MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探究长链非编码RNA (Long non-coding RNA,LncRNA)HOTAIR对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移能力的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U87、U251、U118和LN18中HOTAIR的表达水平和shRNA HOTAIR (sh-HOTAIR)转染U251细胞细胞后HOTAIR和miR-1的表达水平。生物信息预测HOTAIR和miR-1的靶向关系,荧光素酶报告实验验证两者靶向关系。将细胞分为Control、sh-HOTAIR、miR-1inhibitor和sh-HOTAIR+inhibitor组,用sh-HOTAIR和miR-1inhibitor分别或同时转染细胞,CCK8检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达。结果 HOTAIR在U251细胞中表达水平最高,因此选择U251细胞进行后续实验;sh-HOTAIR能显著降低U251细胞HOTAIR的表达水平,升高miR-1的表达水平;miR-1mimic能显著降低HOTAIR野生质粒的荧光素酶活性;与Control组比较,sh-HOTAIR组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显降低,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显升高;sh-HOTAIR组比较,sh-HOTAIR+inhibitor组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显升高,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显降低;同时,sh-HOTAIR组侵袭细胞数与Control组比较明显减少,划痕闭合率明显降低;sh-HOTAIR+inhibitor侵袭细胞与sh-HOTAIR比较显著增多,划痕闭合率明显升高;此外,sh-HOTAIR能显著降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平,miR-1inhibitor能显著减弱sh-HOTAIR对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向抑制miR-1的表达促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移。     

新靶点细胞周期蛋白E干扰RNA对人脑胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨新靶点细胞周期蛋白E干扰RNA对人脑胶质瘤细胞的增殖及侵袭转移能力的影响。方法构建4个新靶点的Cyclin E干扰RNA的真核表达载体作为实验组（1至4组）,同时设立U251人脑胶质瘤细胞为对照组（U251组）。对实验组用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否,转染载体到胶质瘤U251细胞株,通过RT-PCR的结果检测转染后Cyclin E mRNA表达量。对实验组及U251组用M1rr法检测细胞增殖能力的变化,用Transwell小室法检测侵袭能力的变化。结果分别构建了4个新靶点的Cyclin E干扰RNA真核表达载体,CyclinEmRNA表达明显受到抑制（P均〈0．05）,其中实验1组细胞与U251组相比增殖及侵袭能力减弱（P均〈0．05）。结论新靶点Cyclin E干扰RNA使Cyclin E表达下调,从而导致人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭能力减弱。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

慢病毒介导的Cullin3沉默对人胶质瘤细胞的影响

目的:探讨慢病毒介导特异性短发夹RNA(sh RNA)干扰Cullin3表达对人胶质瘤细胞的影响。方法:RT-q PCR及Western blot检测Cullin3在人胶质瘤细胞系SW1783,U251及U87MG中的表达;构建靶向Cullin3的sh RNA重组慢病毒,转染U251和U87MG细胞并测定转染效率。实验分为3组:Blank组(阴性对照组)、NC-sh RNA组(空载慢病毒组)及Cullin3-sh RNA组(慢病毒介导Cullin组)。MTT法和Brd U实验检测细胞活力和增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:与正常人星形胶质细胞相比,Cullin3在人胶质瘤细胞系SW1783,U251及U87MG中高表达。Cullin3-sh RNA转染U251和U87MG细胞后,与Blank组及NC-sh RNA组相比,Cullin3-sh RNA组Cullin3表达水平下降(P<0.05),细胞活力和细胞增殖能力显著降低,侵袭能力下降,细胞周期被阻滞于G0/G1期。结论:Cullin3在胶质瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,提示Cullin3有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

长链非编码RNA CCAT1调控MAPK信号通路对于胶质瘤细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA CCAT1表达对人胶质瘤细胞U251增殖、侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取人胶质瘤细胞U251进行转染实验,分为空白组、sh-NC组和sh-CCAT1组;利用实时荧光定量qRT-PCR检测抑制效果;采用MMT、Transwell试验检测下调CCAT1对于胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响;利用Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关分子的表达变化。结果在转染48h后,sh-CCAT1组CCAT1的表达较NC组和sh-NC组显著降低(P0.05);CCAT1下调后,胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭能力显著下降(P0.05),蛋白表达检测表明,CCAT1下调显著抑制MAPK信号通路分子的表达。结论 CCAT1可能通过MAPK通路抑制胶质瘤的增殖和侵袭。     

