顺铂通过Notch4 信号通路增强口腔鳞癌干细胞的自我更新能力

目的：研究Notch4 信号通路对口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞的肿瘤干细胞（cancer stem cell，CSC）自我更新能力的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库分析Notch4 基因在头颈部肿瘤中的表达。2 μmol/L 顺铂处理口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞48 h，再加入Notch 通路抑制剂DAPT作用24 h，采用流式细胞术检测CSC比例，Western blotting 法和qPCR法检测CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4 信号通路中的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4 等）的表达。采用siRNA技术敲降Notch4，Western blotting 法和qPCR 法检测si-Notch4 和顺铂对CSC标志物表达水平的影响，干细胞成球实验检测CSC的自我更新能力。结果：头颈部肿瘤组织中Notch4 基因呈高表达（P=0.046）。顺铂处理后，PJ15 和PJ41 细胞中NICD4 和CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog ）和Notch4 信号通路的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4）的表达水平较对照组均显著增加（均P<0.05），ALDH1 阳性细胞群体比例显著增加（P<0.05）；再加入Notch 通路抑制剂DAPT 作用24 h 后上述基因表达量均显著下降（P<0.05 或P<0.01）。敲降Notch4 后，与对照组相比，si-Notch4 组PJ15 细胞[ （1.33±0.47）vs（8.00±0.82）个，P<0.01]和PJ41 细胞[ （1.00±0.82）vs（7.67±1.25）个，P<0.01]球体的数量和大小均显著减少；再加入2 μmol/L DDP作用24 h，si-Notch4 组Nanog 和Bmi-1 基因表达量与对照组无显著差异。结论：激活Notch4 信号通路可增加口腔鳞癌PJ15 和PJ41 细胞的干细胞自我更新能力。     

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低（P＜0.05）;且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞（P＜0.05）。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P＜0.05）;si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组（P＜0.05）,miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组（P＜0.05）。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低（P＜0.05）。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。     

STAT3与miR-21的调控关系及其对舌鳞癌化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探讨STAT3与miR-21的调控关系以及其对舌鳞癌细胞Tscca对顺铂（DDP）敏感性的影响作用。［方法］ 体外培养Tscca细胞和Tscca/DDPR细胞,将细胞分为空白对照组、阴性对照组、WP1066处理组、DDP处理组和WP1066+DDP共处理组。采用MTT法和划痕实验检测DDP和/或WP1066对Tscca细胞和Tscca/DDPR细胞增殖和迁移的影响;采用RT-PCR法和Western blot法检测不同处理方式Tscca细胞和Tscca/DDPR细胞miR-21、STAT3、p-STAT3的表达水平。［结果］ 经不同浓度DDP（0.25、1、4、16μg/ml）处理后,Tscca细胞的增殖和迁移能力明显低于Tscca/DDPR细胞（P<0.05）,且具有剂量依赖性。Tscca细胞中miR-21、STAT3表达量明显低于Tscca/DDPR细胞（P<0.05）。WP1066可以明显抑制Tscca细胞和Tscca/DDPR细胞的增殖和迁移活性,且两组细胞比较差异无统计学意义（P>0.05）。经WP1066处理后,Tscca细胞、Tscca/DDPR细胞miR-21和p-STAT3表达水平均低于空白对照组（P＜0.05）。而DDP对Tscca/DDPR细胞miR-21和p-STAT3表达水平无明显影响,与空白对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关性分析显示,miR-21与p-STAT3的表达量呈正相关（r=0.999,P<0.05）。［结论］ STAT3/miR-21过表达与舌鳞癌细胞对顺铂的耐药性相关,有可能成为舌鳞癌患者对化疗药物产生耐药性的潜在干预靶点。     

