞增殖的影响

背景：Rho及其相关分子在神经轴突生长、分化、延伸及突触形成中起重要作用,阻断和抑制RhoA/ROCK通路可促进神经干细胞的增殖与生长。目的：观察Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠神经干细胞增殖的影响。方法：体外培养Wistar胎鼠神经干细胞,分6组干预：空白对照组,5,10,15,20μmol/L法舒地尔组,siRNA沉默RhoA基因组。干预后第3天,采用RT-PCR,Westernblot检测各组神经干细胞RhoA基因及蛋白的表达。应用MTT比色法观察神经干细胞增殖情况;采用流式细胞术测定神经干细胞周期分布的变化。结果与结论：15,20μmol/L法舒地尔组、siRNA沉默RhoA基因组神经干细胞RhoA基因及蛋白表达量较5,10μmol/L法舒地尔组、空白对照组明显降低（P〈0.05）,细胞的生长速度较5,10μmol/L法舒地尔组、空白对照组明显增快（P〈0.05）,细胞周期G0/G1期减少（P〈0.05）,S期细胞数增多（P〈0.05）。当法舒地尔浓度增加到20μmol/L时对细胞的作用并非随浓度的增加而增强,与15μmol/L组的差异无显著性意义（P〉0.05）。15,20μmol/L法舒地尔组与siRNA沉默RhoA基因组相比差异无显著性意义（P〉0.05）。说明Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默在体外均能促进神经干细胞增殖,法舒地尔最佳作用浓度为15μmol/L。     

外周血外泌体及RhoA/ROCK信号通路与系统性红斑狼疮血小板减少患者出血症状的相关性

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)免疫性血小板减少患者有出血症状组及无出血症状组外周血外泌体的表达,以及外周血单个核细胞(MNC)RhoA/ROCK信号通路的变化,探讨影响出血症状的相关机制。方法收集2018年1月至2020年1月在青岛大学附属医院风湿免疫科诊断为SLE并免疫性血小板减少22例患者的资料,按照有无出血症状分为2组,收集患者外周血,分离血浆外泌体,通过透射电镜观测外泌体,蛋白免疫印迹法检测外泌体标志物CD63、CD81表达。Pull-down法检测外周血MNC的RhoA/ROCK信号通路的活化,采用RT-PCR检测MNC的RhoA/ROCK信号通路mRNA的表达,并分析mRNA的表达与临床指标的相关性。结果与无出血症状组比较,SLE免疫性血小板减少患者有出血症状组血浆外泌体减少;与无出血症状组比较,有出血症状组RhoA/ROCK信号通路活化及mRNA表达升高,2组差异有统计学意义(P均<0.05)。SLE免疫性血小板减少患者RhoA/ROCK信号通路m RNA的表达与血小板计数呈负相关(RhoA:r=-0.333,P=0.032;ROCK:r=-0.475, P=0.046),与SLEDAI评分呈正相关(RhoA:r=0.435, P=0.042; ROCK:r=0.462, P=0.047)。结论血浆外泌体及外周血MNC的RhoA/ROCK信号通路可能参与了SLE免疫性血小板减少患者的出血症状调控。     

蒜素对神经样细胞RhoA活性和轴突生长的影响

【目的】探讨蒜素（Allicin）对神经样PCI2细胞Rho亚家族蛋白A（RhoA）活性和轴突生长的影响。【方法】体外培养神经样PCI2细胞,RhoA激动剂溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）诱导RhoA活化,并使用Allicin干预,Western blot检测RhoA、相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（R0ck1）、相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2（Rock2）、轴突生长蛋白神经微丝（NF）、突触蛋白（synapsin）、突触素（synaptophysin）表达并比较。【结果1I。PA作用诱导RhoA活化,RhoA、ROCK1、ROCK2过表达,NF、synapsin、synaptophysin表达显著降低。Allicin干预处理后,RhoA活化被抑制,RhoA、ROCK1、ROCK2表达下调;恢复NF、synapsin、synapto—physin表达。【结论】Allicin干预能有效缓解LPA处理PCI2细胞诱导的RhoA活化和对轴突生长的抑制;提示Allicin可通过抑制RhoA的活化促进轴突生长。     

