不同转移潜能肝癌细胞株中CD标志物的表达差异及意义

目的探讨不同转移潜能的肝癌细胞株中几种CD标记物的表达差异及其意义,为进一步利用CD分子标志物分离多潜能肝癌干细胞奠定基础。方法常规培养三种不同转移潜能的肝癌细胞株HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1,胰酶消化获得单细胞悬液后,经流式抗体染色,通过流式细胞仪分析三种肝癌细胞株中CD133、CD90、CD44、CD34、CD24的表达差异及意义。结果 CD133+细胞在HepG2细胞株仅占0.1%,而在MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中表达也较低;CD90+、CD44+、CD90+CD44+表达水平随细胞转移潜能的增加呈递增趋势(P<0.05)。CD44+CD24+在HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中的阳性表达率分别为0.05%、10.3%和0.3%(P<0.05);三者中均无CD34+和CD133+CD90+细胞表达。结论 CD90和CD44与肝癌细胞的转移潜能有一定的相关性,可能成为潜在的肝癌肿瘤干细胞标记物。     

肝癌MHCC97H细胞中CD133~+和CD133~-亚群分选及其生物学特性

目的分选肝癌MHCC97H细胞中的CD133+和CD133-细胞亚群,并初步探讨CD133+细胞亚群的干细胞特性。方法用磁珠分选技术分选MHCC97H细胞株中的CD133+和CD133-细胞亚群,用流式细胞仪检测分选前后CD133的表达,用MTT法检测其增殖能力,比较其体内成瘤能力,用Western印迹法检测其干细胞相关基因蛋白的表达。结果分选前后MHCC97H细胞中CD133表达分别为(1.09±0.43)vs(86.65±6.49)%(P<0.01)。与CD133-亚群相比,CD133+亚群的体外增殖能力较强,成瘤能力高,高表达干细胞相关基因蛋白(P<0.05,P<0.01)。结论肝癌细胞株MHCC97H中的CD133+细胞亚群具有肿瘤干细胞的特性;CD133是人肝癌MHCC97H细胞株的肿瘤干细胞的表型之一。     

单克隆培养法分离、培养胶质瘤干细胞

目的 观察单克隆培养法从人脑胶质瘤细胞系SHG44中分离、培养肿瘤干细胞的结果.方法 取对数生长期SHG44细胞,用无血清培养基进行肿瘤干细胞的分离培养及单克隆培养,免疫荧光染色法对分化前后的肿瘤球行CD133、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、小管蛋白3-Tubulin染色,MTT法检测肿瘤于细胞的增殖情况,流式细胞术检测CD133阳性细胞比例.结果 单克隆分离培养的细胞球表达CD133及Nestin干细胞标记物,分化后表达星形胶质细胞GFAP及神经元β-Tubulin标记物,细胞球生长约第5天增殖率达到峰值.结论 单克隆培养法可成功分离培养出胶质瘤干细胞,分化前后的细胞球可表达干细胞标记物、神经胶质细胞及神经元标记物,肿瘤球具有较强的增殖及分化能力,并含有一定数量的CD133阳性细胞.     

Oct4通过类泛素修饰途径维持胶质瘤干细胞增殖潜能

目的研究类泛素蛋白(SUMO)与肿瘤干细胞"干性"诱导基因Oct4共同维持胶质瘤干细胞于持续增殖状态的分子机制。方法采用极低密度细胞接种法培养C6胶质瘤肿瘤干细胞克隆球,血清还原+免疫荧光方法验证肿瘤干细胞分化能力。实验设对照组、无义组和SUMO1组。持续测量克隆球直径,免疫荧光方法检测Ki67、CD133、巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况,Western blot法检测Oct4和SUMO1的表达水平。结果肿瘤细胞克隆球被血清诱导分化后高表达胶质细胞标记蛋白GFAP。与对照组和无义组比较,SUMO1组细胞克隆球直径增长速度、Ki67、CD133、巢蛋白阳性率明显降低(P0.05),GFAP阳性率明显升高[(57.35±7.87)%vs(1.09±0.27)%,(0.87±0.21)%,P0.05],SUMO1组游离及共价结合状态的SUMO1及Oct4明显降低(P0.05)。结论 Oct4通过与SUMO1共价结合共同维持胶质瘤干细胞持续增殖潜能。     

GTPBP2通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌干细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和凋亡

目的 探讨GTP结合蛋白(GTPBP)2对CD133阳性结直肠癌干细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法 选取30例结直肠癌患者的结直肠癌组织及相应癌旁组织；利用免疫磁珠法分选出人结直肠癌SW480细胞的CD133阳性肿瘤干细胞，将其分为Con组、si-NC组、si-GTPBP2组；实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GTPBP2 mRNA表达水平；Western印迹检测GTPBP2表达、干细胞表面标志物表达及增殖、细胞周期、迁移、侵袭、凋亡和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡和周期。结果 与癌旁组织相比，结直肠癌组织中GTPBP2表达水平明显升高(P<0.05);沉默GTPBP2可明显抑制结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭，明显阻滞细胞周期进程，并明显促进凋亡，结直肠癌干细胞存活率、S期细胞比例、迁移、侵袭细胞数及细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞核增殖抗原(Ki)-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(B...     