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。     

特定沉默胶质瘤U251细胞株的PDGF-B基因对细胞凋亡和增殖的影响研究

目的利用RNA干扰基因治疗技术,特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板衍生生长因子B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法用血清培养液(含10%胎牛血清DMEM培养基)体外培养人U251脑胶质瘤细胞系。随机分为3组,第1组为实验组:转染siRNA的细胞,第2组为阴性对照组:转染空白质粒的细胞;第3组为空白对照组:细胞常规培养不予以干预。利用脂质体将siRNA转染进入U251细胞,在细胞内形成双链siRNA,识别并降解PDGF-B mRNA。通过RT-PCR检测U251细胞中PDGF-B基因mRNA的表达水平,Western blot检测PDGF-B的蛋白表达,MTT法检测U251细胞的增殖情况,流式细胞学对比检测3组细胞的凋亡情况。结果利用脂质体将靶向PDGF-B基因siRNA转染进入U251细胞,48 h后利用RT-PCR检测PDGF-B基因mRNA的表达,结果显示与阴性对照组和空白对照组对比,转染组PDGF-B基因mRNA表达水平明显下降;转染72 h后,Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率60%);MTT结果显示siRNA转染组U25细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测显示,与阴性对照组和空对照组相比,转染siRNA的细胞的实验组中,G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达,能够使细胞周期阻滞在G1期,从而抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进细胞的凋亡。结论构建靶向胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,通过体外试验观察可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,其所产生的RNA干扰效应对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长的抑制和促进凋亡作用。     

OTUB2表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用Lipofectmine 2000转染试剂向MGC-803细胞中转染OTUB2小干扰RNA(si-OTUB2)序列(si-OTUB2组)和si-NC序列(si-NC组),以不进行任何转染的胃癌MGC-803细胞作为空白对照组。分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中OTUB2mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果与空白对照组和si-NC组比较,siOTUB2组细胞中OTUB2mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),细胞增殖能力减弱(P0.05),细胞迁移数和侵袭数减少(P0.05),细胞中PCNA、N-cadherin和p-AKT蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P0.05)。结论下调OTUB2可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

SATB2基因siRNA对口腔鳞状细胞癌生长及STAT3信号的抑制作用

目的:探讨抑制SATB2基因表达对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法:以LipofectaminTM2000为载体,将阴性对照siRNA(阴性组)与SATB2特异性siRNA(抑制组)转染人OSCC细胞株CAL-27,设置空白组,CCK-8法检测siRNA转染4 d的细胞增殖;siRNA转染CAL-27细胞48 h,Western印迹法检测E-cadherin,STAT3,p-STAT3和cleaved caspase-3蛋白表达。克隆形成实验、Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞克隆形成率、细胞侵袭和迁移能力及细胞凋亡率。结果:转染siRNA的CAL-27细胞SATB2蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。与空白组相比,抑制组细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,E-cadherin和cleaved caspase-3蛋白表达明显升高,p-STAT3蛋白表达明显降低(P0.05)。结论:RNA干扰抑制SATB2基因表达可抑制OSCC细胞生长,机制与下调STAT3信号有关。     

hsa_circ_0000417表达水平对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨hsa_circ_0000417表达水平对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测hsa_circ_0000417在正常人星形胶质细胞HA1800和人源神经胶质瘤细胞U87MG和U251中相对表达量;选择hsa_circ_0000417相对高表达的人源神经胶质瘤细胞U251随机分为siRNA-circ抑制剂组和siRNA-NC对照组,分别转染靶向hsa_circ_0000417接头序列的抑制剂siRNA-circ和阴性对照siRNA-NC,采用实时荧光定量PCR法检测2组U251细胞hsa_circ_0000417相对表达量;转染1、2、3、4 d时,采用CCK-8法测转染后2组细胞增殖率;转染24 h时,采用划痕试验检测2组细胞划痕愈合面积,采用Transwell小室试验检测2组侵袭细胞数。结果人正常星形胶质细胞HA1800 hsa_circ_0000417相对表达量(1.00±0.06)高于人源神经胶质瘤细胞U251(0.85±0.03)和U87MG(0.36±0.02)(P0.05),人源神经胶质瘤细胞U251高于U87MG(P0.05)。转染后siRNA-circ抑制剂组hsa_circ_0000417相对表达量(0.04±0.01)低于siRNA-NC对照组(1.00±0.09)(P0.05);转染1、2、3、4 d时,siRNA-circ抑制剂组细胞增殖率[(90.55±6.30)%、(90.88±2.87)%、(72.42±7.83)%、(65.51±4.28)%]均低于siRNA-NC对照组[(100.00±5.24)%、(100.00±7.86)%、(100.00±4.51)%、(100.00±7.57)%](P0.05)。转染24 h时,siRNA-circ抑制剂组划痕愈合面积百分比[(12.26±2.06)%]和侵袭细胞数[(207±95)个]少于siRNA-NC对照组[(19.01±3.89)%、(814±102)个](P0.05)。结论 Hsa_circ_0000417可提高神经胶质瘤细胞U251的增殖、迁移和侵袭能力,hsa_circ_0000417有可能成为神经胶质瘤新的治疗靶点。     

干扰SATB1抑制宫颈癌增殖和转移能力及增强宫颈癌放射敏感性的作用研究

目的 研究核基质结合区结合蛋白1 (SATB1)在宫颈癌组织中的表达水平及临床意义,并探讨SATB1对宫颈癌细胞增殖、转移能力和宫颈癌放疗敏感性的作用和发挥作用的分子机制。方法 采用免疫组化检测SATB1在宫颈癌组织和非癌组织中的表达,并分析宫颈癌患者中SATB1的表达水平与临床病理参数的关系及对宫颈癌患者预后的影响。常规培养宫颈癌肠转移细胞(CaSki),随机分为si-NC组和si-SATB1组,分别转染NC siRNA和SATB1 siRNA,采用western blotting检测各组细胞中SATB1的表达水平,CCK8实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力;采用不同剂量放射线处理si-NC组和si-SATB1组细胞,CCK8实验检测si-NC组和si-SATB1组细胞放疗敏感性;Western blotting检测si-NC组和si-SATB1组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及其下游蛋白细胞周期蛋白1(cyclinD1)、cMYC和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平的影响。结果 与非癌组织相比,SATB1在宫...     

短发夹核糖核酸沉默EZH2基因对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨短发夹核糖核酸（sh RNA）对高表达EZH2的人胶质瘤细胞株U251增殖和侵袭的影响。方法构建针对EZH2的sh RNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251细胞中,分为对照组、control-sh RNAGFP空载体转染组和EZH2-sh RNA重组质粒转染组。分别通过逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组细胞EZH2基因和蛋白的表达,以噻唑蓝法测各组细胞的增殖活性,蛋白质印迹法检测各组细胞的EZH2蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞侵袭力。结果对照组、control-sh RNA-GFP空载体转染组、EZH2-sh RNA重组质粒转染组U251细胞EZH2基因的表达分别为1.13±0.05、1.15±0.05、0.19±0.02,U251细胞EZH2蛋白的表达分别为1.03±0.03、0.97±0.06、0.20±0.02,转染后24 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.31%、100.03%±9.35%、60.13%±3.15%,转染后48 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.13%、99.58%±9.27%、53.01%±3.14%,重组质粒转染组较另两组均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;重组质粒转染组转染48 h后细胞磷酸化蛋白激酶B和磷酸化叉头框蛋白O1水平降低、细胞周期蛋白D1表达减少、p27蛋白表达增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。Transwell小室侵袭实验显示侵袭至Transwell小室滤膜下表面的细胞数在EZH2-sh RNA重组质粒转染组[（46.00±2.82）个]低于对照组[（60.67±5.71）个]和control-sh RNA-GFP空载体转染组[（61.00±2.48）个],差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在胶质瘤中作用提供了研究基础。     

RNA干扰pygo2基因对人脑胶质母细胞瘤U251生物学行为及wnt通路的影响

目的研究pygo2在胶质瘤细胞系U251中的表达、功能及作用机制。方法利用反义pygo2转染U251,下调pygo2的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化;细胞克隆形成试验和transwell侵袭试验分析细胞的克隆形成能力和侵袭能力,采用Western印迹法检测通路蛋白的表达变化。结果转染反义pygo2后,pygo2表达降低,MTT结果显示转染反义pygo2后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加;流式细胞术提示G1期到S期阻滞,细胞克隆形成能力下降,侵袭能力均受到抑制,Western结果表明wnt通路相关蛋白c-myc和Cyclin D1在抑制pygo2表达后下降。结论 pygo2可促进人脑胶质瘤细胞生长、增殖,可能是胶质瘤治疗的有效靶点,其发挥作用可能与wnt通路密切相关。     

miR-381靶向HMGB1抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探究miR-381调控高迁移率组蛋白1(HMGB1)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-381在子宫内膜癌细胞和正常子宫内膜细胞中的表达水平。转染miR-381mimic后,检测HEC1A细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验加以验证。细胞分为HEC1A组、miR-381mimic组、pc-HMGB1组、mimic+pc-HMGB1组,采用CCK8法检测HEC1A细胞增殖能力,Transwell和划痕实验分别检测HEC1A细胞侵袭和迁移能力,蛋白印迹法检测HEC1A细胞中Ki67、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果 miR-381在正常子宫内膜细胞和癌细胞中存在表达差异。miR-381与HMGB1具有直接的靶向关系。与HEC1A组相比,miR-381组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达则增加(P0.01),pc-HMGB1组上述指标则相反(P0.01);与pc-HMGB1组相比,miR-381mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达增加(P0.01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制HEC1A细胞增殖、侵袭和迁移。     