人滑膜肉瘤肿瘤干样细胞分离与鉴定

目的:分离鉴定滑膜肉瘤（SW982）肿瘤干样细胞。方法:体外培养人滑膜肉瘤细胞系SW982,用CD133标记方法检测SW982中肿瘤干细胞的数量,用免疫磁珠分选法进行分选,分选后所得CD133+和CD133-细胞群分别进行以下实验。通过无血清悬浮培养基培养获得CD133+悬浮细胞球,并将其进行重新贴壁、重新成球以检测其自我更新能力。顺铂（cisplatin,CDDP）和阿霉素（doxorubicin,DXR）分别处理CD133+与CD133-贴壁细胞,CD133+贴壁细胞与CD133+悬浮细胞球,MTS检测每两种细胞药物敏感性。Real-time PCR及Western blotting 检测CD133+和CD133-贴壁细胞干细胞相关基因ABCG2、Bmi1、c-Myc、Nanog、Oct3/4、Sox2表达情况。将CD133+和CD133-贴壁细胞分别接种于6~8周雌性BALB/c裸鼠,观察成瘤情况,并将接种后所得肿瘤进行免疫组化,观察接种瘤含CD133情况。结果:SW982细胞系中CD133含量为8.59%,CDDP、DXR对CD133+和CD133-贴壁细胞抑制具有浓度依赖性。CD133+和CD133-细胞均表达干细胞相关基因ABCG2、Bmi1、c-Myc、Nanog、Oct3/4、Sox2。相对于CD133-细胞,CD133+细胞ABCG2、Nanog、Oct3/4、Sox2表达明显升高。CD133+细胞裸鼠体内成瘤率高于CD133-细胞,CD133+接种瘤含CD133较CD133-接种瘤多。结论:SW982细胞系CD133+细胞具有高自我更新能力、高耐药性、高表达干细胞相关基因、高成瘤性,是肿瘤干细胞。     

HMGB1对宫颈癌干性基因OCT4、Sox2和Nanog表达的影响

目的 研究高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对宫颈癌干性基因OCT4、Sox2和Nanog的作用。方法 构建HMGB1过表达质粒及干扰HMGB1表达的特异性siRNA,将上述重组质粒和（或）siRNA转染到宫颈癌细胞中。采用Western blot和流式细胞术检测HMGB1上调（或抑制）表达后对上述干细胞标志物表达的影响。免疫组织化学法检测HMGB1、OCT4、Sox2和Nanog在66例宫颈组织中的表达并分析相关性。 结果 （1）结果显示HMGB1编码区全长为648 bp,其与GV230真核表达系统构建出HMGB1过表达载体,同时筛选出干扰效率的最高的siRNA-HMGB1-1来进行后续实验;（2）与空载体组和HMGB1低表达组相比,HMGB1过表达组细胞株中干细胞标志物OCT4、Sox2和Nanog蛋白表达和比例明显增高,差异具有统计学意义（均P<0.05）;HMGB1低表达时,Nanog、OCT4和Sox2蛋白的表达和比例明显降低,差异具有统计学意义（均P<0.05）;（3）在宫颈鳞癌组织中HMGB1、OCT4、Sox2和Nanog蛋白阳性表达明显高于慢性宫颈炎组,HMGB1的表达与干细胞标志物的表达呈正相关。结论 HMGB1能够调节宫颈癌干性基因OCT4、Sox2和Nanog的表达,可能是抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

Lin28 对肝癌HepG2 细胞5-Fu 敏感性的影响及其分子机制

目的：探讨RNA结合蛋白Lin28 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响及其机制。方法：应用pcDNA3.1-Lin28 或si-Lin28 转染HepG2 细胞，采用qPCR及WB法检测转染后HepG2 细胞Lin28 的表达水平，CCK-8 法检测5-Fu 作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu 对细胞作用的IC50，流式细胞术检测5-Fu 处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化，qPCR法检测转染后耐药相关miRNA（let-7a 和let-7b）及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog和Sox2）的mRNA表达水平。结果：与空载对照组（HepG2/Vector）相比，HepG2/Lin28 组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P<0.05 或P<0.01），过表达Lin28 可显著抑制HepG2 细胞对5-Fu 作用的敏感性（IC50明显升高，P<0.05）和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3 表达明显降低（均P<0.01）。与阴性对照组（si-control）相比，si-Lin28 细胞中Lin28 表达水平显著下降（P<0.01）；敲减Lin28 可使细胞增殖活性及5-Fu 的IC50显著降低（均P<0.01），凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加（P<0.01）。与HepG2/Vector 组比较，HepG2/Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog 和Sox2）的表达水平明显上调（均P<0.01），而si-Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及Oct4、Nanog、Sox2 的表达水平较si-control 组明显下调（均P<0.01）。结论：Lin28 可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性，靶向调节Lin28 表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。     

miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响

目的:探究miR-30a对人卵巢癌SKOV3细胞自噬及顺铂耐药性的影响,并初步研究其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和人卵巢癌细胞（耐药）细胞（SKOV3/DDP）;将SKOV3/DDP细胞随机分为对照组、miR-30a 阴性对照（NC）组和miR-30a模拟（mimics）组,SKOV3细胞作为正常组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞miR-30a表达情况;CCK-8法检测各组细胞顺铂耐药性;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3 I/II（LC3I/II）、p62、磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（p-PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（p-AKT）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）表达情况;双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-30a与PTEN的靶向关系。结果:与对照组和miR-30a NC组相比,miR-30a mimics组SKOV3/DDP细胞miR-30a表达水平、凋亡率、p62、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR水平显著升高（P＜0.05）,IC50值、LC3II、PTEN蛋白表达水平及LC3II/LC3I比值显著降低（P＜0.05）;与正常组相比,对照组SKOV3/DDP细胞上述各指标变化趋势完全相反;mirbase数据库预测显示,miR-30a与PTEN mRNA 3' UTR区有结合位点,与PTEN-3' UTR-WT+miR-30a NC组比较,PTEN-3' UTR-WT+miR-30a inhibitor组荧光素酶活性降低（P＜0.05）。结论:miR-30a可能通过靶向抑制PTEN表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控人卵巢癌细胞自噬,降低卵巢癌细胞的顺铂耐药性。     

MicroRNA-130a调节胃癌细胞SCG7901/DDP的耐药机制研究

目的:探讨microRNA-130a（miR-130a）在胃癌耐药细胞中的表达,并对进一步作用的机制进行研究。方法:采用体外转染法将miR-130a模拟物或抑制剂分别瞬时转染到SCG7901和SCG7901/DDP细胞后,应用Real-time PCR检测转染前后细胞中miR-130a的表达情况;CCK8实验检测转染前后细胞对顺铂（DDP）敏感性的变化;并用Western blot检测转染前后细胞中PETN的表达变化。结果:MiR-130a在SGC7901／DDP中的表达水平是SGC7901细胞的（8.33±1.21）倍（P＜0.01）。SGC7901转染miR-130a mimics后,细胞中miR-130a表达水平是转染前的（5.52±1.65）倍（P＜0.01）,DDP对SGC7901增殖的抑制率较转染前明显下降（P＜0.01）,细胞内PTEN表达水平较转染前明显下降（P＜0.01）。SCG7901/DDP在转染miR-130a inhibitor 后,细胞中miR-130a表达水平是转染前的（0.18±0.04）倍（P＜0.01）,DDP对SCG7901/DDP增殖的抑制率与转染前比较明显增加（P＜0.01）,细胞内PTEN表达水平较转染前明显增高（P＜0.01）。结论:MiR-130a通过下调PTEN的表达来调节胃癌细胞对DDP的耐药。     

辛伐他汀抑制人乳腺癌MCF-7细胞内多能干细胞标志物Oct3/4 Nanog和Sox-2表达

  目的  研究辛伐他汀（simvastatin,SIM）对人乳腺癌MCF-7细胞内多能干细胞标志物Oct3/4、Nanog和Sox-2表达的影响。  方法  应用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）技术、免疫荧光染色方法,流式细胞仪和免疫印迹（Western blot）方法检测SIM对MCF-7细胞内多能干细胞标志物表达的影响。  结果  qRT-PCR结果显示,10、50和100 μmol/L SIM作用于MCF-7细胞48h后,能显著抑制细胞内Oct3/4、Nanog和Sox-2基因表达,与对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.05）,而SIM 1 μmol/L浓度组和对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。SIM 50、100 μmol/L浓度组和10 μmol/L浓度组相比,抑制Oct3/4和Nanog的表达差异有统计学意义（P < 0.05）,而对Sox-2的表达抑制,SIM 10、50 μmol/L和100 μmol/L各浓度组间差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光染色显示经10 μmol/L SIM处理48 h后MCF-7细胞核内Oct3/4、Nanog和Sox-2蛋白表达减弱,部分细胞核无表达。流式细胞检测显示MCF-7细胞经10 μmol/L SIM处理48 h后,Oct3/4阳性细胞数、Nanog阳性细胞数和Sox-2阳性细胞数显著减少（P < 0.05）,Western blot进一步证实经10 μmol/L SIM处理48 h后MCF-7细胞核内Oct3/4、Nanog和Sox-2蛋白表达显著减少（P < 0.05）。  结论  SIM在体外能有效地抑制人乳腺癌MCF-7细胞内多能干细胞标志物Oct3/4、Nanog和Sox-2的表达,为SIM应用于癌症治疗提供实验依据。      

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞，考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率；Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262，观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05），miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05），显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用，以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。     