针灸预处理对大鼠心肌缺血/再灌注后高迁移率族蛋白B1的影响

目的：探讨针灸预处理对大鼠心肌缺血/再灌注（I/R）后的保护作用以及对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达的影响。方法选择60只Wistar大鼠,按随机数字表法分为假手术组、心肌I/R模型组、针灸预处理组,每组20只。采用结扎冠状动脉左室支左心耳下缘约0.5 cm处阻断血流10 min后再灌注1 h制备I/R损伤模型;假手术组仅穿线不结扎;针灸预处理组于I/R前7 d给予每日1次电针内关穴20 min,连续治疗7 d。采用苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察心肌组织病理学变化,半定量积分法计算3组心肌组织病理学评分;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆HMGB1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）的含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测心肌组织HMGB1、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平。结果光镜下可见心肌I/R模型组心肌纤维部分断裂,心肌细胞大片状坏死,边界不清,细胞出现浓缩、破裂、溶解、甚至消失,间质水肿并伴大量炎性细胞浸润;针灸预处理组上述表现较心肌I/R模型组明显减轻。与假手术组比较,心肌I/R模型组HMGB1、TNF-α、cTnT含量和组织病理学评分均明显升高〔HMGB1（μg/L）：9.64±1.16比2.15±.031,TNF-α（μg/L）：91±22比19±5, cTnT（μg/L）：1.50±0.35比0.07±0.03,组织病理学评分（分）：2.5±0.3比0.0±0.0,均P＜0.01〕,HMGB1、MCP-1、TNF-αmRNA和蛋白表达均明显升高（HMGB1 mRNA：1.42±0.16比0.02±0.00,MCP-1 mRNA：0.46±0.06比0.01±0.00,TNF-αmRNA：0.75±0.04比0.03±0.00;HMGB1蛋白：1.08±0.01比0.02±0.01, MCP-1蛋白：0.92±0.03比0.40±0.01,TNF-α蛋白：1.10±0.02比0.35±0.01,P＜0.05或P＜0.01）;与心肌I/R模型组比较,针灸预处理组HMGB1（6.58±0.73）、TNF-α（63±19）、cTnT（1.15±0.31）含量均明显降低（均P＜0.01）,HMGB1、MCP-1、TNF-αmRNA和蛋白表达明显降低（mRNA表达分别为0.74±0.12、0.18±0.02、0.10±0.03,蛋白表达分别为0.40±0.01、0.36±0.02、0.50±0.02,均P＜0.05）,组织病理学评分（1.2±1.0）明显降低（P＜0.01）。结论针灸预处理可减轻大鼠心肌I/R损伤,其机制可能与减轻HMGB1介导的晚期炎症反应有关。     

乌司他丁对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及机制

目的阐明乌司他丁（UTI）对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。 方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象,建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型,分别用UTI和TNF-α处理细胞,采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性;Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）的表达变化情况。 结果与正常对照组相比,TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,差异具有统计学意义[（33.67±4.04）Ω/cm² vs（67.17±3.81）Ω/cm²,t=10.435,P<0.01],细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,VE-cadherin的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而UTI可逆转上述变化情况;与UTI处理组相比,RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高,VE-cadherin表达降低,细胞通透性增加,差异具有统计学意义（均P<0.05）,而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化,差异无统计学意义（均P>0.05）。 结论UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加,改善血管内皮屏障功能障碍。     

外源性过氧亚硝酸盐对大鼠血管收缩功能的影响的研究

目的观察外源性过氧亚硝酸盐（ONOO-）对SD大鼠胸主动脉血管收缩功能的影响。方法雄性SD大鼠40只,随机分为4组：对照组：等量KH溶液孵育;ONOO-孵育组：ONOO-（5斗moL／L,5min）孵育;分解的ONOO-孵育组：分解的ONOO-（5μmoL／L,5min）孵育;ONOO-＋ONOO-清除剂-尿酸盐孵育组：ONOO-（5μmoL／L,5min）孵育5min后,再加入尿酸盐（100μL／ml,30min）孵育。以去除内皮的大鼠胸主动脉作为实验标本。分别检测各组血管收缩功能、Rho蛋白A／Rho激酶（RhoA／ROCK）表达水平和硝基酪氨酸表达水平的差异。结果与其他三组相比,ONOO-孵育组血管的收缩反应显著增强;与对照组相比,从10-5moL／L苯肾上腺素（PE）浓度开始,分解的ON00-孵育组血管的收缩反应显著增强;与对照组相比,ONOO-＋尿酸盐孵育组血管的收缩反应无显著差异;与ONOO-＋尿酸盐孵育组相比,分解的ONOO-孵育组血管的收缩反应显著增强。同时,ONOO-孵育组血管ROCK蛋白表达水平显著高于其他三组。ONOO-孵育组血管中硝基酪氨酸的表达水平显著高于其他三组。结论氧化应激参与大鼠大动脉血管收缩反应的调节;同时,血管ROCK蛋白表达水平增加。     