Biglycan及血管内皮生长因子对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的:观察biglycan及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对结肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:在稳定转染biglycan的结肠癌细胞系HCT116中转染VEGF siRNA,实验设置未转染对照组(mock组)、空载质粒和非特异性干扰片段转染对照组(vector+siRNA-NC组)、biglycan cDNA和非特异性干扰片段转染组(biglycan+siRNA-NC组)以及biglycan cDNA和VEGF siRNA共转染组(biglycan+siRNA-VEGF组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测biglycan和VEGF的mRNA表达;采用划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测SNAIL、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果:与mock组及vector+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-NC组细胞的迁移、侵袭能力均显著提高(P0.05),vimentin、MMP-2、MMP-9、SNAIL蛋白的表达水平显著提高,E-cadherin蛋白的表达水平则显著下降(P0.05),MMP-2和MMP-9的活性显著提高(P0.05)。与biglycan+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-VEGF组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P0.05),SNAIL、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均显著下降,E-cadherin蛋白的表达水平显著提高(P0.05),MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P0.05)。结论:biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞系HCT116的迁移和侵袭,下调结肠癌细胞中VEGF的表达可逆转biglycan对HCT116迁移和侵袭的促进作用。     

替莫唑胺联合丙戊酸钠对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的观察替莫唑胺(TMZ)与丙戊酸钠(VPA)联用对人脑胶质瘤细胞SHG-44和U251生物学行为的影响。方法将细胞分为对照组、VPA单用组、TMZ单用组和VPA-TMZ联用组。分别采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术AnnexinV-FLUOS染色法检测细胞凋亡;DAPI染色法观察凋亡细胞形态学变化;Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 VPA-TMZ联用较TMZ/VPA单独用药,能有效抑制人胶质瘤细胞SHG-44和U251的增殖,促进其凋亡且减弱其侵袭能力。结论 VPA可提高人脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,为临床合理用药提供参考。     

RNA干扰神经膜蛋白2基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的探究神经膜蛋白2(NRSN2)对骨肉瘤U2-OS细胞增殖、侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法实验分为对照组、siRNA阴性组、siRNA-NRSN2组。对照组为常规培养的细胞,siRNA阴性组和siRNA-NRSN2组通过siRNA技术干扰骨肉瘤细胞中NRSN2基因的表达,分别将siRNA-NC和siRNA-NRSN2转染入U2-OS细胞。CCK-8实验检测干扰NRSN2基因表达对细胞增殖的影响。Transwell小室法检测干扰NRSN2对骨肉瘤U2-OS细胞侵袭、迁移的影响。采用免疫印迹试验(Western Blot)检测NRSN2、钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)水平。结果与对照组相比,siRNA-NRSN2组U2-OS细胞中NRSN2蛋白的表达量显著降低(P0.05)。干扰NRSN2表达显著抑制U2-OS细胞增殖(P0.05),降低其侵袭、迁移能力(P0.05),显著增加Ecadherin蛋白水平,明显降低N-cadherin、Vimentin蛋白水平(P0.05)。结论干扰NRSN2通过抑制上皮-间质转化(EMT)的发生,阻碍骨肉瘤U2-OS细胞的增殖、侵袭、迁移。     

OTUB1基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞凋亡及STAT3信号通路的影响研究

目的探讨卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞活力、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法 Western blotting检测OTUB1在人脑恶性胶质瘤U251、U87、BT325和M17细胞中的蛋白表达;U87细胞分为空白组(不做任何处理)、NC组(转染Control siRNA)和si-OTUB1组(转染OTUB1 siRNA),参照Lip2000转染试剂盒说明转染siRNA。Western blotting检测转染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表达,并选择抑制效果好的siRNA作为研究对象;MTT检测OTUB1-siRNA转染后的24~72 h细胞活力;流式细胞仪检测OTUB1-siRNA转染的48 h细胞凋亡率;Western blotting检测STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信号通路下游相关基因cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达。结果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17细胞中均呈现出阳性表达,在U87细胞中呈现出较高水平表达;OTUB1-siRNA转染后的U87细胞OTUB1的蛋白表达显著低于空白组和NC组(P0.05);与NC组比较,si-OTUB1转染U87细胞24-72h的细胞活力均显著降低,转染48 h的细胞凋亡率显著升高,p-STAT3、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达均显著降低(P0.05),而三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 OTUB1在人脑恶性胶质瘤细胞高表达,抑制OTUB1表达后可明显降低脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能是通过下调STAT3信号通路实现的。