SRPX2对肝癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制

目的探讨sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人肝癌细胞MHCC97H侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97H,用Lipofectamine法将阴性对照和SRPX2特异性siRNA转染到人肝细胞癌MHCC97H,继续培养48 h收获细胞,用Transwell检测细胞体外侵袭和迁移能力;实时荧光RT-PCR法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和基质金属蛋白酶(MMP2)mRNA表达的影响;Western Blot法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和MMP2蛋白水平的影响。结果与阴性对照组比较,干扰SRPX2组人肝癌细胞MHCC97H侵袭、迁移能力、SRPX2 mRNA、MMP-2 mRNA、SRPX2蛋白和MMP-2蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SRPX2可能通过调节MMP2而影响人肝癌细胞MHCC97H侵袭和迁移。     

信号传导及转录激活因子3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及基因沉默对甲状腺癌细胞的影响

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)3基因在老年甲状腺癌组织中的表达及沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞的影响。方法将FTC-133细胞分为siRNA STAT3组、阴性对照组和空白对照组,RT-PCR测定FTC-133细胞STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA的表达,Western印迹测定甲状腺癌FTC-133细胞STAT3蛋白的表达,MTT法测定甲状腺癌FTC-133细胞的生长,Transwell法检测FTC-133细胞的迁移能力。结果老年甲状腺癌组织中STAT3阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3蛋白的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中STAT3、MMP2、MMP9 mRNA的表达量低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组第1、2、3天的抑制率均明显高于阴性对照组(P<0.05)。siRNA STAT3组FTC-133细胞中穿膜细胞数低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论老年甲状腺癌组织中STAT3呈高表达,沉默STAT3基因对甲状腺癌细胞株的增殖和侵袭能力有抑制作用。     

干细胞相关基因在肝癌细胞系中的表达

目的 了解Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b等干细胞相关基因在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中的表达情况,并比较不同细胞系中各基因量的差异和对全反式维甲酸(tRA)的反应.方法 逆转录聚合酶链反应测定4株人肝癌细胞系中Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b mRNA的表达,实时荧光定量PCR比较不同细胞中各基因量的差异以及对tRA的反应.单因素方差分析比较各基因在不同细胞系中的表达差异.结果 干细胞相关基因Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin和Wnt5b在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中有不同程度的表达(P<0.05);人肝癌细胞系HepG2和正常人肝脏细胞系L02对tRA的反应也存在明显差异(P<0.05).结论 干细胞相关基因在人肝癌细胞系中不同程度的表达,不同肝癌细胞系中这些基因表达有一定的差异,可能与其生物学特性不同有关,人肝癌细胞系HepG2中Oct4和Sox2的表达调控不同于胚胎干细胞.在肝癌细胞中可能存在着Oct4对于Wnt/β-catenin信号转导通路的调节作用.     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。     

结肠癌组织CD133表达变化及意义

目的 观察结直肠癌组织中肿瘤干细胞标志物CD133表达变化,并探讨其意义.方法 采用免疫组化法检测60例手术切除的结直肠癌组织中的CD133、survivin、Ki67,并分析三者之间的相关性及其与患者性别、年龄、肿瘤的部位和大小、病理分级、侵袭深度、淋巴结转移、pTNM分期之间的关系.结果 本组CD133阳性表达率为50％(30/60);CD133的表达与淋巴结转移和pTNM分期有关(P均＜0.01),与病理分级有关(P＜0.05),与其他临床病理参数无关(P均＞0.05);survivin仅与肿瘤病理分级有关(P＜0.05),Ki67与各项临床病理参数无关(P均＞0.05).本组CD133与survivin、Ki67的表达呈正相关(r分别为0.269、0.466,P均＜0.05),survivin与Ki67的表达呈正相关(r为0.378,P＜0.01).结论 结直肠癌组织中存在CD133阳性肿瘤细胞,即肿瘤干细胞.肿瘤干细胞在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,检测肿瘤干细胞标志物CD133有助于判断肿瘤的恶性程度和预后.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP