阳离子脂质体VEGF反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的观察阳离子脂质体VEGF反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的作用。方法应用阳离子脂质体VEGFASODN转染HI60细胞48h后,观察细胞形态,电泳法检测DNA梯状带和流式细胞仪AnnexinVFITC/PI检测细胞凋亡。结果VEGFASODN组VEGFmRNA的表达完全抑制,VEGFMSODN组和空白对照组的VEGFmRNA的表达没有明显变化,细胞生长受抑制可见细胞固缩,DNA电泳出现典型的梯状条形带,流式细胞仪分析细胞凋亡率可达23.28%,明显高于VEGFMSODN组的8.21%和空白对照组。结论VEGFASODN可抑制白血病细胞VEGFmRNA的表达,导致白血病细胞的凋亡,VEGF基因与白血病细胞的凋亡有关。     

VEGF反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的: 观察血管内皮生长因子(vascular endotheliM growth factor,VEGF)反义寡核苷酸对白血病细胞系K562细胞凋亡的作用.方法: 实验分为VEGF反义组、VEGF错义组和空白对照组,应用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGF寡核苷酸转染体外培养的白血病细胞系K562细胞48 h后,观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯状带,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.结果: 反义组可见细胞集落减少,细胞皱缩,细胞质中颗粒增多,核固缩并出现细胞碎片;而错义组和空白对照组细胞均悬浮成团,细胞轮廓清楚,胞体透亮,生长旺盛.反义组见凋亡梯形带,错义组和空白对照组仅1条DNA条带.反义组细胞凋亡率达23.28%,与错义组和空白对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论: VEGF反义寡核苷酸可诱导白血病细胞凋亡,提示VEGF与抗白血病细胞凋亡有关.     

Livin反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡影响的研究

目的：探讨Livin mRNA反义寡核苷酸（ASODN）对人乳腺癌MCF-7细胞抑制增殖及诱导凋亡的影响。方法：设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN），脂质体转染至培养的MCF-7细胞。采用MTT法检测Livin ASODN对MCF-7细胞的增殖抑制作用，RT-PCR检测Livin mRNA的表达水平，电镜、流式细胞仪与吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）细胞染色法检测细胞凋亡水平和形态学改变。结果：Livin ASODN在终浓度为600nmol／L作用MCF-7细胞48h时，能明显地抑制其增殖（IC50=604.4），降低Livin mRNA的表达;电镜、流式细胞仪与A0／EB细胞染色法则表明MCF-7细胞在形态学上出现明显的凋亡改变，细胞凋亡率显著增加，而对照组寡核苷酸未见抑制效应。结论：Livin ASODN能够特异性下调MCF-7细胞中Livin基因表达，在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。     

转染血管内皮生长因子C反义寡核苷酸对子宫颈癌Hela细胞增生和凋亡的影响

目的体外研究脂质体介导转染血管内皮生长因子C（VEGF—C）反义寡核苷酸（VEGF—C,ASODN）对子宫颈癌Hela细胞增生和凋亡的影响。方法实验组将VEGF—CASODN（优化筛选）用脂质体导人Hela细胞,设正义（SODN）和空白对照组进行比较。用荧光显微镜观察转染率,MTT比色法检测细胞增生,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,RT—PCR、Western blotting法检测VEGF—C mRNA和蛋白的表达。结果经脂质体介导可成功将VEGF—C反义核酸转染至子宫颈癌Hela细胞;细胞的增生受到明显抑制,G2／M期细胞比例增多,转染作用48h时凋亡率最高,达（19．39±1．81）％;VEGF—C在mRNA和蛋白水平的表达均明显减少,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外转染VEGF—CASODN可在mRNA和蛋白水平下调Hela细胞VEGF—C的表达,阻滞并同步化细胞周期,抑制细胞增生,诱导细胞凋亡。     

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASODN）对顺铂（diamminedichloroplatinum，DDP）诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法：通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS-732细胞并与DDP联合作用，同时设空白对照组、正义（SODN）组及DDP组进行比较。采用RT—PCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivin mRNA和蛋白表达状态，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）、吖啶橙／溴化乙锭（acridine orange／ethidium bromide，AO／EB）染色法检测各组细胞凋亡水平和形态，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果：与空白对照组、SODN组及DDP组相比，ASODN转染组细胞survivin mRNA及蛋白表达明显减弱，细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高，细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变，细胞生长相对受抑；上述指标在ASODN＋DDP组变化更为明显。其细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）和细胞生长抑制率（inhibition ratio，IR，61．36％）明显高于各单“药”组（SODN组6．81％、ASODN组31．82％和DDP组41．35％）及SODN＋DDP组（45．45％），P〈0．05。结论：As0DN能够特异性封闭骨肉瘤OS-732细胞中survivin基因表达，使其功能相应爱抑，增加细胞对DDP敏感性，进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