非小细胞肺癌患者血浆miR-21水平与化疗疗效的相关性

目的:探讨miRNA-21（miR-21）在非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆中的表达及治疗前后NSCLC患者血浆中miR-21水平与化疗药物疗效的相关性。方法:使用荧光定量PCR法检测并比较15例正常人和26例晚期NSCLC患者血浆中miR-21的表达差异；检测并比较晚期NSCLC患者化疗前后血浆中miR-21的变化水平。结果:NSCLC患者血浆中的miR-21表达水平显著高于正常人（P<0.01）。化疗后患者血浆中miR-21表达水平较化疗前存在差异（P<0.05）。miR-21在（SD+PD）组的表达量高于（CR+PR）组（P<0.05）；而（CR+PR）组血浆miR-21的水平与正常对照组比较，无显著差异（P>0.05）。分析miR-21表达与NSCLC患者临床病理参数相关性，发现miR-21表达与患者临床特征无关。结论:血浆中miR-21的表达水平，对于NSCLC早期诊断及化疗药物治疗后评估患者疗效有较好地评判价值。     

miR-21和PDCD4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨微小核糖核酸21（miR-21）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:应用Real-time PCR法检测61例NSCLC组织及61例对应癌旁肺组织中miR-21、PDCD4的表达,分析二者表达的相关性及其与临床病理特征和预后的关系。结果:同癌旁正常组织相比,NSCLC组织中miR-21 mRNA表达明显上调（88.52%,P=0.000）,PDCD4 mRNA表达明显下调（83.61%,P=0.000）。两者表达呈负相关（r＝0．044,P＜0.05）。中晚期（Ⅲ-Ⅳ期）肺癌组织中miR-21 mRNA表达高于早期（Ⅰ-Ⅱ期）（P＜0.05）。PDCD4 mRNA 表达与NSCLC的分化程度、临床分期及淋巴转移相关（P＜0.05）。Kaplan-Meier 生存分析显示miR-21高表达患者较低表达患者总生存期明显缩短（P=0.007）,相反,PDCD4高表达的患者较低表达患者具有较长的总生存期(P=0.003)。     

Nultin-3联合顺铂对口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用及机制研究

目的 探讨MDM2抑制剂Nultin-3联合顺铂对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的抑制作用及其机制。方法 将人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞分为对照组、顺铂组、Nultin-3组及Nultin-3联合顺铂组(联合组), 采用噻唑蓝(MTT)法分别检测各组Tca8113细胞处理48 h后的增殖率;采用蛋白质印迹法检测各组细胞MDM2、p53及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 联合组处理后口腔鳞状细胞癌Tca8133细胞的增殖率明显低于其它各组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。联合组Caspase-9、Caspase-3及p53蛋白的相对表达量明显高于顺铂组和Nultin-3组(P＜0.05);此外, 联合组MDM2蛋白的相对表达量显著低于顺铂组和Nultin-3组(P＜0.05)。结论 Nultin-3联合顺铂作用于口腔鳞癌细胞Tca8113时具有协同增效作用。Nultin-3通过调控MDM2-p53信号通路并上调促凋亡蛋白Caspase-9及Caspase-3的表达水平, 以达到增强顺铂抑制口腔鳞状细胞癌的作用, 从而为相关临床研究及治疗提供坚实的理论基础。     

LINC00460靶向miR-380-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨LINC00460对皮肤鳞状细胞癌（CSCC）细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及可能机制。方法:实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析人类永生化表皮细胞（HaCaT）和CSCC细胞（SCC13、A431和HSC-5）中LINC00460和miR-380-3p的表达水平。将LINC00460小干扰RNA（si-LINC00460）、miR-380-3p模拟物（miR-380-3p mimics）、si-LINC00460+miR-380-3p抑制物（anti-miR-380-3p）分别转染A431细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、上皮细胞钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表达。双荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR确定LINC00460对miR-380-3p的靶向调控作用。结果:与HaCaT比较,CSCC细胞中LINC00460表达显著增加,miR-380-3p表达显著降低（P＜0.05）。下调LINC00460表达后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达显著降低（P＜0.05）,凋亡率、E-Cadherin蛋白表达显著升高（P＜0.05）。上调miR-380-3p表达后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2和MMP9表达显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著升高（P＜0.05）。与下调LINC00460比较,同时下调LINC00460和miR-380-3p后A431细胞增殖活力、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP2、MMP9、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达显著升高（P＜0.05）,凋亡率、E-Cadherin蛋白表达显著降低（P＜0.05）。LINC00460靶向负调控miR-380-3p表达。结论:CSCC细胞中LINC00460表达增加,下调LINC00460能够降低CSCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与靶向调控miR-380-3p表达有关。