藏红花素对脊髓损伤大鼠运动功能、炎症的影响及机制研究

目的 探讨藏红花素对脊髓损伤大鼠运动功能、炎症及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法 构建脊髓损伤大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、藏红花素低(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组、甲泼尼龙琥珀酸钠(30 mg/kg)组,每组12只;另取12只大鼠作为假手术组。各组给予对应药物干预14 d(每天1次)。评估大鼠运动功能,并采用苏木素-伊红和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法染色分别观察脊髓组织病理变化和细胞凋亡,酶联免疫吸附试验法检测脊髓组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测脊髓组织RhoA、ROCK1、ROCK2信使RNA(mRNA)和蛋白水平。结果 假手术组大鼠脊髓组织结构正常,无明显变化;与假手术组相比,模型组大鼠脊髓组织出现坏死灶,伴随嗜伊红色素颗粒生成,可见较多胶质瘢痕及空洞,BBB评分显著降低(P<0.05),脊髓组织细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA...     

血必净注射液对卵蛋白致敏小鼠气道MUC5AC及Th1／Th2细胞因子表达的影响

目的研究血必净注射液对卵蛋白（OVA）致敏小鼠气道MUC5AC及Th1/Th2细胞因子表达的影响,探讨干预气道黏液高分泌的机制。方法卵蛋白腹腔注射致敏小鼠,32只小鼠随机分组为：对照组、哮喘组、地塞米松治疗组和血必净治疗组,每组8只,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ的水平变化,实时RT-PCR检测小鼠肺组织MUC5AC mRNA表达变化。结果 （1）与对照组小鼠气道MUC5A mRNA表达（0.377±0.021）相比,哮喘组（1.103±0.087）明显增多（P〈0.01）;地塞米松治疗组（0.403±0.038）及血必净治疗组（0.437±0.031）小鼠气道MUC5A mRNA表达较哮喘组明显降低（P〈0.01）;（2）与对照组小鼠BALF表达IL-4[（22.812±1.978）ng/L]及IFN-γ[（101.232±9.664）ng/L]比较,哮喘组BALF表达IL-4[（87.234±6.901）ng/L]水平升高（P〈0.01）,而IFN-γ表达[（47.231±3.887）ng/L]明显降低（P〈0.01）;与哮喘组比较,地塞米松治疗组（[36.289±3.012）ng/L]及血必净治疗组IL-4水平[（38.112±2.761）ng/L]均显著降低（P〈0.01）;结论血必净注射液降低IL-4和MUC5AC的表达,提示在抑制气道黏液高分泌及控制哮喘方面具有意义。     

法舒地尔和RhoA沉默对神经干细胞增殖的影响

背景:Rho及其相关分子在神经轴突生长、分化、延伸及突触形成中起重要作用,阻断和抑制RhoA/ROCK通路可促进神经干细胞的增殖与生长.目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠神经干细胞增殖的影响.方法:体外培养Wistar胎鼠神经干细胞,分6组干预:空白对照组,5,10,15,20 μmol/L 法舒地尔组,siRNA 沉默RhoA基因组.干预后第3天,采用RT-PCR,Western blot检测各组神经干细胞RhoA基因及蛋白的表达.应用MTT比色法观察神经干细胞增殖情况;采用流式细胞术测定神经干细胞周期分布的变化.结果与结论:15,20 μmol/L 法舒地尔组、siRNA 沉默RhoA基因组神经干细胞RhoA基因及蛋白表达量较5,10 μmol/L 法舒地尔组、空白对照组明显降低(P < 0.05),细胞的生长速度较5,10 μmol/L 法舒地尔组、空白对照组明显增快(P < 0.05),细胞周期G0/G1期减少(P < 0.05),S期细胞数增多(P < 0.05).当法舒地尔浓度增加到20 μmol/L时对细胞的作用并非随浓度的增加而增强,与15 μmol/L组的差异无显著性意义(P > 0.05).15,20 μmol/L 法舒地尔组与siRNA 沉默RhoA基因组相比差异无显著性意义(P > 0.05).说明Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默在体外均能促进神经干细胞增殖,法舒地尔最佳作用浓度为15 μmol/L.     