反义MLL-AF9基因对THP-1细胞增生和凋亡的影响

 目的　研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸（ASODN）对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响。方法　选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸（SODN）,应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表达量,改良MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察ASODN作用于THP-1后细胞出现凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果　与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中MLL-AF9表达明显降低（P <0.01）,相对应MLL-AF9蛋白水平亦明显下降,同时细胞生长受到抑制,被诱导凋亡产生凋亡小体。ASODN转染THP-1细胞0、24和48 h后,ASODN组凋亡率分别为（10.4±3.0）%、（22.8±2.5）%和（24.7±3.1）%,与对照组相比凋亡率显著增加（P <0.01）且呈时间依赖性。结论　利用ASODN靶向沉默MLL-AF9融合基因的表达能有效抑制THP-1细胞增生并促进其凋亡。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：研究hTERT基因反义寡核苷酸（ASODN）对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响.方法：应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带.结果：hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制（P＜0.01）.流式细胞仪检测显示：ASODN组细胞阻滞于G0/G1期,S、G2/M期细胞减少（P＜0.05）;细胞增殖指数（PI）明显降低（P＜0.05）;检测出早期凋亡峰.Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示：ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组（P＜0.01）.琼脂糖凝胶电泳显示：ASODN组出现凋亡DNA梯带.结论：hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值.     

抗VEGF抗体诱导K562细胞凋亡及其机制的研究

目的 观察抗VEGF抗体对K562细胞凋亡的影响,探讨VEGF抑制白血病细胞凋亡的机理.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测抗VEGF单抗对拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）表达的影响;采用低浓度溴乙啶荧光测定法检测细胞TOPOⅡ的活性;应用琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡的情况.结果 抗VEGF抗体能抑制K562细胞TOPOⅡ的表达,降低TOPOⅡ的活性,促进DNA解旋、断裂;抗VEGF单抗作用于K562细胞后,电泳结果显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带.结论 抗VEGF单抗能引起白血病细胞凋亡,其原因可能是抗VEGF单抗抑制了白血病细胞TOPOⅡ基因的表达.     

脂质体转染survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的作用

目的:观察脂质体转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562的增殖及凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染K562细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;用MTT法观察转染前后对细胞增生的影响;用细胞凋亡检测法(POD)观察细胞凋亡;RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果:(1)survivin ASODN抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;(2)survivin ASODN可诱导K562细胞的凋亡,凋亡指数呈浓度依赖性;(3)survivinASODN处理组K562细胞survivin mRNA的表达水平显著下降。结论:脂质体转染survivin ASODN能够明显抑制K562细胞增殖,且能诱导细胞凋亡。survivin可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。     

凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究

目的:研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞0S-732多药耐药株R-OS-732的作用.方法:凋亡素基因VP3经酶切后克隆入质粒pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法pIRVP3转染R-0S-732细胞,RT-PCR检测凋亡素在细胞中的表达;光镜及电镜下观察瘤细胞;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳;流式细胞仪检测凋亡率.结果:凋亡素基因已在转录水平表达;光镜及电镜下两组细胞形态变化明显;电泳见转染组DNA呈梯状条带,对照组为单一条带;转染组凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:凋亡素可有效诱导R-OS-732细胞凋亡.     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin反义寡核苷酸（ASODN）对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法（MTT）检测细胞增殖,AnnexinV—FITC法检测细胞的凋亡,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果LivinASODN在终浓度为600nmol／L作用K562细胞48h时,能明显抑制其增殖细胞增殖咖制率（IR）为（52．99±2．67）％],降低LivinmRNA的表达[ODR为（59．75±3．24）％],K562细胞凋亡率显著增加f（36．89±1．08）％]（P〈0．01）,而Lip—MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LivinASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡。     

凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究

目的研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞0S-732多药耐药株R-OS-732的作用.方法凋亡素基因VP3经酶切后克隆入质粒pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法pIRVP3转染R-0S-732细胞,RT-PCR检测凋亡素在细胞中的表达;光镜及电镜下观察瘤细胞;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳;流式细胞仪检测凋亡率.结果凋亡素基因已在转录水平表达;光镜及电镜下两组细胞形态变化明显;电泳见转染组DNA呈梯状条带,对照组为单一条带;转染组凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.01).结论凋亡素可有效诱导R-OS-732细胞凋亡.     

三氧化二砷对食管癌细胞系EC9706作用的研究

目的探讨不同浓长三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞系EC9706的生长抑制作用及其机理。方法不同浓度三氧化二砷作用于细胞EC9706,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和流式细胞仪检测凋亡。结果三氧化二砷剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析。细胞株EC9706存在明显的G0／C1期阻滞。结论As2O3具有抑制食管癌细胞株EC9706生长作用,其机理是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

