生物磁石复合体靶向性分离检测目标细菌

目的　使用生物磁石复合体的新型荧光免疫测定方法 ,高感度快速分离检测目标细菌。方法　通过sulfo SMCC及SPDP处理的方法将抗体固定于生物磁石粒子 ,制成生物磁石复合体 ,应用于目标细菌的荧光免疫测定。以生物磁石复合体来结合和移动混合液中的靶细菌 ,并通过外磁场控制生物磁石复合体。结果　本实验以大肠菌为检测目标 ,使用生物磁石 -大肠菌抗体的复合体 ,约 2 0min左右能从大肠菌混合液中分离出目标大肠菌 ,并在 1h以内从大肠菌混合液中检测出大肠菌。采用生物磁石复合体的荧光免疫测定法还可以分离并测定出浓度在 30个 /ml以下的微量大肠菌检体。结论　利用此项技术可以靶向性分离检测特定细菌     

生物磁石复合体靶向性分离检测目标细菌

目的使用生物磁石复合体的新型荧光免疫测定方法,高感度快速分离检测目标细菌.方法通过sulfo-SMCC及SPDP处理的方法将抗体固定于生物磁石粒子,制成生物磁石复合体,应用于目标细菌的荧光免疫测定.以生物磁石复合体来结合和移动混合液中的靶细菌,并通过外磁场控制生物磁石复合体.结果本实验以大肠菌为检测目标,使用生物磁石-大肠菌抗体的复合体,约20min左右能从大肠菌混合液中分离出目标大肠菌,并在1h以内从大肠菌混合液中检测出大肠菌.采用生物磁石复合体的荧光免疫测定法还可以分离并测定出浓度在30个/ml以下的微量大肠菌检体.结论利用此项技术可以靶向性分离检测特定细菌.     

使用生物纳米磁珠对低浓度目标细菌的磁捕获

目的以从磁性细菌体内提取的纳米磁珠为载体，对低浓度大肠杆菌O157：H7进行快速磁捕获与分离。方法从磁性细菌中获取生物纳米磁珠，然后将大肠杆菌O157抗体接种于该磁珠表面，形成免疫磁珠后，对细菌混合液中浓度约为1cfu／10ml的大肠杆菌O157：H7进行快速磁捕获与分离。结果菌源性纳米磁珠表面大肠杆菌O157抗体的包被固定量为132μg／mg磁珠。当大肠杆菌O157免疫磁珠浓度为50μg／ml以上时，即有较好的捕获和分离效果，而且特异性较高，显著强于传统的离心分离法（P〈0．01），当浓度达到100μg／ml以上时捕获和分离效果更好。结论利用磁性细菌由来的生物纳米磁珠，可将目标细菌抗体包被于生物纳米磁珠表面，制成免疫磁珠后，通过外磁场诱导可快速、准确地进行低浓度目标细菌的捕获与分离。     

一种新型结核分枝杆菌检测方法的研究

目的 探讨利用荧光量子点(QDs)开发新一代结核分枝杆菌的检测方法.方法 采用特异性多克隆抗体偶联到磁珠上用于结核杆菌的分离和富集,然后用标记QDs的链霉亲和素检测结合生物素标记的肝素血凝素(HBHA)单克隆抗体的结核杆菌.采用牛结核分枝杆菌和结核分枝杆菌作为阳性样品,以大肠杆菌和沙门氏菌作为阴性对照,以评估该方法的可行性.结果 用抗酸染色能检测到磁珠分离和富集的结核杆菌,直接观察没有发现阴性对照有荧光,但阳性对照可以观察到荧光.直接观察法的检测限为104细菌/mL.当采用荧光光度计检测样品时,其检测限可以达到103细菌/mL.结论 该方法能适用于包括结核分枝杆菌病原体的检测,是一种具有前景的病原体的检测方法.     

老年人前列腺增生症的早期预防

检测艾滋病病毒抗体，方法：对315例新兵采取酶联免疫测定方法。结果：315例无一人抗体阳性。结论：ELISA法检测抗体具有灵敏度高，特异性好，早期检出等特点，可用于临床艾滋病感染的辅助检测手段。     

ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的：提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法：将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b载体构建表达质粒并转化E．coliBL21（DE3），用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白，His-BindQuick Cartridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体，Westernblotting确定抗体的特异性，体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果：16℃条件下O．2mmol／LIPTG诱导培养30h，携带pETa2b—ΦC31质粒的E-coliBL21（DE3）在YTG培养基中，可表达出大量的融合蛋白，该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性。使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后，分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体，Westernblotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实，该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原。结论：本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法，并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体。     

ATP细菌快速测定系统检测温泉中微生物污染的效果评价

目的为提高卫生监督机构对温泉浴水质的现场快速检测能力和手段,建立温泉浴池水中细菌总数新的检测方法。方法对温泉浴池水中非细菌细胞的ATP用生物方法分离,使用荧光虫素和荧火虫光素酶稀释溶剂将溶解的细菌细胞中的ATP转化为光能,再通过灵敏的微光度计检出ATP的量,通过查表,得出池水中所含细菌总数。结果该方法分离效果良好,重现性好,灵敏度、精密度高,干扰少。结论本方法携带、操作方便,重现性好,测定结果可靠,灵敏度高,无论在温泉浴池水还是游泳池水的现场快速检测都有较好的适用性。     

免疫荧光技术和免疫酶标法在T淋巴细胞亚群检测中的应用体会

用McAb检测T淋巴细胞亚群的方法有多种，如生物素一亲和生物素一辣根过氧化物酶复合法，免疫金银法，免疫酶标法(APAAP法)、荧光抗体技术和流式细胞仪技术，其中FACS方法先进，但仪器价格昂贵，目前还只能在少数实验室使用。我们实验室目前使用的是荧光抗体技术和APAAP法，经反复摸索实验，将两种方法介绍如下。     

荧光抗体活菌染色—直接沉淀免疫荧光菌团应用于EITor弧菌快速检定的实验研究

本文报道用荧光抗体直接加入细菌液体标本中,离心沉淀,作活菌湿片染色,在荧光显微镜下直接观察细菌沉淀物荧光菌团,快速检定EI Tor弧菌的实验研究结果。 实验证明:本法特异性强,抗EI Tor弧菌的荧光抗体,只对EI Tor弧菌形成特异的荧光菌团,且能从此种荧光菌团中分离培养出典型的EI Tor弧菌;对不凝集弧菌     

表面增强拉曼散射标记免疫检测的再生陛研究

目的：探讨表面增强拉曼散射标记免疫检测技术的循环利用问题和价值。方法：采用4,4’-联吡啶和苯硫酚制备金溶胶作SERS标记分子,并组装抗原抗体复合物,用其进行SERS检测,通过对SERS谱图的分析识别加入的抗原,重点研究固相抗体的重复使用方法。甘氨酸一HCI缓冲体系能彻底分离抗原和抗体,在SERS标记免疫检测中,能通过实验研究该体系对基底再生性和稳定性的影响。结果：使用甘氨酸-HCl缓冲体系对抗原抗体复合物进行洗脱,在洗脱时间为24h时,抗原和抗体能充分分离,因此清除了抗体上的标记免疫溶胶和抗原。第二次制备抗原抗体复合物时,基底的再生能力良好,重复使用的次数可达约10次,同时能继续识别标记分子,并进行SERS检测,具有稳定性。结论：通过甘氨酸-HCI生物缓冲体系洗脱是一种洗脱基底再生效果好和稳定性强的方法。