狼疮性肾炎患者尿 IL-17，NGAL 及 HMGB1 水平变化及其临床意义

目的　探讨尿白细胞介素 -17（IL-17）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）与高迁移率族蛋白 B1（HMGB1）水平在狼疮性肾炎（LN）中的变化及其临床意义。方法　选取三亚中心医院收治的 LN 患者 106 例,即Ⅱ型,Ⅲ型,Ⅳ型,Ⅴ型和Ⅵ型分别为 18,17,43,21 和 7 例。采用 SLE 病情活动指数（SLEDAI）评分将 106 例 LN 患者分为 LN 稳定组（n=37,SLEDAI 评分＜ 10 分）和 LN 活动组（n=69,SLEDAI 评分≥ 10 分）,采用酶联免疫吸附法测定各组尿 IL-17,NGAL 及 HMGB1 水平。应用 ROC 曲线分析尿 IL-17,NGAL 及 HMGB1 水平预测活动性 LN 的价值。结 果 LN 组 尿 IL-17（146.30±38.24ng/L vs 48.70±11.25ng/L）,NGAL（230.72±65.20ng/ml vs 27.36±6.40ng/ml）和 HMGB1（21.73±6.25μg/L vs 3.46±1.20μg/L）水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=15.826,18.847,14.715,均 P<0.001）。LN 活动组尿 IL-17（171.42±45.26ng/L vs 120.28±26.70ng/L）,NGAL（257.63±69.24ng/ml vs196.35±47.38ng/ml）和 HMGB1（27.16±7.83μg/L vs 16.15±4.17μg/L）水平均明显高于 LN 稳定组,差异均有统计学意义（t=10.264,13.718,9.516,均 P<0.001）。不同分型 LN 患者尿 IL-17,NGAL 及 HMGB1 水平均明显高于对照组（F=8.615,12.217,8.295,P<0.001）,且Ⅴ～Ⅵ型组和Ⅳ型组尿 IL-17,NGAL 及 HMGB1 水平均明显高于Ⅱ～Ⅲ型组（P<0.001）,差异有统计学意义。ROC曲线显示,IL-17,NGAL及HMGB1三项联合预测活动性LN的曲线下面积（0.918,95%CI:0.856~0.982）最大,其敏感度（92.6%）和特异度（86.5%）较好。结论 LN 患者尿 IL-17,NGAL 及 HMGB1水平明显升高,且与 LN 活动性及病理分型相关,三项联合预测活动性 LN 具有较高的价值。     

水扩张联合透明质酸钠治疗膀胱疼痛综合征／间质性膀胱炎的疗效及护理

目的探讨水扩张联合透明质酸钠膀胱灌注治疗膀胱疼痛综合征／间质性膀胱炎（PBS／IC）的疗效及护理措施。方法22例女性膀胱疼痛综合征／间质性膀胱炎患者临床予以水扩张联合透明质酸钠膀胱灌注治疗,辅以行为训练及心理护理,观察分析患者手术前后每日排尿次数、疼痛程度评分,0’Leary—Sant评分,判断水扩张联合透明质酸钠膀胱灌注的疗效并总结护理要点。结果22例患者6个月后排尿次数由治疗前的（21．55±3．37）次,降低到治疗后的（13．08±2．03）次,组间比较差异具有统计学意义（t=2．45,P〈0．05）;疼痛症状评分由治疗前的（6．89±1．42）分,降至治疗后的（3．06±1．02）分组间比较差异具有统计学意义（t=1．98,P〈0．05）;O’Leary—Sant评分由治疗前（24．26±3．24）分,降低到治疗后（12．13±2．10）分,组间比较差异具有统计学意义（t=2．32,P〈0．05）。结论麻醉下水扩张联合透明质酸钠膀胱灌注可改善PBS／IC患者的症状,提高患者生活质量,配合针对性的行为训练及心理护理,增强患者对治疗的信心有重要的意义。     