Slit-Robo信号对黏液表皮样癌细胞凋亡作用的影响

探讨Slit-Robo信号对黏液表皮样癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:免疫组织化学方法检测Mc3细胞Slit2及Robo1蛋白表达，R5单克隆抗体作用Mc3细胞，采用FITC-AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率，流式细胞仪检测细胞周期，DNA梯状电泳及Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡发生，流式细胞仪细胞内抗原检测法检测Caspase-3蛋白含量。结果:Mc3细胞表达Slit2及Robo1蛋白，R5抗体作用下细胞凋亡率增高，达到33.6%，形态学观察凋亡细胞明显增多并出现坏死细胞，电泳结果出现梯状条带，S期细胞明显增多，Caspase-3表达水平上调，平均荧光强度达到64%。结论:黏液表皮样癌中Slit-Robo信号可能以抑制细胞凋亡的形式参与肿瘤的形成过程，而这可能是通过Caspase-3蛋白的表达调控实现的。      

雷公藤多甙诱导HL-60细胞凋亡

目的：探讨雷公藤多甙对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。方法：应用细胞形态学检查,ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果：ＨＬ－６０细胞加上雷公藤多甙１０ｍｇ／Ｌ孵育７２ｈ,流式细胞仪检测细胞凋亡率为２９．４％（与空白对照组比较,Ｐ〈０．０１）。电检查和光镜检查均可见细胞核固缩、碎裂等。ＤＮＡ电泳显示明显的梯状条带。结论：雷公藤多甙能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,提示雷公藤多甙可能具有抗白血病作用。     

Survivin ASODN对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的:观察Survivin基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对胃癌细胞增殖的影响。方法:靶向Survivin ASODN经脂质体介导转染胃癌细胞系SGC-7901,倒置显微镜和电镜观察转染后细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达;免疫组化检测Survivin蛋白的变化情况;FCM检测细胞周期的变化。结果:转染ASODN后,细胞出现了形态学变化;MTT实验检测发现细胞株SGC-7901增殖受到显著抑制,抑制率达(69．2±0．76)％;RT-PCR检测发现Survivin基因mRNA水平表达显著下降,免疫组化试验发现蛋白表达也出现类似的结果;流式细胞仪检测发现G1期细胞比例增高,由对照组的66％和62．5％增至90．7％。结论:Survivin ASODN可以显著抑制Survivin的表达,抑制胃癌细胞增殖。     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.     

survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制

目的 研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法 在脂质体介导下,分别以100mmol／L、300mmol／L和500mmol／L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H44624h、48h和72h后,用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA及蛋白表达,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化;ELISA法检测胞浆细胞色素C（cyt C）浓度;比色法检测胞浆内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）、caspase-3的活性;Western blot检测caspase-8蛋白表达;加入环孢霉素A（CsA）后,以FCM检测细胞凋亡。结果 与各对照组相比,survivin ASODN显著下调了survivin mRNA表达,且呈时间和浓度依赖性,其中以500mmol／L作用72h时效果最佳,抑制率达62．7％,其蛋白表达也显著下调。NCI-H446细胞的凋亡指数（AI）为48．35％,明显高于对照组（3．75％）、空脂质体组（3．41％）、无义寡核苷酸（NSODN）组（4．69％）、100和300mmol／LASODN组（19．85％和34．39％）;增殖指数（PI）为24．38％,明显低于上述各组（75．54％、73．12％、71．76％、51．03％和38．94％,P均〈0．01）。survivin ASODN导致细胞△ψm逐渐下降,并相继引起cytc的释放、caspase-9和caspase-3的激活,而caspase-8酶原无变化。CsA显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论 survivin通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;survivin ASODN能够显著下调survivin mRNA及蛋白表达,诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

全反式维甲酸对食管癌细胞系EC109作用的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞系EC109的生长抑制作用及其机理.方法 不同浓度ATRA作用于细胞EC109,采用MTT法检测细胞生长;通过流式细胞仪检测和DNA梯状电泳证实凋亡存在;用RT-PCR方法检测凋亡诱导过程中p53、bcl-2和bax基因表达变化.结果 ATRA呈剂量及时间依赖性抑制细胞生长;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析存在明显的凋亡峰;ATRA处理组bax和p53基因表达上调,但bcl-2基因表达下调.结论 ATRA具有抑制食管癌细胞株EC109生长作用,其机理可能是诱导细胞凋亡,其分子机制可能与bcl-2/bax和p53的表达相关.     

反义c-myc诱导MCF-7细胞凋亡作用的研究

目的 探讨脂质体LipfectAMINETM (LR)介导的c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对MCF-7细胞凋亡作用的影响.方法 MCF-7细胞经脂质体包裹c-myc反义寡核苷酸作用24、48、72、96小时后, 应用Gimsa染色法及流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况;DNA琼脂糖凝胶电泳检测MCF-7细胞经反义核酸作用72小时时,MCF-7细胞DNA变化情况.结果 经LR介导的 ASODN可以诱导MCF-7细胞凋亡,且随着时间的延长,凋亡细胞逐渐增加,24、48、72、96 小时及正义组72小时各时间点的凋亡率分别为4.3%、4.6%、13.5%、28.8% 、29.1%、4.4%( P＜0.01);DNA凝胶电泳显示脂质体反义核酸72小时组有凋亡特征的DNA改变,呈现典型的DNA降解"梯状"条带片断.结论 c-myc反义寡核苷酸(ASODN) 可以诱导MCF-7细胞凋亡.