圆盘状受体反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达和胶原合成的抑制作用

目的:观察硫代修饰和脂质体包埋的反义寡核苷酸(ASODN)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞圆盘状受体基因表达及其对瘢痕疙瘩胶原抑制的影响。方法:实验于2005-03/2006-01进行。收集解放军第二军医大学长海医院整形外科手术切除的4例瘢痕疙瘩(供体知情同意),采用组织块培养法进行细胞培养。并将经脂质体包埋并全硫代修饰后的圆盘状受体ASODN加入培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中,实验分6组,ASODN 5,10,20 μmol/L组、无寡核苷酸组、单纯脂质体及空白对照组。采用反转录-聚合酶链反应技术及[3H]-脯氨酸掺入法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体1 mRNA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达相对量及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成分泌的影响。结果:①圆盘状受体1 mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.19,1.19±0.37,0.49±0.14,2.61±0.47,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10 μmol/L组(P<0.01)。②Ⅰ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.59,1.46±0.17,0.19±0.27,3.31±0.53,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。③Ⅲ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(0.73±0.36,0.61±0.23,1.16±0.43,P<0.01)。④Ⅰ型胶原mRNA/Ⅲ型胶原mRNA:空白对照组为4.50±0.12,ASODN 5,10,20 μmol/L组均低于空白对照组(2.40±0.11,2.00±0.06,1.50±0.07,P<0.05,0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。⑤胶原合成分泌量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(P<0.01)。ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5 μmol/L组(P<0.01)。结论:圆盘状受体-ASODN能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达,显著抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达,调整Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原比例,并抑制胶原合成和分泌。     

自噬相关基因及蛋白在急性脊髓损伤后大鼠膀胱表达的实验研究

目的 观察自噬相关基因、蛋白在急性期脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌组织中的表达。 方法 选取24只雄性Wistar大鼠并随机分为模型组（12只）及对照组（12只）。模型组采用改良Allen′s法建立脊髓损伤模型,对照组仅予以椎板切除处理。于术后6h对2组大鼠进行BBB运动评分,采用尼氏染色观察2组大鼠脊髓形态学变化,采用Western blotting和免疫荧光染色法检测膀胱平滑肌细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62表达,采用RT-PCR检测膀胱平滑肌自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达。 结果 模型组大鼠下肢运动功能BBB评分较对照组明显降低（P<0.05）。尼氏染色观察可见模型组神经元及尼氏小体数量减少;Western blotting染色提示模型组LC3-Ⅱ表达较对照组增高（P<0.05）,P62表达较对照组降低（P<0.05)。免疫荧光染色法提示模型组膀胱平滑肌LC3阳性细胞率较对照组增高（P<0.05),P62阳性细胞率较对照组降低（P<0.05）。RT-PCR检测发现模型组LC3及Beclin1 mRNA水平较对照组升高(P<0.05）,P62 mRNA水平较对照组降低(P<0.05）。 结论 自噬在急性脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌中表达活跃,可能与脊髓损伤后神经源性膀胱发病机制有关。     

乌司他丁抑制肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞高通透性的机制研究

目的探讨乌司他丁（UTI）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。 方法离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926,分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926,小室法测单层细胞通透性,免疫荧光法测磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1（p-MYPT1）的表达;分别采用免疫细胞化学法、Western Blot法测与通透性相关的关键分子（RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin）表达的变化情况。 结果TNF-α作用下EA.hy926单层细胞通透性增加,细胞内p-MYPT1的表达量较正常对照组明显增加,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化情况;免疫细胞化学结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下RhoA、ROCK2的表达明显增加,而UTI可抑制RhoA、ROCK2的高表达;Western Blot结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下p-MYPT1、RhoA和ROCK2的表达明显增加,VE-cadherin的表达明显降低（均P<0.05）,而UTI可抑制p-MYPT1、RhoA和ROCK2蛋白的高表达,增加VE-cadherin的表达。 结论UTI可能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加。     

膀胱水扩张加托特罗定膀胱内灌注治疗间质性膀胱炎

目的探讨膀胱水扩张与托特罗定灌注治疗间质性膀胱炎的疗效。方法将20例间质性膀胱炎患者随机分为A、B2组,每组10例。A组采用单纯膀胱水扩张治疗;B组采用膀胱水扩张加托特罗定灌注治疗。比较2组的临床疗效及2组治疗前后排尿次数、膀胱初感觉容量、能耐受的膀胱的最大容董与间质性膀胱炎症状评分（IC—SI）、问题评分（ICPI）的变化。结果20例患者随访10个月,A组2例失访,B组1例失访。A组总有效率50．0％,13组66．7％,2组总有效率相比,差异有统计意义（P〈0．05）;2组患者治疗前后参数比较均有明显改善（P〈0．05）。B组的改善程度明显好于A组（P〈0．05）。结论膀胱治疗性水扩张和膀胱逐步训练能有效治疗间质性膀胱炎,辅助运用托特罗定能加强治疗效果。     

E-钙黏附蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中E-钙黏附蛋白（CDH1）表达及其与BTCC发病机制间的相关性。方法 BTCC患者36例,分别取血液、肿瘤、癌旁组织标本。对照组30例,取血液标本。ELISA法测定血浆中CDH1,免疫组化法检测组织CDH1的表达。竞争性PCR方法半定量分析组织中CDH1表达。结果 BTCC组血浆中CDH1（3.4±1.6）ng/ml较非肿瘤组（6.3±2.7）ng/ml低（P〈0.05）。免疫组化示BTCC组织中CDH1表达阳性率为33.3%（11/36）,癌旁组织中的表达阳性率为63.8%（23/36）,BTCC组织CDH1mRNA水平与癌旁组织比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CDH1基因表达下调可能在BTCC发生中发挥重要作用。     

烟碱对心肌缺血/再灌注损伤大鼠炎症细胞因子的影响

目的 探讨烟碱对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠炎症细胞因子的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、I/R组、烟碱高剂量(400μg/kg)组、烟碱低剂量(40μg/kg)组及α-银环蛇毒素(α-BGT,1μg/kg)组5组,每组10只.采用结扎心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注90 min制作大鼠心肌I/R损伤模型;假手术组仅穿线不结扎.制模前30 min各药物组颈静脉注射相应剂量药物干预,假手术组和I/R组给予等量生理盐水.于再灌注末取右颈动脉血,测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-10浓度和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)活性;然后处死动物,取缺血区心肌组织测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应检测心肌组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白及mRNA表达,并观察心肌超微结构.结果 与假手术组比较,I/R组血浆TNF-α、IL-8、IL-10、CK-MB、cTnI、心肌MPO活性及ICAM-1蛋白和mRNA表达均显著升高[TNF-α(ng/L):158.7±32.7比31.5±5.8,IL-8(ng/L):0.71±0.06比0.30±0.04,IL-10(ng/L):69.0±7.8比41.4±4.3,CK-MB(U/L):2 540±169比1 120±102,cTnI(μg/L):26.2±4.6比0.9±0.2,MPO(U/g):4.2±0.6比1.6±0.4,ICAM-1蛋白:0.210±0.025比0.100±0.018,ICAM-1 mRNA:1.82±0.23比1.18±0.20,P＜0.05或P＜0.01],病理学显示心肌组织损伤较重.与I/R组比较,烟碱高剂量组血浆TNF-α、IL-8降低[TNF-α(67.3±9.8)ng/L,IL-8(0.47±0.04)ng/L],IL-10升高[(147.5±12.5)ng/L],CK-MB、cTnI及心肌MPO活性、ICAM-1蛋白和mRNA均降低[CK-MB(1 282±145)U/L,cTnI(4.7±1.4)μg/L,MPO(2.5±0.4)U/g,ICAM-1蛋白0.140±0.026,ICAM-1 mRNA 1.31±0.25,P＜0.05或P＜0.01],心肌组织损伤减轻;而烟碱低剂量组和α-BGT组上述指标与I/R组比较差异无统计学意义.结论 烟碱可阻断内皮细胞表达黏附分子,阻断中性粒细胞黏附、游出,改善抗炎/促炎反应平衡,从而拮抗大鼠心肌I/R损伤时的过度炎症反应.